检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2014年第16期36卷 1647-1650页

作者：黄娟陆蔚天杨致邦徐进甘胜伟邱国平孙善全重庆医科大学基础医学院重庆400016 重庆医科大学人体解剖学教研室重庆400016 重庆医科大学病原微生物与免疫学实验室重庆400016

目的观察在幼年大鼠脑膜炎脑水肿模型中水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP4)的表达变化及内化现象,探讨AQP4及其内化在脑膜炎脑水肿发生中的作用。方法采用幼鼠延髓小脑池注入B族溶血性链球菌建立细菌性脑膜炎模型,采用干湿质量法、伊文思蓝... 详细信息

目的观察在幼年大鼠脑膜炎脑水肿模型中水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP4)的表达变化及内化现象,探讨AQP4及其内化在脑膜炎脑水肿发生中的作用。方法采用幼鼠延髓小脑池注入B族溶血性链球菌建立细菌性脑膜炎模型,采用干湿质量法、伊文思蓝含量测定法、免疫印迹法分别检测脑膜炎幼年大鼠脑含水量、血脑屏障通透性以及AQP4的表达水平,运用免疫荧光双标的方法检测AQP4分别与早期内涵体标记物EEA1和晚期内涵体标记物MPR的共表达。结果 1实验组脑含水量(81.4±2.3)%较对照组(77.3±1.6)%明显增加(P<0.05);2实验组AQP4表达水平(57.41±7.00)%较对照组(44.50±7.45)%明显增加(P<0.05);3实验组依文思蓝含量(4.35±0.21)μg/g较对照组(4.27±0.33)μg/g无统计学差异(P>0.05);4脑膜炎模型中,AQP4分别与EEA1和MPR共表达。结论在幼年大鼠脑膜炎脑水肿模型中,脑内AQP4表达上调,同时存在AQP4内化的现象。

关键词：脑膜炎脑水肿水通道蛋白4 内化内涵体

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核仁复合孔相关蛋白4在活化T细胞中的功能探索

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生物工程学报 2024年第11期40卷 4057-4070页

作者：尹家军郭洁张建华中国科学院微生物研究所中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室北京100101 山东第一医科大学基础医学院山东济南250000

核仁复合孔相关蛋白4(nucleolar complex associated 4 homolog,NOC4L)是一种重要的核糖体生物发生因子。为从翻译调控方面初步探究其在活化后T细胞中的作用,本研究首先利用构建好的Noc4l~(mCherry)转基因报告小鼠,通过流式细胞术检测NO... 详细信息

核仁复合孔相关蛋白4(nucleolar complex associated 4 homolog,NOC4L)是一种重要的核糖体生物发生因子。为从翻译调控方面初步探究其在活化后T细胞中的作用,本研究首先利用构建好的Noc4l~(mCherry)转基因报告小鼠,通过流式细胞术检测NOC4L在不同状态下的CD4^(+)T细胞中的表达水平;之后进一步检测在Th1和Th17细胞极化条件下,NOC4L随细胞增殖的表达情况;最后通过一系列体外实验检测在Th1和Th17细胞活化过程中与NOC4L相互作用的蛋白质,探究NOC4L发挥作用的可能机制。结果显示,NOC4L在活化的CD4^(+)T细胞中表达水平增加,并且NOC4L的表达与活化后T细胞的增殖水平及分裂特性密切相关;体外实验发现,在T细胞活化过程中,NOC4L与核糖体组装及增殖代谢相关蛋白之间存在相互作用。本研究为进一步探究辅助性T细胞的转录后调控奠定了基础,对深入理解T细胞的活化和调控机制具有重要意义。

关键词：核仁复合孔相关蛋白4 活化T细胞翻译调控细胞增殖

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APOBEC3B羧基端抗乙肝病毒位点的筛选和鉴定

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重庆医科大学学报 2017年第7期42卷 776-780页

作者：陈彦猛胡杰黄瑶袁琳周星胡源重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学基础医学院病原微生物教研室重庆400016

目的:筛选参与APOBEC3B羧基端脱氨酶及抗乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)活性的重要区域和关键位点。方法:定点突变构建羧基端活性中心附近的3个螺旋区段(α2、α3、α4)的缺失突变体和α4螺旋区内(D316、K320、E321、R327、D328)位点... 详细信息

