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中华肝脏病杂志 2024年第11期32卷 1042-1046页

作者：舒畅张大志重庆医科大学附属第二医院感染科、重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室、重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆401336

慢性乙型肝炎(CHB)是全球主要的公共卫生问题之一。乙型肝炎病毒感染的潜在免疫机制尚未研究清楚。单细胞转录组测序(scRNA-seq)技术作为近年来新兴的一种测序方法,可以在单细胞水平上提供全转录组的高通量视图,揭示CHB病程中免疫细胞... 详细信息

慢性乙型肝炎(CHB)是全球主要的公共卫生问题之一。乙型肝炎病毒感染的潜在免疫机制尚未研究清楚。单细胞转录组测序(scRNA-seq)技术作为近年来新兴的一种测序方法,可以在单细胞水平上提供全转录组的高通量视图,揭示CHB病程中免疫细胞转录谱的精细变化,为探究CHB的免疫发病机制、探索潜在治疗靶点提供了技术支持。现对scRNA-seq技术在CHB免疫学特征的研究进展进行总结,为治疗CHB提供新思路。

关键词：慢性乙型肝炎单细胞转录组测序发病机制免疫特征诊断

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血管性血友病因子及VITRO评分评估HBV感染患者疾病进展的临床价值

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中华肝脏病杂志 2022年第3期30卷 309-315页

作者：关雅兰张大志杨轶轩万仁均唐璐琪曾维琼康娟重庆医科大学附属第二医院感染科重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400010 重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆400010

目的:探讨血管性血友病因子(vWF)及VITRO评分(vWF/血小板计数数值的比值)评估乙型肝炎病毒(HBV)感染患者疾病进展的临床价值。方法:随机收集重庆医科大学附属第二医院2018年12月1日—2021年1月5日308例HBV感染患者(包括154例慢性乙型肝... 详细信息

目的:探讨血管性血友病因子(vWF)及VITRO评分(vWF/血小板计数数值的比值)评估乙型肝炎病毒(HBV)感染患者疾病进展的临床价值。方法:随机收集重庆医科大学附属第二医院2018年12月1日—2021年1月5日308例HBV感染患者(包括154例慢性乙型肝炎、66例乙型肝炎肝硬化代偿期、88例乙型肝炎肝硬化失代偿期)的相关临床数据,vWF数值均采用统一的光学法测定,所有数据均使用统一标准纳入,并分析血浆vWF水平及VITRO评分在慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化代偿期及失代偿期各组中的差别及意义。结果:慢性乙型肝炎组的血浆vWF水平及VITRO评分数值分别为(139.47%±76.44%、0.86±0.8),乙型肝炎肝硬化代偿期组分别为(164.95%±67.12%和1.44±1.14)、乙型肝炎肝硬化失代偿期组分别为(317.48%±103.32%和6.81±4.98);血浆vWF水平及VITRO评分随HBV感染患者疾病进展而增高,差异有统计学意义(F值分别为133.669、137.598,P值均<0.001)。乙型肝炎肝硬化患者中血浆vWF水平及VITRO评分数值在Child-Pugh A级组分别为(185.65%±85.07%和2.3±2.37)、B级组为(304.74%±105.81%和6.37±5.19)、C级组为(369.48%±73.23%和8.28±5.38);乙型肝炎肝硬化患者中血浆vWF水平及VITRO评分随着Child-Pugh分级等级的增高而增高,差异有统计学意义(F值分别为60.236、32.854,P值均<0.001)。血浆vWF水平及VITRO评分诊断乙型肝炎肝硬化失代偿期的曲线下面积(AUC)分别为0.897[95%可信区间(CI):0.855~0.940,P<0.01]、0.949[95%CI:0.916~0.982,P<0.01]。vWF水平及VITRO评分分别取界值为238.5%和1.65时,诊断乙型肝炎肝硬化失代偿期的敏感度分别为79.5%和94.3%,特异度为92.3%和87.7%,阳性预测值为80.5%和94.3%,阴性预测值为91.9%和97.5%,诊断准确率为88.6%和89.3%。乙型肝炎肝硬化失代偿期患者中,有消化道出血组vWF水平为367.24%±68.29%显著高于无消化道出血组的286.15%±109.69%,差异有统计学意义(P<0.001);有消化道出血组VITRO评分为9.12±5.4明显高于无消化道出血组的5.36±4.13,差异有统计学意义(P<0.01)。有自发性腹膜炎组vWF水平为341.73%±87.92%高于无自发性腹膜炎组的296.32%±111.74%,差异有统计学意义(P<0.05),而VITRO评分在两组中比较,差异无统计意义。结论:血浆vWF水平及VITRO评分可评估HBV感染患者肝脏疾病进展程度及肝硬化失代偿期程度,且对肝硬化失代偿后各种并发症有预测作用,对尽早作出干预措施有一定指导意义。

