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科学通报 2016年第6期61卷 654-667页

作者：王康程王韬蒙杰谢鹏邱江西南大学心理学部重庆400715 西南大学认知与人格教育部重点实验室重庆400715 重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆400016 神经生物学重庆市重点实验室重庆400016 重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016

抑郁症是一种常见的精神类疾病,导致其发病的影响因素众多,但其神经机制尚不清楚.本文首先回顾了与抑郁易感性有关的认知理论,包括Beck提出的认知模型理论以及Abramson提出的抑郁无望理论模型.其次,从遗传因素、外部环境因素以及个体心... 详细信息

抑郁症是一种常见的精神类疾病,导致其发病的影响因素众多,但其神经机制尚不清楚.本文首先回顾了与抑郁易感性有关的认知理论,包括Beck提出的认知模型理论以及Abramson提出的抑郁无望理论模型.其次,从遗传因素、外部环境因素以及个体心理因素3个方面阐述了易感性因素对抑郁影响及其作用的神经机制.最后,基于认知神经科学的现状和局限性并结合抑郁研究现状,提出了抑郁研究可能面临的挑战和对未来研究展望.具体而言,未来研究应从统计建模的角度出发,整合基因-脑影像-行为大数据,先从横向研究角度比较探讨和分析抑郁形成的各种影响因素,建立有效的因素模型;再从纵向跟踪的角度探明各种易感因素在抑郁发生中的作用机制,建立抑郁的预测模型;最终实现基于基因-脑影像-行为大数据的融合,从而对抑郁的发生和发展进行有效的预测和早期干预,降低抑郁症的发病率.

关键词：抑郁易感性因素神经机制预测模型

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新疆伊犁地区牧羊犬脑内亨德拉病毒感染情况

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中国生物制品学杂志 2011年第2期24卷 133-136,145页

作者：王嘉佳冯裕星谢亮张亮何丰孙后超牟君展群岭胡永波朱丹李雷雷谢鹏重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆400016 重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016 重庆市神经生物学重点实验室重庆400016

目的分析新疆伊犁地区草原放养牧羊犬脑内亨德拉病毒(Hendravirus,HeV)的感染情况。方法采用一步法实时荧光定量RT-PCR检测HeV核蛋白(N)基因片段,并验证该方法的敏感性和特异性。采用该方法对采自新疆伊犁地区草原放养、未接种HeV疫苗的... 详细信息

目的分析新疆伊犁地区草原放养牧羊犬脑内亨德拉病毒(Hendravirus,HeV)的感染情况。方法采用一步法实时荧光定量RT-PCR检测HeV核蛋白(N)基因片段,并验证该方法的敏感性和特异性。采用该方法对采自新疆伊犁地区草原放养、未接种HeV疫苗的101例牧羊犬脑组织进行HeV N基因片段检测。结果建立的一步法实时荧光定量RT-PCR检测HeV N基因的最低检出浓度为2.6×102 copies/μl;与其他单股负链RNA病毒,如同属且高度同源的尼帕病毒(Nipah virus,NiV)和博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)等无交叉反应;101份牧羊犬脑组织样本HeV N基因的检测结果均为阴性。结论尚未发现我国新疆伊犁地区天然牧场放养牧羊犬中存在HeV感染的证据,该地区短时间内爆发HeV感染的危险性不大。

关键词：亨德拉病毒一步法荧光定量RT-PCR N基因新疆伊犁地区牧羊犬

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博尔纳病病毒磷蛋白的原核表达及纯化

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中国生物制品学杂志 2011年第10期24卷 1148-1151页

作者：金戈张亮徐晓艳黄荣忠马丽华邓婧李文娟房亮谢鹏重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆400016 重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016 重庆市神经生物学重点实验室重庆400016

目的构建博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)磷蛋白(p24蛋白)基因重组表达质粒,原核表达p24蛋白,并进行纯化。方法通过RT-PCR法从BDV感染的少突胶质细胞株(Oligodendrocyte,OL)中扩增p24基因片段,构建重组表达质粒pET-41a-p24,转化... 详细信息

目的构建博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)磷蛋白(p24蛋白)基因重组表达质粒,原核表达p24蛋白,并进行纯化。方法通过RT-PCR法从BDV感染的少突胶质细胞株(Oligodendrocyte,OL)中扩增p24基因片段,构建重组表达质粒pET-41a-p24,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并对表达的重组蛋白进行亲和层析纯化。结果经双酶切鉴定和测序证实,重组表达质粒pET-41a-p24构建正确;表达的重组p24蛋白相对分子质量约24 000,表达量占菌体总蛋白的30%以上,主要以可溶形式表达;纯化的重组蛋白纯度达85%左右,可与鼠抗BDV p24单克隆抗体特异性结合。结论已成功原核表达并纯化了重组BDV p24蛋白,为进一步建立BDV相关免疫学检测方法奠定了基础。

