检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术 2009年第2期19卷 44-46页

作者：崔静胡接力张文露王媛媛李毅黄爱龙重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016

目的:建立化学发光法检测体外HBV复制水平的方法,研究其灵敏度和稳定性。方法:用HBV DNA重组质粒pCH9转染到人肝癌细胞株HepG2和Huh7中,5d后收集细胞并抽提其HBV复制中间体DNA,转印后以地高辛标记HBV DNA为探针进行杂交,用化学发光法检... 详细信息

目的:建立化学发光法检测体外HBV复制水平的方法,研究其灵敏度和稳定性。方法:用HBV DNA重组质粒pCH9转染到人肝癌细胞株HepG2和Huh7中,5d后收集细胞并抽提其HBV复制中间体DNA,转印后以地高辛标记HBV DNA为探针进行杂交,用化学发光法检测杂交结果,同时进行探针灵敏度的检测。结果:转染后HepG2和Huh7细胞提取HBV DNA中检测出较强的复制中间体的信号,分别为松散环状DNA(rcDNA),双链线性DNA(dslDNA),单链DNA(ssDNA),探针检测的灵敏度可达到1pg,接近同位素法检测的灵敏度。整个实验重复3次获得同样结果。结论:成功建立了稳定的化学发光法检测体外HBV复制水平的方法。

关键词： HBV DNA 化学发光法复制

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骨化三醇对晚期糖基终末产物诱导的NRK52E细胞EMT的影响

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第三军医大学学报 2016年第15期38卷 1735-1740页

作者：莫念春蔡稀谢树钦钟玲重庆医科大学附属第二医院肾内科重庆400010 重庆医科大学病毒性肝炎所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室

目的探讨骨化三醇对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)诱导的肾小管上皮细胞间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用及可能机制。方法先单独用骨化三醇刺激细胞,再采用AGEs处理NRK52E细胞,建立... 详细信息

目的探讨骨化三醇对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)诱导的肾小管上皮细胞间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用及可能机制。方法先单独用骨化三醇刺激细胞,再采用AGEs处理NRK52E细胞,建立由AGEs诱导的细胞EMT模型。分为4组:对照组、模型组、低剂量骨化三醇(10nmol/L)预处理的模型组、高剂量骨化三醇(100nmol/L)预处理的模型组。利用Western blot、逆转录实时定量PCR等方法检测E-cadherin、α-SMA、AGEs特异性受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)及NF-κB的磷酸化等的表达。结果骨化三醇单独刺激时,大鼠肾小管上皮细胞上的E-cadherin和α-SMA的表达未发生明显变化;较对照组,AGEs培养后,NRK52E细胞E-cadherin表达显著下调,α-SMA表达明显上调,AGEs特异性受体显著表达增多,NF-κB途径活化;以上变化都能够被骨化三醇所逆转(P<0.05),抗RAGE中和抗体(AF1616)可抑制AGEs引起的E-cadherin下调和α-SMA上调,骨化三醇抑制AGEs诱导RAGE的上调能够被NF-κB磷酸化抑制剂(IMD0354)部分阻断。结论骨化三醇通过降低RAGE的表达和阻断NF-κB的磷酸化来抑制肾小管上皮细胞上皮间质转化。

关键词：糖尿病肾病晚期糖基化终末产物骨化三醇上皮细胞间质转化

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HBVnt453-250负性调节元件作用方式与嗜肝性的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第1期29卷 16-23页

作者：吴莹张文露余波杨扬黄爱龙北京中医药大学中医药抗病毒教育部重点实验室 100029 重庆医科大学感染性疾病分子生物学实验室(省部共建)重庆医科大学病毒性肝炎研究所 400016

目的HBVnt453-250序列为乙型肝炎病毒正链的-个新的负性调节元件，探讨其作用方式是否具有方向位点依赖性、启动子选择性以及肝细胞特异性。方法构建含有负性调节元件的质粒pHBV453-250方向和位点置换体（pHBV250-453、plucHBV453-250和... 详细信息

