检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病毒学 2005年第5期20卷 472-475页

作者：马翠卿周育森王弋嘉郭彦管洁魏林何玉先军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 河北医科大学免疫学教研室河北石家庄050017

为了表达SARS-CoV的S蛋白的受体结合区并对其免疫原性进行分析,用PCR方法扩增S蛋白的受体结合区基因片段,克隆至原核表达质粒pET-32a+并在大肠杆菌中表达,应用Western-blot鉴定表达的目的蛋白,而后以该蛋白作为诊断抗原包被酶联板来检... 详细信息

为了表达SARS-CoV的S蛋白的受体结合区并对其免疫原性进行分析,用PCR方法扩增S蛋白的受体结合区基因片段,克隆至原核表达质粒pET-32a+并在大肠杆菌中表达,应用Western-blot鉴定表达的目的蛋白,而后以该蛋白作为诊断抗原包被酶联板来检测20份SARS病人血清和28份健康人血清,结果原核表达的S蛋白能够和所用的SARS病人血清反应。这提示表达的S重组蛋白具有良好的抗原性。将变性纯化的重组蛋白和复性蛋白分别皮下免疫小鼠,第三次免疫一周后收集抗血清,用ELISA测定抗体和同时测定中和抗体活性。用变性的抗原免疫的小鼠血清均无中和活性;而用复性的蛋白免疫的小鼠产生了中和抗体。实验表明,S蛋白受体结合区无线性中和表位,中和抗体的产生是由构象表位诱导的。提示该蛋白有可能应用于亚单位疫苗的研究。

关键词：严重急性呼吸窘迫综合征病毒(SARS-CoV) 刺突蛋白(S蛋白) 受体结合区

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重组EV71和CVA16型手足口病双价VLP疫苗构建及免疫保护效果评价

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免疫学杂志 2014年第6期30卷 469-473页

作者：袁媛刘鑫周娅段跃强杨晓岚张立赵忠鹏王希良宁夏医科大学基础医学院病原生物学和免疫学教研室银川750004 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 解放军第302医院临床检验中心北京100039 总参警卫局卫生保健处北京100017

目的运用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达EV71和CVA16的病毒样颗粒，并对纯化的重组EV71、CVA16双价病毒样颗粒疫苗进行免疫效果评价。方法构建重组杆状病毒Bacmid-P1-3CD，转染Sf9昆虫细胞，纯化EV71、CVA16的病毒样颗粒并检测其形态... 详细信息

目的运用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达EV71和CVA16的病毒样颗粒，并对纯化的重组EV71、CVA16双价病毒样颗粒疫苗进行免疫效果评价。方法构建重组杆状病毒Bacmid-P1-3CD，转染Sf9昆虫细胞，纯化EV71、CVA16的病毒样颗粒并检测其形态和生物特性；通过EV71、CVA16的病毒样颗粒免疫ICR雌鼠后，以EV71、CVA16强毒株腹腔攻击5日龄乳鼠，对重组EV71、CVA16型双价VLP免疫保护性进行评价。结果利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功构建并表达EV71和CVA16病毒样颗粒，颗粒大小约为23-30nm，存在Mr约39000VP1特异性蛋白表达。重组EV71、CVA16双价VLP疫苗免疫接种能够诱导小鼠机体产生高效价的特异性抗体（EV71中和抗体效价为1：960，CVA16中和抗体效价为1：624）并发挥优于单价VLP疫苗的有效免疫保护效果。结论重组EV71、CVA16型双价VLP疫苗免疫原性和保护性显著高于单价疫苗，为手足口病疫苗的研发提供了新的思路及实验基础。。

关键词： EV71 CVA16 双价疫苗病毒样颗粒

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CD133表位联合热休克蛋白佐剂疫苗引发抗白血病的免疫应答（英文）

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生物工程学报 2017年第6期33卷 1006-1017页

作者：王硕范红霞李杨郑华国李鑫李长菲陈立钊鞠莹孟颂东河北大学生命科学学院河北保定071002 天津医科大学基础医学院天津300070 中国科学院微生物研究所中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室北京100101 中国科学院大学生命科学学院北京100049

肿瘤干细胞具有肿瘤形成、自我更新和抗化疗的特性,因而受到广泛关注和研究。CD133作为重要的肿瘤干细胞标志物与肿瘤细胞的干性与恶性密切相关。本研究筛选并且鉴定了CD133的3个H2-K^d限制性的细胞毒性T细胞(CTL)的表位,分别是CD133_(... 详细信息