关键词：博尔纳病病毒磷蛋白类原核细胞基因表达纯化

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合并脑干钙化Fahr病一家系报告

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第三军医大学学报 2013年第7期35卷 617-617,621页

作者：董美学李琦谢鹏重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆400016 重庆医科大学神经科学研究中心重庆市神经生物学重点实验室重庆400016

Fahr病又称特发性基底节钙化（idiopathicbasalgangliacalcification，IBGC），是神经系统退行性疾病的一种。本病多呈家族性聚集发病，散发少见，以脑组织，特别是基底节及齿状核对称性钙盐沉积为特征。其钙化分布广泛，好发部位依次... 详细信息

Fahr病又称特发性基底节钙化（idiopathicbasalgangliacalcification，IBGC），是神经系统退行性疾病的一种。本病多呈家族性聚集发病，散发少见，以脑组织，特别是基底节及齿状核对称性钙盐沉积为特征。其钙化分布广泛，好发部位依次为苍白球、尾状核、壳核、丘脑、额顶叶脑回，钙化也偶见于小脑齿状核及小脑皮质”，合并脑干钙化者在以往病例报告中罕见。现报告Fahr病一家系如下。

关键词： Fahr病脑干家系基底节钙化

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博尔纳病病毒对人少突胶质细胞增殖与凋亡的影响

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第三军医大学学报 2012年第5期34卷 401-405页

作者：邓婧李丹张亮黄荣忠李文娟马丽华房亮谢鹏重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆400016 重庆医科大学神经科学研究中心重庆市神经生物学重点实验室重庆400016

目的探讨博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)感染对人少突胶质细胞(oligodendrocytes,OL)增殖与凋亡的影响。方法用BDV感染OL细胞,免疫荧光检测OL细胞中博尔纳病病毒P40蛋白的表达,CCK8测定法观察细胞的生长增殖情况,用流式细胞技... 详细信息

目的探讨博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)感染对人少突胶质细胞(oligodendrocytes,OL)增殖与凋亡的影响。方法用BDV感染OL细胞,免疫荧光检测OL细胞中博尔纳病病毒P40蛋白的表达,CCK8测定法观察细胞的生长增殖情况,用流式细胞技术检测细胞的凋亡情况和周期变化,Western blot检测凋亡指标Bax、Bcl-2的相对表达量。结果与阴性对照组细胞比较,感染组在博尔纳病病毒感染少突胶质细胞第3天时,免疫荧光能够检测到P40蛋白的表达。随着感染时间的增加,BDV感染的OL细胞增殖能力下降(P<0.05),且通过流式细胞仪检测到病毒感染3 d后,细胞出现凋亡增多。流式细胞仪检测结果显示,与对照组比较,感染细胞周期G2期延迟(P<0.05),细胞增殖指数降低(P<0.05)。Western blot检测结果显示,与对照组比较,感染细胞促凋亡蛋白Bax表达量增加(P<0.05),抑凋亡蛋白Bcl-2表达量下降(P<0.05)。结论 BDV感染可以抑制OL细胞增殖,并能通过上调Bax蛋白及下调Bcl-2蛋白表达量,诱导细胞凋亡的发生。

关键词：博尔纳病病毒少突胶质细胞细胞增殖细胞凋亡

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博尔纳病病毒荧光定量PCR试剂盒扩增缓冲液的优化

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第三军医大学学报 2011年第13期33卷 1323-1327页

作者：金戈徐晓艳张亮马丽华黄荣忠邓婧李文娟房亮谢鹏重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆400016 重庆医科大学神经科学研究中心重庆市神经生物学重点实验室重庆400016

目的选择并优化博尔纳病病毒荧光定量PCR TaqMan探针法反应体系中的扩增缓冲液,使PCR反应体系对该病毒p24模板基因的扩增效率得到明显提高。方法通过常规PCR比较选择3种常用酸(盐酸、磷酸和硫酸)所滴定的缓冲液体系,在其基础上选择适合... 详细信息