关键词：慢性乙型肝炎肝硬化血管性血友病因子 VITRO评分消化道出血

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富马酸替诺福韦二吡呋酯对血脂影响的研究进展

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中华肝脏病杂志 2023年第10期31卷 1103-1107页

作者：段袁琴胡鹏重庆医科大学附属第二医院感染科教育部感染性疾病分子生物学重点实验室重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆400010

富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)是一种新型核苷酸类逆转录酶抑制剂,主要用于治疗人类免疫缺陷病毒和乙型肝炎病毒感染。近年来越来越多的研究发现,TDF治疗可以降低艾滋病和慢性乙型肝炎患者的血脂,而血脂又和疾病进展以及心血管事件的发... 详细信息

富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)是一种新型核苷酸类逆转录酶抑制剂,主要用于治疗人类免疫缺陷病毒和乙型肝炎病毒感染。近年来越来越多的研究发现,TDF治疗可以降低艾滋病和慢性乙型肝炎患者的血脂,而血脂又和疾病进展以及心血管事件的发生息息相关。现就TDF对血脂影响的研究进展作一综述,旨在为TDF的合理用药提供依据。

关键词：乙型肝炎病毒血脂人类免疫缺陷病毒富马酸替诺福韦二吡呋酯

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慢性乙型肝炎抗病毒治疗新药研究进展

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中华肝脏病杂志 2024年第4期32卷 295-299页

作者：蔡南胡鹏重庆医科大学附属第二医院感染病科感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆400010

乙型肝炎治疗的理想目标是实现功能性治愈,但肝内持续存在的共价闭合环状DNA(cccDNA)是HBV长期感染的关键因素,也是难以实现彻底治愈的原因。当前以聚乙二醇干扰素α和核苷(酸)类似物为代表的抗病毒药物均不能消除cccDNA,因此难以实现... 详细信息

乙型肝炎治疗的理想目标是实现功能性治愈,但肝内持续存在的共价闭合环状DNA(cccDNA)是HBV长期感染的关键因素,也是难以实现彻底治愈的原因。当前以聚乙二醇干扰素α和核苷(酸)类似物为代表的抗病毒药物均不能消除cccDNA,因此难以实现功能性治愈。随着对各种机制和药物靶点的探索不断深化,许多针对乙型肝炎病毒生命周期和免疫系统的新药研发取得显著进展,为乙型肝炎的功能性治愈带来了希望。现结合近年发表的文献和国际会议资料,概述慢性乙型肝炎抗病毒治疗新药临床研究的最新进展。

关键词：慢性乙型肝炎抗病毒治疗功能性治愈临床试验

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极低病毒血症:抗乙型肝炎病毒治疗过程中需要关注的临床新问题

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中华肝脏病杂志 2021年第12期29卷 1147-1150页

作者：石宇婧丁银敖玲张大志蔡大川重庆医科大学附属第二医院感染病科重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400010

临床研究证实慢性乙型肝炎患者接受核苷(酸)类似物抗病毒治疗过程中存在的低水平病毒血症与多种临床不良结局相关。随着PCR检测水平的提升,高灵敏度PCR技术的HBV DNA检测下限可达到 5~10 IU/ml)。长期存在的极低水平病毒血症是否影响慢... 详细信息

