检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2012年第10期25卷 1303-1306页

作者：朱重阳李鑫温泉张军重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的探讨L-精氨酸对人肝细胞LO2中内源凝血因子Ⅷ(Coagulation factorⅧ,FⅧ)表达的激活作用。方法将LO2细胞分为试验组和对照组,试验组加入L-精氨酸(终浓度为10 mmol/L)分别培养24、36、48和60 h,对照组用等体积的灭菌水取代L-精氨酸... 详细信息

目的探讨L-精氨酸对人肝细胞LO2中内源凝血因子Ⅷ(Coagulation factorⅧ,FⅧ)表达的激活作用。方法将LO2细胞分为试验组和对照组,试验组加入L-精氨酸(终浓度为10 mmol/L)分别培养24、36、48和60 h,对照组用等体积的灭菌水取代L-精氨酸培养。采用RT-PCR法检测LO2细胞中人FⅧ基因mRNA的转录水平并测序鉴定,一期法检测细胞培养上清液中人FⅧ的促凝活性(FⅧ∶C),Western blot检测24、48 h时相点LO2细胞中人FⅧ蛋白的表达,免疫荧光染色结合激光共聚焦显微镜观察L-精氨酸作用48 h后LO2细胞中人FⅧ的表达。结果加入L-精氨酸培养36、48、60 h后,LO2细胞中有人FⅧ基因mRNA的转录,而对照组未出现人FⅧ基因mRNA的转录;各时相点两组细胞培养上清液中人FⅧ∶C的水平差异均无统计学意义(P>0.05);Western blot及激光共聚焦均观察到加L-精氨酸培养48 h后LO2细胞中出现人FⅧ的表达,而对照组细胞中均无人FⅧ的表达。结论 L-精氨酸可激活人正常肝细胞中内源FⅧ的表达。

关键词： L-精氨酸肝细胞凝血因子Ⅷ 转录表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

FNBP1参与HeLa细胞的形态控制与生长调控

引用

第三军医大学学报 2013年第19期35卷 2046-2050页

作者：李鑫温泉周云飞何玉霞张军重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆400016

目的研究FNBP1在HeLa细胞形态控制及生长调控过程中的作用。方法运用RT-PCR、Western blot法在mRNA和蛋白水平验证FNBP1在HeLa细胞中的表达;运用RT-PCR、Western blot法检测靶向siRNA干扰HeLa细胞内源FNBP1的表达情况,并于完全沉默和表... 详细信息

目的研究FNBP1在HeLa细胞形态控制及生长调控过程中的作用。方法运用RT-PCR、Western blot法在mRNA和蛋白水平验证FNBP1在HeLa细胞中的表达;运用RT-PCR、Western blot法检测靶向siRNA干扰HeLa细胞内源FNBP1的表达情况,并于完全沉默和表达恢复2个时相点检测HeLa细胞在细胞形态、细胞周期等方面的变化。结果FNBP1在HeLa细胞中稳定表达;FNBP1表达沉默后,HeLa细胞形态发生纤维状转变;FNBP1表达恢复后,HeLa细胞形态恢复至上皮状;FNBP1表达沉默后,干扰组处于S期的细胞为30.36%,较正常组(25.45%)明显增多(P<0.05);而G2期干扰组细胞比例(9.28%)低于正常组(11.88%,P<0.05);HeLa细胞周期在S期出现阻滞。结论 FNBP1作为关键调控分子,为HeLa细胞的形态建成及维持所必需;FNBP1可能参与HeLa细胞周期调控相关过程。

关键词： FNBP1 HeLa细胞形态控制生长调控

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

小鼠微RNA miR-21真核表达质粒的构建及其在小鼠肾小球系膜细胞中的表达

引用

中国生物制品学杂志 2010年第7期23卷 708-710页

作者：张政彭惠民徐晓明何晓燕重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学分子医学及肿瘤研究中心重庆400016

目的构建小鼠微RNA miR-21真核表达质粒,并在小鼠肾小球系膜细胞中表达。方法人工合成小鼠miR-21基因序列,构建miR-21真核表达质粒pGenesil-miR-21。使用脂质体Lipofectamine2000转染小鼠肾小球系膜细胞后,G418筛选,获得稳定转染克隆,... 详细信息

目的构建小鼠微RNA miR-21真核表达质粒,并在小鼠肾小球系膜细胞中表达。方法人工合成小鼠miR-21基因序列,构建miR-21真核表达质粒pGenesil-miR-21。使用脂质体Lipofectamine2000转染小鼠肾小球系膜细胞后,G418筛选,获得稳定转染克隆,提取总RNA,通过实时荧光定量RT-PCR技术检测miR-21的表达。结果经酶切鉴定和测序证实,合成的miR-21基因序列完全正确,并已成功克隆到真核表达质粒pGenesil-1上。重组真核表达质粒转染小鼠肾小球系膜细胞后,筛选出的阳性克隆可稳定高表达miR-21。结论已成功构建miR-21真核表达质粒,并在小鼠肾小球系膜细胞中高效表达,为进一步探讨miR-21的生物学功能奠定了基础。

