检索结果-内蒙古大学图书馆

中华结核和呼吸杂志 2004年第4期27卷 244-248页

作者：陈全朱道银骆旭东蒋英江山重庆医科大学微生物学教研室 400016

目的　制备重组培养滤液蛋白 10和 6 0 0 0早期分泌性抗原靶的融合蛋白 (rCFP10 ESAT 6 ) ,研究其免疫学特性 ,评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法　用基因拼接 (GeneSOEing)法扩增lhp ESAT 6融合基因、并克隆入pQE30质粒 ,表达... 详细信息

目的　制备重组培养滤液蛋白 10和 6 0 0 0早期分泌性抗原靶的融合蛋白 (rCFP10 ESAT 6 ) ,研究其免疫学特性 ,评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法　用基因拼接 (GeneSOEing)法扩增lhp ESAT 6融合基因、并克隆入pQE30质粒 ,表达、纯化rCFP10 ESAT 6蛋白 ,通过Westernblot分析其抗原性。建立豚鼠BCG免疫模型和结核分枝杆菌强毒株 (H3 7Rv)感染模型 ,建立以融合蛋白为抗原的酶联免疫吸附测定 (ELISA)法 ,检测豚鼠血清中的抗结核分枝杆菌抗体 ,并与以纯化蛋白衍生物 (PPD)为抗原的ELISA法比较。结果　重组质粒pQE30 CFP10 ESAT 6靶基因的测序结果与预计序列 (lhp linker ESAT 6 )完全一致。融合蛋白在DH5α菌中以可溶性非包涵体形式存在 ,表达量占菌体总蛋白的 4 0 % ,分子质量为 2 6 0 0 0 ,纯化后的蛋白纯度为 98% ,浓度为 1 2 g/L。Westernblot分析表明 ,融合蛋白与活动性肺结核患者血清、兔抗CFP10血清和兔抗ESAT 6血清都能发生特异性免疫反应。以 10只生理盐水处理豚鼠血清的平均吸光度 (A)值 + 2s为正常界限值 ,以融合蛋白为抗原 ,11份H3 7Rv感染豚鼠血清全部呈阳性反应 ,11份BCG免疫豚鼠血清仅 1份呈阳性反应 ;以PPD为抗原 ,11份H3 7Rv感染豚鼠血清全部呈阳性反应 ,11份BCG免疫豚鼠血清也?

关键词：重组结核分枝杆菌 CFPlO-ESAT-6融合蛋白制备临床应用

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结核分枝杆菌Ag85B与IL-12基因真核共表达质粒的构建及表达

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第6期20卷 664-666页

作者：江山朱道银骆旭东陈全蒋英重庆医科大学微生物学教研室重庆400016

目的 :构建结核分枝杆菌Ag85B和鼠IL 12基因的共表达载体pBud85B IL12。方法 :将结核分枝杆菌Ag85B基因和鼠IL 12基因同时克隆入含多启动子的共表达载体pBudCE4 .1中 ,构建真核共表达质粒pBud85B IL12。以pBud85B IL12转染COS 7细胞 ,通... 详细信息

目的 :构建结核分枝杆菌Ag85B和鼠IL 12基因的共表达载体pBud85B IL12。方法 :将结核分枝杆菌Ag85B基因和鼠IL 12基因同时克隆入含多启动子的共表达载体pBudCE4 .1中 ,构建真核共表达质粒pBud85B IL12。以pBud85B IL12转染COS 7细胞 ,通过RT PCR及ELISA方法检测目的基因的表达。结果 :在COS 7细胞中同时可检测到Ag85B和IL12的表达。结论 :pBud85B IL12共表达质粒的成功构建 ,为对其免疫原性。

关键词：结核分枝杆菌 Ag85B IL-12 共表达载体

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结核分枝杆菌lhp基因原核表达载体的构建和表达

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第4期19卷 332-334,340页

作者：陈全骆旭东蒋英江山朱道银重庆医科大学微生物学教研室重庆400016

目的 :构建结核分枝杆菌 (MTB)lhp基因原核表达载体并进行表达。方法 :用PCR扩增MTBlhp基因 ,并克隆入pQE30质粒。测序正确后 ,再亚克隆入 pET32a(+)质粒 ,构建pQE30 CFP10和pET32a(+) CFP10重组体。结果 :以重组体分别转化DH5α和BL... 详细信息

