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40年风雨历程:中国乙型肝炎的负担和希望 ——谨以此文献给中国改革开放40周年

中华肝脏病杂志 2019年第1期27卷 3-5页

作者：蔡大川任红重庆医科大学附属第二医院感染科、重庆医科大学病毒性肝炎研究所、教育部感染性疾病分子生物学重点实验室 400010

中国改革开放40周年来,全国各行各业发生了翻天覆地的变化。历经40年的风雨历程,慢性乙型肝炎防治领域研究硕果累累。乙型肝炎疫苗接种使乙型肝炎病毒(HBV)感染流行率大幅下降,有效的抗HBV治疗使广大乙型肝炎患者获益,逐步形成了抗HBV... 详细信息

中国改革开放40周年来,全国各行各业发生了翻天覆地的变化。历经40年的风雨历程,慢性乙型肝炎防治领域研究硕果累累。乙型肝炎疫苗接种使乙型肝炎病毒(HBV)感染流行率大幅下降,有效的抗HBV治疗使广大乙型肝炎患者获益,逐步形成了抗HBV治疗领域"强效、低耐药和免疫调节并举"的共识。我们相信,在不远的将来,根据"预防为主,防治并举"的原则,通过新生儿普遍接种疫苗、高危人群接种疫苗,积极治疗HBV携带者和慢性乙型肝炎患者,实现肝细胞癌的"早期筛查、早期诊断、早期治疗"等措施。

关键词：肝炎,乙型抗病毒治疗癌,肝细胞预防

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丙型肝炎直接抗病毒治疗耐药相关突变的临床意义

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中华肝脏病杂志 2017年第3期25卷 170-174页

作者：李召陈志伟任红胡鹏重庆医科大学附属第二医院感染科重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室 400010

直接抗病毒药物（DAAs）治疗慢性丙型肝炎病毒感染获得了较高的持续病毒学应答率。但耐药相关突变（RAVs）在其治疗失败中有着重要作用，引起越来越多的临床关注。现从DAAs耐药相关突变的定义，RAVs与基因型的关系，已知耐药突变及其流... 详细信息

直接抗病毒药物（DAAs）治疗慢性丙型肝炎病毒感染获得了较高的持续病毒学应答率。但耐药相关突变（RAVs）在其治疗失败中有着重要作用，引起越来越多的临床关注。现从DAAs耐药相关突变的定义，RAVs与基因型的关系，已知耐药突变及其流行率，RAVs对于初治及经治患者的影响，以及耐药检测的临床作用方面阐述RAVs的临床意义，以期对优化临床DAAs治疗方案提供借鉴，获得更高的持续病毒学应答率。

关键词：肝炎丙型直接抗病毒药物耐药

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Fractalkine基因真核表达质粒的构建及其在小鼠肝癌细胞中的表达

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西南师范大学学报（自然科学版） 2005年第1期30卷 122-125页

作者：唐俐曾彦胡鹏彭明利兰英华任红重庆医科大学病毒性肝炎研究所省部共建感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400010

为克隆小鼠趋化因子Fractalkine(FK)基因, 构建真核表达质粒, 并在小鼠肝癌细胞中表达, 用以进行肿瘤的基因治疗, 用RT PCR法, 从小鼠乳腺癌细胞D2F2扩增FK的cDNA, 插入pCR2. 1 TOPO载体, 测序证实后,将其亚克隆至质粒pIRES中构建FK... 详细信息

为克隆小鼠趋化因子Fractalkine(FK)基因, 构建真核表达质粒, 并在小鼠肝癌细胞中表达, 用以进行肿瘤的基因治疗, 用RT PCR法, 从小鼠乳腺癌细胞D2F2扩增FK的cDNA, 插入pCR2. 1 TOPO载体, 测序证实后,将其亚克隆至质粒pIRES中构建FK真核表达载体; 用脂质体将重组质粒转染小鼠肝癌MM45T Li细胞, 经G418筛选获得抗性细胞克隆, 用RT PCR和免疫化学方法鉴定转染细胞中 FK基因的表达. 结果表明: 经限制性内切酶酶切图谱分析和 DNA 序列测定证实目的基因已插入重组质粒, RT PCR 和免疫化学方法证明转基因MM45T .Li细胞克隆中存在小鼠FK基因的表达.

