检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2007年第4期29卷 296-299页

作者：刘涛金超智张翠莉陈慧储朗王英杰杨晓明第三军医大学西南医院全军感染病研究所重庆400038 军事医学科学院放射医学研究所北京100850 重庆医科大学生殖医学系遗传学教研室重庆410016 安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032

目的应用酵母双杂交技术研究与多药耐药蛋白MRP2发生相互作用的蛋白。方法应用酵母双杂交系统,以人MRP2胞内区C末端220个氨基酸为诱饵,筛选成人肝cDNA文库,寻找能与之相互作用的蛋白。利用生物信息学分析,一对一酵母回复性杂交等提供的... 详细信息

目的应用酵母双杂交技术研究与多药耐药蛋白MRP2发生相互作用的蛋白。方法应用酵母双杂交系统,以人MRP2胞内区C末端220个氨基酸为诱饵,筛选成人肝cDNA文库,寻找能与之相互作用的蛋白。利用生物信息学分析,一对一酵母回复性杂交等提供的信息,筛除假阳性。结果经过酵母双杂交共获得162个克隆,经过验证分析,最终确定3个无重复阳性克隆。结论获得的3个基因编码的蛋白可能揭示MRP2新的作用机制。

关键词： MRP2 酵母双杂交蛋白质相互作用 ATP结合盒超家族转运蛋白

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肿瘤抑制基因Nm23-M1原核表达载体的构建和表达

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生殖与避孕 2006年第8期26卷 451-455页

作者：刘芳王应雄翁亚光何俊琳刘学庆杨曦黎刚重庆医科大学生殖医学系遗传优生教研室重庆400016

目的:构建鼠Nm23-M1基因的原核表达载体并进行表达。方法:应用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术扩增Nm23-M1基因,将其克隆于pQE30质粒中,测序正确后,构建重组体pQE30-Nm23-M1,在大肠杆菌中诱导NM23-M1蛋白表达。结果:SDS-PAGE凝胶电泳... 详细信息

目的:构建鼠Nm23-M1基因的原核表达载体并进行表达。方法:应用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术扩增Nm23-M1基因,将其克隆于pQE30质粒中,测序正确后,构建重组体pQE30-Nm23-M1,在大肠杆菌中诱导NM23-M1蛋白表达。结果:SDS-PAGE凝胶电泳分离显示,在分子量大约17.5kD处有一诱导表达蛋白带,表达蛋白量占菌体蛋白量的15%,通过Westernblot证实,表达产物与抗人Nm23-H1单克隆抗体有特异性免疫反应。经Ni-NTA柱纯化,获得电泳均一性为92%的重组蛋白。结论:成功构建Nm23-M1表达载体,并获得了重组NM23-M1蛋白。

关键词： Nm23-M1 基冈克隆基因表达

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sgp190与白血病抑制因子对滋养层细胞金属蛋白酶-9及抑制因子-1表达的影响

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生殖与避孕 2006年第5期26卷 286-290页

作者：黎刚王应雄何俊琳刘学庆潘卫翁亚光陈雪梅重庆医科大学生殖医学系遗传优生室重庆400016

目的:探讨sgp190与白血病抑制因子(LIF)在妊娠维持中的作用。方法:体外培养滋养层细胞,分别施加LIF和/或sgp190处理后,用RT-PCR法检测金属蛋白酶-9(MMP-9)与金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)mRNA表达情况,免疫印迹法检测细胞MMP-9与TIMP-... 详细信息

目的:探讨sgp190与白血病抑制因子(LIF)在妊娠维持中的作用。方法:体外培养滋养层细胞,分别施加LIF和/或sgp190处理后,用RT-PCR法检测金属蛋白酶-9(MMP-9)与金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)mRNA表达情况,免疫印迹法检测细胞MMP-9与TIMP-1蛋白表达水平,ELISA法测定培养上清中MMP-9与TIMP-1的浓度。结果:LIF抑制体外培养滋养层细胞中MMP-9与TIMP-1中mRNA和蛋白表达(P<0.05),而sgp190可抑制LIF的这种作用。sgp190促进MMP-9mRNA与蛋白的表达(P<0.05),但对TIMP-1mRNA与蛋白表达无影响。ELISA分析结果基本与RT-PCR和免疫印迹分析结果相同。结论:LIF和sgp190可能通过调节MMPs和TIMPs表达来影响滋养层细胞的侵袭,而sgp190在LIF功能活性调节中扮演着一定角色。

关键词：白血病抑制因子(LIF) 可溶性gp190(sgp190) 基质金属蛋白酶-9(MMP-9) 基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1) 滋养层细胞

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双向凝胶电泳-飞行时间质谱技术鉴定小鼠胚泡黏附时子宫内膜nm23-M2/NDPK B的表达

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实验生物学报 2005年第2期38卷 111-118页

作者：潘卫王应雄黎刚翁亚光刘芳余秋波重庆医科大学生殖医学系遗传优生教研室

运用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2DPAGE)分析未交配小鼠子宫内膜和妊娠第五天(D_5)小鼠子宫内膜胚泡黏附时植入位点及其旁组织蛋白质组。差异蛋白质组学显示,等电点(isoelectricpoint,pI)约7.1、分子量(molecularweight,Mw)约18kDa的蛋白... 详细信息

