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聚乙二醇干扰素α-2a治疗慢性乙型肝炎过程中外周血γδT细胞的变化及其临床意义

中华肝脏病杂志 2018年第5期26卷 365-370页

作者：刘楷沈妍希凌宁雷宇胡鹏任红陈敏重庆医科大学附属第二医院感染科、重庆医科大学病毒性肝炎研究所、教育部感染性疾病分子生物学重点实验室 400010

目的观察慢性乙型肝炎（CHB）患者在聚乙二醇干扰素（Peg-IFN） α-2a治疗过程中外周血γδT细胞的变化,并分析其与临床指标及疗效的相关性. 方法收集HBeAg阳性的CHB患者在Peg-IFNα-2a治疗不同时间点的外周全血,包括0周17例、12周20... 详细信息

目的观察慢性乙型肝炎（CHB）患者在聚乙二醇干扰素（Peg-IFN） α-2a治疗过程中外周血γδT细胞的变化,并分析其与临床指标及疗效的相关性. 方法收集HBeAg阳性的CHB患者在Peg-IFNα-2a治疗不同时间点的外周全血,包括0周17例、12周20例、24周20例及48周16例,其中有11例患者在每个时间点均收集血样观察.流式细胞术检测外周血中γ δ T及其亚群细胞Vδ1T、Vδ2T、效应记忆γδT（γ δTem）、中央记忆γ δT （γ δTcm）、初始γδT （γδTnaive）与终末分化效应γ δT （γ δTeff）细胞的频率.同时检测肝功能、HBV血清病毒等标志物及HBV DNA水平.用SPSS 23.0统计软件分析比较各治疗时间点细胞比例的差异,以及细胞比例与丙氨酸氨基转移酶（ALT）、HBsAg、HBeAg或HBV DNA水平的相关性;并且分析持续随访的11例患者中,γδT及其亚群细胞比例与Peg-IFN α-2a治疗应答的相关性.结果在Peg-IFNα-2a治疗0～ 48周期间,CHB患者外周血γδT及Vδ 2T细胞比例逐渐下降,48周时的γδT细胞和Vδ 2T细胞比例分别为6.89％（5％,8.15％）、4.61％（2.16％,6.50％）,明显低于0周水平[12.5％（7.73％,19.00％）、6.59％（3.86％,13.62％）],差异均具有统计学意义（P值均＜0.05）;但V δ 1T、γ δ Tem、γ δTcm、γ δTnaive或γ δTeff亚群细胞的比例在各时间点的差异均无统计学意义（P值均＞ 0.05）.同时ALT、HBsAg、HBeAg或HBV DNA水平与γδT或Vδ2T细胞比例均呈显著性正相关（P值均＜0.05）.11例持续随访患者中,应答者的γ δ Tem细胞的比例在各时间点均显著低于无应答者,差异均有统计学意义（P值均＜ 0.05）,而其他γδT亚群细胞比例在两组间的差异均无统计学意义（P值均＞ 0.05）. 结论 Peg-IFN α-2a治疗CHB过程中γδT细胞比例随着HBV复制降低及肝脏炎症缓解而呈下降趋势,且具有较低效应记忆γδT细胞比例的CHB患者在Peg-IFNα-2a治疗中可能更易获得应答.

关键词：肝炎乙型慢性聚乙二醇干扰素α γδT细胞

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直接抗病毒药物在丙型肝炎肝硬化患者中的应用进展

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临床肝胆病杂志 2024年第8期40卷 1682-1687页

作者：冉锡萍蔡大川重庆医科大学附属第二医院感染病科重庆401336 感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆400010

慢性丙型肝炎病毒感染可导致肝硬化的发生,肝硬化后出现肝细胞癌等并发症是慢性肝病患者的主要死亡原因。抗病毒治疗可以实现持续病毒学应答,改善肝炎、肝纤维化,进而延缓病程进展。直接抗病毒药物(DAA)在丙型肝炎肝硬化患者中的安全性... 详细信息

慢性丙型肝炎病毒感染可导致肝硬化的发生,肝硬化后出现肝细胞癌等并发症是慢性肝病患者的主要死亡原因。抗病毒治疗可以实现持续病毒学应答,改善肝炎、肝纤维化,进而延缓病程进展。直接抗病毒药物(DAA)在丙型肝炎肝硬化患者中的安全性和有效性已被证实,其是否能改善肝硬化患者疾病并发症和预后逐渐成为讨论和研究的热点。相关数据主要由国外学者报告,我国DAA上市较晚,尚缺乏中远期数据。本文回顾了最新的相关研究,对DAA在丙型肝炎肝硬化患者中的应用现状及其对临床预后的影响进行综述。