关键词：微RNA miR-21 真核细胞基因表达肾小球系膜细胞

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

特异性ILK-siRNA对膀胱癌EJ细胞侵袭和迁移的影响

引用

第三军医大学学报 2011年第4期33卷 360-364页

作者：朱军高娟李红彦潘湘阳陈俊霞重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的设计合成有效的ILK-siRNA,并检测其对EJ细胞侵袭和迁移的影响。方法构建针对ILK基因mRNA的2个特异性siRNA表达载体pGenSil-1 siRNA1、pGensil-1 siRNA2和1个阴性对照载体pGenSil-1 siRNA3。稳定转染膀胱癌EJ细胞后,通过RT-PCR检测E... 详细信息

目的设计合成有效的ILK-siRNA,并检测其对EJ细胞侵袭和迁移的影响。方法构建针对ILK基因mRNA的2个特异性siRNA表达载体pGenSil-1 siRNA1、pGensil-1 siRNA2和1个阴性对照载体pGenSil-1 siRNA3。稳定转染膀胱癌EJ细胞后,通过RT-PCR检测EJ细胞中ILK mRNA水平的表达,并通过Western blot和细胞免疫荧光检测ILK蛋白水平的表达;观察EJ细胞形态变化;检测EJ细胞迁移、黏附和侵袭能力及基质金属蛋白酶的变化。结果重组质粒构建成功。干扰组细胞ILK mRNA及蛋白的表达分别较3个对照组(未转染组、转空质粒组和转阴性对照质粒组)比较,呈显著性下降(P<0.05);HE染色结果显示,细胞铺展良好,核质比减小;转染干扰质粒的2个实验组细胞的黏附能力相对于对照组分别增加87%和76%,黏附能力显著升高,迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05);与3个对照组比较,转染pGenSil-1 siRNA1与pGensil-1 siRNA2质粒到EJ细胞后,MMP-2及MMP-9的表达水平明显降低(P<0.05)。结论成功构建的干扰质粒能抑制ILK基因及蛋白水平的表达,显著抑制细胞的生长、侵袭及迁移能力。

关键词： RNA,小分子干扰膀胱肿瘤细胞系,肿瘤侵袭迁移整合素连接激酶

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

乙型肝炎病毒x蛋白基因荧光真核表达质粒的构建及其对人正常肝细胞株L0_2增殖的影响

引用

中国生物制品学杂志 2012年第2期25卷 157-160页

作者：钱冠华董君军段昌柱彭惠民重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学实验教学中心重庆400016

目的构建乙型肝炎病毒x蛋白基因荧光真核表达质粒,并检测HBx对人正常肝细胞株L02细胞增殖的影响。方法以pcDNA3-HBV质粒为模板,PCR法扩增HBx基因编码区全长序列,将其克隆至pIRES2-EGFP荧光真核表达载体中,构建重组真核表达质粒pIRES2-EG... 详细信息

目的构建乙型肝炎病毒x蛋白基因荧光真核表达质粒,并检测HBx对人正常肝细胞株L02细胞增殖的影响。方法以pcDNA3-HBV质粒为模板,PCR法扩增HBx基因编码区全长序列,将其克隆至pIRES2-EGFP荧光真核表达载体中,构建重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-HBx,转染L02细胞,筛选稳定表达HBx的细胞,RT-PCR法检测细胞中HBx基因mRNA的转录水平;Western blot法检测细胞中HBx蛋白的表达水平;MTT法检测细胞的增殖活力。结果重组荧光真核表达质粒pIRES2-EGFP-HBx经双酶切和测序证明构建正确,转染该质粒的L02细胞可检测到HBx基因mRNA的转录及蛋白的表达,与空质粒pIRES2-EGFP转染的L02细胞相比,增殖活力明显提高。结论成功构建了HBx基因荧光真核表达质粒,并获得了能稳定表达HBx蛋白的L02细胞株,为进一步研究HBx对细胞周期调控通路的影响及探索HBx导致的与HBV相关的HCC的分子机制奠定了基础。

关键词：肝炎病毒乙型 x蛋白绿色荧光蛋白质类真核细胞基因表达 LO2细胞细胞增殖

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人类X盒结合蛋白1的融合表达、纯化及多克隆抗体的制备

引用

第四军医大学学报 2009年第22期30卷 2533-2536页

作者：林建炜李婧刘平郭风劲重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆400016

目的:将以构建的未剪接型X盒结合蛋白1(XBP1u)的原核表达,纯化及人XBP1多克隆抗体的制备.方法:重组质粒pET32a-XBP1u转化入宿主菌***2l(DE3),在IPTG诱导下表达,经SDS-PAGE鉴定正确后,用Ni2+-NTA柱式亲和层析法纯化蛋白,将纯化后的目的... 详细信息

