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G蛋白偶联雌激素受体1、表皮生长因子受体和趋化因子受体1在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

第三军医大学学报 2014年第12期36卷 1317-1321页

作者：唐萃杨磊王旎杨俊艳刘智敏重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的探讨G蛋白偶联雌激素受体1(G protein-coupled estrogen receptor1,GPER1)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和趋化因子受体1(chemokine receptor1,CXCR1)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)组织中的表达及意义。方法甲状腺乳头状癌68例、结节性甲状腺肿42例,采用免疫组织化学S-P法检测GPER1、EGFR和CXCR1的表达,分析其与患者临床病理特征的关系,以及三者间表达的相关性。结果在PTC组织中,GPER1、EGFR和CXCR1的表达阳性率分别为76.5%、66.2%、64.7%,明显高于结节性甲状腺肿组的21.4%、16.7%和11.9%(P<0.01);GPER1、EGFR和CXCR1在PTC中的表达与颈部淋巴结转移相关(P<0.05),而与其他临床病理特征(年龄、性别、肿瘤大小及TNM分期)无相关性(P>0.05);在PTC及PTC淋巴转移癌组织中,GPER1与EGFR的表达呈显著正相关(r=0.262,P=0.031;r=0.542,P=0.002)、GPER1与CXCR1的表达也呈显著正相关(r=0.276,P=0.025;r=0.483,P=0.006)。结论 GPER1、EGFR和CXCR1的两两共表达与PTC的发生、发展密切相关,三者间可能存在一种相互作用。

关键词：甲状腺乳头状癌 G蛋白偶联雌激素受体1 表皮生长因子受体趋化因子受体1

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人MCPH1基因重组慢病毒的制备及稳定感染HeLa细胞系的建立

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重庆医科大学学报 2014年第3期39卷 290-294页

作者：麦力张冀刘革力卜友泉李韵樊建军宋方洲重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心、基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016

目的 :构建人MCPH1(microcephalin 1)基因重组慢病毒载体并建立稳定过表达MCPH1基因的宫颈癌HeLa细胞株。方法:将MCPH1基因重组到pLenO-DCE质粒中,构建重组质粒pLenO-DCE-MCPH1,经酶切和测序鉴定后,与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,包... 详细信息

目的 :构建人MCPH1(microcephalin 1)基因重组慢病毒载体并建立稳定过表达MCPH1基因的宫颈癌HeLa细胞株。方法:将MCPH1基因重组到pLenO-DCE质粒中,构建重组质粒pLenO-DCE-MCPH1,经酶切和测序鉴定后,与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,包装重组慢病毒,滴度测定后,感染HeLa细胞,用有限稀释法筛选稳定的细胞克隆,real-time PCR和Western blot分别检测细胞中MCPH1 mRNA和蛋白水平。结果:经酶切和测序鉴定,成功构建MCPH1重组慢病毒载体,并成功包装慢病毒,滴度为1.24×109 TU/ml;慢病毒感染HeLa细胞后经有限稀释法成功筛选到MCPH1稳定表达细胞株pLenO-DCEMCPH1-HeLa;real-time PCR证实pLenO-DCE-MCPH1-HeLa细胞株较正常组HeLa(P=0.000)和pLenO-DCE-HeLa组(P=0.000)的MCPH1 mRNA水平显著地增高;Western blot进一步证实pLenO-DCE-MCPH1-HeLa细胞株过表达MCPH1。结论:成功构建MCPH1重组慢病毒,并建立了稳定表达MCPH1基因的细胞株pLenO-DCE-MCPH1-HeLa,为进一步研究MCPH1在宫颈癌中的作用奠定了基础。

关键词：慢病毒 MCPH1基因宫颈肿瘤单克隆细胞

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MCPH1在肺组织的表达及其对人肺癌细胞株H1299凋亡的影响

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第三军医大学学报 2014年第6期36卷 574-577页

作者：张冀麦力吴晓彬肖明袁成福卜友泉宋方洲重庆医科大学:分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016

目的探讨MCPH1基因在肺癌组织和正常组织的蛋白表达分布及其过表达后对人肺腺癌细胞系H1299凋亡的影响。方法临床收集20例肺癌组织和8例正常肺组织标本,免疫组化法检测MCPH1蛋白在肺组织的表达分布,真核表达质粒pcDNA3.1(-)/MCPH1和空... 详细信息