临床研究证实慢性乙型肝炎患者接受核苷(酸)类似物抗病毒治疗过程中存在的低水平病毒血症与多种临床不良结局相关。随着PCR检测水平的提升,高灵敏度PCR技术的HBV DNA检测下限可达到<5~10 IU/ml。以HBV DNA < 20 IU/ml为判断标准获得完全病毒学应答者中,采用更高灵敏度PCR技术仍可发现部分患者存在极低水平的病毒血症(HBV DNA<20 IU/ml,但> 5~10 IU/ml)。长期存在的极低水平病毒血症是否影响慢性乙型肝炎患者的临床结局,目前相关研究较少,需要积累更多的研究数据回答这一临床问题。

关键词：乙型肝炎核苷(酸)类似物极低病毒血症完全病毒学应答

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基于生物信息学分析筛选肝细胞癌中的核心基因:细胞周期蛋白B2可作为肝癌潜在的诊疗和预后生物标志物

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中华肝脏病杂志 2020年第9期28卷 773-783页

作者：杨双燕任红李传飞汤慧重庆医科大学附属第二医院感染科/重庆医科大学病毒性肝炎研究所/感染性疾病分子生物学教育部重点实验室 400010 重庆医科大学附属第二医院消化内科 400010

目的通过生物信息学方法筛选出参与肝细胞癌(HCC)进展的核心基因(Hub gene),探讨细胞周期蛋白B2(CCNB2)在HCC发生发展及预后中的潜在作用。方法从GEO数据库中筛选并下载四个HCC相关数据集,用GEO2R分析数据并鉴定差异表达基因(DEGs)。利... 详细信息

目的通过生物信息学方法筛选出参与肝细胞癌(HCC)进展的核心基因(Hub gene),探讨细胞周期蛋白B2(CCNB2)在HCC发生发展及预后中的潜在作用。方法从GEO数据库中筛选并下载四个HCC相关数据集,用GEO2R分析数据并鉴定差异表达基因(DEGs)。利用DAVID数据库对DEGs进行GO分析,Cytoscape的ClueGO插件完成KEGG信号通路富集分析,并将DEGs导入STRING数据库建立蛋白相互作用(PPI)网络图,用Cytoscape对PPI网络进行可视化,构建关键模块(cluster)和筛选核心基因。分别使用UCSC数据库和UALCAN数据库完成核心基因在TCGA肝癌中的差异表达分析和生存分析。使用Firebrowse,Oncomine和UALCAN数据库分析核心基因在包括HCC在内的多个肿瘤中的表达。用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测候选基因在HCC组织和肝癌细胞系中的表达水平。结果从四个数据集中共鉴定了73个DEGs,包括15个上调基因和58个下调基因。KEGG信号通路富集分析显示DEGs主要富集于肿瘤相关通路。基于DEGs的PPI网络图,筛选了一个关键模块和10个核心基因。CCNB2与NCAPG在多个数据库的肝癌组织中均高表达。CCNB2与NCAPG呈正相关,被认为是与预后相关的关键基因(P<0.01)。RT-qPCR结果表明CCNB2在人肝癌组织和细胞系中高表达(P<0.01)。结论成功筛选出HCC相关的DEGs和核心基因,其中CCNB2在HCC中高表达且与患者生存预后相关,有望成为HCC诊疗和预后的生物标志物。

关键词：肝细胞癌生物信息学分析细胞周期蛋白B2 生物标志物

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超级白细胞介素-6重组慢病毒的构建及其对肝细胞的促增殖作用

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中华肝脏病杂志 2009年第8期17卷 615-619页

作者：孙文静秦波黄涛黄爱龙重庆医科大学附属第一医院感染科 400016 重庆医科大学病毒性肝炎研究所、感染性疾病分子生物学教育部重点实验室

目的观察超级白细胞介素-6重组慢病毒对人正常肝细胞L—02的促增殖作用。方法利用慢病毒表达质粒及其包装系统构建超级白细胞介素-6重组慢病毒（FIV—Hyper—IL-6）、IL-6重组慢病毒（FIV-IL-6）和空慢病毒载体（FIV），用嘌呤霉素筛选... 详细信息