肿瘤干细胞具有肿瘤形成、自我更新和抗化疗的特性,因而受到广泛关注和研究。CD133作为重要的肿瘤干细胞标志物与肿瘤细胞的干性与恶性密切相关。本研究筛选并且鉴定了CD133的3个H2-K^d限制性的细胞毒性T细胞(CTL)的表位,分别是CD133_(419–428)、CD133_(702–710)和CD133_(760–769)。将重组热休克蛋白gp96为佐剂联合CD133表位制备表位疫苗,将疫苗免疫CD133^+白血病移植的小鼠后引发抗肿瘤的特异性T细胞免疫应答。转输CD133表位特异的T细胞同样可以抑制小鼠淋巴瘤的生长。该研究为设计抗CD133^+的白血病和其他肿瘤的表位疫苗提供了依据。

关键词： CD133 表位 gp96 白血病细胞毒性T细胞

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羊布鲁菌OMP31蛋白基因表达及抗原性分析

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中国公共卫生 2013年第4期29卷 596-598页

作者：吴静波丘金浪逯光文许翔邱菲黎诚耀王文敬南方医科大学生物技术学院输血医学系广东广州510515 中国科学院微生物研究所病原微生物与免疫学重点实验室安徽农业大学生命科学学院

目的构建布鲁菌OMP31蛋白原核表达载体,获得OMP31蛋白。方法 PCR扩增OMP31基因,连接入pET-30a(+)表达载体中,构建pET-30a(+)/OMP31质粒,双酶切鉴定、测序正确后,转化入大肠埃希氏菌BL21(DE3)中,以不同浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IP... 详细信息

目的构建布鲁菌OMP31蛋白原核表达载体,获得OMP31蛋白。方法 PCR扩增OMP31基因,连接入pET-30a(+)表达载体中,构建pET-30a(+)/OMP31质粒,双酶切鉴定、测序正确后,转化入大肠埃希氏菌BL21(DE3)中,以不同浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,并通过二十烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析;蛋白质免疫印迹(western blot)初步分析其免疫原性。结果成功构建pET-30a(+)/OMP31表达载体,并表达出OMP31蛋白,分子量约为31 kDa,主要以包涵体形式存在;通过复性获得>95%的高纯度可溶性蛋白;以布鲁菌虎红平板阳性血清检测,显示复性后蛋白具有良好的免疫反应性。结论成功表达出带组氨酸(HIS)标签的OMP31融合蛋白,且具有较好的蛋白抗原性。

关键词：布鲁菌 OMP31 表达载体构建蛋白表达抗原性

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甲型H7N9流感裂解疫苗制备及免疫保护效果的评价

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免疫学杂志 2014年第7期30卷 608-611页

作者：陈锐段跃强赵忠鹏张良艳邢丽刘娜张立周娅王希良杨鹏辉宁夏医科大学基础医学院病原生物学和免疫学教研室银川750004 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 解放军第302医院医疗部北京100039 总参警卫局卫生保健处北京100071

目的构建、拯救重配甲型H7N9流感病毒疫苗候选株并制备甲型H7N9流感裂解疫苗,动物实验评价甲型H7N9流感裂解疫苗的免疫原性及免疫保护性效果。方法采用反向遗传学技术将A/Anhui/1/2013(H7N9)疫苗株的HA、NA基因和A/Puerto Rico/8/34(PR8... 详细信息

目的构建、拯救重配甲型H7N9流感病毒疫苗候选株并制备甲型H7N9流感裂解疫苗,动物实验评价甲型H7N9流感裂解疫苗的免疫原性及免疫保护性效果。方法采用反向遗传学技术将A/Anhui/1/2013(H7N9)疫苗株的HA、NA基因和A/Puerto Rico/8/34(PR8)毒株的PB2、PB1、PA、NP、M、NS基因进行重配,转染细胞后筛选拯救甲型H7N9流感病毒疫苗候选株,制备rgPR8-H7N9流感裂解疫苗抗原。腹腔注射免疫Balb/c小鼠,检测血清IgG、IgG1、IgG2a、HI效价,进一步用野生株攻毒,评价rgPR8-H7N9流感裂解疫苗的免疫保护效果。结果成功拯救甲型H7N9流感病毒疫苗候选株rgPR8-H7N9。制备的重配甲型H7N9流感裂解疫苗对小鼠产生较高的HI抗体效价。IgG1/IgG2a亚型检测结果表明小鼠体内以诱导体液免疫为主。攻毒实验显示甲型H7N9流感裂解疫苗能够有效降低肺部的病毒载量,肺组织病变显著减轻、体质量下降后趋于稳定,疫苗剂量达到15μg即可全部存活。A/Anhui/1/2013(H7N9)野生株流感病毒攻毒,甲型H7N9流感裂解疫苗能够达到保护小鼠效果。结论成功拯救重配甲型H7N9流感病毒疫苗候选株rgPR8-H7N9,制备的甲型H7N9流感裂解疫苗具有较好的免疫原性及免疫保护性,为H7N9流感裂解疫苗的研发及进入临床研究提供了实验依据。