目的HBVnt453-250序列为乙型肝炎病毒正链的-个新的负性调节元件，探讨其作用方式是否具有方向位点依赖性、启动子选择性以及肝细胞特异性。方法构建含有负性调节元件的质粒pHBV453-250方向和位点置换体（pHBV250-453、plucHBV453-250和plucHBV250-453），分别以荧光素酶（1uciferase）及增强型绿色荧光蛋白（EGFP）作为报告基因，转染HepG2细胞后，通过双荧光素酶体系、荧光定量PCR和Westernblot分析，检测HBVnt453-250序列对目的基因转录及表达的影响；构建启动子置换的质粒pCMV453-250（1uc），转染HepG2细胞后，双荧光素酶检测系统检测荧光素酶表达；将pHBV453—250和pHBV250-453分别转染人宫颈癌细胞（HeLa）和人肺癌细胞（A549），双荧光素酶检测系统检测荧光素酶表达。结果HBVnt453-250序列以正向或反向插入荧光素酶或EGFP基因的5’端或3’端时，均能表现对目的基因转录和表达的下调作用；在CMV启动子引导下，HBVnt453-250序列明显降低了荧光素酶的活性，为对照的36．56％；正反向的HBVnt453-250序列均能在两种非肝源性细胞系中抑制荧光素酶活性。结论HBVnt453-250序列的负性调节作用无方向及位点特异性，无启动子选择性及肝细胞特异性。

关键词：乙型肝炎病毒正链负性调节元件嗜肝性

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基因表达谱分析非酒精性脂肪肝中细胞色素P450的作用

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中华肝脏病杂志 2017年第4期25卷 285-290页

作者：刘玉成飞罗玉璇胡鹏任红彭明利教育部感染性疾病分子生物学重点实验室重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆医科大学附属第二医院感染科重庆400010

目的用二代转录组测序（RNA-seq）技术，结合差异基因GO分析、KEGG富集分析，探讨细胞色素（CY）P450在高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝（NAFLD）中的作用。方法高脂饲料（D12492，60％脂肪热量）喂养C57BL／6J小鼠16周构建NAFLD模... 详细信息

目的用二代转录组测序（RNA-seq）技术，结合差异基因GO分析、KEGG富集分析，探讨细胞色素（CY）P450在高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝（NAFLD）中的作用。方法高脂饲料（D12492，60％脂肪热量）喂养C57BL／6J小鼠16周构建NAFLD模型，以低脂饲料（D12450B，10％脂肪热量）为对照。实验结束后检测体质量、肝质量及肝脏组织中甘油三酯含量，对肝组织行HE染色及RNA-Seq分析，对差异表达基因进行GO分析、KEGG分析及相互作用网络分析。两样本均数比较采用t检验。结果与对照组相比，模型组小鼠明显肥胖，体质量和肝质量显著高于对照组[（41．41±6．01）g比（28．78±1．79）g，t=6．04，P〈0．01]和[（1．38±0．30）g比（1．08±0．10）g，t=2．89，P〈0．01]；HE染色可见模型组小鼠肝脏发生严重脂肪变性，伴少量炎症细胞浸润，但未见明显的纤维化，模型组肝脏甘油三酯含量显著增高[（0．64±0．01）mg／mg比（0．29±0．06）mg／mg，t=10．11，P=0．041。RNA-seq结果显示高脂饮食导致367个基因差异表达，211个下调，156个上调，其中CYP450基因有19个，占差异表达基因的5％，其中CYP2E1、CYP2C70、CYP3A11、CYP3A25、CYP2D26、CYP4A10、CYP17A1、CYP2810、CYP2C38等参与氧化应激、类固醇激素代谢、脂肪酸代谢、花生四烯酸代谢，以及过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路等过程；相互作用网络分析预测发挥连接作用的基因有30个，CYP2E1、CYP2C70在其中发挥核心作用。RT-PCR方法对GYP450基因在组织中进行基因水平验证，实验结果与测序结果一致。结论CYP450通过参与氧化应激，脂肪酸代谢、花生四烯酸代谢，类固醇激素合成等多个途径影响脂质代谢，与非酒精性脂肪肝发病进程密切相关。

关键词：脂肪肝非酒精性细胞色素P450 二代转录组测序

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基于iTRAQ技术筛选肝癌转移相关差异蛋白

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重庆医科大学学报 2016年第10期41卷 983-989页

作者：宋琳岚杨敏蒋小燕陈瑜汤慧颜亮廖勇重庆医科大学病毒性肝炎研究所教育部感染性疾病分子生物学重点实验室重庆医科大学附属第二医院感染科重庆400016

目的:通过对不同转移潜能的肝癌细胞系的差异蛋白组学研究,以筛选鉴定出与肝癌转移相关的差异表达蛋白。方法:3株具有相同遗传背景、不同转移潜能的肝癌细胞系MHCC97-L、MHCC97-H及HCCLM3作为研究材料,经过收集胞质蛋白,浓缩、酶解、脱... 详细信息

