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中国人兽共患病学报 2006年第5期22卷 440-442,463页

作者：王鸿李文桂重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所重庆市传染病寄生虫病学重点实验室重庆400016

目的研究多房棘球绦虫EmⅡ/3外源基因在大肠杆菌和BCG中的表达。方法将重组质粒pBCG-EmⅡ/3转入感受态大肠杆菌Top10和用电穿孔法导入BCG构建rBCG,将含有重组子的细菌培养至对数生长期,然后45℃热诱导,分别对表达产物作SDS-PAGE及免疫... 详细信息

目的研究多房棘球绦虫EmⅡ/3外源基因在大肠杆菌和BCG中的表达。方法将重组质粒pBCG-EmⅡ/3转入感受态大肠杆菌Top10和用电穿孔法导入BCG构建rBCG,将含有重组子的细菌培养至对数生长期,然后45℃热诱导,分别对表达产物作SDS-PAGE及免疫印迹分析。结果多房棘球绦虫pBCG-EmⅡ/3在BCG中成功表达了EmⅡ/3重组蛋白,在相对分子量为65 kDa处可见明显的表达蛋白带,其表达量占菌体总蛋白量的9%,且能与鼠血清抗体发生特异结合,而在大肠杆菌中没有外源蛋白表达。结论多房棘球绦虫pBCG-EmⅡ/3能在BCG中表达,Western blot结果提示rBCG-EmⅡ/3表达的EmⅡ/3重组蛋白具有特异的抗原性。

关键词：多房棘球绦虫重组EmⅡ/3蛋白大肠杆菌 BCG 基因表达

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比阿培南和亚胺培南对呼吸道和泌尿道致病菌的体外抗菌活性比较

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中华检验医学杂志 2007年第7期30卷 770-773页

作者：刘成伟涂植光黄文祥余登高李崇智郑行萍重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所重庆市传染病寄生虫病学重点实验室 400016 重庆医科大学检验系

目的研究比阿培南和亚胺培南对呼吸道和泌尿道致病菌的体外抗菌活性。方法采用琼脂二倍稀释法,测定比阿培南和亚胺培南对294株呼吸道和泌尿道致病菌的 MIC。结果比阿培南对所有测试菌的 MIC_(50)、MIC_(90)和敏感率范围分别为≤0.03～4... 详细信息

目的研究比阿培南和亚胺培南对呼吸道和泌尿道致病菌的体外抗菌活性。方法采用琼脂二倍稀释法,测定比阿培南和亚胺培南对294株呼吸道和泌尿道致病菌的 MIC。结果比阿培南对所有测试菌的 MIC_(50)、MIC_(90)和敏感率范围分别为≤0.03～4μg/ml、0.06～>128μg/ml 及90%～100%,亚胺培南为≤0.03～2μg/ml、0.06～>128μg/ml 及86.7%～100%。比阿培南对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的 MIC_(90)(4,1μg/ml)是亚胺培南 MIC_(90)(2,0.25μg/ml)的2～4倍,对大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、奇异变形杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌的 MIC_(90)(0.125～4μg/ml)是亚胺培南MIC_(90)(0.5～8μg/ml)的1/4～1/2,对肠球菌属、肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌、流感嗜血杆菌的MIC_(90)与亚胺培南相当,分别为>128、0.06、0.5、2μg/ml。结论比阿培南对革兰阳性菌和革兰阴性菌均具有广谱抗菌活性,其中对革兰阴性菌的作用优于亚胺培南,对革兰阳性菌的作用稍差于亚胺培南。

关键词：亚胺培南呼吸道感染泌尿道感染 β内酰胺酶类

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巴洛沙星对泌尿道病原菌的体外抗菌活性

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中国新药与临床杂志 2007年第12期26卷 921-923页

作者：刘成伟余登高李崇智郑行萍钱元恕重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所重庆市传染病寄生虫病学重点实验室重庆400016 汕头大学医学院药理教研室广东汕头515031

目的:评价巴洛沙星对泌尿道病原菌的体外抗菌活性。方法:收集泌尿道感染病人尿液中所分离到的249株病原菌,其中革兰阳性菌90株(金黄色葡萄球菌30株、表皮葡萄球菌27株、粪肠球菌18株、B溶血性链球菌15株)、革兰阴性菌159株(大肠埃希菌8... 详细信息

