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乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes对内皮细胞增殖的影响及MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路的作用

解放军医学杂志 2012年第11期37卷 1054-1058页

作者：隆霜沈宜谢莹珊范维珂姜蓉陈黎重庆医科大学基础医学院病理生理教研室干细胞与组织工程研究室400016

目的研究人乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的促增殖作用,并初步探讨MAPK/ERK和PI3K/Akt信号转导通路在此过程中的作用。方法低温超速离心及密度梯度离心法提取乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes。采用MTT法分... 详细信息

目的研究人乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的促增殖作用,并初步探讨MAPK/ERK和PI3K/Akt信号转导通路在此过程中的作用。方法低温超速离心及密度梯度离心法提取乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes。采用MTT法分别检测50、100、200、400μg/ml Exosomes对HUVECs促增殖作用的影响,流式细胞仪测定200μg/ml Exosomes对HUVECs细胞周期的影响,Western blotting检测200μg/ml Exosomes诱导下HUVECs细胞内细胞外调节蛋白激酶(ERK)和蛋白激酶B(Akt)蛋白的表达水平。结果乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes可促进HUVECs细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性。200μg/ml Exosomes作用HUVECs细胞24h后,S期细胞比例(27.8%±3.37%)较对照组(15.34%±0.71%)增加(P<0.05),G1/S期细胞比例(2.22%±0.37%)与对照组(4.67%±0.47%)比较下降(P<0.05)。Western blotting结果显示,200μg/ml Exosomes作用HUVECs细胞24、48、72h后,磷酸化ERK表达(0.3378±0.0415,0.4967±0.0511,0.9205±0.0462)与磷酸化Akt蛋白表达(0.4091±0.0361,0.5484±0.0382,0.7496±0.0481)与对照组(磷酸化ERK 0.1836±0.0324,磷酸化Akt 0.2582±0.0215)相比有所增加(P<0.05)。结论乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes能促进HUVECs的增殖,其机制可能与细胞周期改变,以及MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路的持续活化有关。

关键词： Exosomes 胞外信号调节激酶蛋白激酶B 增殖乳腺癌

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Tollip体外转染HepG2215细胞对HBsAg和HBeAg分泌的影响及其机制

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中国生物制品学杂志 2012年第12期25卷 1587-1590页

作者：陈维英施又丹唐俐李龙江王亚平余瑜汤为学重庆医科大学干细胞与组织工程研究室重庆400016 重庆医科大学病理生理教研室重庆400016 重庆医科大学药学院重庆400016

目的探讨Tollip转染人肝癌细胞系HepG2215细胞对HBsAg和HBeAg分泌的影响及其机制,为乙型肝炎的治疗寻找新的靶点。方法含HA标签的重组表达质粒pCMV-HA-Tollip经EcoRⅠ和KpnⅠ双酶切鉴定后,采用脂质体LipofectamineTM2000转染HepG2215细... 详细信息

目的探讨Tollip转染人肝癌细胞系HepG2215细胞对HBsAg和HBeAg分泌的影响及其机制,为乙型肝炎的治疗寻找新的靶点。方法含HA标签的重组表达质粒pCMV-HA-Tollip经EcoRⅠ和KpnⅠ双酶切鉴定后,采用脂质体LipofectamineTM2000转染HepG2215细胞,共设4个转染组:脂质体转染对照组(15μl脂质体)、空质粒转染对照组(6μg空质粒、15μl脂质体)、空质粒重组质粒共转染组(3μg空质粒、3μg pCMV-HA-Tollip、15μl脂质体)及重组质粒转染组(6μgpCMV-HA-Tollip、15μl脂质体),转染48 h后,收集细胞,经Western blot检测AKT、p-AKT、NF-κB以及HA标签蛋白的表达;收集上清,ELISA法检测HBsAg和HBeAg的水平。结果重组质粒pCMV-HA-Tollip经双酶切鉴定构建正确。空质粒重组质粒共转染组和重组质粒转染组均有HA标签蛋白的表达,而脂质体转染对照组和空质粒转染对照组无HA标签蛋白表达;与空质粒转染对照组比较,空质粒重组质粒共转染组和重组质粒转染组中NF-κB和p-AKT蛋白的表达明显降低(P<0.01),而AKT蛋白的表达无明显变化(P>0.05);空质粒重组质粒共转染组和重组质粒转染组细胞上清中HBsAg和HBeAg的含量明显低于空质粒转染对照组(P<0.01),对HBsAg的抑制率分别为24%和41%,对HBeAg的抑制率分别为13%和31%。结论 pCMV-HA-Tollip重组质粒在HepG2215细胞中能有效抑制HBsAg和HBeAg的分泌,其机制可能与抑制AKT的磷酸化和下调NF-κB的表达有关。