运用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2DPAGE)分析未交配小鼠子宫内膜和妊娠第五天(D_5)小鼠子宫内膜胚泡黏附时植入位点及其旁组织蛋白质组。差异蛋白质组学显示,等电点(isoelectricpoint,pI)约7.1、分子量(molecularweight,Mw)约18kDa的蛋白质点在D_5小鼠子宫内膜特别是植入位点表达上调。对此蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix—assistedlaserdesorpion/ionizationtimeofflyingmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质量指纹谱(PeptideMassFingerprint,PMF),经Mascot:PeptideMassFingerprint中SWISS-PROT数据库查询后,鉴定该蛋白质为鼠源性nm23-M2/NDPKB。RT-PCR和免疫组织化学结果也显示D_5小鼠子宫内膜nm23-M2/NDPKBmRNA和蛋白表达明显增加。提示nm23-M2/NDPKB参与胚泡着床这一重要生命活动过程。

关键词：子宫内膜 NDPK 双向凝胶电泳小鼠技术鉴定黏附聚丙烯酰胺凝胶电泳电离飞行时间质谱肽质量指纹谱免疫组织化学蛋白质点 Mass 蛋白质组学 point laser MALDI 数据库查询 time mass 蛋白表达 mRNA 活动过程胚泡着床

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Klinefelter综合征X染色体着丝粒区α-卫星DNA变异

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第三军医大学学报 2005年第16期27卷 1678-1680页

作者：李恬翁亚光王应雄何俊琳刘学庆陈雪梅重庆医科大学生殖医学系遗传优生室重庆400016

目的从DNA分子水平建立研究X染色体着丝粒区域的α-卫星DNA变异的方法,发现K linefelt综合征患者的X染色体着丝粒区域的α-卫星DNA串联重复序列结构变化与染色体不分离的关系。方法采用(representativesamp ling ofmu ltip le repetitiv... 详细信息

目的从DNA分子水平建立研究X染色体着丝粒区域的α-卫星DNA变异的方法,发现K linefelt综合征患者的X染色体着丝粒区域的α-卫星DNA串联重复序列结构变化与染色体不分离的关系。方法采用(representativesamp ling ofmu ltip le repetitive un its,rep)PCR方法,通过设计适当的引物,对α-卫星DNA多个单拷贝串联重复序列同时进行扩增,检测重复序列中结构变化的种类、频率及重组位点。结果首次发现由缺失产生的562 bp和220 bp变异片段和重组位点,异常组的570、562、220 bp构成显著高于正常组(P<0.05)。Logistic回归分析显示:570、562 bp和220 bp 3个短片段同时出现和任两个短片段同时出现均是疾病相关的危险因素。结论K linefelt综合征的X染色体着丝粒区α-卫星DNA过多的重组可能是造成X染色体不分离的重要原因之一。

关键词：聚合酶链反应 Klinefelt综合征 α-卫星DNA 不等交换

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染色体着丝粒特异性蛋白质的研究进展

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国外医学（遗传学分册） 2005年第4期28卷 196-199页

作者：蔡燕翁亚光杨戎重庆医科大学生殖医学系遗传优生教研室 400016

着丝粒是细胞有丝分裂或减数分裂中期姐妹染色单体相互联系在一起的特殊部位,为一DNA-蛋白质复合体。在调控细胞分裂和染色单体分离机制中具有重要作用。它携带的蛋白质是其功能得以正确发挥所必不可少的功能元件。本文主要对近几年来... 详细信息

着丝粒是细胞有丝分裂或减数分裂中期姐妹染色单体相互联系在一起的特殊部位,为一DNA-蛋白质复合体。在调控细胞分裂和染色单体分离机制中具有重要作用。它携带的蛋白质是其功能得以正确发挥所必不可少的功能元件。本文主要对近几年来着丝粒特异性蛋白质的研究予以综述。

关键词：着丝粒特异性蛋白质染色体分离染色体数目异常特异性蛋白质染色体着丝粒姐妹染色单体细胞有丝分裂特殊部位相互联系减数分裂

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精液蛋白质组研究进展

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中国优生与遗传杂志 2005年第1期13卷 1-3,5页

作者：黎刚潘卫王应雄重庆医科大学生殖医学系遗传优生室 400016

后基因组时代的主要研究任务之一即是蛋白组研究。蛋白质组学方法发展迅速 ,已被广泛应用于寻找生理状态与疾病相关的差异表达蛋白质。生殖技术已取得了很大的进展 ,但人们对生殖尤其是人类生殖的分子机制了解仍很贫乏。受精是雌雄配子... 详细信息

后基因组时代的主要研究任务之一即是蛋白组研究。蛋白质组学方法发展迅速 ,已被广泛应用于寻找生理状态与疾病相关的差异表达蛋白质。生殖技术已取得了很大的进展 ,但人们对生殖尤其是人类生殖的分子机制了解仍很贫乏。受精是雌雄配子发育向新的合子个体发育转变的枢纽。利用蛋白质组研究技术分析精液 ,可从蛋白质分子整体水平了解受精的机制。