目的:筛选参与APOBEC3B羧基端脱氨酶及抗乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)活性的重要区域和关键位点。方法:定点突变构建羧基端活性中心附近的3个螺旋区段(α2、α3、α4)的缺失突变体和α4螺旋区内(D316、K320、E321、R327、D328)位点的突变体;Southern blot筛选APOBEC3B抑制HBV复制的重要区段和关键位点;不同DNA变性PCR(differential DNA denaturation PCR,3D-PCR)和克隆测序进行验证。结果:APOBEC3B羧基端脱氨酶活性中心周围的α3和α4螺旋区缺失后,其抗病毒活性消失;D316位点突变后APOBEC3B的脱氨酶活性和抗病毒活性消失。结论:APOBEC3B羧基端的D316位点是APOBEC3B脱氨酶和抗病毒的关键位点。

关键词： APOBEC3B 脱氨基 3D-PCR D316

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粪便样本不同保存方式对肠道菌群测序结果的影响

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微生物学报 2022年第2期62卷 520-532页

作者：范馨月陈璐萍朱金滔律娜朱宝利中国科学院微生物研究所中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室北京100101 中国科学院大学存济医学院北京100049 病原微生物耐药与耐药基因组学北京市重点实验室北京100101 西南医科大学基础医学院四川泸州646000

【目的】本文探究了3种室温保存剂和–80°C冷冻保存对粪便样本中菌群结构的影响,为大规模、标准化的采样提供参考。【方法】本研究采集了5名健康志愿者的新鲜粪便作为测试样本,采用4种不同的保存方式保存:DETs室温保存、GITC室温... 详细信息

【目的】本文探究了3种室温保存剂和–80°C冷冻保存对粪便样本中菌群结构的影响,为大规模、标准化的采样提供参考。【方法】本研究采集了5名健康志愿者的新鲜粪便作为测试样本,采用4种不同的保存方式保存:DETs室温保存、GITC室温保存、RNAlater室温保存和–80°C冷冻保存,在保存0、1、3、7、14、28 d后,采用高通量测序技术测定样本中微生物16S rRNA基因V3-V4区序列,通过比较不同保存剂、不同保存时间后的样本与新鲜样本的差异,分析保存剂和保存时间对粪便样本菌群组成及丰度的影响。【结果】5组样本共得到489个操作分类单元(operational taxonomic units,OTUs),其中488个OTUs为5组所共有,且样本alpha多样性无统计学差异。从属水平上看,与fresh组(新鲜样本)相比,DETs组的拟杆菌属相对丰度显著升高,且部分OTUs在保存超过3 d后发生明显变化;其余保存方式无显著差异。综合分析微生物群落多样性和丰度,结果表明,在保存不同天数后,4种保存方式的样本与fresh组的菌群结构均无显著差异,其中-80°C保存的样本与fresh组样本菌群结构相似程度最高,但不同志愿者与各自新鲜样本的相似程度变化较大,且整体相似程度随着时间的推移与fresh组差异呈下降趋势;而使用DTEs保存剂和GITC保存剂保存的样本,志愿者个体间差异小,保存效果稳定,且随时间变化小。聚类分析结果表明,无论使用哪种保存方式,保存方式和时间带来的差异均小于志愿者个体间的差异。【结论】在满足低温冷冻保存条件时优先选择–80°C冷冻保存粪便样本,无法满足立即冷冻保存的条件时,可以选择添加保存剂室温保存,且GITC保存剂优于其他保存剂。

关键词：粪便样本室温保存肠道菌群保存剂高通量测序

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猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_1000的表达、纯化及活性分析

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中国人兽共患病学报 2013年第8期29卷 757-761页

作者：王涛郑玉玲袁媛江华郝淮杰李雪琴姜永强安徽医科大学研究生学院合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国科学院微生物研究所病原微生物与免疫学重点实验室北京100101

目的构建猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_1000基因的重组表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,并研究其对细胞间紧密连接的调控作用。方法以05ZYH33基因组为模板设计引物,构建pET30a-SSU05_1000重组表达质粒,转化到大肠杆菌中诱导表达,用... 详细信息

目的构建猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_1000基因的重组表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,并研究其对细胞间紧密连接的调控作用。方法以05ZYH33基因组为模板设计引物,构建pET30a-SSU05_1000重组表达质粒,转化到大肠杆菌中诱导表达,用镍亲和层析的方法对目的蛋白进行纯化,Western blot检测其对人脑微血管内皮细胞紧密连接的调控。结果构建的SSU05_1000重组表达质粒能够在大肠杆菌中高效表达,纯化的SSU05_1000蛋白纯度达90%以上,Western blot结果显示其与人脑微血管内皮细胞(hCMEC/D3)相互作用后,可以下调细胞间紧密连接蛋白Claudin-5的表达。结论 SSU05_1000蛋白能够破坏人脑微血管内皮细胞的紧密连接结构,提示其在猪链球菌穿血脑屏障(BBB,bloodbrain barrier)过程中起重要作用。

