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重庆医科大学学报 2011年第12期36卷 1440-1444页

作者：姜蓉黎晓莉吴宏王璐重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:建立稳定高效的人包皮成纤维细胞(Human foreskin fibroblasts,HFF)饲养层培养体系,用于培养人胚胎生殖细胞(Embryonic germ cells,EGCs)。方法:取4～5岁小儿包皮,采用机械法和组织消化法分离、培养成纤维细胞,倒置相差显微镜观察... 详细信息

目的:建立稳定高效的人包皮成纤维细胞(Human foreskin fibroblasts,HFF)饲养层培养体系,用于培养人胚胎生殖细胞(Embryonic germ cells,EGCs)。方法:取4～5岁小儿包皮,采用机械法和组织消化法分离、培养成纤维细胞,倒置相差显微镜观察细胞生长状况,免疫细胞化学法、MTT法、流式细胞术检测细胞纯度、生长曲线及细胞周期,筛选丝裂霉素C作用的最佳浓度和时间。分离5～11周人胚胎原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)并培养于经丝裂霉素C处理的HFF饲养层上,观察人EGCs生长情况。结果:机械法和组织消化法结合分离HFF方法可靠,纯度高,细胞生长活性好,能快速进入对数生长期,细胞周期与细胞生长曲线保持一致,细胞可以传60代以上,P3～P30代均适宜作饲养层;丝裂霉素C抑制细胞增殖的适宜浓度及时间为12.5 mg/L作用2.5 h;分离的人PGCs在该饲养层上培养可形成典型的EGCs集落,体外连续培养超过3代。结论:HFF饲养层能有效地支持人EGCs的生长。

关键词：人胚胎生殖细胞包皮成纤维细胞饲养层

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硝普钠促进静脉移植BMSCs向溃疡性结肠炎大鼠结肠的迁移

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重庆医科大学学报 2011年第2期36卷 152-155页

作者：陈晓云徐艳华姜蓉汪维伟重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:观察硝普钠能否促进静脉移植的大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向溃疡性结肠炎(Ulcerativecolitis,UC)大鼠结肠的迁移。方法:分离培养4、’,6-二脒基-2-苯基吲哚盐酸(4’,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)荧光标记SD大鼠BMSCs。免疫复合法建立UC大鼠模型,1、2组UC大鼠均经尾静脉注射DAPI标记BMSCs的细胞悬液,2组细胞悬液还含0.2 mg/kg体重的硝普钠。移植后第7、14天各处死5只大鼠,取溃疡及非溃疡部位结肠做恒冷切片,荧光显微镜下分别计数各组DAPI标记BMSCs在溃疡及非溃疡部位结肠的细胞数。结果:移植第7、14天,2组结肠溃疡部位阳性细胞数均明显高于非溃疡部位(P<0.01);移植第7天,2组溃疡及非溃疡部位的阳性细胞数均高于1组(P<0.05)。结论:静脉移植BMSCs的同时给予硝普钠能促进BMSCs向结肠溃疡部位的迁移。

关键词：骨髓间充质干细胞移植溃疡性结肠炎硝普钠

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三丁基过氧化氢体外诱导造血干/祖细胞衰老中的SIRT6/NF-κB信号轴

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中国组织工程研究 2014年第37期18卷 5967-5971页

作者：周玥王亚平王建伟丁继超杨勇琴大理学院组织学与胚胎学教研室云南省大理市671000 重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织学与胚胎学教研室重庆市400016

背景:SIRT6/NF-κB信号轴是细胞衰老的调控通路,但其在造血干/祖细胞(hematopoietic stem and progenitor cell,HSC/HPC)衰老中的作用尚不清楚。目的:探讨SIRT6/NF-κB信号通路在三丁基过氧化氢体外诱导造血干/祖细胞衰老中的作用。方法... 详细信息

