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柚皮素通过激活mTOR/p70S6K信号通路减轻胰岛素抵抗并改善H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激损伤

重庆医科大学学报 2019年第4期44卷 424-429页

作者：成建璋茶喆向辉余华荣重庆医科大学基础医学院生理教研室神经科学研究中心重庆400016

目的:观察柚皮素(naringenin,NAR)对H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激损伤的影响,并探索其机制。方法:通过CCK-8检测细胞存活率,筛选出H_2O_2的半数致死浓度,用该浓度H_2O_2同时加入20、40、80μmol/L柚皮素处理SH-SY5Y细胞4 h,通过CCK-... 详细信息

目的:观察柚皮素(naringenin,NAR)对H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激损伤的影响,并探索其机制。方法:通过CCK-8检测细胞存活率,筛选出H_2O_2的半数致死浓度,用该浓度H_2O_2同时加入20、40、80μmol/L柚皮素处理SH-SY5Y细胞4 h,通过CCK-8检测细胞存活率,选择适宜柚皮素浓度。按所选H_2O_2和柚皮素浓度进行后续实验。将实验分为3组。control组:细胞不进行任何干预处理;H_2O_2组:只加入600μmol/L H_2O_2;H_2O_2+NAR组:同时加入600μmol/L H_2O_2与40μmol/L柚皮素。4 h后,通过ANNEXIN V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS),Western blot检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、核糖体蛋白S6激酶(p70ribosomal S6 kinase,p70S6K),以及各自磷酸化形式蛋白[p-mTOR(Ser2448)、p-p70S6K(Thr389)],用胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate 1,IRS1)及其丝氨酸636+639位点磷酸化[p-IRS1(Ser636+Ser639)]蛋白的表达来观察胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)。结果:H_2O_2降低SH-SY5Y细胞的存活率,呈剂量依赖性,600μmol/L浓度为半数致死剂量。柚皮素明显降低了H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞死亡,最适剂量为40μmol/L。与control组比,H_2O_2明显增加了细胞凋亡率、胞内ROS的产生,降低了p-mTOR(Ser2448)、p-p70S6K(Thr389)的表达,增加了p-IRS1(Ser636+Ser639)蛋白的表达(P<0.05);加入柚皮素后,相对于H_2O_2组,上述作用明显减弱(P<0.05)。结论:在体外氧化应激模型中,柚皮素能明显降低细胞内ROS的积累,提高细胞的存活率。其机制可能与激活mTOR/p70S6K信号通路、改善IR有关。

关键词：柚皮素氧化应激胰岛素抵抗哺乳动物雷帕霉素靶蛋白

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睡眠剥夺上调小鼠胰腺TNF-α的表达

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中国组织化学与细胞化学杂志 2015年第5期23卷 461-464,474页

作者：刘丽君何菲郭珮王琦王弘凯冉建华重庆医科大学基础医学院解剖学教研室重庆400016 重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016

目的探讨睡眠剥夺对小鼠胰腺形态、功能的影响以及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)表达变化的病理意义。方法 C57雄性小鼠随机分为正常对照组,睡眠剥夺24 h、48 h和60 h组,观察各组小鼠的精神活动状态及体重变化;检测... 详细信息

目的探讨睡眠剥夺对小鼠胰腺形态、功能的影响以及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)表达变化的病理意义。方法 C57雄性小鼠随机分为正常对照组,睡眠剥夺24 h、48 h和60 h组,观察各组小鼠的精神活动状态及体重变化;检测血清淀粉酶(serum amylase,AMS)水平;采用HE染色和免疫组织化学法观察各组小鼠胰腺的组织学特征及TNF-α表达情况;Western Blot检测TNF-α的表达水平。结果随睡眠剥夺时间的延长,模型组小鼠体重较正常对照组明显下降。AMS水平在睡眠剥夺24 h显著升高,48 h达到峰值后维持至60 h。HE染色可见睡眠剥夺组小鼠出现胰岛细胞排列紊乱、胞质浓缩、细胞间隙扩大;外分泌部细胞酶原颗粒消失,细胞空泡化等病理改变;免疫组化及免疫印迹显示,睡眠剥夺组小鼠胰腺中TNF-α的表达随剥夺时间的延长而明显上调。结论睡眠剥夺后不仅导致小鼠全身衰竭,并通过活化TNF-α而诱导胰腺的炎症反应,导致其形态和功能损伤。