目的:评价巴洛沙星对泌尿道病原菌的体外抗菌活性。方法:收集泌尿道感染病人尿液中所分离到的249株病原菌,其中革兰阳性菌90株(金黄色葡萄球菌30株、表皮葡萄球菌27株、粪肠球菌18株、B溶血性链球菌15株)、革兰阴性菌159株(大肠埃希菌84株、肺炎克雷伯菌20株、肠杆菌属25株、奇异变形杆菌15株、铜绿假单胞菌15株),采用琼脂二倍稀释法,测定巴洛沙星与左氧氟沙星对该249株泌尿道病原菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果:巴洛沙星对革兰阳性菌的MIC_(90)(2～8 mg·L^(-1))是左氧氟沙星MIC_(90)(2～16 mg·L^(-1))的1/4～1/2或相等,对革兰阴性菌的MIC_(90)(4～32 mg·L^(-1))是左氧氟沙星MIC_(90)(2～16 mg·L^(-1))的2～4倍或相等。结论:巴洛沙星对革兰阳性菌和革兰阴性菌均具有抗菌活性,其中对革兰阳性菌的作用稍强于或等于左氧氟沙星,对革兰阴性菌的作用等于或稍弱于左氧氟沙星。

关键词：巴洛沙星左氧氟沙星抗生素类泌尿道感染体外抗菌活性

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细菌多药外排系统及其研究方法的进展(英文)

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中国抗生素杂志 2007年第4期32卷 203-210页

作者：贾蓓黄文祥黄爱龙重庆市传染病寄生虫病重点实验室重庆医科大学附属第一医院重庆400016 教育部感染性疾病分子生物学重点实验室重庆医科大学附属第二医院肝炎研究所重庆400010

位于细菌细胞膜上的多药外排泵可将多种结构无关药物排出,本文综述了细菌主要外排泵包括初级和次级转运系统的分子生物学特征及外排蛋白结构与药物识别和转运上的关系;同时总结了对外排蛋白进行结构与功能关系研究的主要的方法,包括定... 详细信息

位于细菌细胞膜上的多药外排泵可将多种结构无关药物排出,本文综述了细菌主要外排泵包括初级和次级转运系统的分子生物学特征及外排蛋白结构与药物识别和转运上的关系;同时总结了对外排蛋白进行结构与功能关系研究的主要的方法,包括定点诱变、螺旋空间排列和结晶等。

关键词：细菌外排泵多药耐药研究方法

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慢性乙型肝炎和原发性肝癌患者体内人腺病毒5型、26型及黑猩猩腺病毒68型中和抗体的流行率

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中国病理生理杂志 2015年第7期31卷 1272-1276页

作者：熊域皎赵启全章述军黄文祥周向阳贾蓓重庆医科大学附属第一医院感染科重庆市传染病寄生虫病学重点实验室重庆400016 Wistar研究所美国费城19104

目的:调查慢性乙型病毒性肝炎(CHB)和原发性肝癌(PLC)患者体内人腺病毒5型(Ad Hu5)、26型(Ad Hu26)和黑猩猩腺病毒68型(Ad C68)中和抗体的流行率,为这2种疾病开发安全有效的生物治疗载体提供依据。方法:我们收集196份CHB患者的血清和193... 详细信息

目的:调查慢性乙型病毒性肝炎(CHB)和原发性肝癌(PLC)患者体内人腺病毒5型(Ad Hu5)、26型(Ad Hu26)和黑猩猩腺病毒68型(Ad C68)中和抗体的流行率,为这2种疾病开发安全有效的生物治疗载体提供依据。方法:我们收集196份CHB患者的血清和193份PLC患者的血清,通过腺病毒中和实验检测血清中Ad Hu5、Ad Hu26和Ad C68的中和抗体。结果:在CHB患者中Ad Hu5、Ad Hu26和Ad C68中和抗体的阳性率分别为84.7%、58.2%及39.8%;在PLC患者中Ad Hu5、Ad Hu26和Ad C68中和抗体的阳性率分别为75.1%、66.8%及32.1%。结论:本次实验显示3种腺病毒中和抗体的流行率和抗体滴度都以Ad C68的最低,故其作为CHB和PLC的生物治疗载体较Ad Hu5与Ad Hu26具有优势。