关键词：猪链球菌 SSU05_1000 紧密连接

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粪肠球菌类毒力基因sprE功能的动物实验研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第2期27卷 155-159页

作者：吴利先黄文祥孙小平重庆医科大学附属第一医院感染科重庆市传染病寄生虫病学重点实验室 400016 大理学院微生物学及免疫学教研室

目的构建粪肠球菌丝氨酸蛋白酶基因（sprE）突变株，通过动物实验来研究sprE基因的功能。方法通过小鼠腹膜炎模型和兔心内膜炎模型来评价粪肠球菌sprE基因的突变株（sprEmutant）的毒力下降情况。结果突变株在小鼠腹膜炎模型中的半数... 详细信息

目的构建粪肠球菌丝氨酸蛋白酶基因（sprE）突变株，通过动物实验来研究sprE基因的功能。方法通过小鼠腹膜炎模型和兔心内膜炎模型来评价粪肠球菌sprE基因的突变株（sprEmutant）的毒力下降情况。结果突变株在小鼠腹膜炎模型中的半数致死量（LD50）提高了7倍，小鼠的存活率明显高于野生株感染组，引起的兔心内膜炎的病理改变也较野生株轻微。结论 sprE基因在粪肠球菌致病中起着重要的作用，可能是粪肠球菌的毒力因子之一。

关键词：粪肠球菌丝氨酸蛋白酶基因毒力腹膜炎模型心内膜炎模型

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基于NP和M1蛋白的甲型流感通用疫苗的初步研究

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免疫学杂志 2013年第5期29卷 376-381页

作者：王文娟刘坤段跃强高啸邢丽张良艳王希良杨鹏辉安徽医科大学研究生学院合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的克隆、表达并纯化NP-M1-HSP60融合蛋白,免疫Balb/c小鼠,评价其免疫原性及免疫保护性,为候选甲型流感通用疫苗抗原提供新靶标。方法合成NP-M1-HSP60融合基因,构建pET28a-NP-M1-HSP60重组质粒,表达并纯化NP-M1-HSP60融合蛋白,抗原与S... 详细信息

目的克隆、表达并纯化NP-M1-HSP60融合蛋白,免疫Balb/c小鼠,评价其免疫原性及免疫保护性,为候选甲型流感通用疫苗抗原提供新靶标。方法合成NP-M1-HSP60融合基因,构建pET28a-NP-M1-HSP60重组质粒,表达并纯化NP-M1-HSP60融合蛋白,抗原与SP01水包油佐剂混匀,制备候选甲型流感通用疫苗,滴鼻免疫Balb/c小鼠,评价其免疫原性及免疫保护性。结果成功构建pET28a-NP-M1-HSP60表达载体,表达并纯化了NP-M1-HSP60融合蛋白;与SP01水包油乳剂佐剂混合免疫小鼠后,小鼠血清IgG抗体效价较对照组显著提升,鼻、肺灌洗液中sIgA水平显著升高,IgG亚型分析及细胞因子分泌细胞实验表明该候选疫苗可诱导相对均衡的Th1和Th2反应。免疫后小鼠分别对100LD50剂量的A/Beijing/501/2009(H1N1)毒株,100LD50剂量的PR8(H1N1)毒株和50LD50剂量的A/ostrich/Suzhou/097/2003(H5N1)毒株的攻击分别具有100%、100%和67%保护效果。结论 NP-M1-HSP60融合蛋白抗原具有一定的效果,为发展甲型流感通用疫苗提供了实验依据。

关键词： NP M1 HSP60 流感病毒通用疫苗

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两质粒系统重配甲型H1N1流感病毒株的研究

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免疫学杂志 2018年第4期34卷 353-358页

作者：周珊珊杨晓岚孙芳程晋霞谷宏婧段跃强杨鹏辉王希良安徽医科大学研究生院合肥230601 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建两质粒冷适应流感病毒拯救系统,提高流感病毒的重配效率。方法本研究通过构建克隆载体pfastbac△plh HTB,将流感病毒A/Ann Arbor/6/60(H2N2)6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M、NS)的双向转录表达元件定向克隆入此载体,获得pfast... 详细信息