背景:SIRT6/NF-κB信号轴是细胞衰老的调控通路,但其在造血干/祖细胞(hematopoietic stem and progenitor cell,HSC/HPC)衰老中的作用尚不清楚。目的:探讨SIRT6/NF-κB信号通路在三丁基过氧化氢体外诱导造血干/祖细胞衰老中的作用。方法:免疫磁性分选法分离、纯化小鼠Sca-1+HSC/HPC。用100μmol/L三丁基过氧化氢体外诱导Sca-1+HSC/HPC构建体外衰老模型,通过衰老相关β-半乳糖苷酶细胞化学染色、流式细胞术分析细胞周期、造血祖细胞混合集落培养确定三丁基过氧化氢诱导Sca-1+HSC/HPC衰老的生物学作用。荧光定量PCR及Western blotting检测衰老调控分子SIRT6、NF-κB mRNA及蛋白的表达。结果与结论:与对照组比较,衰老组Sca-1+HSC/HPCβ-半乳糖苷酶染色阳性细胞数、G0/G1期细胞比例增高,形成造血祖细胞混合集落数量减少;SIRT6 mRNA及蛋白表达下调,NF-κB mRNA及蛋白表达上调。结果表明三丁基过氧化氢可能通过调控SIRT6/NF-κB信号通路发挥诱导Sca-1+HSC/HPC衰老作用。

关键词：干细胞造血干细胞三丁基过氧化氢造血干/祖细胞衰老 SIRT6 国家自然科学基金

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人参皂苷单体Rh2对人鼻咽癌CNE2细胞株增殖、凋亡的影响及其机制

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中国生物制品学杂志 2014年第8期27卷 1029-1034页

作者：袁轲刘泽洪游智梅夏菁魏强赵亮李静重庆医科大学附属儿童医院耳鼻喉科重庆400014 重庆医科大学组织学与胚胎学教研室重庆400016 重庆医科大学干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的研究人参皂苷单体Rh2对人鼻咽癌CNE2细胞株增殖、凋亡的影响及其可能的机制。方法取对数生长期的CNE2细胞,用不同浓度的Rh2(20、40、60、80、100μmol/L)处理不同时间(24、48、72 h),并设对照组(正常培养),采用MTT法检测各组细胞的... 详细信息

目的研究人参皂苷单体Rh2对人鼻咽癌CNE2细胞株增殖、凋亡的影响及其可能的机制。方法取对数生长期的CNE2细胞,用不同浓度的Rh2(20、40、60、80、100μmol/L)处理不同时间(24、48、72 h),并设对照组(正常培养),采用MTT法检测各组细胞的增殖活力;用最适作用浓度的Rh2分别处理CNE2细胞24、48、72 h,采用Hoechst荧光染色法观察细胞凋亡形态;流式细胞术检测细胞凋亡率、周期分布以及膜电位的变化;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、CyclinD1、P53的表达水平。结果 Rh2对CNE2细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈时间和剂量依赖性,60μmol/L Rh2作用72 h为最适作用浓度和时间。经60μmol/L的Rh2作用48、72 h后,凋亡细胞数目增多,凋亡细胞体积变小,细胞核出现染色质不均匀,核浓缩聚集、碎裂,边集程度增大等现象。与对照组比较,经60μmol/L的Rh2作用24、48、72 h,CNE2细胞的凋亡率逐渐增加(P<0.01);G0/G1期细胞比例逐渐升高(P<0.01),S期(P<0.01)和G2/M期细胞比例逐渐下降;细胞的膜电位逐渐降低(P<0.05);促凋亡蛋白Bax、激活型Caspase-3和P53蛋白表达上调(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2和细胞周期相关蛋白CyclinD1表达下调(P<0.05)。结论人参皂苷单体Rh2具有抑制CNE2细胞增殖,使细胞周期阻滞在G0/G1期,诱导细胞凋亡的作用,其机制可能是通过Caspase/CyclinD1信号通路实现的。

关键词：人参皂苷 Rh2 鼻咽癌 CNE2细胞细胞增殖细胞凋亡 Caspase-3 CyclinD1

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运用新的体视学方法定量研究大鼠海马结构神经元和突触数目

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第三军医大学学报 2011年第13期33卷 1328-1332页