关键词：慢性乙型病毒性肝炎原发性肝癌腺病毒中和抗体

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产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的分布及耐药性分析

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中国病原生物学杂志 2006年第6期1卷 404-406页

作者：刘成伟李文桂郑行萍李崇智余登高重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所重庆市传染病寄生虫病学重点实验室重庆400016

目的了解医院产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的分布及耐药性特点。方法对我院2004年7月～2006年7月间各类临床标本分离出的大肠埃希菌307株和肺炎克雷伯菌202株，用CLSI／NCCLS推荐的表型确证法检测其ESBLs，采... 详细信息

目的了解医院产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的分布及耐药性特点。方法对我院2004年7月～2006年7月间各类临床标本分离出的大肠埃希菌307株和肺炎克雷伯菌202株，用CLSI／NCCLS推荐的表型确证法检测其ESBLs，采用K-B纸片琼脂扩散法进行药敏试验，分析产ESBLs菌株的分布及耐药性。结果大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLS菌株的检出率分别为38．4％（118／307）和31．7％（64／202），主要分布于尿和痰、咽拭子中，病区主要集中于肺科、神经外科、感染科、泌尿外科、ICU室。产ESBLs菌株对亚胺培南和美罗培南呈高度敏感，对哌托西林／三唑巴坦、头孢哌酮／舒巴坦、头孢西丁耐药率较低，对其他抗菌药物均出现较高耐药。结论产ESBLS的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分布在不同病区的不同标本中，碳青霉烯类抗生素亚胺培南和美罗培南是治疗产ESBLS菌株感染的较佳药物。

关键词：超广谱β-内酰胺酶(ESBLs) 大肠埃希菌肺炎克雷伯菌耐药性

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多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠脾脏T细胞亚群的变化

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重庆医科大学学报 2007年第6期32卷 575-577,580页

作者：唐君李文桂王鸿朱佑明重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所重庆市传染病寄生虫病重点实验室重庆400016

目的:探讨多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的变化。方法:将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/C鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感... 详细信息

目的:探讨多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的变化。方法:将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/C鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周杀鼠取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的百分比,同时设有空载体、BCG和PBS对照。结果:疫苗接种组的脾CD4+T细胞亚群显著增加,CD8+T细胞亚群无明显变化,CD4+/CD8+亚群比值明显升高;皮下注射组的CD4+和CD4+/CD8+亚群比值显著高于鼻腔内接种组。结论:CD4+T细胞亚群在多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗诱导的小鼠抗Em原头节攻击感染的保护性免疫机制中起一定作用。

关键词：多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗 BCG-Em14-3-3疫苗脾细胞亚群

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直接分子克隆法构建重组腺病毒AdHu5-mfsp27的研究

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中国病原生物学杂志 2012年第11期7卷 807-811页

作者：王群贾蓓魏晓宇黄文祥周向阳重庆医科大学附属第一医院感染科重庆市传染病寄生虫病学重点实验室重庆400016 美国Wistar研究所病毒载体中心美国费城19104

目的采用直接分子克隆体外连接的方法构建重组腺病毒AdHu5-040-mfsp27(cds),高效高质量扩增和纯化重组腺病毒以满足实验及临床研究的需求。方法将mfsp27克隆至穿梭质粒pSh CMV intron-eGFP两个稀有限制性内切酶之间(I-ceuI和PI-sceI)(... 详细信息

