检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2012年第7期28卷 752-754页

作者：耿珊张琛刘俊刘典锋周玥王亚平重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织胚胎学教研室重庆400016

目的:改良常规免疫磁性活化细胞分选(MACS)的分离纯化方法,提高分选后细胞的纯度并确保细胞仍具有良好活性及功能。方法:以干细胞抗原-1(Sca-1)标记的Sca-1+造血干/祖细胞(Sca-1+HSC/HPC)为例,分别用改良后和常规MACS法分选出小鼠骨髓细... 详细信息

目的:改良常规免疫磁性活化细胞分选(MACS)的分离纯化方法,提高分选后细胞的纯度并确保细胞仍具有良好活性及功能。方法:以干细胞抗原-1(Sca-1)标记的Sca-1+造血干/祖细胞(Sca-1+HSC/HPC)为例,分别用改良后和常规MACS法分选出小鼠骨髓细胞Sca-1+细胞,流式细胞术检测两种分选方法获得Sca-1+细胞纯度;计算阳性细胞回收率;台酚蓝染色检测分选细胞存活百分率;CCK-8检测细胞增殖,混合造血祖细胞(CFU-Mix)体外培养评价分选Sca-1+细胞分化能力。结果:改良MACS法分选获得的Sca-1+细胞纯度达93%以上(常规MACS法仅为87%),阳性细胞的回收率可达73%(常规法仅为62.3%);细胞存活率、细胞增殖和CFU-Mix集落形成能力两种分选方法无明显差别。结论:改良法能明显提高细胞分选纯度及回收率,细胞活性和功能保持良好,值得各种细胞免疫磁性分选参考采用。

关键词：免疫磁性活化细胞分选方法干细胞抗原-1 生物学特征

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人参皂苷Rg_1诱导人白血病K562细胞株衰老的实验研究

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中国中药杂志 2012年第16期37卷 2424-2428页

作者：蔡世忠周玥刘俊刘典峰姜蓉王亚平重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的:观察人参皂苷Rg1(Rg1)诱导人白血病K562细胞株衰老的作用及其机制。方法:MTT比色法检测Rg1对K562细胞增殖的影响,筛选最佳作用浓度及时间(20μmol.L-1,48 h)。流式细胞术检测Rg1对细胞周期的影响;SA-β-Gal染色检测细胞阳性染色百... 详细信息

目的:观察人参皂苷Rg1(Rg1)诱导人白血病K562细胞株衰老的作用及其机制。方法:MTT比色法检测Rg1对K562细胞增殖的影响,筛选最佳作用浓度及时间(20μmol.L-1,48 h)。流式细胞术检测Rg1对细胞周期的影响;SA-β-Gal染色检测细胞阳性染色百分率;RT-PCR法检测衰老相关基因p16,p53,p21,Rb的表达;电镜观察细胞衰老超微形态学改变。结果:Rg1在体外能明显抑制K562细胞增殖,使细胞阻滞于G2/M期;SA-β-Gal染色阳性细胞百分率显著增高(P<0.05);细胞衰老相关基因的表达上调(P<0.05);超微结构观察显示细胞增大,异染色质凝集、碎裂,线粒体体积增大,溶酶体体积增大、数目增多等衰老形态学变化。结论:Rg1能诱导K562细胞衰老,p53-p21-Rb,p16-Rb信号转导通路在其衰老调控中起重要作用。

关键词：人参皂苷Rg1 白血病 K562细胞株细胞衰老

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人参皂苷单体Rh2(S亚型)对人急性髓系白血病细胞株KG1α增殖、凋亡的影响及其机制

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中国生物制品学杂志 2012年第10期25卷 1319-1324页

作者：刘艺李静刘晓岩姜蓉王建伟魏强赵亮陈地龙重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的探讨人参皂苷单体Rh2(S亚型)对人急性髓系白血病细胞株KG1α增殖、凋亡的影响及其机制。方法取对数生长期的KG1α细胞,分为两组:空白对照组(常规培养)和人参皂苷单体Rh2(S)组,采用MTT法检测细胞的增殖活力,倒置显微镜观察细胞的形... 详细信息