关键词：反向遗传学 H7N9流感病毒裂解疫苗免疫保护性

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镀银医用聚丙烯网片的制备及其抗菌性检测

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重庆医科大学学报 2008年第5期33卷 592-595,599页

作者：王刚赵渝刘明方重庆医科大学附属第一医院普外科重庆市普外科重点实验室重庆医科大学病原微生物学教研室重庆400016

目的:制备镀银的医用聚丙烯网片(Polypropylene mesh,PP),并检测其抗菌性。方法:采用银作为抗菌剂,通过酒石酸钾钠作为还原剂的化学液相还原法,制成镀银PP。并分别用纸片扩散法和浸泡法对镀银组(n=10)和对照组(n=10)网片的抗菌性进行定... 详细信息

目的:制备镀银的医用聚丙烯网片(Polypropylene mesh,PP),并检测其抗菌性。方法:采用银作为抗菌剂,通过酒石酸钾钠作为还原剂的化学液相还原法,制成镀银PP。并分别用纸片扩散法和浸泡法对镀银组(n=10)和对照组(n=10)网片的抗菌性进行定性和定量的对比检测。结果:纸片扩散法(定性):在1d、3d、7d对照组(8mm×8mm×0.65mm)抑菌圈均不明显,网眼内还可见有金葡菌菌落附着生长。镀银组(8mm×8mm×0.65mm)抑菌圈则较为明显。两组比较有显著性差异(P<0.05)。不同时间段两两相比,差异无显著性(P>0.05)。浸泡法(定量):60min和120min时,对照组和镀银组比较有显著性差异(P<0.05)。240min时对照组和镀银组比较无显著性差异(P>0.05)。不同时间段两两相比,差异无显著性(P>0.05)。结论:镀银PP具有较为肯定的抗菌性,抗菌性随时间推移无明显变化。

关键词：银抗菌性聚丙烯

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人源靶向补体抑制物CR2-CD59在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达

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第三军医大学学报 2010年第9期32卷 887-890页

作者：郭彦寇志华孙世惠张传福赵光宇于虹宋宏彬乔飞陈万荣周育森军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 军事医学科学院疾病控制与预防研究所北京100071 美国南卡医科大学微生物学和免疫学系美国查里斯顿SC29425

目的构建人源靶向补体抑制物CR2-CD59,并筛选中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)高效表达细胞株。方法运用FuGENE6转染试剂,将含有人CR2-CD59的重组PEE14.1质粒转入CHO细胞,蛋氨酸亚氨基代砜(MSX)筛选出阳性克隆,并利用... 详细信息

目的构建人源靶向补体抑制物CR2-CD59,并筛选中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)高效表达细胞株。方法运用FuGENE6转染试剂,将含有人CR2-CD59的重组PEE14.1质粒转入CHO细胞,蛋氨酸亚氨基代砜(MSX)筛选出阳性克隆,并利用无血清培养基对CHO细胞表达株进行培养获得重组蛋白,以ELISA、SDS-PAGE和Western blot对表达蛋白进行鉴定。结果成功构建PEE14.1-CR2-CD59重组质粒,获得CHO细胞稳定表达株。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白CR2-CD59的相对分子质量同预期结果一致。ELISA和Western blot鉴定重组蛋白CR2-CD59可与CR2、CD59多克隆抗体特异性结合。且与含血清培养基相比,无血清培养基能明显提高CHO细胞的蛋白表达量(P<0.05)。结论在CHO细胞中成功表达人源靶向补体抑制物CR2-CD59。

关键词：中国仓鼠卵巢细胞 CR2-CD59 补体

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H7N4低致病性禽流感病毒小鼠感染模型建立及感染致病特征研究

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病毒学报 2024年第3期40卷 546-554页

作者：商若雨田甜刘云孙举张瑞丰张爽杨婧段学锋毕玉海山东第一医科大学山东省医学科学院研究生部济南250117 中国科学院微生物研究所病原微生物与免疫学重点实验室中国科学院流感研究与预警中心北京100101 中国科学院大学北京100049

2018年,我国江苏省首次报告人感染H7N4禽流感病毒事件,提示H7N4禽流感病毒具有跨种传播和人畜共患的风险。为评估流行的H7N4禽流感病毒感染和适应哺乳动物的能力,预警未来禽流感病毒感染致病哺乳动物甚至人类的风险,提供疫苗及药物研发... 详细信息