关键词： Tollip HepG2215细胞转染肝炎表面抗原,乙型肝炎e抗原,乙型

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人参总皂苷对PC12细胞突起生长及GAP-43表达的影响

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中国生物制品学杂志 2012年第1期25卷 47-49页

作者：李晗宇王顺和郑娟姜蓉重庆医科大学病理学教研室重庆400016 重庆医科大学干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的探讨人参总皂苷(Total saponin of panax ginseng,TSPG)对神经细胞PC12突起生长以及生长相关蛋白-43(Growth-associated protein-43,GAP-43)表达的影响。方法以0、10、20、40、80 mg/L TSPG作用于体外培养的PC12细胞,相差显微镜观察细胞的形态学改变,透射电镜观察细胞突触连接情况,显微镜测微尺测量突起长度,免疫组织化学和Western blot法检测GAP-43的表达。结果与对照组相比,TSPG处理组分化的PC12细胞直径明显增大,突起长度明显增长,并形成突触连接,GAP-43表达水平增加,以40 mg/L组最为明显。结论 TSPG可诱导PC12细胞发生分化、突起生长延伸,并可上调GAP-43的表达水平。

关键词：人参总皂苷神经元突起生长 GAP＊43蛋白

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人参皂苷Rg1对白消胺诱导细胞衰老的延缓作用

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中国生物制品学杂志 2012年第10期25卷 1340-1343页

作者：王红宁闫玲玲李春莉官涛姜蓉左国伟陈地龙龙轩王建伟重庆医科大学组织胚胎教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016 重庆医科大学分子诊断中心重庆400016 重庆医科大学生理教研室重庆400016 重庆医科大学临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆400016

目的探讨人参皂苷Rg1(Ginsenoside Rg1,Rg1)对白消胺(Busulfan,BU)诱导的人胚肺成纤维细胞衰老的延缓作用。方法将人胚肺成纤维细胞(<24代)随机分为空白对照组(常规培养)、BU组(以120μmol/L BU处理复制细胞衰老模型)、BU+Rg1组(120... 详细信息

目的探讨人参皂苷Rg1(Ginsenoside Rg1,Rg1)对白消胺(Busulfan,BU)诱导的人胚肺成纤维细胞衰老的延缓作用。方法将人胚肺成纤维细胞(<24代)随机分为空白对照组(常规培养)、BU组(以120μmol/L BU处理复制细胞衰老模型)、BU+Rg1组(120μmol/L BU+10μmol/L Rg1)、Rg1预+BU组(10μmol/L Rg1预处理后加入120μmol/L BU)和Rg1预+BU+Rg1组(10μmol/L Rg1预处理后加入120μmol/L BU,再加入10μmol/L Rg1),通过倒置显微镜观察细胞形态的变化,细胞增殖试验检测细胞增殖情况,流式细胞术分析细胞周期的分布;半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法观察细胞衰老情况。结果 BU组细胞胞体扁平、宽大、不规则,出现空泡,而Rg1处理各组细胞的衰老表型出现一定程度的改善,以Rg1预+BU+Rg1组效果最佳,但未完全恢复;BU组细胞增殖能力较空白对照组明显降低,Rg1处理组细胞增殖能力有所恢复,且随着时间的延长效果越明显,其中以Rg1预+BU+Rg1组最佳;Rg1预+BU组和Rg1预+BU+Rg1组G2/M期比例较BU组显著降低(P<0.05),其中以Rg1预+BU+Rg1组降低最明显;Rg1预+BU组和Rg1预+BU+Rg1组衰老细胞数较BU组显著降低(P<0.05)。结论 Rg1能有效对抗BU诱导的细胞早衰,其具体作用机制有待进一步深入研究。