作者：师晓燕赵圆宇卢伟陈林张蕾姜蓉2,3 唐勇姜蓉重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆400016 重庆医科大学组织学与胚胎学教研室重庆400016 重庆医科大学干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的建立定量研究海马结构神经元数目和突触数目的无偏体视学方法。方法选择18月龄正常雌性Long-Evans大鼠5只,取一侧大脑半球进行石蜡包埋后切取14μm厚的冠状连续切片。根据均匀系统随机抽样的原则,在包含海马结构的连续切片中均匀随... 详细信息

目的建立定量研究海马结构神经元数目和突触数目的无偏体视学方法。方法选择18月龄正常雌性Long-Evans大鼠5只,取一侧大脑半球进行石蜡包埋后切取14μm厚的冠状连续切片。根据均匀系统随机抽样的原则,在包含海马结构的连续切片中均匀随机地抽取切片。将抽取的一组切片进行神经元的组织化学染色,以计数神经元的数目;将抽取的另外一组切片进行突触的免疫组织化学染色,以计数突触的数目。在体视学设备下,计数大鼠海马结构CA1和DG的神经元数目和大鼠海马结构CA1、CA1放射层(CA1sr)、齿状回内分子层(DGiml)和齿状回外分子层(DGoml)的突触数目。结果得到大鼠海马结构CA1和DG的神经元数目分别为[(3.17×105)±(2.23×104)]和[(1.70×106)±(1.87×105)]。大鼠海马结构CA1、CA1 CA1 sr、DGiml和DGoml的突触数目分别为[(1.04×108)±(5.39×106)]、[(4.36×107)±(3.78×106)]、[(1.87×107)±(1.81×106)]和[(4.48×107)±(7.29×105)]。结论本研究建立了定量研究海马结构各区域内神经元数目和突触数目的方法,可为定量研究正常老年及各种神经系统退行性疾病状态下海马结构各区域内神经元数目、突触数目及神经元与突触数目关系的改变提供方法学依据。

关键词：海马结构神经元突触大鼠体视学

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短期丰富生存环境对中老年雌性大鼠海马结构及其内有髓神经纤维的影响

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解剖学报 2010年第2期41卷 219-223页

作者：仇玄卢伟杨姝李琛夏磊黄春霞杨俊卿唐勇重庆医科大学组织学与胚胎学教研室重庆400016 重庆医科大学干细胞与组织工程学研究室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆400016 重庆医科大学生理学教研室重庆400016 重庆医科大学药理学教研室重庆400016

目的探讨短期丰富生存环境干预对中老年雌性大鼠海马结构及其内有髓神经纤维的影响。方法将20只14月龄的雌性SD大鼠随机分为丰富生存环境组和标准环境组,每组各10只,对丰富生存环境组的动物给予4个月丰富生存环境干预,标准环境组于普通... 详细信息

目的探讨短期丰富生存环境干预对中老年雌性大鼠海马结构及其内有髓神经纤维的影响。方法将20只14月龄的雌性SD大鼠随机分为丰富生存环境组和标准环境组,每组各10只,对丰富生存环境组的动物给予4个月丰富生存环境干预,标准环境组于普通标准环境下饲养4个月;然后每组各随机选取5只,采用Morris水迷宫对大鼠的空间学习能力进行测试,然后运用透射电子显微镜和体视学方法分别对大鼠大脑海马结构及其内有髓神经纤维进行定量研究。结果短期丰富生存环境组中老年雌性大鼠与标准环境组相比,其空间学习能力明显增强;丰富生存环境组海马结构内有髓神经纤维总长度和总体积分别显著增加了43.4%和47.4%,且有髓神经纤维总长度的增加主要是由于细小直径的有髓神经纤维长度增加所致。海马结构总体积和海马结构内有髓神经纤维直径未见改变。结论4个月丰富生存环境干预对于14月龄雌性大鼠空间学习能力、海马内有髓神经纤维均有显著性影响。