目的:通过对不同转移潜能的肝癌细胞系的差异蛋白组学研究,以筛选鉴定出与肝癌转移相关的差异表达蛋白。方法:3株具有相同遗传背景、不同转移潜能的肝癌细胞系MHCC97-L、MHCC97-H及HCCLM3作为研究材料,经过收集胞质蛋白,浓缩、酶解、脱盐并用同位素标记相对和绝对定量技术(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)对其进行标记,应用二维液相色谱串联质谱技术对肽段进行鉴定,得到的结果与数据库进行比对,对蛋白进行注释。基于Web Gestalt数据库对差异表达的蛋白进行GO(gene ontology)功能分析和通路分析以筛选与肝癌转移相关的目标蛋白。并用Western blot对3个关键蛋白(PLEC、SHMT2、LDHA)进行验证。结果:经过iTRAQ标记并质谱检测分析,共发现鉴定1 170个蛋白,其中在L/H(MHCC97-L/MHCC9-H)组鉴定发现47个差异表达蛋白,在M/H(HCCLM3/MHCC97-H)组鉴定发现65个差异表达蛋白。生物信息学分析显示L/H和M/H组差异表达的蛋白主要参与酶催化和细胞间粘附及细胞代谢的过程。应用Western blot在蛋白水平上的验证,PLEC在高转移细胞株MHCC97-H和HCCLM3中表达上调,SHMT2在HCCLM3中表达上调,LDHA在MHCC97-H中表达上调。结论:在本研究中应用iTRAQ标记高通量的蛋白质组学技术对3株不同转移潜能的肝癌细胞系的差异表达蛋白进行检测和鉴定分析,发现PLEC和SHMT2蛋白是两种新的与肝癌转移可能相关的蛋白。

关键词：肝细胞性肝癌蛋白组学同位素标记相对和绝对定量技术转移

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丙氨酸转氨酶低于2倍正常值上限的慢性乙型肝炎患者的肝脏病理学特征及其影响因素

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中华肝脏病杂志 2023年第5期31卷 483-488页

作者：王晓昊刘小庆蔡大川胡鹏李虎重庆医科大学附属第二医院感染病科、重庆医科大学病毒性肝炎研究所、感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400010

目的分析丙氨酸转氨酶(ALT)低于2倍正常值上限(ULN)的慢性乙型肝炎(CHB)患者的肝脏病理学特征及其影响因素,探讨启动抗病毒治疗ALT阈值的优化策略。方法回顾性收集2010年1月—2019年12月行肝穿刺活体组织学检查的CHB初治患者及其临床资... 详细信息

目的分析丙氨酸转氨酶(ALT)低于2倍正常值上限(ULN)的慢性乙型肝炎(CHB)患者的肝脏病理学特征及其影响因素,探讨启动抗病毒治疗ALT阈值的优化策略。方法回顾性收集2010年1月—2019年12月行肝穿刺活体组织学检查的CHB初治患者及其临床资料。利用多元回归模型探讨ALT水平和显著肝组织学改变(≥G2/S2)的风险。采用受试者操作特征曲线评价不同模型诊断肝组织炎症≥G2或纤维化≥S2的价值。结果共纳入447例符合要求的CHB患者,中位数年龄为38.0岁,72.9%为男性。ALT水平在正常范围时,分别有66.9%和53.0%的患者存在显著的肝脏炎症(≥G2)和纤维化(≥S2);ALT为1~2×ULN时,肝脏炎症≥G2和纤维化≥S2的比例上升为81.2%和60.0%。调整混杂因素后,发现较高的ALT水平(>29 U/L)与显著的肝脏炎症(OR:2.30,95%置信区间:1.11~4.77)以及纤维化(OR:1.84,95%置信区间:1.10~3.09)有关。引入γ-谷氨酰转移酶-血小板比值(GPR)后,不同ALT治疗阈值标准下的CHB患者出现≥G2/S2的比例显著降低,尤其是对肝纤维化≥S2的误判可以得到显著的改善(33.5%~57.5%)。结论无论ALT正常或在2×ULN以内,均有超过半数的CHB患者存在明显的炎症及纤维化。GPR可以显著改善不同ALT治疗阈值对CHB患者病情的准确判断。