目的采用直接分子克隆体外连接的方法构建重组腺病毒AdHu5-040-mfsp27(cds),高效高质量扩增和纯化重组腺病毒以满足实验及临床研究的需求。方法将mfsp27克隆至穿梭质粒pSh CMV intron-eGFP两个稀有限制性内切酶之间(I-ceuI和PI-sceI)(与腺病毒骨架质粒相同),回收酶切片段后连接,用合适的感受态细胞转化后氨苄青霉素抗性挑选克隆,用2～3种合适的限制性内切酶酶切证实重组腺病毒质粒骨架和目标基因的大小和方向,必要时测序。然后线性化该重组腺病毒以释放腺病毒载体基因组的反向末端重复序列(ITRs),在HEK293细胞系转染、感染、扩增,改良氯化铯梯度离心法纯化病毒并测定病毒的滴度。结果成功构建pAdHu5-mfsp27(cds)(J1034),扩增后纯化病毒浓度为1×1013 VP/ml,MOI为1.44×1011,二者比值为69.44。重组腺病毒AdHu5-mfsp27可高效感染293包装细胞。结论用直接分子克隆的方法成功构建重组腺病毒AdHu5-mfsp27(cds)并高质量扩增,解决了用同源重组方法构建时难于挑选克隆,时间长且成功率低的问题。利用高效液相柱,生物胶联合氯化铯梯度离心技术纯化病毒,简化了操作,不需透析病毒,最大程度保存病毒活性,病毒纯度高,为研究基因的功能及实现重组腺病毒产业化提供了依据。

关键词：直接分子克隆重组缺陷型腺病毒AdHu5-mfsp27 扩增纯化

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普卢利沙星对呼吸道和泌尿道致病菌的体外抗菌活性研究

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重庆医科大学学报 2007年第3期32卷 284-286,305页

作者：刘成伟黄文祥卓超李崇智余登高郑行萍重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所重庆市传染病寄生虫病学重点实验室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院感染科重庆400016

目的:研究普卢利沙星对呼吸道和泌尿道致病菌的体外抗菌活性。方法:采用琼脂二倍稀释法,测定普卢利沙星与左氧氟沙星对221株呼吸道和泌尿道致病菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果:普卢利沙星对所有测试菌的MIC50、MIC90和敏感率范围分别为≤0... 详细信息

目的:研究普卢利沙星对呼吸道和泌尿道致病菌的体外抗菌活性。方法:采用琼脂二倍稀释法,测定普卢利沙星与左氧氟沙星对221株呼吸道和泌尿道致病菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果:普卢利沙星对所有测试菌的MIC50、MIC90和敏感率范围分别为≤0.03-1μg/ml、0.5-4μg/ml及67%-100%,左氧氟沙星分别为0.125-2μg/ml、0.5-8μg/ml及61%-100%。普卢利沙星对大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌和卡他莫拉菌的MIC90是左氧氟沙星的MIC90的1/2;对肺炎克雷伯菌、变形杆菌、表皮葡萄球菌、肺炎链球菌和粪肠球菌的MIC90与左氧氟沙星的MIC90相等;对流感嗜血杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC90是左氧氟沙星的MIC90的2倍。结论:普卢利沙星对呼吸道和泌尿道致病菌均具有抗菌活性。

关键词：普卢利沙星左氧氟沙星体外抗菌活性

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结核分枝杆菌重组双歧杆菌-ESAT-6-MPT64疫苗的构建及鉴定

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湖北民族学院学报（医学版） 2010年第4期27卷 14-16页

作者：曾莉蓉李文桂恩施州中心医院消化内科湖北恩施445000 重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所重庆市传染病寄生虫病学重点实验室重庆400016

目的构建并鉴定结核分枝杆菌重组双歧杆菌((Bifidobacteria bifidum,Bb)-ESAT-6-MPT64疫苗。方法以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组DNA为模板,通过PCR扩增ESAT-6和MPT64单基因序列,然后采用基因拼接(gene SOEing)法构建融合基因ESAT-6-MPT64,定向克隆至穿梭表达载体pGEX-1λT中,构建重组质粒pGEX-ESAT-6-MPT64;再电转化入Bb,构建结核分枝杆菌重组双歧杆菌-ESAT-6-MPT64疫苗。结果 PCR成功扩增出1020bp的ESAT-6-MPT64融合基因;双酶切证实ESAT-6-MPT64融合基因成功插入pGEX-1λT中;PCR证实rBb-ESAT-6-MPT64疫苗构建成功。结论成功构建了结核分枝杆菌rBb-ESAT-6-MPT64疫苗,为进一步研究其免疫保护效果奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌融合基因ESAT-6-MPT64 rBb-ESAT-6-MPT64疫苗

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