关键词：丰富生存环境空间学习能力 Morris水迷宫海马结构有髓神经纤维体视学雌性大鼠

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急性低剂量辐射对小鼠肝脏及骨髓DNA甲基化的影响

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基础医学与临床 2014年第7期34卷 933-938页

作者：陈凤鸣吴宏张梦关雪晶何晓莉蒋林重庆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016 重庆医科大学药学院重庆400016

目的观察低剂量辐射(LDR)对小鼠肝脏及骨髓单个核细胞(BMNC)DNA甲基化及甲基化转移酶的影响。方法直线加速器一次性全身X射线1.0 Gy均匀照射C57BL/6小鼠,建立辐射损伤模型。并于照射后1、3、7和14 d取眼球血进行外周血细胞计数,处死小... 详细信息

目的观察低剂量辐射(LDR)对小鼠肝脏及骨髓单个核细胞(BMNC)DNA甲基化及甲基化转移酶的影响。方法直线加速器一次性全身X射线1.0 Gy均匀照射C57BL/6小鼠,建立辐射损伤模型。并于照射后1、3、7和14 d取眼球血进行外周血细胞计数,处死小鼠提取肝脏及BMNC,高效液相色谱法检测全基因组DNA甲基化的水平,Western blot检测DNA甲基化转移酶1(DNMT1)、DNMT3A及DNMT3B的水平。结果与正常组相比,辐射组白细胞及血小板计数均明显降低(P<0.05),白细胞在1 d时降至最低,而血小板在3 d时降至最低,14 d仍未恢复正常。辐射组肝及BMNC全基因组DNA甲基化水平下降(P<0.05),其后均逐渐恢复正常。与正常组相比,辐射组肝脏及BMNC DNMT1及DNMT3A表达显著升高(P<0.05),14 d时仍未恢复至正常,DNMT3B的表达也显著升高(P<0.05),但在7 d时已恢复至正常。结论低剂量辐射可导致小鼠肝脏及骨髓DNA甲基化水平的降低及DNMTs表达的升高。

关键词：低剂量辐射 DNA甲基化 DNA甲基化转移酶表观遗传学

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移植骨髓间充质干细胞在溃疡性结肠炎大鼠结肠的分布

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重庆医科大学学报 2010年第6期35卷 845-848页

作者：陈晓云徐艳华姜蓉汪维伟重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室重庆市干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:观察不同数量大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)移植于溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)大鼠模型,探讨BMSC移植的最适数量。方法:分离培养、DAPI荧光标记SD大鼠BMSCs。免疫复合法建立大鼠UC模型,... 详细信息

目的:观察不同数量大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)移植于溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)大鼠模型,探讨BMSC移植的最适数量。方法:分离培养、DAPI荧光标记SD大鼠BMSCs。免疫复合法建立大鼠UC模型,分A、B、C组分别经尾静脉注射1×106、5×106、1×107个DAPI标记的BMSCs。移植后第7、14d各处死5只大鼠,取结肠做恒冷切片,荧光显微镜下记数各组DAPI标记BMSCs在病灶部位和周围正常部位的细胞数。结果:移植7、14d,各组均见BMSCs分布于结肠黏膜,溃疡部位阳性细胞数明显高于非溃疡部位阳性细胞数(P<0.05)。移植7、14d,B组损伤部位的荧光标记细胞多于A组(P<0.05),但B组与C组间差异不明显。结论:经静脉给UC大鼠移植BMSCs的最适数量为5×106个。

关键词：骨髓间充质干细胞移植溃疡性结肠炎

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烟草烟雾提取物通过TGF-β1/Smad2通路诱导RLE-6TN细胞凋亡

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第三军医大学学报 2015年第14期37卷 1412-1416页