目的探讨人参皂苷单体Rh2(S亚型)对人急性髓系白血病细胞株KG1α增殖、凋亡的影响及其机制。方法取对数生长期的KG1α细胞,分为两组:空白对照组(常规培养)和人参皂苷单体Rh2(S)组,采用MTT法检测细胞的增殖活力,倒置显微镜观察细胞的形态及数量,透射电镜观察细胞的超微结构,流式细胞仪检测细胞周期的分布,Real-time PCR检测细胞中β-catenin基因mRNA水平,免疫细胞化学法检测细胞中β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的定位及表达,Western blot检测细胞中β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的表达水平。结果人参皂苷单体Rh2(S)对KG1α细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性。与空白对照组比较,Rh2(S)作用48 h后,可见KG1α细胞分散生长,数量明显减少;可见数量不等,程度不同的凋亡细胞;G0/G1期细胞比例明显上升(P<0.05),G2+M和S期细胞比例明显下降(P<0.05);细胞中β-catenin基因mRNA水平明显降低(P<0.01)。β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论人参皂苷单体Rh2(S亚型)对KG1α细胞具有明显的增殖抑制作用,其机制可能抑制Wnt/β-catenin/TCF4/CyclinD1信号通路,使细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡。

关键词：人参皂苷单体Rh2(S亚型) KG1a细胞细胞增殖细胞凋亡 β-catenin TCF4 CyclinD1

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人参皂苷Rg1诱导白血病K562细胞衰老

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基础医学与临床 2012年第5期32卷 481-486页

作者：蔡世忠刘俊刘典峰周玥姜蓉王亚平重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的探讨人参皂苷Rg1(Rg1)诱导白血病K562细胞衰老及其机制。方法 MTT比色法筛选细胞增殖抑制的最佳浓度及时间,并以此浓度和作用时间进行细胞衰老的相关机理研究。流式细胞术检测细胞增殖周期;SA-β-Gal染色检测阳性细胞;Colony-Assay... 详细信息

目的探讨人参皂苷Rg1(Rg1)诱导白血病K562细胞衰老及其机制。方法 MTT比色法筛选细胞增殖抑制的最佳浓度及时间,并以此浓度和作用时间进行细胞衰老的相关机理研究。流式细胞术检测细胞增殖周期;SA-β-Gal染色检测阳性细胞;Colony-Assay检测集落形成能力;Southern blotting检测端粒长度;Western blot检测蛋白表达;透射电镜观察细胞超微形态。结果 Rg1在体外能明显抑制K562细胞增殖,使K562细胞阻滞于G2/M期;并显著提高SA-β-Gal染色阳性细胞百分率(P<0.05);降低细胞形成集落的能力;衰老相关蛋白P53、P21、P16及RB表达上调(P<0.05);端粒长度缩短(P<0.05);胞体增大,溶酶体体积增大、数目增多,线粒体体积增大,异染色质凝集等衰老形态学变化。结论人身皂苷Rg1能诱导K562细胞衰老。

关键词：人参皂苷Rg1 K562细胞衰老机制

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人参皂苷Rg1诱导人红白血病K562细胞株衰老与p16-Rb信号通路的相关性

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中国生物制品学杂志 2012年第10期25卷 1310-1314页

作者：蔡世忠刘俊周玥刘典锋杨斌姜蓉王亚平重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的探讨人参皂苷Rg1(以下简称Rg1)诱导人红白血病K562细胞株衰老与p16-Rb信号通路的相关性。方法以不同浓度的Rg1(0、5、10、20、40和80μmol/L)作用于K562细胞不同时间(24、48、72 h),MTT法筛选Rg1抑制K562细胞增殖的最佳作用浓度及... 详细信息