关键词：成纤维细胞衰老延缓作用人参皂苷人胚肺成纤维细胞细胞增殖能力细胞衰老模型细胞增殖情况细胞增殖试验

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MDA-MB-231源Exosomes对内皮细胞增殖及MAPK/ERK和P13K/Akt信号通路的影响

MDA-MB-231源Exosomes对内皮细胞增殖及MAPK/ERK和P13K/Akt信号通...

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中国病理生理学会第十三届肿瘤、第十四届免疫专业委员会学术会议

作者：隆霜沈宜谢莹珊范维珂姜蓉陈黎重庆医科大学基础医学院病理生理教研室干细胞与组织工程研究室

目的:研究人乳腺癌MDA-MB-23 1细胞源Exosomes对人脐静脉内皮细胞HUVECs的促增殖作用,并初步探讨MAPK/ERK和PI3K/Ak信号转导通路在此过程中的作用。方法:低温超速离心及密度梯度离心法提取乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes;采用MTT法分... 详细信息

目的:研究人乳腺癌MDA-MB-23 1细胞源Exosomes对人脐静脉内皮细胞HUVECs的促增殖作用,并初步探讨MAPK/ERK和PI3K/Ak信号转导通路在此过程中的作用。方法:低温超速离心及密度梯度离心法提取乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes;采用MTT法分别检测50、100、200、400μg/mL Exosomes对HUVECs细胞促增殖作用的影响;采用流式细胞仪测定200μg/mL Exosomes对HUVECs细胞周期的影响;采用Western blot技术检测200μg/mL Exosomes对HUVECs细胞ERK和Akt蛋白的表达水平。结果:乳腺癌MDA-MB-23 1细胞源Exosomes以时间和剂量依赖性的方式促进HUVECs细胞的增殖。细胞周期结果显示200μg/mL Exosomes作用HUVECs细胞24 h后,S期细胞比例增加,G1/S期细胞比例下降。Western blot实验显示,200μg/mL Exosomes分别作用HUVECs细胞24h、48 h、72 h后,磷酸化ERK与Akt蛋白的表达逐渐增加。结论:乳腺癌MDAMB-231细胞源Exosomes能促进人脐静脉内皮细胞HUVECs的增殖,其机制可能与细胞周期改变和MAPK/ERK和P13K/Akt信号通路的持续活化有关。

关键词： Exosomes 胞外信号调节激酶蛋白激酶B 增殖乳腺癌

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赫赛汀对乳腺癌SK-BR3细胞Notch-1信号通路的影响及意义

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中国肿瘤临床 2011年第11期38卷 626-629页

作者：韩铭邓华瑜隆玲姜蓉重庆医科大学病理生理教研室干细胞与组织工程研究室重庆市400016

目的:探讨赫赛汀对乳腺癌SK-BR3细胞Notch-1蛋白的影响及其作用机制,认识Notch-1信号通路在乳腺癌细胞形成赫赛汀耐药中的意义。方法:选用HER-2过表达乳腺癌SK-BR3细胞及HER-2非过表达乳腺癌MDA-MB-231细胞,免疫细胞化学法和Western blo... 详细信息