目的:将以构建的未剪接型X盒结合蛋白1(XBP1u)的原核表达,纯化及人XBP1多克隆抗体的制备.方法:重组质粒pET32a-XBP1u转化入宿主菌***2l(DE3),在IPTG诱导下表达,经SDS-PAGE鉴定正确后,用Ni2+-NTA柱式亲和层析法纯化蛋白,将纯化后的目的蛋白经透析袋复性后进行蛋白质定量,再以此蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,末次免疫后心脏取血,采用ELISA法检测抗血清效价;免疫印迹和免疫组化法检测兔抗XBP1u血清的特异性.结果:XBP1u蛋白为包涵体表达,包涵体裂解后经过纯化、复性进行免疫,得到抗血清的效价大于1∶64000,免疫印迹结果出现特异Mr33×103XBP1u条带,免疫组化法在兔肝细胞中成功检测到XBP1u的表达.结论:成功表达和纯化人XBP1u蛋白,并得到高特异性、高效价兔抗XBP1u多克隆抗体.

关键词：未剪接型X盒结合蛋白1 效价纯化多克隆抗体免疫印迹

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

乙型肝炎病毒C蛋白和X蛋白的修饰及其意义

引用

生物技术通报 2009年第6期25卷 30-33,37页

作者：钱冠华段昌柱重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

乙型肝炎病毒(HBV)作为一个外来入侵的病毒可以激发人体的免疫反应,导致人体一系列与HBV感染有关的病理变化与临床表现。HBC和HBX是由HBV基因编码的两种重要蛋白。HBC对病毒基因组的复制和成熟是必不可少的,其蛋白修饰后的产物对病毒在... 详细信息

乙型肝炎病毒(HBV)作为一个外来入侵的病毒可以激发人体的免疫反应,导致人体一系列与HBV感染有关的病理变化与临床表现。HBC和HBX是由HBV基因编码的两种重要蛋白。HBC对病毒基因组的复制和成熟是必不可少的,其蛋白修饰后的产物对病毒在宿主细胞内的组装、成熟和对外分泌中发挥着作用。HBX能与多种蛋白发生相互作用,在HBV的复制中起着不可或缺的作用,也影响着肝细胞癌的形成。现有的对HBC和HBX的磷酸化和泛素化过程的研究,为进一步揭示HBV的致病机制提供了依据,希望最终为乙型肝炎的临床治疗寻找一条新的途径。

关键词：乙型肝炎病毒核心蛋白乙型肝炎病毒X蛋白磷酸化泛素化

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

过表达人RI抑制人膀胱癌T24细胞的侵袭、转移及EMT发生

引用

第三军医大学学报 2012年第23期34卷 2378-2383页

作者：姚雪熊冬梅舒静李林陈俊霞重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的检测过表达人核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因的质粒pIRES2-EGFP-RI对人膀胱癌T24细胞侵袭转移及上皮细胞间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)现象的影响。方法将连有RI的质粒pIRES2-EGFP-RI稳定转染T24细胞后利用G418筛选出阳性克隆。根据转染的质粒不同分为3组:T24组(未转染组)、T24-0(转染pIRES2-EGFP质粒)和T24-RI组(转染pIRES2-EGFP-RI质粒)。RT-PCR检测T24细胞中RI的mRNA水平变化,细胞免疫荧光及Western blot检测RI蛋白的表达,利用HE染色观察其细胞形态的变化,Transwell方法检测细胞侵袭及转移能力的变化,Western blot检测侵袭转移及EMT相关蛋白Twist、MMP-9和Snail及E-cadherin的表达,构建移植瘤模型,利用HE染色观测肺组织切片癌细胞转移情况,组织免疫化学方法检测移植瘤中RI、Twist、Snail及E-cadherin的表达。结果 T24-RI组人RI的mRNA水平及蛋白表达显著升高(P<0.05);HE染色结果表明细胞铺展良好,核质比明显减小,细胞由间质形态向上皮形态转变;Transwell方法显示T24-RI组细胞的侵袭及转移能力较T24组、T24-0组明显下降;Western blot结果表明T24-RI组Twist、MMP-9和Snail较T24组、T24-0组显著降低(P<0.01),E-cadherin较T24组、T24-0组显著升高(P<0.01);HE染色肺组织切片显示T24-RI组较其他两组癌细胞转移降低,组织免疫化学结果表明T24-RI组RI、E-cadherin蛋白明显升高,而Twist、Snail显著降低。结论过表达人RI载体提高了RI蛋白的表达水平,并抑制了人膀胱癌T24细胞EMT的发生,从而抑制了膀胱癌T24细胞的侵袭、转移。