目的 :构建结核分枝杆菌 (MTB)lhp基因原核表达载体并进行表达。方法 :用PCR扩增MTBlhp基因 ,并克隆入pQE30质粒。测序正确后 ,再亚克隆入 pET32a(+)质粒 ,构建pQE30 CFP10和pET32a(+) CFP10重组体。结果 :以重组体分别转化DH5α和BL2 1(DE3)菌后 ,经IPTG诱导 ,pQE30 CFP10未表达目的蛋白 ;而 pET32a(+) CFP10则表达出Mr 为 2 0 0 0 0左右重组蛋白。SDS PAGE分析显示 ,IPTG诱导 4h重组蛋白的表达量最高。表达蛋白以可溶性非包涵体形式存在于胞质中 ,表达量占全菌蛋白质的 38% ,用Westernblot证实其具有良好的抗原性。经Ni NTA柱纯化 ,获得纯度为 93%的重组蛋白。结论 :成功地构建原核表达载体 pET32a(+) CFP10 ,并获得重组CFP10蛋白 ,为MTB重组抗原的应用奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌 lhp基因 CFPIO

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结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因疫苗的免疫效果观察

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第6期19卷 592-594页

作者：骆旭东朱道银陈全蒋英江山重庆医科大学微生物学教研室重庆400016

目的:研究并比较结核分枝杆菌(H37Rv)Ag85B、MPT64DNA.以及两者的融合基因(AM)的免疫原性。方法:雌性C57BL/6小鼠25只,随机分为5组,即A组(PBS)、B组(peDNA3.1)、C组(pcDNA/Ag85B)、D组(pcDNA/MPT64)和E组(pcDNA/AM)。分别于胫前肌注射7.5 g/L利多卡因和质粒混合物(1:4,100μL,含质粒70μg/次),间隔2 wk免疫 1次,共3次。末次免疫后4 wk取血分离血清测定总IgG,同时分离脾淋巴细胞,用PPD刺激后分别做脾淋巴细胞增殖实验(MTT比色法)和测定脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ的水平。结果:Ag85B、MPT64和AM质粒DNA,均能诱导小鼠产生较高水平的PPD特异性IgG。免疫小鼠脾淋巴细胞体外经PPD刺激后,能产生特异性淋巴细胞增殖和分泌IFN-γ。peDNA/AM组IFN-γ的分泌水平明显高于pcDNA/Ag85B和pcDNA/MPT64免疫组(P<0.05)。结论:结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因疫苗,能在小鼠体内诱导特异性细胞和体液免疫。

关键词：结核分枝杆菌 Ag85B MPT64 融合基因 DNA疫苗

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双歧杆菌脂磷壁酸对结肠癌细胞Toll样受体表达的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第10期25卷 803-805页

作者：王跃罗强陈淑惠刘明方重庆医科大学临床微生物学教研室 400016

目的通过研究双歧杆菌脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA)对结肠癌细胞中Toll样受体(TLR)表达的影响,探讨TLR在启动双歧杆菌LTA抗肿瘤信号转导通路中的作用。方法用RT-PCR检测结肠癌细胞HCT-116经双歧杆菌LTA处理前后TLR的表达变化。结果... 详细信息

目的通过研究双歧杆菌脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA)对结肠癌细胞中Toll样受体(TLR)表达的影响,探讨TLR在启动双歧杆菌LTA抗肿瘤信号转导通路中的作用。方法用RT-PCR检测结肠癌细胞HCT-116经双歧杆菌LTA处理前后TLR的表达变化。结果结肠癌HCT-116细胞有TLR的基础表达,且经LTA处理后受体的表达增强,呈剂量依赖性。结论双歧杆菌LTA可上调TLR的表达,提示双歧杆菌LTA诱导肿瘤细胞凋亡的信号转导途径可能由TLR启动。

关键词：脂磷壁酸双歧杆菌 Toll样受体表达

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功能性自身抗体及其作用机制研究进展

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免疫学杂志 2019年第10期35卷 906-911页

作者：孟彩云宋武琦哈尔滨医科大学病原微生物学教研室

随着对自身抗体研究的不断深入,功能性自身抗体已成为自身抗体研究领域的新热点。这类免疫球蛋白大多为受体抗体,其在疾病中的作用机制为目前的热点研究内容。该类抗体对介导机体心血管功能异常、内分泌紊乱以及神经系统传导功能异常等... 详细信息