目的探讨人参皂苷Rg1(以下简称Rg1)诱导人红白血病K562细胞株衰老与p16-Rb信号通路的相关性。方法以不同浓度的Rg1(0、5、10、20、40和80μmol/L)作用于K562细胞不同时间(24、48、72 h),MTT法筛选Rg1抑制K562细胞增殖的最佳作用浓度及作用时间,以该浓度干预K562细胞不同时间,流式细胞术检测细胞的细胞周期;以最佳浓度Rg1干预K562细胞最佳时间,集落培养法检测细胞集落形成能力;衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测阳性细胞百分率;透射电镜观察细胞的超微结构;Southern blot检测细胞的端粒长度;Western blot检测细胞中P16和RB蛋白的表达。结果 Rg1在体外可明显抑制K562细胞增殖,其最佳作用浓度及作用时间分别为20μmol/L和48 h;经20μmol/L Rg1诱导48 h的K562细胞与常规培养对照组相比,细胞出现G2/M期阻滞(P<0.05),集落形成能力明显减弱(P<0.05),SA-β-Gal染色阳性率增加(P<0.01),细胞体积增大,且溶酶体,线粒体体积增大,数目增多,端粒缩短加速(P<0.05),P16和RB蛋白表达上调(P<0.05)。结论 Rg1能诱导人红白血病K562细胞株衰老,可能与Rg1激活了p16-Rb信号通路有关。

关键词：人参皂苷Rg1 人红白血病 K562细胞株细胞衰老 p16-Rb信号通路

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1,25-二羟基维生素D_3对乳腺癌MCF-7细胞CYP1B1表达的作用和COX-2/PGE2通路机制

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第二军医大学学报 2012年第3期33卷 252-258页

作者：袁磊邓华瑜姜蓉丁嵩涛重庆医科大学病理生理学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的分析COX-2、p-ERα、CYP1B1在人乳腺癌组织和ERα阳性表达人乳腺癌细胞系MCF-7中的表达规律,探讨1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]在人乳腺癌细胞MCF-7中通过COX-2/PGE2通路对CYP1B1表达和细胞增殖、细胞周期转化的影响及作用机制... 详细信息

目的分析COX-2、p-ERα、CYP1B1在人乳腺癌组织和ERα阳性表达人乳腺癌细胞系MCF-7中的表达规律,探讨1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]在人乳腺癌细胞MCF-7中通过COX-2/PGE2通路对CYP1B1表达和细胞增殖、细胞周期转化的影响及作用机制。方法用免疫组织化学法检测42例人乳腺癌组织中COX-2、p-ERα、CYP1B1的表达,并分析其相关性;MTT法检测1,25(OH)2D3对MCF-7细胞增殖的影响,并确定后续实验药物浓度;流式细胞术检测细胞周期;RT-PCR检测MCF-7细胞COX-2 mRNA水平;ELISA法检测细胞培养上清液中PGE2水平;蛋白质印迹法检测MCF-7细胞COX-2、p-ERK、p-ERα、CYP1B1蛋白水平;免疫细胞荧光检测COX-2、p-ERα、CYP1B1蛋白在MCF-7中的原位表达。结果在人乳腺癌组织中COX-2、p-ERα、CYP1B1蛋白呈阳性表达,两两之间均呈正相关性(P<0.05)。1,25(OH)2D3对MCF-7细胞增殖具有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。应用100 nmol/L 1,25(OH)2D372 h后,MCF-7细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05);细胞COX-2 mRNA表达减少(P<0.05);细胞培养上清中PGE2水平降低(P<0.01);COX-2、p-ERK、p-ERα及CYP1B1蛋白表达均减少(P<0.05)。结论在乳腺癌中,COX-2/PGE2通路对CYP1B1的表达具有正向调控作用。1,25(OH)2D3可通过抑制COX-2/PGE2通路减少CYP1B1的表达,对乳腺癌细胞MCF-7的增殖产生抑制作用。

关键词：环氧化酶2 1,25-二羟基维生素D3 细胞色素P4501B1 乳腺肿瘤

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中医气虚血虚模型与造血干／祖细胞衰老

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激光杂志 2012年第4期33卷 88-89页

作者：刘典锋周王月蔡世忠何轩耿珊张琛孙可王亚平重庆医科大学组织学与胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:构建中医"气虚血虚"模型,探讨造血干/祖细胞(HSC/HPC)衰老及检测相关生物学指标,为阐释中医"气虚血虚"的现代生物学机理和探讨"补气生血"药物的作用提供理论与实验依据。方法:6.5Gy的x射线一次性全... 详细信息