目的构建两质粒冷适应流感病毒拯救系统,提高流感病毒的重配效率。方法本研究通过构建克隆载体pfastbac△plh HTB,将流感病毒A/Ann Arbor/6/60(H2N2)6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M、NS)的双向转录表达元件定向克隆入此载体,获得pfastbac△plh HTBP6。同时将流感病毒A/California/7/2009(H1N1)表面基因(HA、NA)双向转录表达元件定向克隆入p ENTR-1A质粒,获得p ENTR-1AP2。将2个重组质粒共转染MDCK/COSI细胞,细胞上清接种10日龄SPF鸡胚,收取尿囊液,血凝实验筛选阳性株,并进行全面鉴定。结果本研究利用两质粒系统成功重配甲型H1N1流感病毒株,命名为TRG A/California/07/2009(H1N1)Vca,重配病毒株传代后HA效价为2~8,形态符合流感病毒典型特征,大小80~120 nm,具有冷适应、温度敏感表型。结论两质粒流感病毒拯救系统为高效重配流感疫苗株提供了新策略。

关键词：反向遗传学两质粒系统流感病毒

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HBV逆转录复制分子机制的研究进展

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病毒学报 2013年第2期29卷 218-223页

作者：潘万龙方岩朱红李雪璐胡接力黄爱龙重庆医科大学感染病分子生物学教育部重点实验室重庆400016 川I北医学院微生物与免疫学教研室南充637000 甘肃省第二人民医院ICU 兰州730000

HBV感染是世界范围的公共卫生事件,我国尤为严重。理解和阐明HBV逆转录复制分子机制是优化治疗和处理耐药的基础。目前,通过生物化学及遗传学手段揭示了参与HBV逆转录过程的主要结构基础及顺式作用元件。在HBV逆转录复制过程中,主要经... 详细信息

HBV感染是世界范围的公共卫生事件,我国尤为严重。理解和阐明HBV逆转录复制分子机制是优化治疗和处理耐药的基础。目前,通过生物化学及遗传学手段揭示了参与HBV逆转录过程的主要结构基础及顺式作用元件。在HBV逆转录复制过程中,主要经历了由P-ε结构介导的第一次模板转换、5E/3E及M介导的第二次模板转换和5′r/3′r介导的第三次模板转换,从而完成逆转录复制整个过程。本文对这一过程中所涉及的重要结构和顺式作用元件详细阐述,同时对相关研究进展加以概括说明,以期能够给出HBV逆转录过程的全貌。

关键词： HBV 逆转录机制进展

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SARS病毒S蛋白受体结合区DNA疫苗及免疫效果研究

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免疫学杂志 2007年第2期23卷 131-134页

作者：谢力肖文珺管洁于虹赵瑞景周育森军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 河北医科大学免疫学教研室石家庄050017

目的研究SARS冠状病毒(SARS-CoV)靶细胞受体结合区所构建之DNA疫苗的免疫效果,为进一步的SARS-CoV免疫机理研究及疫苗研制奠定基础。方法选取SARS-CoVS基因包含靶细胞受体结合区和S1亚单位C端2个基因片段作为目的基因,构建真核表达质粒p... 详细信息

目的研究SARS冠状病毒(SARS-CoV)靶细胞受体结合区所构建之DNA疫苗的免疫效果,为进一步的SARS-CoV免疫机理研究及疫苗研制奠定基础。方法选取SARS-CoVS基因包含靶细胞受体结合区和S1亚单位C端2个基因片段作为目的基因,构建真核表达质粒pVAX-RBD(receptor binding domain)、pVAX-S1C作为DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,检测其特异性体液免疫及细胞免疫情况。结果体液免疫方面,以SARS全病毒裂解产物和原核表达的RBD蛋白作为诊断抗原,用ELISA均可检测到高滴度的小鼠血清抗体IgG的产生。而且,血清中和试验显示pVAX-RBD质粒激发了小鼠保护性中和抗体的产生。通过流式细胞分析和酶联免疫斑点实验(ELISPOT)检测,pVAX-RBD和pVAX-S1C两组质粒均诱导免疫小鼠产生了特异性细胞免疫反应。结论证明SARS-CoVS蛋白受体结合区上中和表位的存在;体液免疫在抗SARS-CoV感染方面起到重要作用。

关键词： SARS冠状病毒 s蛋白受体结合区中和抗体 DNA疫苗

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