目的选择并优化博尔纳病病毒荧光定量PCR TaqMan探针法反应体系中的扩增缓冲液,使PCR反应体系对该病毒p24模板基因的扩增效率得到明显提高。方法通过常规PCR比较选择3种常用酸(盐酸、磷酸和硫酸)所滴定的缓冲液体系,在其基础上选择适合浓度的硫酸铵配制TSS buffer,在TSS buffer中分别加入四甲基氯化铵、TritonX-100、二甲亚砜和甜菜碱这4种常用的PCR添加剂,并确定各自的最佳工作浓度,选择扩增效果较好的添加剂与其他添加剂进行依次组合,寻找最佳的添加剂组合,最后用荧光定量PCR进行对比验证。结果在滴定酸上选择了效果最好的硫酸,配制TSS buffer硫酸铵的最佳终浓度为6 mmol/L。在添加剂的优化组合上,1.5 mol/L甜菜碱、0.15%Triton X-100、8 mmol/L四甲基氯化铵和TSS buffer组合成的TBTT buffer效果最佳,在其与TaKaRa PCR buffer的对比中,TBTT buffer效果明显好于后者。结论成功研制优化出适合扩增博尔纳病病毒p24模板基因的扩增缓冲液。

关键词： PCR扩增缓冲液 PCR试剂盒博尔纳病病毒

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博尔纳病病毒p24和p40基因星形胶质细胞特异表达重组质粒的构建

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中国人兽共患病学报 2012年第1期28卷 1-5页

作者：李文娟张亮邓婧金戈黄荣忠房亮谢鹏重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆400016 重庆医科大学神经科学研究中心重庆市神经生物学重点实验室重庆400016

目的构建星形胶质细胞特异性表达的博尔纳病病毒磷蛋白和核蛋白基因重组质粒,以供后续实验研究使用。方法用PCR方法扩增BDV p24和p40基因完整序列同时加入Nhe I和EcoR I酶切位点,将所得目的片段克隆至pMD18-T载体,再通过酶切连接将其连... 详细信息

目的构建星形胶质细胞特异性表达的博尔纳病病毒磷蛋白和核蛋白基因重组质粒,以供后续实验研究使用。方法用PCR方法扩增BDV p24和p40基因完整序列同时加入Nhe I和EcoR I酶切位点,将所得目的片段克隆至pMD18-T载体,再通过酶切连接将其连接至pCMvie-GFAP质粒中的GFAP启动子的下游,分别得到p24和p40重组质粒。用酶切、PCR以及测序3种方法鉴定重组质粒,并将质粒转染人胶质瘤细胞株(U251),采用免疫细胞化学方法检测目的蛋白表达。结果 pCMvie-GFAP-BDVp24和pCMvie-GFAP-BDVp40重组质粒经酶切、PCR鉴定可见目的条带位置与预期相符,经测序可见插入序列正确,质粒转染U251细胞后,经免疫细胞化学检测到目的蛋白表达。结论成功构建了pCMvie-GFAP-BDVp24和pCMvie-GFAP-BDVp40星形胶质细胞特异性表达质粒,为研究这两种病毒蛋白的致病机制及其对星形胶质细胞的影响提供了工具。

关键词：博尔纳病病毒核蛋白磷蛋白星形胶质细胞质粒

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不同血清浓度培养条件对博尔纳病病毒感染滴度的影响比较

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激光杂志 2012年第1期33卷 78-81页

作者：邓婧黄荣忠李文娟张亮刘霞马丽华金戈徐晓艳房亮谢鹏重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆400016 重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016 重庆市神经生物学重点实验室重庆400016

目的:探讨不同血清浓度对博尔纳病病毒(BDV)感染少突胶质细胞(OL细胞)感染力的影响,寻找BDV病毒感染细胞最适宜的血清浓度。方法:接种BDV的OL细胞(OL/BDV)于培养皿中,培养24小时后,通过反复冻融、超声破碎的方法获取BDV病毒液,用于感染... 详细信息

目的:探讨不同血清浓度对博尔纳病病毒(BDV)感染少突胶质细胞(OL细胞)感染力的影响,寻找BDV病毒感染细胞最适宜的血清浓度。方法:接种BDV的OL细胞(OL/BDV)于培养皿中,培养24小时后,通过反复冻融、超声破碎的方法获取BDV病毒液,用于感染正常的OL细胞。在保证除血清浓度因素不同而其余因素均相同的条件下,用DMEM、2%FCS、5%FCS、10%FCS四种不同浓度的血清培养基在96孔板中培养BDV新感染的OL细胞,测定病毒感染滴度,比较各组之间是否有统计学差异。结果:DMEM、5%FCS和10%FCS组所测得的BDV病毒滴度两组之间无统计学差异,2%FCS组所测得的病毒滴度和DMEM、5%FCS、0%FCS组之间有明显统计学差异,2%FCS组病毒滴度明显高于其它两组。结论:不同浓度的血清浓度对Boma病毒对细胞的感染力有影响,2%FCS的培养条件可能更适合于BDV感染OL细胞实验。