关键词：肝炎病毒属肝硬化直接抗病毒药物治疗结果

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基于生物信息学分析筛选肝细胞癌中的核心基因:细胞周期蛋白B2可作为肝癌潜在的诊疗和预后生物标志物

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中华肝脏病杂志 2020年第9期28卷 773-783页

作者：杨双燕任红李传飞汤慧重庆医科大学附属第二医院感染科/重庆医科大学病毒性肝炎研究所/感染性疾病分子生物学教育部重点实验室 400010 重庆医科大学附属第二医院消化内科 400010

目的通过生物信息学方法筛选出参与肝细胞癌(HCC)进展的核心基因(Hub gene),探讨细胞周期蛋白B2(CCNB2)在HCC发生发展及预后中的潜在作用。方法从GEO数据库中筛选并下载四个HCC相关数据集,用GEO2R分析数据并鉴定差异表达基因(DEGs)。利... 详细信息

目的通过生物信息学方法筛选出参与肝细胞癌(HCC)进展的核心基因(Hub gene),探讨细胞周期蛋白B2(CCNB2)在HCC发生发展及预后中的潜在作用。方法从GEO数据库中筛选并下载四个HCC相关数据集,用GEO2R分析数据并鉴定差异表达基因(DEGs)。利用DAVID数据库对DEGs进行GO分析,Cytoscape的ClueGO插件完成KEGG信号通路富集分析,并将DEGs导入STRING数据库建立蛋白相互作用(PPI)网络图,用Cytoscape对PPI网络进行可视化,构建关键模块(cluster)和筛选核心基因。分别使用UCSC数据库和UALCAN数据库完成核心基因在TCGA肝癌中的差异表达分析和生存分析。使用Firebrowse,Oncomine和UALCAN数据库分析核心基因在包括HCC在内的多个肿瘤中的表达。用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测候选基因在HCC组织和肝癌细胞系中的表达水平。结果从四个数据集中共鉴定了73个DEGs,包括15个上调基因和58个下调基因。KEGG信号通路富集分析显示DEGs主要富集于肿瘤相关通路。基于DEGs的PPI网络图,筛选了一个关键模块和10个核心基因。CCNB2与NCAPG在多个数据库的肝癌组织中均高表达。CCNB2与NCAPG呈正相关,被认为是与预后相关的关键基因(P<0.01)。RT-qPCR结果表明CCNB2在人肝癌组织和细胞系中高表达(P<0.01)。结论成功筛选出HCC相关的DEGs和核心基因,其中CCNB2在HCC中高表达且与患者生存预后相关,有望成为HCC诊疗和预后的生物标志物。

关键词：肝细胞癌生物信息学分析细胞周期蛋白B2 生物标志物

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乙型肝炎病毒基因的型特异引物结合型特异核苷酸分析

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中华肝脏病杂志 2008年第2期16卷 84-87页

作者：曾爱中黄爱龙郭进军邓小燕李青岭黄文祥重庆医科大学病毒性肝炎研究所、教育部感染性疾病分子生物学重点实验室 400010 重庆医科大学附属第一医院

目的研究HBV感染者HBV基因型分布状况，并建立一套适合HBV病毒株分型的简便可靠的分析方法。方法通过对GenBank中全部S区基因序列（1000余条）进行比对，筛选A～H8个基因型的型特异核苷酸。采用型特异引物PCR法分型，对238例慢性乙型肝... 详细信息

目的研究HBV感染者HBV基因型分布状况，并建立一套适合HBV病毒株分型的简便可靠的分析方法。方法通过对GenBank中全部S区基因序列（1000余条）进行比对，筛选A～H8个基因型的型特异核苷酸。采用型特异引物PCR法分型，对238例慢性乙型肝炎患者所感染病毒中未能分型的病毒株再进行S区基因巢式PCR扩增、测序筛选出其特异性核苷酸从而判定其基因型。结果238株HBV均得到分型。其中B型HBV感染者159例（男120例、女39例）；C型69例（男52例、女17例）；B＋C混合型6例（男4例、女2例），B＋D混合型4例（男3例、女1例）。B型、C型、B＋C和B＋D混合型检出率分别为66．8％、28．9％、2．5％和1．6％。未检出A、E、F、G、H基因型。结论HBV感染以B、C基因型为主，B基因型高于C基因型。少数患者为B＋C或B＋D混合型感染。B、C基因型分布与性别无关（x^2=0．794，P〉0．05）。