关键词：蛋白质组精子精液受精

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外源蛋白在酵母中表达的糖化修饰及人源化改造

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国外医学（临床生物化学与检验学分册） 2005年第4期26卷 235-237页

作者：黎刚潘卫王应雄重庆医科大学生殖医学系遗传优生室 400016

Pichiapastoris(为毕赤酵母属中的一种)是目前广泛用于分泌表达重组蛋白质的宿主细胞,许多有着药用价值的蛋白质为N糖基化修饰。因此,要求表达宿主能够产生在结构和功能上与人相同的N连寡糖。最近一些研究组报道了利用组合基因文库来改... 详细信息

Pichiapastoris(为毕赤酵母属中的一种)是目前广泛用于分泌表达重组蛋白质的宿主细胞,许多有着药用价值的蛋白质为N糖基化修饰。因此,要求表达宿主能够产生在结构和功能上与人相同的N连寡糖。最近一些研究组报道了利用组合基因文库来改造PichiapastorisN糖基化路径,从而产生同哺乳动物细胞N糖基化蛋白质一样的N连寡糖。该类研究的成功将可能广泛用于蛋白质功能的研究,并极有可能掀起运用Pichiapastoris生产药用糖蛋白的热潮。

关键词：人源化改造外源蛋白修饰 pastoris Pichia N-糖基化糖化哺乳动物细胞重组蛋白质结构和功能蛋白质功能宿主细胞分泌表达毕赤酵母药用价值基因文库糖蛋白寡糖

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重庆育龄妇女生育观与人口素质现代化探讨

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重庆行政（公共论坛） 2005年第5期6卷 87-88页

作者：冉云霞唐贵忠陈乐唐丽红重庆医科大学生殖医学系人口学教研室

重庆是西部地区的特大中心城市和唯一的直辖市，在实施西部大开发战略中，市委、市政府提出的战略构想和战略目标是到2020年建成长江上游经济中心，逐步迈向国际大都市。重庆要实现这一构想和目标，需要多方面条件共同发挥作用，但最关... 详细信息

重庆是西部地区的特大中心城市和唯一的直辖市，在实施西部大开发战略中，市委、市政府提出的战略构想和战略目标是到2020年建成长江上游经济中心，逐步迈向国际大都市。重庆要实现这一构想和目标，需要多方面条件共同发挥作用，但最关键的是要加强人口素质现代化的建设。重庆是典型的大城市与大农村并存的欠发达地区，农村人口占80％，人力资源的数量多，质量低，消费方式仍以物质资本消费为主，而人力资本消费较少(包括知识资本存量和健康资本存量)，这在一定程度上阻碍了我市人口现代化的发展，影响了新一代育龄妇女的生育观。要提高人口现代化的素质，就必须优生，要保证优生就必须培养正确的生育观。政府在制定一套切实可行的生育政策时，首先要清楚不同地域育龄妇女的生育观。研究新形势下育龄妇女生育观对人口现代化的影响，是我市人口环境资源可持续发展的基本保障，对促进我市经济繁荣和社会健康发展具有重要意义。

关键词：生育观念农村直辖市生育率人口生育意愿重庆

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人可溶性 gp1 90在酵母Pichiapastoris中的表达(英文)

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Acta Genetica Sinica 2004年第11期31卷 1182-1189页

作者：黎刚王应雄潘卫刘学庆何俊琳翁亚光陈雪梅重庆医科大学生殖医学系遗传优生室重庆400016

人可溶性 gp190 (sgp190 )是白血病抑制因子 (LIF)的可溶性受体 ,可能在LIF行使众多生物学功能中扮演着重要的角色。为获得这一蛋白以研究它在人体内的生物学活性 ,在酵母Pichiapastoris中实现了重组sgp190分泌表达。利用基因重组技术 ... 详细信息

人可溶性 gp190 (sgp190 )是白血病抑制因子 (LIF)的可溶性受体 ,可能在LIF行使众多生物学功能中扮演着重要的角色。为获得这一蛋白以研究它在人体内的生物学活性 ,在酵母Pichiapastoris中实现了重组sgp190分泌表达。利用基因重组技术 ,将编码人可溶性 gp190 (LIF受体α亚基 gp190胞外区 )cDNA克隆到毕赤酵母Pichiapastoris分泌表达载体 pPIC9K ,构建了重组表达质粒 pPIC9K sgp190。原生质体法转染PichiapastorisGS115菌株 ,经过G4 18筛选 ,得到了高效分泌表达sgp190蛋白的毕赤酵母菌株GS115 / pPIC9K sgp190 ,sgp190蛋白占摇瓶培养表达上清中总蛋白质的 2 6 %。经初步纯化 ,对表达产物的性质鉴定表明 ,其分子量约 12 5kD ,具有免疫活性。

关键词：毕赤酵母白血病抑制因子受体可溶性受体分泌表达白血病基因重组技术

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