目的观察超级白细胞介素-6重组慢病毒对人正常肝细胞L—02的促增殖作用。方法利用慢病毒表达质粒及其包装系统构建超级白细胞介素-6重组慢病毒（FIV—Hyper—IL-6）、IL-6重组慢病毒（FIV-IL-6）和空慢病毒载体（FIV），用嘌呤霉素筛选的方法测定其病毒滴度。将人肝细胞L02分为4组：FIV-Hyper—IL-6组、FIV-IL-6组、FIV组及未感染组，各组分别感染其相应的重组慢病毒，采用四甲基偶氮唑盐法检测其对L-02细胞生长状态的影响；并用RT—PCR法检测重组慢病毒感染L02细胞后产生的急性时相蛋白结合珠蛋白mRNA表达量的变化。应用方差分析进行统计学分析。结果构建出的各重组慢病毒能成功感染靶细胞，嘌呤霉素筛选法测得的各重组慢病毒的病毒滴度均为10^3pfu／ml。病毒颗粒感染L02细胞后48h，细胞的促增殖作用（4值）FIV—Hyper—IL-6组为0．6267±0．0256，FIV—IL-6组、FIV组及未感染组分别为0．5563±0．0112、0．5040±0．0078、0．4790±0．0201，F=41．09，P值均〈0．01，且随着时间的延长，对细胞的促增殖作用有所增加，并于感染后72h达到最高，为0．8000±0．0166。FIV—Hyper—IL-6组细胞结合珠蛋白mRNA吸光度值为0．7030±0．0106，FIV—IL-6组、FIV组及未感染组分别为0．3355±0．0093、0．1143±0．0153、0．1145±0．0076，q=57．5007，P值均〈0．01。结论构建的Hyper-IL-6重组慢病毒能够显著刺激L-02细胞表达结合珠蛋白，对L-02细胞有较强的促增殖作用。

关键词：肝细胞白细胞介素-6 慢病毒属触珠蛋白类

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TIA-1通过影响肝细胞转录因子的活性调节HBV的e抗原和s抗原表达

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第三军医大学学报 2008年第9期30卷 834-836页

作者：陈婧李毅谭畅刘湘黄爱龙汤华重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所教育部感染性疾病分子生物学重点实验室重庆400016

目的证明TIA-1分子具有调节HBV基因表达的功能。方法TIA-1真核表达质粒pcDNA3-TIA-1,用脂质体转染HepG2.2.15细胞后,ELISA检测e和s抗原的表达;RT-PCR检测与HBV复制有关的转录因子HNF1、HNF2、HNF3、HNF4、RXRα、PPARα、C/EBP的表达。... 详细信息

目的证明TIA-1分子具有调节HBV基因表达的功能。方法TIA-1真核表达质粒pcDNA3-TIA-1,用脂质体转染HepG2.2.15细胞后,ELISA检测e和s抗原的表达;RT-PCR检测与HBV复制有关的转录因子HNF1、HNF2、HNF3、HNF4、RXRα、PPARα、C/EBP的表达。结果与正常的HepG2.2.15细胞相比,转染pcDNA3-TIA-1质粒的HepG2.2.15细胞,其e抗原的表达量明显的增高,而s抗原表达量明显的降低。与正常的HepG2.2.15细胞相比,转染pcDNA3-TIA-1质粒的HepG2.2.15细胞中的HNF1、HNF2、RXRα mRNA含量有明显的下降。结论TIA-1蛋白能通过影响与HBV复制有关的转录因子活性,调节HBV e抗原和s抗原的表达。

关键词： TIA-1 s抗原 e抗原转录因子 HepG 2.2.15细胞

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丙型肝炎病毒核心蛋白对Wnt信号抑制因子SFRPs甲基化修饰的影响

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第三军医大学学报 2011年第20期33卷 2116-2119页