随着对自身抗体研究的不断深入,功能性自身抗体已成为自身抗体研究领域的新热点。这类免疫球蛋白大多为受体抗体,其在疾病中的作用机制为目前的热点研究内容。该类抗体对介导机体心血管功能异常、内分泌紊乱以及神经系统传导功能异常等具有重要作用。本文将对功能性自身抗体的作用机制以及应用价值进行综述。

关键词：功能性自身抗体作用机制受体抗体

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双歧杆菌脂磷壁酸延缓脾脏衰老的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第7期24卷 568-570页

作者：付玉荣王跃刘明方陈淑惠重庆医科大学临床微生物学教研室 400016

目的　研究双歧杆菌表面分子脂磷壁酸 (LTA)在D 半乳糖诱导的衰老小鼠体内 ,对脾脏指数和脾细胞DNA损伤的影响。方法　在建立D 半乳糖诱导的衰老小鼠模型的同时 ,注射双歧杆菌LTA ;然后测定模型对照组、正常对照组、试验组小鼠的脾脏指... 详细信息

目的　研究双歧杆菌表面分子脂磷壁酸 (LTA)在D 半乳糖诱导的衰老小鼠体内 ,对脾脏指数和脾细胞DNA损伤的影响。方法　在建立D 半乳糖诱导的衰老小鼠模型的同时 ,注射双歧杆菌LTA ;然后测定模型对照组、正常对照组、试验组小鼠的脾脏指数 ,并以单细胞凝胶电泳试验检测脾脏淋巴细胞DNA氧化损伤的情况。结果　与正常对照组相比 ,模型对照小鼠的脾脏指数显著升高 (P <0 .0 5 ) ,脾淋巴细胞DNA受到了较严重的损伤 (P <0 .0 5 ) ;用双歧杆菌LTA处理后 ,试验小鼠的脾脏指数明显下降 (P <0 .0 5 ) ,脾淋巴细胞DNA的损伤程度显著降低 (P <0 .0 5 )。结论　双歧杆菌LTA能显著抑制衰老小鼠脾脏淋巴细胞DNA的氧化损伤 ,这可能与双歧杆菌抗衰老有关。

关键词：双歧杆菌脂磷壁酸脾脏衰老 LTA 淋巴细胞

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双歧杆菌完整肽聚糖对重组乙肝表面抗原细胞免疫应答的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第5期22卷 617-619页

作者：王跃谢成彬刘明方陈淑惠重庆医科大学临床微生物学教研室重庆400016

目的:探讨双歧杆菌完整肽聚糖(BWPG)对重组乙肝表面抗原(rHBsAg)诱导细胞免疫应答的影响。方法:以BWPG作为rHBsAg的佐剂免疫BALB/c小鼠,观察免疫小鼠的生长状态及中枢淋巴器官的发育情况,检测NK细胞和CTL杀伤活性的变化,脾淋巴细胞的增... 详细信息

目的:探讨双歧杆菌完整肽聚糖(BWPG)对重组乙肝表面抗原(rHBsAg)诱导细胞免疫应答的影响。方法:以BWPG作为rHBsAg的佐剂免疫BALB/c小鼠,观察免疫小鼠的生长状态及中枢淋巴器官的发育情况,检测NK细胞和CTL杀伤活性的变化,脾淋巴细胞的增殖和细胞因子的产生。结果:免疫小鼠未出现可见的毒副反应,胸腺和脾脏组织呈增生状态,脾脏NK细胞和CTL的杀伤活性增强,脾淋巴细胞体外增殖活跃,细胞因子产生增多。结论:BWPG能促进中枢淋巴器官增生,增强机体对rHBsAg的细胞免疫应答。

关键词：双歧杆菌完整肽聚糖 HBsAg 细胞免疫应答

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颗粒溶素和白细胞介素12重组耻垢分枝杆菌对小鼠结核病的治疗作用

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中华结核和呼吸杂志 2007年第2期30卷 133-137页

作者：杨春王渝伟伊正君何永林李娜徐蕾张黎朱道银重庆医科大学免疫学与微生物学教研室 400016

目的探讨携带编码人天然颗粒溶素和小鼠白细胞介素12(IL-12)基因质粒(pZM03)的重组耻垢分枝杆菌对结核分枝杆菌感染的疗效与机制。方法结核分枝杆菌 H_(37)Rv 感染 Balb/c小鼠4周后,分别用生理盐水、耻垢分枝杆菌、pZM03、重组耻垢分枝... 详细信息