关键词：人核糖核酸酶抑制因子 T24细胞细胞转移细胞侵袭 EMT

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

UHRF2不同结构域缺失突变体的真核表达

引用

中国生物制品学杂志 2013年第1期26卷 44-47页

作者：白露王筱绘胡斌周丹琳段昌柱重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的构建UHRF2不同结构域缺失突变体,并在HEK293细胞中表达。方法根据UHRF2不同结构域位置特征,构建5种不同结构域缺失突变体;以重组质粒pCMV-3xFlag-UHRF2为模板,PCR法直接扩增△UBL、△RING和△YDG+△RING编码基因,重叠PCR法扩增△PH... 详细信息

目的构建UHRF2不同结构域缺失突变体,并在HEK293细胞中表达。方法根据UHRF2不同结构域位置特征,构建5种不同结构域缺失突变体;以重组质粒pCMV-3xFlag-UHRF2为模板,PCR法直接扩增△UBL、△RING和△YDG+△RING编码基因,重叠PCR法扩增△PHD和△YDG编码基因,定向克隆至pCMV-3xFlag真核表达载体中,构建重组表达质粒,转染HEK293细胞,Western blot鉴定重组蛋白的表达。结果 UHRF2的结构域缺失体△UBL、△PHD的上游和下游及上下游合并、△YDG的上游和下游及上下游合并、△RING和△YDG+△RING的PCR产物分别可见2 018、987、1 152、2 272、1 232、629、1 827、2 163和1 287 bp的特异条带;UHRF2各结构域缺失体的重组表达质粒经双酶切和测序鉴定,证明构建正确;重组质粒转染HEK293细胞表达的重组蛋白大小均与理论值相符。结论成功在HEK293细胞中表达了UHRF2不同结构域缺失突变体,为进一步研究UHRF2各结构域的功能及其与其他蛋白质的相互作用位点奠定了基础。

关键词： UHRF2 结构域缺失体真核细胞表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

下调血管生成素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡的影响

引用

第三军医大学学报 2014年第14期36卷 1460-1466页

作者：舒静田文琳李林刘玉林陈俊霞重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室、分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的构建人血管生成素（angiogenin,ANG）基因siRNA干扰质粒,检测其对膀胱癌T24细胞增殖、凋亡的影响。方法将针对人ANG基因siRNA表达质粒和无同源性的对照质粒稳定转染T24细胞后经G418筛选出阳性克隆。根据转染质粒不同分为3组：T24组... 详细信息

目的构建人血管生成素（angiogenin,ANG）基因siRNA干扰质粒,检测其对膀胱癌T24细胞增殖、凋亡的影响。方法将针对人ANG基因siRNA表达质粒和无同源性的对照质粒稳定转染T24细胞后经G418筛选出阳性克隆。根据转染质粒不同分为3组：T24组（未转染组）、T24-NC组（转染阴性对照质粒组）、T24-siANG组（转染干扰质粒组）。通过RT-PCR检测T24细胞中ANG的mRNA表达水平,Western blot检测ANG蛋白的表达;MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术、TUNEL及Hochest 33342检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达;构建BALB/c裸鼠[4-6周龄,体质量（20±3）g]移植瘤模型,组织HE染色和免疫荧光CD31检测微血管变化;组织免疫化学方法检测移植瘤中ANG、Bax、Caspase-3、Bcl-2的表达。结果酶切和测序结果证明重组质粒构建成功;T24-siANG组ANG的mRNA水平及蛋白表达水平显著降低（P〈0.05）;T24-siANG组细胞增殖活力明显下降（P〈0.05）;流式细胞仪检测结果显示：与T24-NC组和T24细胞组相比,T24-siANG组细胞的凋亡率明显升高（P〈0.01）;TUNEL检测结果显示：T24-siANG组出现大量凋亡细胞;Hochest检测结果显示：T24-siANG组出现典型的凋亡形态特征如染色质凝集、核碎裂和明亮的蓝色荧光等;Western blot结果显示,在T24-siANG组中,Bcl-2的表达明显降低（P〈0.01）,而Bax和激活的Caspase-3的表达明显升高（P〈0.05）;组织HE染色和组织免疫荧光显示：T24-siANG组肿瘤微血管生成较T24与T24-NC组明显减少（P〈0.01）;组织免疫化学结果也表明：T24-siANG组ANG、Bcl-2蛋白显著降低,而Bax、活化的Caspase-3蛋白明显升高。结论成功构建的干扰质粒通过降低ANG的表达、抑制膀胱癌T24细胞的增殖、调节凋亡关键蛋白的表达,从而促进膀胱癌T24细胞的凋亡。

关键词：血管生成素膀胱癌增殖凋亡

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：