关键词： fractalkine MM45T.Li细胞基因克隆真核表达

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HBV慢性携带小鼠中CD27和CD11b标记NK细胞亚群的变化

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中华肝脏病杂志 2019年第6期27卷 436-439页

作者：张琼方张大志重庆医科大学病毒性肝炎研究所教育部感染性疾病分子生物学重点实验室重庆医科大学附属第二医院感染科 400010

目的评价乙型肝炎病毒(HBV)慢性携带小鼠中CD27和CD11b标记自然杀伤(NK)细胞亚群的变化。方法将pAAV-HBVl.2质粒采用高压水动力法尾静脉注入C57BL/6小鼠体内,作为造模组,空载质粒作为对照组;检测不同时间点肝功能和病毒学指标判断HBV质... 详细信息

目的评价乙型肝炎病毒(HBV)慢性携带小鼠中CD27和CD11b标记自然杀伤(NK)细胞亚群的变化。方法将pAAV-HBVl.2质粒采用高压水动力法尾静脉注入C57BL/6小鼠体内,作为造模组,空载质粒作为对照组;检测不同时间点肝功能和病毒学指标判断HBV质粒慢性携带动物模型构建情况;采用流式细胞术检测脾脏和肝脏中NK细胞及CD11b联合CD27划分的NK细胞亚群的频数;采用Graphpad Prism软件进行统计学分析。结果小鼠HBV持续携带模型构建成功。与对照组相比,HBV慢性携带小鼠的脾脏和肝脏中的NK细胞频数差异均无统计学意义(P值均>0.05)。CD27联合CD11b将NK细胞划分为CD11b+CD27-(CD11b+SP)、CD11b+CD27+(DP)、CD11b-CD27+(D27+SP)和CD11b-CD27-(DN)四个亚群,与对照组相比,HBV慢性携带小鼠的脾脏中四个NK细胞亚群的频数差异均无统计学意义(P值均>0.05)。HBV慢性携带小鼠的肝脏中DN NK细胞亚群的频数与对照组比较显著增多(P<0.001),CD11b+SP细胞亚群的频数显著减少(P<0.05),DP和CD27+SP两个NK细胞亚群频数差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论HBV慢性携带小鼠肝脏NK细胞亚群分布异常,DN NK细胞亚群的频数明显增多,CD11b+SP细胞亚群的频数显著减少。

关键词：肝炎病毒,乙型淋巴细胞亚群自然杀伤细胞质粒高压注射

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猪IL27p28蛋白分子的三维结构模建的研究

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西南师范大学学报（自然科学版） 2005年第6期30卷 1090-1094页

作者：胡鹏胡怀东唐俐彭明利任红重庆医科大学病毒性肝炎研究所省部共建感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400010

利用生物信息学手段分析了猪白细胞介素IL27p28(IL27p28)蛋白的二级结构及特征,并运用线索化／折叠识别方法模建了猪IL27p28蛋白分子的三维空间结构,它是一种与4-螺旋细胞因子超家族中的牛粒细胞集落刺激因子(G-CSF)类似,并且含有多个... 详细信息

利用生物信息学手段分析了猪白细胞介素IL27p28(IL27p28)蛋白的二级结构及特征,并运用线索化／折叠识别方法模建了猪IL27p28蛋白分子的三维空间结构,它是一种与4-螺旋细胞因子超家族中的牛粒细胞集落刺激因子(G-CSF)类似,并且含有多个功能结构位点的全α型蛋白质．在此基础上,结合氨基酸特性,分析其可能的功能位点,发现其中5个功能结构位点分布在蛋白质纵轴的两端．包括1个蛋白激酶C磷酸化位点,3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和一个N-豆寇酰化位点,推测蛋白质纵轴的两端是其重要的功能结构区域．

关键词： IL27p28 蛋白质三维结构结构预测线索化/折叠识别方法

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CD36在非酒精性脂肪性肝病中的作用

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中华肝脏病杂志 2017年第12期25卷 953-956页

作者：詹柱任红彭明利重庆医科大学附属第二医院感染科重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室 400010