关键词：睡眠剥夺胰腺肿瘤坏死因子-α

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PKCβ/p66Shc介导高尿素引起的人脐静脉内皮细胞ROS的产生

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中国组织化学与细胞化学杂志 2016年第5期25卷 385-391页

作者：何菲樊春华郭珮王弘凯周宏宇陈益李晋芳冉建华重庆医科大学基础医学院解剖学教研室重庆400016 重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016 重庆医科大学附属第二医院神经内科重庆400016

目的探讨PKCβ/p66Shc通路在高浓度尿素引起的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)产生中的作用。方法体外培养HUVECs,分为正常对照组、甘露醇组、尿素组和尿素+LY333531(PKCβ抑制剂)组。采用CCK8法检测高浓度尿素对细胞活性的影响,倒置显微镜观察细胞形态改变;DCFH-DA法检测细胞内ROS含量;Western blot检测细胞中p66Shc、p-p66Shc、PKCβ和p-PKCβ水平;免疫荧光技术观察细胞内p-p66Shc水平。结果 25mmol/L尿素明显抑制HUVECs活力,并引起细胞排列紊乱、细胞间隙增大、铺路石样排列结构受到破坏等形态学改变。与对照组相比,25mmol/L尿素引起细胞内ROS水平明显升高,在6h达到峰值;加入PKCβ抑制剂LY333531后ROS水平明显降低。Western blot结果显示,25mmol/L尿素诱导p66Shc、p-p66Shc、PKCβ和p-PKCβ水平随作用时间的延长而逐渐增加。25mmol/L尿素负荷6h后可见细胞胞质内p-p66Shc免疫反应性明显增强,LY333531可阻断该作用;Western blot检测也显示LY333531可显著抑制高浓度尿素对p-p66Shc水平的上调。结论 PKCβ/p66Shc信号通路是高浓度尿素诱导HUVECs内ROS产生的重要途径。

关键词：尿素人脐静脉内皮细胞活性氧簇

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重组耻垢分枝杆菌联合抗痨药物对鼠结核病治疗作用的探讨

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重庆医科大学学报 2009年第5期34卷 516-520页

作者：杨晓燕杨春何永林徐蕾重庆医科大学基础医学院免疫学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院神经科学研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016

目的:探讨携带编码人天然颗粒溶素(Granulysin,GLS)和小鼠IL-12基因的重组耻垢分枝杆菌(***,MS)与抗痨药物对结核分枝杆菌感染的协同治疗效果。方法:将结核分枝杆菌H37Rv感染的Balb/c小鼠40只随机分成4组。感染4周后分别用生理盐水、重... 详细信息

目的:探讨携带编码人天然颗粒溶素(Granulysin,GLS)和小鼠IL-12基因的重组耻垢分枝杆菌(***,MS)与抗痨药物对结核分枝杆菌感染的协同治疗效果。方法:将结核分枝杆菌H37Rv感染的Balb/c小鼠40只随机分成4组。感染4周后分别用生理盐水、重组MS、INH+PZA和重组MS联合INH+PZA治疗,于第一次治疗后3个月,处死小鼠,检测器官荷菌量、脾淋巴细胞IFN-γ和TNF-α的分泌水平、血清IL-12和IFN-γ和肺、脾组织中GLS表达,同时观察小鼠肺、脾组织病理改变情况。结果:重组MS联合INH+PZA治疗组肺、脾组织荷菌量(lgCFU/g)比重组MS和INH+PZA治疗组显著降低;重组MS和INH+PZA治疗组肺、脾组织荷菌量比生理盐水组显著降低。重组MS组经PPD刺激后IFN-γ和TNF-α分泌水平明显高于其它组。重组MS联合INH+PZA治疗组和重组MS组血清IL-12和IFN-γ水平明显高于生理盐水组。重组MS和INH+PZA组病变轻且局限,生理盐水组肺组织病理改变以渗出为主,病变广泛。重组MS联合INH+PZA治疗组肺组织病变最轻。结论:GLS/IL-12重组MS对小鼠结核病有一定免疫治疗作用;重组MS联合临床常用的抗痨药可增强抗结核病的疗效。