目的:探讨赫赛汀对乳腺癌SK-BR3细胞Notch-1蛋白的影响及其作用机制,认识Notch-1信号通路在乳腺癌细胞形成赫赛汀耐药中的意义。方法:选用HER-2过表达乳腺癌SK-BR3细胞及HER-2非过表达乳腺癌MDA-MB-231细胞,免疫细胞化学法和Western blot法检测两细胞株中Notch-1蛋白的表达;应用赫赛汀处理SK-BR3细胞,Western blot法检测HER-2、Notch-1通路活性分子Notch-1^(IC)的蛋白表达;RT-PCR法检测Notch-1靶基因HES-1 mRNA的表达;免疫共沉淀法检测SK-BR3细胞中Nolch-1与HER-2是否存在相互作用结果:Notch-1^(IC)核定位水平及Notch-1^(IC)蛋白表达水平在HER-2过表达乳腺癌细胞(9.37±0.64)中明显低于HER-2非过表达乳腺癌细胞(21.665±1.11),P<0.01;赫赛汀处理SK-BR3细胞后,与未处理组比较,细胞内Notch-1^(IC)蛋白及HES-1 mRNA水平均明显增高(P<0.01,P<0.01),HER-2蛋白表达水平在处理前后未发生明显变化(F=0.973,P>0.05);免疫共沉淀结果显示Notch-1与HER-2蛋白之间存在共沉淀。结论:Notch-1蛋白在HER-2过表达乳腺癌细胞中活性下降;HER-2与Notch-1结合,可能负性调控Notch-1;赫赛汀活化的Notch-1信号通路,可能与细胞耐药发生有关。

关键词： Notch-1 赫赛汀乳腺癌免疫共沉淀

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Hedgehog通路对乳腺癌细胞MDA-MB-231c-jun、uPA表达的影响和机制

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激光杂志 2011年第5期32卷 70-72页

作者：隆玲邓华瑜姜容陈黎重庆医科大学病理生理学教研室干细胞和组织工程研究室重庆400016

目的:研究Hedgehog信号转导通路对人乳腺癌细胞MDA-MB-231c-jun、uPA表达的影响和作用机制,认识其在侵袭转移中的意义。方法:应用Hedgehog信号通路抑制剂Cyclopamine作用人乳腺癌细胞MDA-MB-231,Transwell小室进行侵袭迁移实验;Western ... 详细信息

目的:研究Hedgehog信号转导通路对人乳腺癌细胞MDA-MB-231c-jun、uPA表达的影响和作用机制,认识其在侵袭转移中的意义。方法:应用Hedgehog信号通路抑制剂Cyclopamine作用人乳腺癌细胞MDA-MB-231,Transwell小室进行侵袭迁移实验;Western blotting检测P-c-jun、uPA蛋白的水平:RT-PCR检测Gli1、c-jun和uPA的mRNA水平。结果:应用Cyclopamine后,细胞的侵袭迁移能力明显下降;P-c-Jun、uPA蛋白表达减少;Gli1、c-jun和uPA mRNA水平降低。结论:Hedgehog信号通路可通过活化c-jun上调uPA的表达,促进乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞的侵袭转移。

关键词： Hedgehog 侵袭 uPA C—jun

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T淋巴细胞侵袭转移诱导蛋白1在小鼠子宫内膜基质细胞-胚泡共培养体系中对胚泡黏附的影响

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解剖学杂志 2011年第4期34卷 480-483页

作者：李丹魏莎莉姜蓉王庆跃陈渝刘祖翠重庆医科大学生理教研室重庆400016 重庆医科大学干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的：检测不同浓度T淋巴细胞侵袭转移诱导蛋白1（Tiam1）抗体下，小鼠着床窗子宫内膜基质细胞内的Tiam1蛋白表达及其对基质细胞-胚泡共培养体系中胚泡黏附的影响，探讨Tiara1对小鼠胚胎着床的影响。方法：提取着床窗小鼠子宫内膜基质... 详细信息