目的:构建中医"气虚血虚"模型,探讨造血干/祖细胞(HSC/HPC)衰老及检测相关生物学指标,为阐释中医"气虚血虚"的现代生物学机理和探讨"补气生血"药物的作用提供理论与实验依据。方法:6.5Gy的x射线一次性全身辐射C57小鼠,辐射6h内腹腔注射盐酸苯肼40mg/kg,建立"气虚血虚"模型(即骨髓抑制与贫血模型),分别在第3、7、14、28d观察小鼠的行为学变化、外周血象、骨髓单个核细胞总数、免疫磁性分选法分离鉴定小鼠Sca-1+HSC/HPC、检测骨髓单个核细胞数(MNCs)与造血干/祖细胞(Sca-1+HSC/HPC)数量、衰老SA-β-半乳糖苷酶染色检测Sca-1+HSC/HPC阳性率、Sca-1+HSC/HPC细胞周期分布、脾指数与脾脏病理变化。结果:与对照组相比,在各时间段上模型组小鼠均表现出精神萎靡,行为迟缓,进食量下降等中医"气虚血虚"症候、外周血象各项指标降低,MNCs数下降,Sca-1+HSC/HPC数下降、SA-β-半乳糖苷酶染色阳性百分率(11.82±3.24)%,高于对照组〔(2.07±2.21)%,P<0.05〕、细胞周期G1期阻滞,G0/G1期比例为(86.70±3.79)%,高于对照组〔(69.31±3.07)%,P<0.05〕,S期比例减少、脾指数降低和脾脏退行性变化显著。结论:辐射和盐酸苯肼并用法可成功的建立中医"气虚血虚"动物模型,并导致造血干/祖细胞衰老。

关键词：气虚血虚动物模型造血干/祖细胞衰老

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ATF4基因在小鼠胚胎围着床期子宫内膜的表达

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基础医学与临床 2012年第11期32卷 1293-1297页

作者：柴路维姜蓉何小茜黄燕杨戎重庆医科大学干细胞与组织工程研究室生理教研室重庆400016

目的探讨转录激活因子4(ATF4)在小鼠胚胎围着床期子宫内膜中的表达规律及在胚胎植入过程中的作用。方法妊娠0～7 d小鼠子宫内膜,用RT-PCR、免疫组织化学法和Western blot分别检测小鼠内膜ATF4 mRNA及蛋白的表达;用子宫角内注射ATF4抗体... 详细信息

目的探讨转录激活因子4(ATF4)在小鼠胚胎围着床期子宫内膜中的表达规律及在胚胎植入过程中的作用。方法妊娠0～7 d小鼠子宫内膜,用RT-PCR、免疫组织化学法和Western blot分别检测小鼠内膜ATF4 mRNA及蛋白的表达;用子宫角内注射ATF4抗体进行干预。结果 1)妊娠各组小鼠子宫内膜ATF4 mRNA的表达量均显著高于未孕组d0(P<0.05),且随妊娠天数的增加其表达量逐渐增高,到d4达到峰值,之后逐渐下降;2)ATF4蛋白主要在基质细胞胞质表达,其表达规律与mRNA表达规律基本一致。3)子宫角ATF4抗体注射后与对照组相比着床数明显减少。结论 ATF4在小鼠妊娠早期可能参与子宫内膜蜕膜化过程,有利于着床。

关键词： ATF4 着床子宫内膜蜕膜化

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人参皂苷Rg_1诱导人白血病K562细胞复制性衰老的机制

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解剖学报 2012年第4期43卷 473-478页

作者：李建平蔡世忠刘俊周玥刘典锋王亚平顾恒伟重庆医科大学组织学胚胎学教研室干细胞与组织工程学研究室重庆400016

目的探讨人参皂苷Rg1(Rg1)诱导人白血病K562细胞复制性衰老特征性变化。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)法筛选Rg1对K562细胞增殖抑制的最佳浓度及时间,以此浓度和作用时间诱导K562细胞衰老。流式细胞术检测Rg1对细胞增殖周期的影响;衰老相关β... 详细信息