作者：陈庆美刘娇周帆单晓亮陈林林权会琴唐霓重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016

目的探讨丙型肝炎病毒核心蛋白是否通过对Wnt信号抑制因子SFRPs的甲基化修饰,从而活化Wnt信号通路。方法将编码HCV核心蛋白的腺病毒(AdCore)或GFP对照腺病毒(AdGFP)感染SMMC-7721细胞,采用逆转录PCR(RT-PCR)方法检测SFRPs基因mRNA的表达... 详细信息

目的探讨丙型肝炎病毒核心蛋白是否通过对Wnt信号抑制因子SFRPs的甲基化修饰,从而活化Wnt信号通路。方法将编码HCV核心蛋白的腺病毒(AdCore)或GFP对照腺病毒(AdGFP)感染SMMC-7721细胞,采用逆转录PCR(RT-PCR)方法检测SFRPs基因mRNA的表达;用5-氮杂-2'-脱氧胞苷(DAC)对AdCore或AdGFP腺病毒感染的SMMC-7721细胞进行去甲基化处理,进一步采用甲基化特异性PCR(MSP)和DNA甲基化测序,检测SFRPs基因启动子区CpG岛的甲基化程度,Western blot检测甲基化转移酶Dnmts的表达。结果在HCV核心蛋白过表达的SMMC-7721细胞系中,SFRP2和SFRP5基因mRNA的表达量与对照组相比明显降低(P<0.05);甲基化分析结果表明:SFRP5基因启动子区CpG岛呈现高甲基化修饰;甲基化转移酶Dnmt1、Dnmt3a表达量增加(P<0.05)。结论 HCV核心蛋白可以促进SFRP5基因启动子区CpG岛的甲基化修饰,参与HCV相关疾病的发生。

关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白 SFRPs 甲基化细胞系,肿瘤

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Sirt4在心肌细胞中增强血管紧张素Ⅱ对GATA结合蛋白4的激活作用

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第三军医大学学报 2016年第14期38卷 1603-1608页

作者：罗玉璇陈志伟刘玉莫念春邓燕感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆医科大学附属第二医院重庆400010

目的探索Sirt4在大鼠原代心肌细胞中对GATA结合蛋白4(GATA-binding protein 4,GATA4)活性的影响。方法构建过表达Sirt4(Ad-Sirt4)以及干扰Sirt4表达(Ad-sh Sirt4)的腺病毒并且在体外培养大鼠原代心肌细胞,将构建好的腺病毒及其相应的对... 详细信息

目的探索Sirt4在大鼠原代心肌细胞中对GATA结合蛋白4(GATA-binding protein 4,GATA4)活性的影响。方法构建过表达Sirt4(Ad-Sirt4)以及干扰Sirt4表达(Ad-sh Sirt4)的腺病毒并且在体外培养大鼠原代心肌细胞,将构建好的腺病毒及其相应的对照腺病毒(Ad-GFP/Ad-U6)分别感染大鼠原代心肌细胞,感染24 h后用PBS或1μmol/L血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)处理细胞48 h。采用Western blot及Real-time PCR检测GATA4的表达,通过免疫荧光及细胞核分离法检测GATA4的核转运,利用双荧光素酶报告基因法检测GATA4下游分子心房利钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、脑利钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)的启动子活性。结果 Sirt4在大鼠原代心肌细胞中不会影响GATA4的蛋白及mRNA水平(P>0.05)。与对照组比较,Sirt4过表达显著增加AngⅡ诱导的GATA4磷酸化,而干扰Sirt4表达降低GATA4的磷酸化水平。在大鼠原代心肌细胞中下调Sirt4表达可以明显抑制AngⅡ引起的GATA4入核;Sirt4过表达显著增加GATA4下游分子ANP、BNP的启动子活性(P<0.01)。结论 Sirt4可以在大鼠原代心肌细胞中促进AngⅡ对GATA4的激活效应。

关键词： Sirt4 GATA结合蛋白4 心肌细胞血管紧张素Ⅱ

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