关键词：颗粒溶素 IL-12 重组MS 结核病抗痨药

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尿素通道蛋白B敲除引起小鼠大脑皮质毛细血管形态改变的体视学研究

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激光杂志 2013年第6期34卷 97-100页

作者：侯良绢陈林张雪甘胜伟唐勇冉建华重庆医科大学基础医学院解剖学教研室重庆40016 重庆医科大学神经科学研究中心重庆40016 重庆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室重庆40016 重庆医科大学组织工程研究室重庆40016

目的:研究尿素通道蛋白B(Urea transporter B,UT-B)敲除对小鼠大脑皮质毛细血管形态结构的影响及出现抑郁样行为的病理机制。方法采用强迫游泳实验观察野生型和UT-B基因敲除小鼠的抑郁样行为,免疫组化技术和体视学方法定量检测两型小鼠... 详细信息

目的:研究尿素通道蛋白B(Urea transporter B,UT-B)敲除对小鼠大脑皮质毛细血管形态结构的影响及出现抑郁样行为的病理机制。方法采用强迫游泳实验观察野生型和UT-B基因敲除小鼠的抑郁样行为,免疫组化技术和体视学方法定量检测两型小鼠大脑皮质毛细血管总长度、总体积、总表面积、平均直径等形态学指标。结果强迫游泳实验中,野生型和UT-B基因敲除小鼠的不动时间分别为(123±19 s)和(86±13 s),P=0.0012<0.05,差异具有显著性。两型小鼠大脑皮质的体积皱缩率分别为0.53±0.04、0.51±0.07(P>0.05),无显著性差异。野生型小鼠和UT-B基因敲除小鼠大脑皮质毛细血管的总长度为(29.20±1.20)m和(24.00±2.45)m(P=0.093>0.05),总体积为(1.159±0.095)mm3和(0.855±0.060)mm3(P=0.035<0.05),总表面积为(6.143±0.377)cm2和(4.616±0.455)cm2(P=0.042<0.05),平均直径为(6.506±0.161)μm和(5.564±0.118)μm(P=0.016<0.05)。结论:UT-B敲除可能导致小鼠大脑皮质毛细血管总表面积、总体积和平均直径显著下降,造成大脑血灌注量不足而引发小鼠的抑郁样行为。

关键词：尿素通道蛋白B 小鼠体视学抑郁样行为

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罗格列酮调节IDE和GSK-3β的活性改善阿尔茨海默病动物认知能力

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重庆医科大学学报 2013年第6期38卷 620-625页

作者：杨文青马晶宋晓征余华荣重庆医科大学基础医学院生理教研室神经科学研究中心重庆400016 三六三医院神经内科成都610041

目的:研究作为胰岛素增敏剂的过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorsγ,PPARγ)激动剂-罗格列酮对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)动物模型的认知水平、β淀粉样蛋白(amyloidβ-peptide,Aβ)和Tau的影响,并探讨其改善AD模型认知能力的可能机制。方法:通过侧脑室注射链脲佐菌素建立AD动物模型,并用罗格列酮处理动物,第1次手术后21 d用Morris水迷宫检测动物的学习和记忆水平;采用Western blot检测胰岛素降解酶(insulin-degrading enzyme,IDE)、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(pGSK-3β)、Tau、磷酸化Tau(phosphoTau,pTau)的表达;通过免疫组化检测Aβ40和Aβ42在大脑的沉积。结果:Morris水迷宫结果显示罗格列酮可以明显改善AD大鼠的认知能力(P<0.001);Western blot结果显示罗格列酮能增加IDE的表达(P=0.028)、降低GSK-3β的活性(P=0.012)、减少Tau的磷酸化水平(P=0.001);免疫组化结果显示罗格列酮处理的大鼠,其大脑皮质Aβ40和Aβ42的沉积量均较模型组减少。结论:罗格列酮可以明显改善AD动物的认知能力、Aβ的沉积和Tau的磷酸化,机制可能与其调节胰岛素信号通路相关的IDE和GSK-3β的表达有关。