2018年,我国江苏省首次报告人感染H7N4禽流感病毒事件,提示H7N4禽流感病毒具有跨种传播和人畜共患的风险。为评估流行的H7N4禽流感病毒感染和适应哺乳动物的能力,预警未来禽流感病毒感染致病哺乳动物甚至人类的风险,提供疫苗及药物研发和评价的工具,本研究利用BALB/c小鼠建立了H7N4禽流感病毒感染模型并初步研究了病毒的感染致病特性。结果显示,随着病毒感染小鼠和连续传代次数的增加,病毒对小鼠的致病力逐渐增强。野生型病毒感染小鼠后(MA1),病毒可在肺脏中复制,但小鼠体重轻微且短暂性下降;自病毒在小鼠体内传至第2代(MA2)起,感染小鼠开始全部死亡且小鼠死亡时间逐渐缩短。MA2代感染小鼠7 d内全部死亡,MA5代感染小鼠4 d内全部死亡。对每代次病毒进行全基因组测序比对分析发现,随着感染代次的增加,病毒多个基因呈现出动态适应性突变,其中PB2-E627K和PA-T97I等突变很可能导致病毒对小鼠的致病力增强。研究结果提示:流行的H7N4禽流感病毒具有感染致病哺乳动物的能力和潜在风险,建立的小鼠感染模型为病毒的致病机制研究及疫苗和药物研发奠定了基础。

关键词：禽流感病毒 H7N4 小鼠感染模型突变

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结核菌H37Ra诱导迟发型超敏反应的探讨

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现代预防医学 2008年第2期35卷 343-344+350页

作者：王淑玲刘来成范雄林付瑞玲卢贤瑜重庆医科大学检验系临床免疫学教研室临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室华中科技大学同济医学院微生物学教研室

[目的]探讨结核分枝杆菌H37Ra免疫小鼠后能否诱发迟发型超敏反应及最佳的观测时间。[方法]Balb/c小鼠随机分为3组。分别用H37Ra、BCG和NS皮内免疫,6周后每组小鼠皮内注射PPD,游标卡尺测定24、48和72h局部皮肤红肿、硬结直径。[结果]H37R... 详细信息

[目的]探讨结核分枝杆菌H37Ra免疫小鼠后能否诱发迟发型超敏反应及最佳的观测时间。[方法]Balb/c小鼠随机分为3组。分别用H37Ra、BCG和NS皮内免疫,6周后每组小鼠皮内注射PPD,游标卡尺测定24、48和72h局部皮肤红肿、硬结直径。[结果]H37Ra组24、48和72h的局部皮肤红肿、硬结直径结果分别是(6.17±0.20)、(5.23±0.35)、(3.59±0.40)mm,24和48h反应稍弱于BCG组[(6.71±0.66)、(5.89±0.52)mm],无统计学意义(P﹥0.05)。与NS对照组相比,H37Ra和BCG免疫小鼠后均能诱导显著的迟发超敏型反应(P﹤0.05)。H37Ra组和BCG组均24h反应最明显。[结论]结核分枝杆菌H37Ra免疫小鼠6周后能诱导迟发型超敏反应,较BCG弱;24h为最佳观测时间。

关键词：结核分枝杆菌 H37Ra BCG 迟发型超敏反应

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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染小鼠致肺炎的模型构建与特征分析

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中国人兽共患病学报 2023年第5期39卷 447-454页

作者：赵玥周冬生杨文慧秦佟童吕蒙翟丽娜张丽丽商正玲贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵阳550025 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071 军事科学院军事医学研究院实验动物中心北京100071

目的建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的BALB/c小鼠吸入感染肺炎恢复模型,并评价模型的病原学、病理学、免疫学特征。方法将MRSA以气溶胶肺递送途径感染小鼠,在7 d内观察小鼠状态与死... 详细信息

目的建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的BALB/c小鼠吸入感染肺炎恢复模型,并评价模型的病原学、病理学、免疫学特征。方法将MRSA以气溶胶肺递送途径感染小鼠,在7 d内观察小鼠状态与死亡情况。选择亚致死剂量构建小鼠肺炎恢复模型,检测感染后小鼠的血液及心、肝、脾、肺、肾组织中的细菌载量及病理变化,并对血清与肺泡灌洗液中的细胞因子及肺组织的重要细胞群的变化趋势进行检测。结果致死剂量感染后小鼠的死亡时间集中在48 h内。亚致死剂量感染小鼠后,肺部的病变以48~72 h最为严重,其余组织器官无严重病变;多种细胞因子在12~48 h浓度升高至峰值,在96 h下降至接近感染前水平;在感染后48 h内的肺中,中性粒细胞、树突状细胞、炎性单核细胞、间质巨噬细胞和内皮细胞的比例明显增加,而T细胞、B细胞、肺泡巨噬细胞和上皮细胞的比例则下降。大部分细胞群的比例在96 h恢复至接近感染前水平。结论本研究成功构建了小鼠吸入MRSA感染肺炎恢复模型,并通过多种指标的检测明确0~96 h是小鼠感染后的应答关键期。该小鼠模型可用于深入开展MRSA感染的发病机理、免疫调控、治疗评价等研究,具有良好的应用价值。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌小鼠模型肺部感染气溶胶

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