非酒精性脂肪性肝病包括非酒精性单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎以及相关的肝硬化和肝癌，是目前全球最为常见的肝脏疾病，对其复杂的发病机制的探索是研究人员关注的重点。CD36是一种跨膜糖蛋白，因其在肝脏中主要发挥着脂肪酸摄取... 详细信息

非酒精性脂肪性肝病包括非酒精性单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎以及相关的肝硬化和肝癌，是目前全球最为常见的肝脏疾病，对其复杂的发病机制的探索是研究人员关注的重点。CD36是一种跨膜糖蛋白，因其在肝脏中主要发挥着脂肪酸摄取及结合氧化的低密度脂蛋白等作用，参与到了非酒精性脂肪性肝病的发生、发展过程。结合近期研究成果，现就CD36与非酒精性脂肪性肝病的关系及其发挥的作用进行综述。

关键词：脂肪肝非酒精性脂肪酸类 CD36

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丙型肝炎病毒F蛋白原核表达载体的构建、表达和纯化

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重庆医科大学学报 2009年第4期34卷 385-388页

作者：高亚丽刘娇刘湘汤华陈沂蔡雪飞唐霓重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆400016

目的:构建丙型肝炎病毒(Hepatitis Cvirus,HCV)F蛋白的原核表达载体,表达pET32a(+)-HCVF融合蛋白。方法:根据丙型肝炎病毒F基因的全序列设计引物,以HCV1a型cDNA质粒H/FL为模板,通过PCR方法扩增得到F基因的编码区序列,将其定向克隆于含有... 详细信息

目的:构建丙型肝炎病毒(Hepatitis Cvirus,HCV)F蛋白的原核表达载体,表达pET32a(+)-HCVF融合蛋白。方法:根据丙型肝炎病毒F基因的全序列设计引物,以HCV1a型cDNA质粒H/FL为模板,通过PCR方法扩增得到F基因的编码区序列,将其定向克隆于含有6×Histag的原核表达载体pET32a(+),转化大肠杆菌JM109,经菌落PCR筛选,双酶切和测序鉴定阳性克隆后,转化大肠杆菌BL21,采用IPTG诱导表达融合蛋白,表达产物经SDS-PAGE电泳分析和Western-blot检测鉴定,并用Ni-NTA亲和层析柱纯化。结果:F基因以正确的方式插入到pET32a(+)载体中,重组质粒转化大肠杆菌BL21后经IPTG诱导表达,出现了与预期分子量相符的蛋白条带,该蛋白通过Westernblot检测具有6×Histag蛋白的免疫学活性。结论:成功构建了丙型肝炎病毒F蛋白的原核表达载体pET32a(+)-HCVF并表达和纯化出重组融合蛋白,为进一步研究F蛋白的生物学功能奠定了基础。

关键词：丙型肝炎病毒 F蛋白原核表达

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转化生长因子β1及基质金属蛋白酶抑制剂1、2siRNA真核表达载体的构建与鉴定

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中华肝脏病杂志 2011年第4期19卷 291-296页

作者：钱克莉徐宁郎清戚敬虎孙银春肖朗刘杞石小枫重庆医科大学附属第二医院感染科重庆医科大学病毒性肝炎研究所教育部感染性疾病分子生物学重点实验室400010 陕西省榆林市第二医院重症医学科

目的用RNA干扰技术,分别以转化生长因子（TGF）β 1、基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP）-1和TIMP-2为靶基因,设计并构建针对TGF β 1、TIMP-1和TIMP-2基因的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体,并在体外检测其对大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）的T... 详细信息

目的用RNA干扰技术,分别以转化生长因子（TGF）β 1、基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP）-1和TIMP-2为靶基因,设计并构建针对TGF β 1、TIMP-1和TIMP-2基因的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体,并在体外检测其对大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）的TGF β 1、TIMP-1和TIMP-2基因表达的抑制情况.方法设计合成TGF β 1、TIMP-1和TIMP-2的siRNA并与含绿色荧光蛋白的pGenesil-1载体连接,构建siRNA真核表达载体,并测序鉴定.体外转染HSC-T6细胞,观察转染效率,并用荧光定量PCR以及Western blot分析对目的基因的抑制效率.组间比较用方差分析,两两比较用q检验.结果成功构建了针对TGF β 1、TIMP-1和TIMP-2基因的siRNA真核表达载体.体外成功转染HSC-T6细胞,转染后的细胞TGF β 1、TIMP-1及TIMP-2 mRNA表达分别下调63.4%±8.0%,64.5%±9.0%,55.0%±17.0%（F值分别为17.55、128.42、210.36,P值均＜0.01）,TGF β 1、TIMP-1及TIMP-2蛋白表达分别下降57.8%±3.0%,55.1%±5.0%,49.3%±1.0%（F值分别为130.75、159.09、35.72,P值均＜0.01）.结论成功构建了针对TGF β 1、TIMP-1和TIMP-2基因的siRNA真核表达载体;将重组载体成功转染入体外培养的HSC-T6细胞,并显著抑制了目的基因的表达;为进一步研究其在体抑制表达提供了实验工具.