目的探讨携带编码人天然颗粒溶素和小鼠白细胞介素12(IL-12)基因质粒(pZM03)的重组耻垢分枝杆菌对结核分枝杆菌感染的疗效与机制。方法结核分枝杆菌 H_(37)Rv 感染 Balb/c小鼠4周后,分别用生理盐水、耻垢分枝杆菌、pZM03、重组耻垢分枝杆菌治疗6次,于第1次治疗后3个月处死小鼠,检测器官荷菌量、脾淋巴细胞γ干扰素的分泌水平、血清 IL-12和 IgG_(2a)分泌水平和肺、脾组织中颗粒溶素表达,同时观察小鼠肺、脾组织病理改变情况。结果重组耻垢分枝治疗组的肺和脾组织对数荷菌量分别为(4.57±0.28)和(3.47±0.25)CFU/g,比生理盐水组的(5.77±0.12)和(4.66±0.18)CFU/g、载体组的(5.62±0.14)和(4.65±0.26)CFU/g 及质粒组的(5.04±0.22)和(4.25±0.48)显著降低;重组耻垢分枝杆菌组和 pZM03组经结核菌素纯蛋白衍生物刺激后,γ干扰素分泌水平显著高于耻垢分枝杆菌组和生理盐水对照组;重组耻垢分枝杆菌组血清 IL-12水平和IgG_(2a)水平显著高于耻垢分枝杆菌组和生理盐水对照组。用免疫组织化学方法检测到小鼠肺及脾组织中颗粒溶素的表达。生理盐水和耻垢分枝杆菌组的肺组织病理改变以渗出为主,病变广泛,增生改变不明显;重组耻垢分枝杆菌组的病变范围局限,并有类上皮细胞和泡沫细胞。治疗组和对照组的脾脏病理改变不明显。结论携带颗粒溶素和 IL-12的重组耻垢分枝杆菌对小鼠结核病有一定的免疫治疗作用,与增强宿主 Th1型免疫应答和颗粒溶素的抗菌活性有关。

关键词：白细胞介素12 分枝杆菌耻垢分枝杆菌结核颗粒溶素

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肠道病毒D68型感染前后转录组分析及差异表达基因的验证

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第三军医大学学报 2021年第4期43卷 275-282页

作者：唐霞司俊卓卢楠何永林徐蕾包嘉佳唐佳玲杨春重庆医科大学基础医学院病原微生物学教研室重庆400016

目的探讨肠道病毒D68型(enterovirus D68, EV-D68)感染前后宿主细胞转录组的表达变化,寻找与EV-D68感染的相关基因及信号通路,为初步探索EV-D68的感染机制奠定基础。方法将病毒以感染复数(multiplicity of infection,MOI)0.01接种于人... 详细信息

目的探讨肠道病毒D68型(enterovirus D68, EV-D68)感染前后宿主细胞转录组的表达变化,寻找与EV-D68感染的相关基因及信号通路,为初步探索EV-D68的感染机制奠定基础。方法将病毒以感染复数(multiplicity of infection,MOI)0.01接种于人横纹肌瘤(rhabdomyosarcoma, RD)细胞,24 h后提取感染组和对照组细胞总RNA进行转录组测序,筛选差异表达基因(differentially expressed genes, DEGs),对其进行GO和KEGG富集分析,并用RT-qPCR验证8个主要差异表达的基因(EGR1、c-fos、ZNF625、ARRDC3、c-jun、ASNS、CHAC1、ADM2)。结果从测序结果中共筛选出差异表达两倍以上的基因140个,其中上调基因71个,下调基因69个。GO功能富集分析结果主要涉及离子的调控与应答;KEGG富集分析结果主要与甲状旁腺激素的合成分泌和作用、GnRH信号通路、Toll样受体信号通路、IL-17信号通路和MAPK信号通路等有关。RT-qPCR验证结果表明选取的8个基因上调或下调的差异表达倍数趋势与测序结果基本一致,c-fos和c-jun的表达量随病毒MOI及感染时长的增加而增加。结论通过对差异表达基因的功能和信号通路富集分析及验证,EV-D68加重哮喘的机制可能与c-fos上调有关;而MAPK信号通路可能在EV-D68感染期间发挥促炎作用和抗病毒作用。

关键词： EV-D68 转录组测序差异表达基因

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