关键词：慢性乙型肝炎乙型肝炎病毒炎症纤维化抗病毒治疗

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肝再生增强因子对大鼠脾单个核细胞增殖及IL-2产生能力的影响

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中国免疫学杂志 2007年第5期23卷 467-470页

作者：谢华孙航郭辉刘杞教育部感染性疾病分子生物学重点实验室重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆医科大学第二附属医院重庆400010

目的:通过体外实验探讨rALR对脾脏单个核细胞是否具有直接的免疫调控作用和作用特点。方法:以3H-TdR掺入法检测脾脏单个核细胞在不同处理情况下的增殖状况:①不同剂量的rALR与5μg/ml ConA同时加入;②5μg/ml ConA预刺激脾脏单个核细胞1... 详细信息

目的:通过体外实验探讨rALR对脾脏单个核细胞是否具有直接的免疫调控作用和作用特点。方法:以3H-TdR掺入法检测脾脏单个核细胞在不同处理情况下的增殖状况:①不同剂量的rALR与5μg/ml ConA同时加入;②5μg/ml ConA预刺激脾脏单个核细胞10和32小时后,再加入30μg/ml rALR;③30μg/ml rALR预处理脾脏单个核细胞至30小时,再加5μg/ml ConA刺激。以环孢霉素A作为阳性对照,以转空质粒的酵母表达上清提取物作为阴性对照。以放免法检测培养上清中IL-2分泌情况。结果:不同剂量的rALR与ConA同时加入时,能以剂量依赖方式明显抑制ConA对脾脏单个核细胞的促增殖作用。ConA预刺激脾脏单个核细胞10、32小时后,再给予30μg/ml rALR仍可明显抑制脾脏单个核细胞的增殖,但用30μg/ml rALR预处理脾脏单个核细胞至30小时,并不影响脾脏单个核细胞对ConA刺激的反应能力。ConA+rALR(30μg/ml)组的IL-2分泌在24小时明显低于ConA组。结论:rALR对ConA活化的脾脏单个核细胞增殖有明显的抑制作用,而对未活化的脾脏单个核细胞则无明显影响,提示未经抗原激活的免疫细胞可能不表达ALR受体。

关键词：肝再生增强因子脾脏单个核细胞增殖 IL-2产生

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热休克蛋白70-HBcAg（18～27）蛋白复合物对乙型肝炎病毒转基因小鼠的免疫研究

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中华肝脏病杂志 2007年第1期15卷 28-31页

作者：胡怀东胡鹏陈国林彭明利陈敏任红重庆医科大学病毒性肝炎研究所、省部共建感染性疾病分子生物学教育部重点实验室 400010 哈尔滨医科大学第一临床医学院感染病科

目的研究结核杆菌热休克蛋白（HSP）70-HBcAg（18～27）蛋白复合物对HBV转基因小鼠免疫应答的影响。方法体外构建HSP70-HBcAg（18-27）蛋白复合物，以HBV转基因小鼠为实验对象，进行体内免疫学功能研究。结果HSP70-HBcAg（18-27）蛋白... 详细信息

目的研究结核杆菌热休克蛋白（HSP）70-HBcAg（18～27）蛋白复合物对HBV转基因小鼠免疫应答的影响。方法体外构建HSP70-HBcAg（18-27）蛋白复合物，以HBV转基因小鼠为实验对象，进行体内免疫学功能研究。结果HSP70-HBcAg（18-27）蛋白复合物使HBV转基因小鼠外周血及脾中CD4^＋ T淋巴细胞和CD8^＋T淋巴细胞大量增殖，诱导较强的抗原特异性CTL应答，并活化自然杀伤细胞、树突状细胞参与应答反应。结论HSP70-HBcAg（18-27）蛋白复合物具有免疫原性，能够增强转基因鼠细胞免疫应答能力，有望作为蛋白疫苗用于慢性乙型肝炎的免疫治疗。

关键词：热休克蛋白肝炎核心抗原乙型蛋白质疫苗细胞毒性T淋巴细胞小鼠转基因

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B和C基因型乙型肝炎病毒对阿德福韦酯治疗的病毒学应答比较

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中华肝脏病杂志 2008年第6期16卷 412-415页