目的探讨MCPH1基因在肺癌组织和正常组织的蛋白表达分布及其过表达后对人肺腺癌细胞系H1299凋亡的影响。方法临床收集20例肺癌组织和8例正常肺组织标本,免疫组化法检测MCPH1蛋白在肺组织的表达分布,真核表达质粒pcDNA3.1(-)/MCPH1和空白质粒pcDNA3.1瞬时转染肺癌细胞株H1299,并设立未处理组。转染质粒48 h后,采用Real-time PCR法检测细胞中MCPH1基因mRNA的转录表达情况;转染72 h后提取细胞总蛋白,Western blot检测细胞中MCPH1蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 MCPH1蛋白在肺癌组织中表达低于正常组织,而且MCPH1蛋白在癌组织中表现为核质低表达,在正常组织中为核质高表达;H1299转染pcDNA3.1(-)/MCPH1重组质粒后,可有效上调H1299细胞中MCPH1基因的mRNA和蛋白表达,处理组的细胞凋亡率(18.10±1.87)%较pcDNA3.1(-)转染组(5.76±1.85)%和未处理组(5.85±0.57)%显著增加(P<0.05)。结论 MCPH1在人肺癌组织表达降低,过表达之后可诱导肺腺癌细胞发生凋亡。

关键词：肺癌 MCPH1 免疫组化 H1299 细胞凋亡

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过表达Bmi-1基因对乳腺癌细胞株BT474侵袭转移能力的影响

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第三军医大学学报 2014年第21期36卷 2187-2190页

作者：李海玉宋方洲卜友泉易发平朱慧芳汪长东刘革力武向梅重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院生理学教研室重庆400016

目的建立过表达Bmi-1的乳腺癌稳定细胞株,检测过表达Bmi-1对该肿瘤细胞株侵袭转移能力的影响,探讨Bmi-1与乳腺癌转移的相关性。方法根据GenBank中人源Bmi-1的mRNA序列,设计引物,构建Bmi-1真核表达载体GV144-Bmi-1,将其转染乳腺癌细胞株B... 详细信息

目的建立过表达Bmi-1的乳腺癌稳定细胞株,检测过表达Bmi-1对该肿瘤细胞株侵袭转移能力的影响,探讨Bmi-1与乳腺癌转移的相关性。方法根据GenBank中人源Bmi-1的mRNA序列,设计引物,构建Bmi-1真核表达载体GV144-Bmi-1,将其转染乳腺癌细胞株BT474,G418筛选建立过表达Bmi-1的稳定细胞株。实时荧光定量PCR和Western blot检测Bmi-1的mRNA和蛋白表达水平,Matrigel和Transwell侵袭小室模型检测转染和未转染BT474细胞体外侵袭和转移能力的变化,荧光定量PCR和Western blot检测细胞中MMP-2、MMP-9蛋白的变化。结果成功构建人源Bmi-1真核表达载体GV144-Bmi-1,转染BT474细胞后,获得稳定转染细胞株。实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,与空载体组相比,实验组Bmi-1的mRNA和蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。Bmi-1过表达后,迁移能力明显增强、穿膜细胞数明显增多,MMP-2、MM-9 mRNA和蛋白表达水平显著增强(P<0.05)。结论过表达Bmi-1稳定细胞株构建成功,Bmi-1表达上调可显著提高乳腺癌细胞的体外侵袭转移能力。

关键词：乳腺癌 Bmi-1 BT474 过表达侵袭转移

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核仁素蛋白调节嗅觉介导素4mRNA表达的研究

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重庆医科大学学报 2014年第5期39卷 657-660页

作者：安娜吴莉雅宋利华黄轶蒋雪刘先俊重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室、分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学附属儿童医院临床分子诊断中心重庆400014

目的:探讨核仁素(nucleolin,NCL或C23)蛋白与嗅觉介导素4(olfaetomedin 4,OLFM4)mRNA之间是否存在相互作用,以及NCL对OLFM4转录水平的调控。方法:本研究利用RNA染色质免疫共沉淀(RNA chromatin immunoprecipitation assay,RNA chip)结合RT-PCR确定NCL是否能与OLFM4 mRNA相互作用,以及双荧光素酶报告基因试验检测NCL对OLFM4报告基因的影响。结果:在SGC-7901细胞内,NCL能与OLFM4 mRNA结合,且过表达NCL质粒的相对荧光素酶活性约为对照质粒的1.15倍,敲低NCL质粒的相对荧光素酶活性约为对照质粒的0.8倍,NCL对OLFM4具正向调节作用。结论:NCL与OLFM4mRNA可以相互结合,且NCL可以通过增加OLFM4转录水平和延长OLFM4 mRNA的半衰期来增加OLFM4 mRNA的稳定性。

关键词：核仁素嗅觉介导素4 RNA染色质免疫共沉淀(RNA Chip) 双荧光素酶报告基因试验

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HIF-1α、SIP1及MMP-9在甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义

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免疫学杂志 2014年第10期30卷 897-901页

作者：杨磊唐萃王旎杨俊艳刘智敏重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心 400016 重庆医科大学附属口腔医院检验科 400016