关键词：博尔纳病病毒少突胶质细胞血清浓度病毒滴度

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首发未用药抑郁症患者血浆氨基酸检测分析及其临床意义

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第三军医大学学报 2012年第14期34卷 1442-1445页

作者：陈奕晨徐红波胡子成房亮陈建军谢鹏重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016 重庆医科大学重庆市神经生物学重点实验室重庆400016 重庆医科大学第一附属医院神经内科重庆400016

目的检测首发未用药抑郁症患者血浆氨基酸浓度并分析其与健康对照者之间的差异以及可能的临床价值。方法使用同位素内标结合串联质谱鉴定的方法测定26例首发未用药抑郁症患者和25例健康对照者血浆氨基酸浓度,同时使用17项汉密尔顿抑郁量... 详细信息

目的检测首发未用药抑郁症患者血浆氨基酸浓度并分析其与健康对照者之间的差异以及可能的临床价值。方法使用同位素内标结合串联质谱鉴定的方法测定26例首发未用药抑郁症患者和25例健康对照者血浆氨基酸浓度,同时使用17项汉密尔顿抑郁量表(Hamilton rating scale-17 for depression,HAMD-17)评定患者病情严重程度并进行统计分析。结果与健康对照组相比,抑郁症组中9种氨基酸(色氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、γ-氨基丁酸、α-氨基己二酸、谷氨酰胺、乙醇胺和亮氨酸)存在异常改变(P<0.05);抑郁症组中天冬氨酸和β-氨基异丁酸浓度与汉密尔顿抑郁量表得分呈显著的负性相关(P值分别为0.045、0.006,r值分别为-0.397、-0.521);回归分析提示色氨酸、半胱氨酸和谷氨酰胺组成的预测模型对抑郁组和健康对照组人群具有较好的预测效果。结论抑郁症患者病程早期存在血浆氨基酸代谢紊乱;循环氨基酸或可用于抑郁症病情严重程度评价以及抑郁症初步诊断。

关键词：串联质谱法同位素标记氨基酸抑郁症

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GAD_(65)基因修饰的神经干细胞移植治疗癫痫的实验研究

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激光杂志 2011年第2期32卷 54-56页

作者：刘霞齐志国谢鹏重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆400016 重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016 重庆市神经生物学重点实验室重庆400016

目的:将谷氨酸脱羧酶65(GAD65)基因修饰的神经干细胞移植到海仁酸颞叶癫痫模型大鼠海马中,检测目的基因在脑内的表达以及基因工程化细胞移植对癫痫的影响。方法:建立海仁酸致癫痫大鼠模型,完全随机分为GAD-NSCs移植组、单纯NSCs移植组... 详细信息

目的:将谷氨酸脱羧酶65(GAD65)基因修饰的神经干细胞移植到海仁酸颞叶癫痫模型大鼠海马中,检测目的基因在脑内的表达以及基因工程化细胞移植对癫痫的影响。方法:建立海仁酸致癫痫大鼠模型,完全随机分为GAD-NSCs移植组、单纯NSCs移植组、生理盐水对照组,每组20只。在移植后1、2、3天,1、2、4、8周各时间点,通过小剂量戊四氮诱发试验检测大鼠的癫痫敏感性;移植l周后,取海马进行WesternBlotting检测GAD65表达;移植8周后,取脑组织,进行海马区HE病理染色及BrdU和GAD65的免疫组化染色。结果:移植后,GAD-NSCs移植组2天就表现出癫痫敏感性下降,而单纯NSCs移植组术后2周才出现该变化,并且生理盐水对照组和单纯NSCs移植组Racine评分标准评分高于GAD-NSCs称植组;Western Blotting检测表明仅有GAD-NSCs移植组海马区GAD65高表达;GAD-NSCs移植组的BrdU阳性标记细胞、GAD65阳性标记细胞均显著高于其他两组。结论:GAD65基因修饰神经干细胞移植到癫痫大鼠海马中,海马区GAD65呈高表达,可持续抑制实验动物癫痫敏感性,并对移植后的宿主神经干细胞具有保护作用,改善实验动物神经病理变化。

关键词：神经干细胞谷氨酸脱羧酶癫痫移植海马

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