关键词：肝炎病毒,乙型基因型型特异性核苷酸聚合酶链反应(PCR)

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血浆置换联合双重血浆吸附治疗早、中、晚期肝衰竭的经济学评价

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中华肝脏病杂志 2020年第5期28卷 434-440页

作者：孔令希邱峰王红梅单雪峰胡鹏钟珊王娜重庆医科大学附属第一医院药学部 400042 重庆医科大学附属第二医院感染科重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室400010

目的比较血浆置换、半量血浆置换联合双重血浆吸附(DPMAS)、先等量血浆置换再联合DPMAS、先DPMAS再联合等量血浆置换4种人工肝模式治疗肝衰竭的经济学特点。方法用Treeage pro 2011软件构建决策树模型,针对肝衰竭患者早、中、晚期分别... 详细信息

目的比较血浆置换、半量血浆置换联合双重血浆吸附(DPMAS)、先等量血浆置换再联合DPMAS、先DPMAS再联合等量血浆置换4种人工肝模式治疗肝衰竭的经济学特点。方法用Treeage pro 2011软件构建决策树模型,针对肝衰竭患者早、中、晚期分别计算并比较4种不同治疗模式的成本效果比值及增量成本效果值,且对该模型进行敏感性分析;数据来自课题组前期研究结果。结果肝衰竭早期患者的人工肝治疗,半量血浆置换联合DPAMS方案成本效果比值为89547.79,增量成本效果值为34665.34,低于人均国内生产总值,增加的成本具有成本效果优势;肝衰竭中、晚期,先DPMAS再联合等量血浆置换的方案,成本效果比值分别为122865.5、284334.97,增量成本效果比值分别为70744.55、75299.48,小于3倍人均国内生产总值,增加的成本可以接受,有经济学优势。敏感性分析结果显示基础分析结果可靠。结论对于早期肝衰竭,半量血浆置换联合DPAMS方案最具成本效果优势;而对于肝衰竭中、晚期,采用先DPMAS再联合等量血浆置换是最为经济的人工肝治疗方案。

关键词：肝衰竭肝,人工血浆置换经济学

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利用噬菌体随机肽库筛选人肝再生增强因子特异结合肽及其抗肝癌作用的研究

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第三军医大学学报 2014年第6期36卷 568-573页

作者：冯倩刘燕倩孙航刘杞重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所国家教育部感染性疾病分子生物学重点实验室重庆400010

目的利用噬菌体随机肽库筛选人肝再生增强因子(human augmenter of liver regeneration,hALR)特异结合肽并研究其抗肝癌作用。方法以hALR为靶分子,利用***噬菌体肽展示系统筛选出与hALR特异性结合的单克隆噬菌体,ELISA法鉴定筛选出的单... 详细信息

目的利用噬菌体随机肽库筛选人肝再生增强因子(human augmenter of liver regeneration,hALR)特异结合肽并研究其抗肝癌作用。方法以hALR为靶分子,利用***噬菌体肽展示系统筛选出与hALR特异性结合的单克隆噬菌体,ELISA法鉴定筛选出的单克隆噬菌体与hALR的结合性,对特异性结合噬菌体DNA中插入片段进行PCR扩增、测序及短肽合成,MTS法检测特异结合肽对人HepG2肝癌细胞增殖的影响,观察特异结合肽对裸鼠人HepG2肝癌移植瘤生长的影响。结果经过3轮生物淘筛,特异性结合噬菌体得到富集;筛选到的单克隆噬菌体与hALR结合具有特异性(与对照组比较P<0.05);特异结合肽在体外能抑制人HepG2肝癌细胞增殖(24 h抑制率为46.2%vs 6.5%,P<0.01;48 h抑制率为23.6%vs 5.9%,P<0.05),在体内能抑制裸鼠人HepG2肝癌移植瘤生长[(1.250±0.512)cm3vs(4.590±0.398)cm3,P<0.01;(1.100±0.453)g vs(3.794±0.299)g,P<0.01];该特异结合肽免疫小鼠后机体内无相应抗体检出,且对裸鼠的重要脏器组织结构及功能无明显损害。结论利用噬菌体肽库筛选到hALR特异结合肽,该短肽通过阻断hALR促肝癌细胞增殖作用,能抑制人HepG2肝癌细胞在体内外增殖,达到抗肝癌的作用,同时产生较低的免疫原性及毒性损害。