目的探讨低氧诱导因子-1(HIF-1α)、Smad蛋白的相互作用蛋白1(SIP1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测72例人甲状腺乳头状癌和37例癌旁正常组织中HIF-1α、SIP1和MMP-9的表达水... 详细信息

目的探讨低氧诱导因子-1(HIF-1α)、Smad蛋白的相互作用蛋白1(SIP1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测72例人甲状腺乳头状癌和37例癌旁正常组织中HIF-1α、SIP1和MMP-9的表达水平,分析其表达与临床病理指标的关系及三者间表达的相关性。结果在PTC组织中,HIF-1α、SIP1和MMP-9的阳性表达率分别为51.56%、51.39%和54.16%,显著高于癌旁正常组织(P<0.01)。HIF-1α、SIP1和MMP-9的表达与患者颈部淋巴结转移显著相关(P<0.05)。HIF-1α与SIP1、HIF-1α与MMP-9、SIP1和MMP-9的表达均呈显著正相关(rs=0.304,P=0.009;rs=0.243,P=0.040;rs=0.277,P=0.019)。2种蛋白(HIF-1α/SIP1,HIF-1α/MMP-9,SIP1/MMP-9)联合表达较二者之一表达与颈部淋巴结转移更具相关性(P<0.05)。HIF-1α、SIP1和MMP-9 3种蛋白联合表达较三者之一表达与颈部淋巴结转移更具有相关性(P<0.05)。结论 HIF-1α、SIP1和MMP-9在PTC组织中的表达与颈部淋巴结转移密切相关,且三者存在相互协同作用,其表达情况可能作为监测PTC颈部淋巴结转移的指标。

关键词：甲状腺乳头状癌 HIF-1α SIP1 MMP-9

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mIL-21-hIgGFc融合蛋白在293E细胞中的表达纯化及其对CD8^+T细胞表型的影响

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中国免疫学杂志 2014年第7期30卷 884-887,892页

作者：黄启彬刘明月符少月邢巧刘潇淇王盛典易发平重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 中国科学院生物物理研究所中国科学院感染与免疫重点实验室北京100101

目的:在293E细胞中表达小鼠IL-21-hIgGFc融合蛋白,并检测该蛋白对CD8+T细胞表型的影响。方法:运用RT-PCR方法从BALB/c小鼠脾脏淋巴细胞扩增出IL-21基因,插入到PTT3-hIgGFc载体上,获得重组质粒PTT3-mIL-21-hIgGFc;用磷酸钙瞬时转染293E细... 详细信息

目的:在293E细胞中表达小鼠IL-21-hIgGFc融合蛋白,并检测该蛋白对CD8+T细胞表型的影响。方法:运用RT-PCR方法从BALB/c小鼠脾脏淋巴细胞扩增出IL-21基因,插入到PTT3-hIgGFc载体上,获得重组质粒PTT3-mIL-21-hIgGFc;用磷酸钙瞬时转染293E细胞,48 h和72 h后分别收集培养上清。培养上清经MOLLIPORE LabscaleTMTFF system浓缩后,Protein G琼脂糖柱纯化获得mIL-21-hIgGFc融合蛋白,再用ELISA和SDS-PAGE电泳检测融合蛋白的含量和纯度。mIL-21-hIgGFc刺激P1A小鼠的CD8+T细胞,72 h后,运用流式细胞术检测其表型改变情况。结果:重组质粒PTT3-mIL-21-hIgGFc经酶切和测序确定载体构建成功,ELISA检测表明293E细胞上清中含有787 ng/ml,SDS-PAGE结果显示得到了较纯的融合蛋白,纯化后获得500μg融合蛋白mIL-21-hIgGFc。融合蛋白mIL-21-hIgGFc处理P1A小鼠CD8+T细胞后,CD44lowCD62Lhi CD8+T细胞明显增多。结论:我们成功构建了PTT3-mIL21-hIgGFc重组质粒,在293E细胞中表达并纯化出mIL21-hIgGFc融合蛋白。mIL21-hIgGFc能促进CD8+T细胞向CD44lowCD62LhiCD8+记忆干细胞表型分化,这对于肿瘤过继免疫治疗方案的改进具有重要的参考意义。

关键词：白细胞介素21(IL-21) 293E细胞表达纯化 CD8^+T细胞

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MCPHl在肺组织的表达及其对人肺癌细胞株H1299凋亡的影响

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第三军医大学学报 2014年第6期36卷 574-577页