关键词：阿尔茨海默病罗格列酮 β淀粉样蛋白 Tau 胰岛素降解酶糖原合成酶激酶-3β

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高浓度尿素诱导人脑微血管内皮细胞系产生炎性因子

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基础医学与临床 2015年第2期35卷 152-156页

作者：王琦王弘凯刘丽君何菲汪克建李晋芳冉建华重庆医科大学基础医学院解剖学教研室重庆400016 重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016 重庆医科大学附属第二医院神经内科重庆400016

目的研究高浓度尿素诱导人脑微血管内皮细胞系(HBMECs)产生炎性因子及其机制。方法以相同渗透压的甘露醇为对照,高浓度尿素(25 mmol/L)干预HBMECs 3、6、12和24 h后,免疫荧光法观察细胞内肿瘤坏死因子α(TNF-α)和诱导型一氧化氮合酶(i ... 详细信息

目的研究高浓度尿素诱导人脑微血管内皮细胞系(HBMECs)产生炎性因子及其机制。方法以相同渗透压的甘露醇为对照,高浓度尿素(25 mmol/L)干预HBMECs 3、6、12和24 h后,免疫荧光法观察细胞内肿瘤坏死因子α(TNF-α)和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的表达。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TNF-α、i NOS、环氧合酶-2(cycloxygenase-2,COX-2)、核因子κB(NF-κB)/P65和p-P65的表达水平。一氧化氮(NO)试剂盒检测细胞NO含量。结果高浓度尿素增强细胞内TNF-α和i NOS表达。细胞TNF-α、COX-2和p-P65蛋白水平在3和6 h明显高于对照组(P<0.01);i NOS蛋白水平持续增高(P<0.01)。NO含量在3 h明显增多(P<0.05)。结论高浓度尿素诱导人脑微血管内皮细胞产生炎性因子。

关键词：尿素人脑微血管内皮细胞肿瘤坏死因子α 一氧化氮核因子-κB

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多克隆及单克隆P24抗体在石蜡组织切片上检测BDV-P24蛋白质的应用

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重庆医科大学学报 2014年第7期39卷 1005-1009页

作者：张鸿志李丹雷阳邓婧陈世刚黄华李文娟陈建军王啸张亮黄荣忠刘霞谢鹏重庆医科大学附属第一医院神经内科、重庆医科大学神经科学研究中心、重庆市神经生物学重点实验室重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理学教研室重庆400016

目的:验证本课题组前期制备的多克隆及单克隆P24抗体能否在石蜡组织切片上检测博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)磷蛋白(P24蛋白质)以及探索其运用的条件。方法:选择出生24 h内的SD大鼠20只为实验组颅内注射BDV病毒液,对照组大鼠2... 详细信息

目的:验证本课题组前期制备的多克隆及单克隆P24抗体能否在石蜡组织切片上检测博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)磷蛋白(P24蛋白质)以及探索其运用的条件。方法:选择出生24 h内的SD大鼠20只为实验组颅内注射BDV病毒液,对照组大鼠20只在相同部位注射磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS),未经注射的SD大鼠和C57小鼠各40只作为阴性实验对照,饲养到60 d取脑石蜡包埋制片;免疫组化染色用Envision两步法,一抗为多克隆或单克隆P24抗体,以PBS代替一抗作为空白对照,P24抗体的稀释浓度分别从1∶50、1∶100、1∶200、1∶400直到1∶5 000;以高倍镜下神经细胞细胞质呈棕黄色或棕褐色颗粒为阳性,将每张切片阳性细胞比例评分乘以阳性强度评分计算总分。结果:多克隆P24和单克隆P24抗体分别在BDV感染大鼠实验组与阴性对照组的染色评分差异有统计学意义(多克隆抗体Z=-3.108,P=0.000;单克隆抗体Z=-4.605,P=0.000);在多克隆P24抗体稀释度中,1∶200、1∶400的敏感性好而背景着色较轻,在单克隆P24抗体稀释度中,1∶100、1∶200、1∶400的敏感性好而无背景着色。结论:多克隆及单克隆P24抗体在石蜡组织切片上能检测出BDV P24蛋白质;并且多克隆P24抗体推荐的浓度为1∶200和1∶400,单克隆P24抗体的推荐浓度为1∶100、1∶200和1∶400。