作者：廖科陈亚娟赵绿翠巫凤苹陈虹重庆医科大学附属第一医院呼吸与危重症医学科重庆400016 重庆医科大学组织学与胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的研究烟草烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)对体外培养的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡的影响,探究其潜在机制。方法体外培养大鼠肺泡上皮RLE-6TN细胞株24 h,分别加入0.5%、1.0%、2.0%CSE共培养48 h;转化生长因子-β1(TGF-β1)... 详细信息

目的研究烟草烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)对体外培养的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡的影响,探究其潜在机制。方法体外培养大鼠肺泡上皮RLE-6TN细胞株24 h,分别加入0.5%、1.0%、2.0%CSE共培养48 h;转化生长因子-β1(TGF-β1)受体抑制剂(SB431542)500 nmol/L作用RLE-6TN细胞株24 h后,加入2.0%CSE共培养48 h。Hoechst染色后观察细胞核的形态学改变;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测TGF-β1、p-Smad2和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3裂解片段(Cleaved Caspase-3)的表达。结果经不同浓度(0.5%、1.0%、2.0%)的CSE作用48 h后,Hoechst染色可见部分凋亡细胞,核发白、固缩、染色质边集等现象;细胞早期凋亡率由(5.270±0.526)%增加至(32.580±0.413)%(P<0.01);TGF-β1、p-Smad2和Cleaved Caspase-3蛋白表达量增加;TGF-β1受体抑制剂(SB431542)干预后,Smad2和Cleaved Caspase-3表达量明显降低(P<0.05)。结论 CSE通过激活TGF-β1/Smad2信号通路,参与调节Cleaved Caspase-3的表达,从而诱导大鼠肺泡上皮细胞的凋亡。

关键词：烟草烟雾提取物肺泡Ⅱ型上皮细胞细胞凋亡

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ERK途径可能参与抗坏血酸诱导的神经干细胞向多巴胺能细胞分化

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第三军医大学学报 2013年第22期35卷 2430-2434页

作者：邓小兰晋贞超王健郑敏重庆医科大学基础医学院干细胞与组织工程研究室组织学与胚胎学教研室重庆400016 重庆医科大学附属第二医院神经内科重庆400010

目的探讨抗坏血酸（ascorbic acid，AA）诱导神经干细胞（neural stem cells，NSCs）向多巴胺能神经元方向分化的作用并初步探索其机制。方法从12.5 d胚胎大鼠中脑获得NSCs，培养扩增后分为对照组和分别加入1、10、50、100、200 μmol/L... 详细信息

目的探讨抗坏血酸（ascorbic acid，AA）诱导神经干细胞（neural stem cells，NSCs）向多巴胺能神经元方向分化的作用并初步探索其机制。方法从12.5 d胚胎大鼠中脑获得NSCs，培养扩增后分为对照组和分别加入1、10、50、100、200 μmol/L AA处理组，比较NSCs向多巴胺能神经元分化结果；采用免疫细胞化学对NSCs以及分化后神经元进行鉴定和检测，RT-PCR检测酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase，TH）、多巴胺转运子（dopamine transporter，DAT）、SHH、Nurr1、Ptx3 mRNA表达；在AA诱导分化中加入ERK阻断剂 PD98059，以探讨ERK通路在分化中的作用。结果获得大量的神经球并且表达nestin强阳性；AA处理组比对照组表现出较强的多巴胺能分化，其中100 μmol/L AA诱导组表达TH和DAT阳性细胞数量比对照组明显增加（P〈0.05），增加30～50倍；AA诱导增加了Nurr1、TH、DAT、SHH mRNA的表达，ERK抑制剂PD98059能抑制AA诱导后Nurr1、TH、DAT mRNA的表达而不影响SHH mRNA表达（P〈0.05 ）。结论抗坏血酸能诱导神经干细胞分化为多巴胺能神经元，ERK途径可能是AA诱导过程中参与多巴胺能分化的途径之一，Nurr1基因可能参与到ERK途径中或者是其下游基因。

关键词：神经干细胞分化促分裂原活化蛋白激酶细胞外信号调节激酶通路信号转导

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