作者：张冀麦力昊晓彬肖明袁成福卜友泉宋方洲重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016

目的:探讨MCPHl基因在肺癌组织和正常组织的蛋白表达分布及其过表达后对人肺腺癌细胞系H1299凋亡的影响。方法:临床收集20例肺癌组织和8例正常肺组织标本,免疫组化法检测MCPHl蛋白在肺组织的表达分布,真核表达质粒pcDNA3.1(-)/MCPHl和... 详细信息

目的:探讨MCPHl基因在肺癌组织和正常组织的蛋白表达分布及其过表达后对人肺腺癌细胞系H1299凋亡的影响。方法:临床收集20例肺癌组织和8例正常肺组织标本,免疫组化法检测MCPHl蛋白在肺组织的表达分布,真核表达质粒pcDNA3.1(-)/MCPHl和空白质粒pcDNA3.1瞬时转染肺癌细胞株H1299,并设立未处理组。转染质粒48h后,采用***法检测细胞中MCPHl基因mRNA的转录表达情况;转染72h后提取细胞总蛋白,Westernblot检测细胞中MCPHl蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:MCPHl蛋白在肺癌组织中表达低于正常组织,而且MCPHl蛋白在癌组织中表现为核质低表达,在正常组织中为核质高表达;H1299转染pcDNA3.1(-)/MCPHl重组质粒后,可有效上调H1299细胞中MCPHl基因的mRNA和蛋白表达,处理组的细胞凋亡率(18.10±1.87)%较pcDNA3.1(-)转染组(5.76±1.85)%和未处理组(5.85±0.57)%显著增加(P<0.05)。结论:MCPHl在人肺癌组织表达降低,过表达之后可诱导肺腺癌细胞发生凋亡。

关键词：蛋白质类/遗传学肺肺肿瘤/病理学基因细胞凋亡细胞系质粒转染人类

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高原短期暴露男性返回低海拔地区后脱适应期性激素水平的动态变化及意义

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西北国防医学杂志 2014年第1期35卷 40-42页

作者：杨磊杨有利周其全唐萃解放军第十医院检验科甘肃武威733000 第三军医大学高原军事医学系高原疾病学教研室重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心

目的:了解高原短期暴露人群返回低海拔后性激素的变化。方法:对参加玉树(海拔3 700m)抗震救灾116d后返回平原的613名官兵(观察组)在返回后的第2、15、30天分别抽取空腹静脉血,放射免疫竞争法分析其血清中睾酮(T)、雌二醇(E2)的浓度。未... 详细信息

目的:了解高原短期暴露人群返回低海拔后性激素的变化。方法:对参加玉树(海拔3 700m)抗震救灾116d后返回平原的613名官兵(观察组)在返回后的第2、15、30天分别抽取空腹静脉血,放射免疫竞争法分析其血清中睾酮(T)、雌二醇(E2)的浓度。未到高原的140名官兵作为对照组。结果:观察组返回平原第2、15天T含量略高于对照组(P>0.05),第30天T含量略低于对照组(P>0.05)。与对照组相比,观察组返回平原第2、15、30天E2含量均明显降低(P<0.05)。观察组返回平原第30天E2含量明显低于第2、15天的含量(P<0.05),但第15天与第2天比较无统计学差异(P>0.05)。结论:成年男性高原短期暴露返回低海拔地区后,血清T水平呈先增高后降低趋势,并出现过度重新调整现象,E2水平呈持续下降趋势。由于E2缺乏与骨质疏松相关,应避免过度训练引发骨损伤。

关键词：高原男性性激素睾酮雌二醇

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尿微量蛋白联合检测对高原短期暴露人群返回低海拔地区后肾脏脱适应损伤的判定

尿微量蛋白联合检测对高原短期暴露人群返回低海拔地区后肾脏脱适...

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第九届全国生物医学体视学学术会议、第十二届全军军事病理学学术会议暨第八届全军定量病理学学术会议

作者：周其全杨有利杨磊唐萃第三军医大学高原军事医学系高原疾病学教研室重庆400038 解放军第十医院检验科甘肃武威733000 解放军第十医院检验科甘肃武威733000 重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的:了解平原人高原短期暴露再返回平原后尿微量蛋白变化规律,进一步探讨高原脱适应对肾脏的影响.方法:对参加高原军事任务116天的738名官兵分别在返回平原后的第2天、第15天和第30天采集晨起中段尿20mL,使用全自动化学发光免疫分析仪...

目的:了解平原人高原短期暴露再返回平原后尿微量蛋白变化规律,进一步探讨高原脱适应对肾脏的影响.方法:对参加高原军事任务116天的738名官兵分别在返回平原后的第2天、第15天和第30天采集晨起中段尿20mL,使用全自动化学发光免疫分析仪,对尿液中的α-1微球蛋白(α1-MG), β2-微球蛋白(β2-MG),尿微量白蛋白(MA1b)进行检测,并对结果进行统计学分析.

关键词：

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