作者：曾爱中邓惠彭凤英辛小娟杨春李青岭郭进军张祯祯赫美君袁喆黄文祥黄爱龙重庆医科大学病毒性肝炎研究所教育部感染性疾病分子生物学重点实验室重庆400010 重庆医科大学附属第一医院感染科重庆医科大学附属第二医院淌化科

目的阐明不同基因型HBV对阿德福韦酯治疗反应是否存在差异。方法首先利用型特异引物PCR法结合型特异核苷酸分析法检测HBV基因型，然后根据基因型对阿德福韦酯Ⅲ期临床资料进行分析及统计学处理（计量资料用t检验，计数资料用卡方检验）... 详细信息

目的阐明不同基因型HBV对阿德福韦酯治疗反应是否存在差异。方法首先利用型特异引物PCR法结合型特异核苷酸分析法检测HBV基因型，然后根据基因型对阿德福韦酯Ⅲ期临床资料进行分析及统计学处理（计量资料用t检验，计数资料用卡方检验）。结果177例临床标本检出B基因型HBV感染者102例，C基因型感染者65例，B＋C混合型感染者6例，B＋D混合型感染者4例。治疗第12、24周时，B基因型组和C基因型组血清HBVDNA下降均值分别为2.2log10拷贝／ml、2.1log10拷贝／ml和2.7log10拷贝／ml、2．4log10拷贝／ml，两组差异均无统计学意义（P〉0．05），第48周时两组HBVDNA分别下降3.6log10拷贝／ml和3．1log10拷贝／ml，差异有统计学意义（P〈0．05）。治疗结束时（48周）B基因型组和C基因型组分别有43例（42．2％）和22例（33．8％）出现血清HBVDNA转阴，差异有统计学意义（P〈0．05）；两组患者HBeAg阴转率和抗-HBe血清转换率分别为30．4％、29．2％和21．6％、20．0％，差异无统计学意义（P〉0．05）。两组患者血清ALT复常率在治疗第12、24、36周和48周时分别为35．3％、33．9％，51．0％、53．9％，63．4％、61．5％和83．3％、81．5％，各时间段两组ALT复常率差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎48周时，部分病毒学指标（如血清HBVDNA下降均值和HBVDNA阴转率）B基因型优于C基因型HBV感染者。但由于阿德福韦酯起效较慢，抑制病毒作用相对较弱，有必要延长治疗时间进一步证实这一现象。

关键词：肝炎乙型慢性肝炎病毒基因型阿德福韦酯

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杀伤细胞凝集素样受体亚家族G成员1在慢性乙型肝炎病毒感染中对自然杀伤细胞功能的影响

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中华肝脏病杂志 2018年第8期26卷 585-589页

作者：李呜鸿张琼方殷文伟张大志任红重庆医科大学附属第二医院感染科重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室 400010

目的研究慢l生乙型肝炎病毒（HBV）感染中的杀伤细胞凝集素样受体亚家族G成员1（KLRG1）表达对自然杀伤（NK）细胞功能的影响。方法提取120例慢性乙型肝炎病毒感染者和19名健康对照外周血单个核细胞（PBMC），使用流式细胞仪检测外周血... 详细信息

目的研究慢l生乙型肝炎病毒（HBV）感染中的杀伤细胞凝集素样受体亚家族G成员1（KLRG1）表达对自然杀伤（NK）细胞功能的影响。方法提取120例慢性乙型肝炎病毒感染者和19名健康对照外周血单个核细胞（PBMC），使用流式细胞仪检测外周血中NK细胞和KLRG1^＋NK细胞频数，检测外周血PBMC中分泌干扰素Y的NK细胞频数，并用GraphPad Prism6．03软件对实验数据进行统计分析。结果HBV感染组NK细胞频数（16．92％±7．9％）与健康对照组（10．57％±6．5％）比较，差异无统计学意义；HBV感染组KLRG1^＋NK细胞频数（49．43％±21．2％）明显高于健康对照组（31．60％±17．9％），差异有统计学意义（t=7．3476，P〈0．001）；HBV感染组分泌干扰素v的KLRG1^＋NK细胞频数（2．59％±1．0％）明显低于健康对照组（5．96％±2．4％），差异有统计学意义（P=0．009）。结论HBV感染可增加NK细胞KLRG1的表达，并且进一步减少NK细胞中干扰素γ分泌，可能是造成HBV慢性感染的重要因素。

关键词：肝炎病毒乙型干扰素γ 自然杀伤细胞杀伤细胞凝集素样受体亚家族G成员1

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