关键词：人肝再生增强因子特异结合肽噬菌体肽库肝癌靶向治疗

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血浆置换联合双重血浆吸附治疗提高慢加急性肝衰竭预后

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中华肝脏病杂志 2018年第10期26卷 744-749页

作者：钟珊王娜赵静张莉罗玲曾维琼石小枫王志毅蔡大川张大志周智胡鹏重庆医科大学附属第二医院感染科重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室 400010

目的比较血浆置换（PE）联合双重血浆吸附与单纯PE治疗慢加急性肝衰竭的疗效和安全性。方法回顾性分析2015年1月以来收治的经人工肝治疗的慢加急性肝衰竭患者251例。比较不同模式治疗前后患者症状、体征、实验室检查以及并发症的变化情... 详细信息

目的比较血浆置换（PE）联合双重血浆吸附与单纯PE治疗慢加急性肝衰竭的疗效和安全性。方法回顾性分析2015年1月以来收治的经人工肝治疗的慢加急性肝衰竭患者251例。比较不同模式治疗前后患者症状、体征、实验室检查以及并发症的变化情况，并追踪近期疗效。据资料不同用t检验、Pearsonz。检验或者Fisher确切概率法进行统计学分析。结果早期肝衰竭，低置换PE联合双重血浆分子吸附系统（DPMAs）（83.7％）和等量PE联合DPMAS治疗有效率（84．0％和82．1％）明显优于单纯的足量PE（55．6％）垆〈0．05）。中晚期肝衰竭，各组治疗有效率差异无统计学意义（P〉0．05）。联合治疗组的胆红素下降率、胆汁酸下降率均明显优于PE组（P〈0．05）。低置换量PE联合DPMAS（LPE＋DPMAS）组，先PE后DPMAS组的凝血酶原活动度改善率，白蛋白改善率均明显低于PE组（P〈0．05）。先DPMAS后PE组凝血酶原活动度改善率和白蛋白改善率与PE组差异无统计学意义。各组不良反应发生差异无统计学意义。结论较单纯PE而言，PE联合DPMAS既能提高早期肝衰竭治疗有效率，还能减少血浆用量。先行DPMAs治疗后行PE治疗，能改善DPMAS对凝血功能和白蛋白水平的不良影响。

关键词：肝衰竭肝,人工血浆置换双重血浆吸附

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从人肝癌细胞cDNA表达文库筛选人肝再生增强因子相互作用蛋白及其活性初步鉴定

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中华肝脏病杂志 2006年第5期14卷 346-349页

作者：邓建川张林孙航唐琳王娜刘杞重庆医科大学病毒性肝炎研究所教育部感染性疾病分子生物学重点实验室400010 四川省人民医院传染科

目的利用噬菌体表面展示技术筛选人肝再生增强因子(hALR)相互作用蛋白并初步鉴定噬菌体展示肽的生物学活性。方法以hALR为靶蛋白,采用T7噬菌体表面展示技术从人肝癌细胞cDNA表达文库筛选与 hALR相互作用的特异噬菌体克隆;对获得的特异... 详细信息

目的利用噬菌体表面展示技术筛选人肝再生增强因子(hALR)相互作用蛋白并初步鉴定噬菌体展示肽的生物学活性。方法以hALR为靶蛋白,采用T7噬菌体表面展示技术从人肝癌细胞cDNA表达文库筛选与 hALR相互作用的特异噬菌体克隆;对获得的特异噬菌体克隆cDNA插入片段进行测序及生物信息学分析;利用3H- TdR掺入法测定噬菌体展示肽及联合hALR对QGY肝癌细胞的增殖效应。结果经过四轮生物淘洗,特异噬菌体克隆富集,获得212 bp的噬菌体cDNA插入序列,生物信息学分析与人Citron激酶同源性达100％;该噬菌体展示肽及联合应用hALR对QGY细胞具有促增殖效应。结论利用噬菌体表面展示技术可以筛选出与hALR具有相互作用的多肽,该序列与人Citron激酶完全同源,Citron激酶可能参与了hALR促肝癌细胞增殖的过程。

关键词：癌,肝细胞基因文库肝再生增强因子相互作用蛋白

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二甲双胍对胰岛素抵抗大鼠脂肪肝的影响

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中华肝脏病杂志 2005年第12期13卷 915-918页