目的：检测不同浓度T淋巴细胞侵袭转移诱导蛋白1（Tiam1）抗体下，小鼠着床窗子宫内膜基质细胞内的Tiam1蛋白表达及其对基质细胞-胚泡共培养体系中胚泡黏附的影响，探讨Tiara1对小鼠胚胎着床的影响。方法：提取着床窗小鼠子宫内膜基质细胞并构建基质细胞-胚泡共培养体系；分别用免疫细胞化学和免疫印迹法检测不同浓度抗Tiam1抗体时着床窗基质细胞Tiam1蛋白的表达及其对胚泡黏附的影响。结果：抗体干预后着床窗基质细胞内的Tiam1蛋白表达水平降低；在不同抗体浓度下胚泡黏附率有差异。结论：随Tiam1抗体浓度增加，着床窗小鼠子宫内膜基质细胞Tiam1蛋白表达量及胚泡黏附率降低。表明Tiam1可能在胚泡植入过程起重要的作用。

关键词： T淋巴细胞侵袭转移诱导蛋白1 子宫基质细胞胚泡

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地塞米松对两种急性肝损伤模型小鼠的作用

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基础医学与临床 2011年第6期31卷 717-718页

作者：彭小蓉卢虹旭刘娟何菲黎桂菊谢军陈黎张力重庆医科大学实验教学管理中心重庆400016 重庆医科大学儿科学院重庆医科大学病理生理学教研室重庆医科大学干细胞与组织工程研究室重庆400016

肝炎在我国发病极为普遍且种类较多、发病机制复杂。类固醇激素类药物具有强效的抗炎及免疫调节效应,是治疗严重肝病的常用药[1]。本实验复制了四氯化碳（Carbon tetrachloride,CCl4）及刀豆蛋白A（Concanavalin A,Con A）诱导的小鼠急... 详细信息

肝炎在我国发病极为普遍且种类较多、发病机制复杂。类固醇激素类药物具有强效的抗炎及免疫调节效应,是治疗严重肝病的常用药[1]。本实验复制了四氯化碳（Carbon tetrachloride,CCl4）及刀豆蛋白A（Concanavalin A,Con A）诱导的小鼠急性肝损伤模型,对比了地塞米松（dexamethasone,DXM）在两种肝损伤过程中的效应。

关键词：急性肝损伤模型小鼠地塞米松免疫调节效应发病机制激素类药物肝损伤模型肝损伤过程

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人参总皂苷对PC12细胞分化的影响

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重庆医科大学学报 2011年第4期36卷 423-425页

作者：李晗宇王顺和郑娟姜蓉重庆医科大学基础医学院病理学教研室重庆医科大学干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:研究人参总皂苷(Totalsaponin of panax ginseng,TSPG)诱导PC12细胞神经元性分化的作用。方法:体外培养PC12细胞,观察PC12细胞在TSPG的影响下细胞发生的形态学改变。诱导48 h透射电镜观察突触连接形成情况,72 h利用免疫细胞化学技... 详细信息

目的:研究人参总皂苷(Totalsaponin of panax ginseng,TSPG)诱导PC12细胞神经元性分化的作用。方法:体外培养PC12细胞,观察PC12细胞在TSPG的影响下细胞发生的形态学改变。诱导48 h透射电镜观察突触连接形成情况,72 h利用免疫细胞化学技术,观察TSPG作用后PC12细胞向MAP-2(Microtubule-associated protein 2)阳性细胞分化的情况。结果:TSPG作用后的PC12细胞其突起长度和细胞直径较对照组明显增长和增大[长度由(13.95±2.59)μm增长至(30.33±3.82)μm;直径由(8.25±1.82)μm提高到(14.33±2.84)μm,P<0.05]。TSPG能促进PC12细胞形成突触连接。TSPG组表达MAP2的阳性细胞率明显高于对照组(由4.55%提高到12.22%,P<0.05)。结论:TSPG具有诱导PC12细胞神经元性分化的作用。

关键词：人参总皂苷 PC12细胞分化

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