目的探讨人参皂苷Rg1(Rg1)诱导人白血病K562细胞复制性衰老特征性变化。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)法筛选Rg1对K562细胞增殖抑制的最佳浓度及时间,以此浓度和作用时间诱导K562细胞衰老。流式细胞术检测Rg1对细胞增殖周期的影响;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测阳性细胞百分率;Southern blotting检测端粒长度;Western blotting检测复制性衰老信号通路相关P21、P53与Rb蛋白表达;透射电镜观察人白血病K562细胞衰老超微形态学改变。结果 Rg1在体外能明显抑制K562细胞增殖,其最佳作用浓度为20μmol/L,时间为48h;诱导后的K562细胞阻滞于G2/M期;SA-β-Gal染色阳性细胞百分率增加(P<0.05);复制性衰老通路相关蛋白P21、P53和Rb表达上调(P<0.05);端粒长度缩短加速(P<0.05);经诱导细胞呈现胞体增大,溶酶体体积增大、数目增多,线粒体体积增大等衰老形态学变化。结论 Rg1可能经由p53-p21-Rb信号通路诱导K562细胞呈现复制性衰老特征。

关键词：人参皂苷Rg1 白血病 K562细胞株复制性衰老衰老相关β-半乳糖苷酶染色四甲基偶氮唑盐法

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去上皮羊膜及其浸提液体外诱导骨髓间充质干细胞的分化

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中国生物制品学杂志 2012年第9期25卷 1147-1151页

作者：段江洁田静姜蓉汪维伟重庆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的观察去上皮羊膜及其浸提液体外诱导骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向上皮细胞的分化,并探讨其机制。方法从胎儿四肢长骨分离BMSCs,扩增后采用流式细胞术分析第3代(P3)细胞表面抗原(CD29、CD34、CD71和... 详细信息

目的观察去上皮羊膜及其浸提液体外诱导骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向上皮细胞的分化,并探讨其机制。方法从胎儿四肢长骨分离BMSCs,扩增后采用流式细胞术分析第3代(P3)细胞表面抗原(CD29、CD34、CD71和HLA-DR)的表达,并用4,6-乙酰基-2-苯基吲哚(DAPI)标记第4代BMSCs(P4-BMSCs)。机械法去除正常胎盘羊膜上皮,制成去上皮羊膜,并制备去上皮羊膜浸提液。将DAPI标记的BMSCs接种于羊膜上,设加或不加表皮细胞生长因子(Epidermal growth factor,EGF)、类胰岛素1号生长因子(Insulin-like growth factor 1,IGF-1)、羊膜浸提液诱导组及细胞爬片对照组,体外诱导培养后,采用免疫荧光组织(细胞)化学染色学法检测各组细胞角蛋白(Cytokeratin,CK)、EGF-R和IGF-1-R的表达,并于诱导后第10天计算CK阳性细胞率。结果原代BMSCs呈典型旋涡状生长,P3细胞表达CD29和CD71,不表达CD34和HLA-DR。羊膜组和细胞爬片组BMSCs在加入EGF或IGF-1诱导后,表达EGF-R和IGF-1-R的时间较未加生长因子的对照组提前2～4 d,表达CK的时间提前2～6 d,单用羊膜组或羊膜浸提液组的表达时间差异无统计学意义(P>0.05);诱导第10天,单用羊膜或羊膜浸提液诱导组的CK阳性细胞表达率明显高于细胞爬片对照组(P<0.05);羊膜与EGF、IGF-1联合诱导组高于单用羊膜组(P<0.05);EGF诱导组高于IGF-1诱导组(P<0.05)。结论羊膜及羊膜浸提液、外源性EGF和IGF-1在体外均可诱导BMSCs向上皮细胞分化,羊膜可能主要通过其所含的细胞因子诱导BMSCs向上皮分化。

关键词：羊膜骨髓间充质干细胞诱导细胞分化

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