作者：陈世清刘杞孙航唐琳邓建川重庆医科大学病毒性肝炎研究所教育部感染性疾病分子生物学重点实验室重庆医科大学附属第二医院400010

目的探讨二甲双胍对胰岛素抵抗大鼠脂肪肝的影响。方法雄性 Wistar 大鼠31只，随机分为正常组(n=8)和实验组(n=23)。正常组普通饮食，实验组高脂饮食，8周末从实验组中随机抽取7只证实造模成功。实验组再分为二甲双胍组(n=8)和模型... 详细信息

目的探讨二甲双胍对胰岛素抵抗大鼠脂肪肝的影响。方法雄性 Wistar 大鼠31只，随机分为正常组(n=8)和实验组(n=23)。正常组普通饮食，实验组高脂饮食，8周末从实验组中随机抽取7只证实造模成功。实验组再分为二甲双胍组(n=8)和模型对照组(n=8)，6周后，胰岛素敏感性用正常血糖高胰岛素钳夹技术稳态时的葡萄糖输注率来评价；氨基转移酶、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)等以生物化学方法测定；胰岛素和肿瘤坏死因子α(TNF α)分别用放射免疫法和酶联免疫吸附法测定；肝细胞脂肪变性和肝脏的炎症程度在光学显微镜下评估。结果与模型对照组相比，二甲双胍组大鼠胰岛素抵抗明显改善，肝指数、附睾脂肪比重、体重明显下降，氨基转移酶、TG、FFA、TNF α明显降低，肝细胞脂肪变性和肝脏炎症情况有不同程度的改善。结论二甲双胍能够明显改善高脂饲养诱发脂肪肝大鼠的胰岛素抵抗和肝脏组织学，它可能成为治疗脂肪肝的新药物。

关键词：脂肪肝胰岛素抗药性大鼠二甲双胍

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非酒精性脂肪性肝炎的治疗新尝试——脂蛋白脂酶激动剂

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中华肝脏病杂志 2019年第7期27卷 533-540页

作者：陈裕荷詹柱胡鹏任红彭明利教育部感染性疾病分子生物学重点实验室重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆医科大学附属第二医院感染科 400010

目的通过生物信息学方法分析非酒精性脂肪性肝炎(NASH)相关差异表达基因(DEGs),寻找NASH发生的关键通路及潜在的治疗靶点。方法从公共基因芯片数据库下载GSE61260芯片,包含24例NASH和38例健康对照者肝组织穿刺样本芯片数据。利用R语言中... 详细信息

目的通过生物信息学方法分析非酒精性脂肪性肝炎(NASH)相关差异表达基因(DEGs),寻找NASH发生的关键通路及潜在的治疗靶点。方法从公共基因芯片数据库下载GSE61260芯片,包含24例NASH和38例健康对照者肝组织穿刺样本芯片数据。利用R语言中的limma软件包以差异倍数>1.5且adj.P<0.05为条件筛选DEGs,clusterProfiler软件包进行GO分析和KEGG分析,STRING在线数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用分析,L1000和DrugBank数据库进行药物预测。结果与健康对照组相比,NASH组共筛选出857个DEGs,其中上调基因167个,下调基因690个。GO分析结果显示DEGs主要参与炎症、胆固醇代谢等过程,KEGG分析结果显示DEGs主要富集于过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)、非酒精性脂肪性肝病、氧化磷酸化等信号通路。其中,ACSL4、CYP7A1、FABP4、FABP5、脂蛋白酯酶(LPL)、ME1、OLR1、PLIN18个基因富集在PPAR信号通路上,与47个DEGs编码的蛋白共形成165个相互作用节点。LPL与21个DEGs存在相互作用,其表达上调具有改善脂质代谢、胰岛素抵抗及抗炎的作用。通过L1000和DrugBank数据库筛选出吉非罗齐、苯扎贝特、ω-3羧酸、甘草酸4种药物具有激活脂蛋白脂酶的作用。目前这4种药物在临床上主要用于治疗高甘油三酯血症或改善炎症。推测这4种药物在原有药理作用的基础上,可通过激活脂蛋白酯酶来促进肝脏脂质代谢、减轻炎症反应,达到改善NASH的目的。结论PPAR信号通路与NASH的发生与发展密切相关,脂蛋白脂酶激动剂治疗NASH是一种新的尝试。

关键词：非酒精性脂肪性肝炎 PPAR信号通路脂蛋白脂酶生物信息学

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