关键词：肝硬化转化生长因子β 肝星状细胞

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丙型肝炎病毒重要编码蛋白重组腺病毒载体的构建

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生物技术通报 2011年第3期27卷 146-149,159页

作者：刘娇周帆陈庆美单晓亮唐霓重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016

旨在构建含HCV core、E1、E2、F、NS3、NS5a和NS5b基因的重组腺病毒载体。运用PCR技术扩增目的基因片段,通过酶切连接方法将上述7种基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-TO4中,然后将重组质粒用PmeⅠ线性化后与骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细... 详细信息

旨在构建含HCV core、E1、E2、F、NS3、NS5a和NS5b基因的重组腺病毒载体。运用PCR技术扩增目的基因片段,通过酶切连接方法将上述7种基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-TO4中,然后将重组质粒用PmeⅠ线性化后与骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌中同源重组。用PacⅠ酶把重组腺病毒载体线性化后转染HEK293细胞后产生重组腺病毒颗粒。利用穿梭质粒中带有绿色荧光蛋白GFP对其感染效率进行监测。结果显示,酶切鉴定和测序结果均证实含core、E1、E2、F、NS3、NS5a和NS5b基因的重组腺病毒构建成功,在感染的Huh7细胞中观察到绿色荧光蛋白GFP。成功制备了高滴度的腺病毒Ad-core、Ad-E1、Ad-E2、Ad-F、Ad-NS3、Ad-NS5a和Ad-NS5b,为后续研究奠定了基础。

关键词： HCV编码蛋白穿梭质粒骨架质粒同源重组腺病毒

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汉坦病毒包膜糖蛋白G2与β3整合素的表达及相互作用

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中国人兽共患病学报 2008年第6期24卷 531-534页

作者：李青岭冯涛郭进军黄爱龙重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室

目的研究汉坦病毒76-118株包膜糖蛋白G2与β3整合素之间的相互作用。方法根据HV76-118株M基因和β3整合素基因序列设计引物,分别以质粒M56和Hela细胞cDNA为模板通过PCR和基因重组获得带有EGFP标签的G2和带有FLAG标签的β3整合素膜外区... 详细信息

目的研究汉坦病毒76-118株包膜糖蛋白G2与β3整合素之间的相互作用。方法根据HV76-118株M基因和β3整合素基因序列设计引物,分别以质粒M56和Hela细胞cDNA为模板通过PCR和基因重组获得带有EGFP标签的G2和带有FLAG标签的β3整合素膜外区片段融合表达质粒,并且在HEK293细胞中进行表达。将表达成功的G2与β3整合素片段进行免疫共沉淀,用Western blot检测它们之间的相互作用。结果成功构建了G2和β3整合素膜外区各片段的融合表达质粒。将各表达质粒转染HEK293细胞进行瞬时表达,Western blot结果显示β3整合素膜外区各功能片段在细胞裂解上清中获得大量表达,而G2蛋白膜外区仅有81-140片段在细胞裂解上清中大量表达。将G2 81-140片段与β3整合素膜外区各功能片段进行免疫共沉淀的结果显示,仅G2 81-140片段和β3整合素27-133片段在细胞中以复合物存在,提示两者之间可能有直接的相互作用。结论汉坦病毒76-118株包膜糖蛋白G2 81-140片段与β3整合素27-133片段在细胞中以复合物的形式存在,两者之间存在着相互作用,为β3整合素作为汉坦病毒受体提供了进一步的证据。

关键词：汉坦病毒包膜糖蛋白G2 β3整合素免疫共沉淀

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