关键词：多克隆P24抗体单克隆P24抗体博尔纳病病毒免疫组化染色

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脑血流低灌注老龄大鼠中脑皮质血流的改变与血清总胆固醇和高密度脂蛋白的动态变化

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重庆医科大学学报 2012年第6期37卷 494-497页

作者：王林辉田茗源滕志朋王晨李昱重庆医科大学基础医学院病理学教研室、重庆医科大学神经科学中心、重庆市神经生物学重点实验室重庆400016

目的:通过建立脑血流低灌注模型,观察老龄大鼠脑血流的变化以及在脑血流低灌注下血清中总胆固醇(Total cholesterol,TC)和高密度脂蛋白(High density lipoprotein,HDL)的动态变化。方法:采用持久性双侧颈总动脉结扎法(2VO)致老龄大鼠脑... 详细信息

目的:通过建立脑血流低灌注模型,观察老龄大鼠脑血流的变化以及在脑血流低灌注下血清中总胆固醇(Total cholesterol,TC)和高密度脂蛋白(High density lipoprotein,HDL)的动态变化。方法:采用持久性双侧颈总动脉结扎法(2VO)致老龄大鼠脑血流灌注不足,测定术后7、14、21、28 d大鼠脑皮质血流;检测、比较术后不同时间段大鼠血清中TC和HDL浓度差异。结果:术后第14天大鼠脑颞区血流出现明显减少;术后21、28 d大鼠脑局部皮质血管有再生侧支形成,大鼠脑颞区血流仍未恢复;术后第14天血清中HDL、TC含量明显高于假手术组(P<0.05),随着缺血时间延长,又逐渐降低。结论:血清TC和HDL浓度在脑缺血灌注不足的不同时间段经历了先增强后减弱的动态变化,提示脑血流低灌注老龄大鼠因大脑血流灌注不足可出现体内胆固醇代谢失衡并出现应激调节现象。

关键词：脑血流低灌注总胆固醇高密度脂蛋白

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钙视网膜蛋白在先天性巨结肠病理诊断中的应用

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第三军医大学学报 2012年第19期34卷 2005-2008页

作者：朱进安洪伟赵涌李昱重庆医科大学基础医学院病理学教研室神经科学中心重庆市神经生物学重点实验室重庆400016

目的研究钙视网膜蛋白(calretinin,CR)免疫组织化学染色及胆碱酯酶染色(acetylcholinesterase staining,AchE)在先天性巨结肠(hirschsprung disease,HD)病理诊断中的作用对比,并探讨在直肠黏膜活检标本不足时CR的诊断作用。方法采用回... 详细信息

目的研究钙视网膜蛋白(calretinin,CR)免疫组织化学染色及胆碱酯酶染色(acetylcholinesterase staining,AchE)在先天性巨结肠(hirschsprung disease,HD)病理诊断中的作用对比,并探讨在直肠黏膜活检标本不足时CR的诊断作用。方法采用回顾性研究的方法对比163例直肠黏膜活检CR免疫组织化学染色与AchE染色诊断HD准确性及敏感性。研究26例只含有1个黏膜下神经丛的直肠黏膜活检标本中,CR免疫组织化学染色辅助病理诊断的准确率。结果在年龄<3个月的病例组中,CR免疫组织化学染色敏感度显著高于AchE染色。CR免疫组织化学染色能够准确诊断21例只含有1个黏膜下神经丛的直肠黏膜活检HD病例。结论 CR免疫组织化学染色是一种优于AchE染色的直肠黏膜活检诊断HD的必要辅助方法。

关键词：先天性巨结肠钙视网膜蛋白胆碱酯酶染色

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