目的构建含肝再生增强因子(ALR)基因的重组腺病毒并探讨其抗凋亡功能。方法采用基因重组法构建重组穿梭载体p Ad Track-TO4-m ALR和p Ad Track-TO4-h ALR,同源重组法构建重组腺病毒Ad-GFP-m ALR和Ad-GFP-h ALR,4轮扩增后获得高滴度Ad-GF...
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目的构建含肝再生增强因子(ALR)基因的重组腺病毒并探讨其抗凋亡功能。方法采用基因重组法构建重组穿梭载体p Ad Track-TO4-m ALR和p Ad Track-TO4-h ALR,同源重组法构建重组腺病毒Ad-GFP-m ALR和Ad-GFP-h ALR,4轮扩增后获得高滴度Ad-GFP-m ALR和Ad-GFP-h ALR。将上述腺病毒感染L02细胞,通过绿色荧光蛋白(GFP)的表达了解其感染率;Western blotting法检测ALR及Bcl-2/Bax蛋白表达;CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测ALR对棕榈酸(PA)诱导的L02细胞凋亡的影响。结果重组腺病毒Ad-GFP-m ALR和Ad-GFP-h ALR构建成功,且均能高效感染并稳定表达于L02细胞。与非感染组和感染空载病毒组相比,过表达ALR能促进L02细胞的增殖,并抵抗PA诱导的L02细胞凋亡作用,明显降低Bax,增加Bcl-2蛋白的表达。结论 ALR对L02细胞具有促增殖及抗PA诱导的细胞凋亡的作用。
目的探索Sirt4在大鼠原代心肌细胞中对GATA结合蛋白4(GATA-binding protein 4,GATA4)活性的影响。方法构建过表达Sirt4(Ad-Sirt4)以及干扰Sirt4表达(Ad-sh Sirt4)的腺病毒并且在体外培养大鼠原代心肌细胞,将构建好的腺病毒及其相应的对...
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目的探讨骨化三醇对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)诱导的肾小管上皮细胞间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用及可能机制。方法先单独用骨化三醇刺激细胞,再采用AGEs处理NRK52E细胞,建立...
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目的探讨骨化三醇对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)诱导的肾小管上皮细胞间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用及可能机制。方法先单独用骨化三醇刺激细胞,再采用AGEs处理NRK52E细胞,建立由AGEs诱导的细胞EMT模型。分为4组:对照组、模型组、低剂量骨化三醇(10nmol/L)预处理的模型组、高剂量骨化三醇(100nmol/L)预处理的模型组。利用Western blot、逆转录实时定量PCR等方法检测E-cadherin、α-SMA、AGEs特异性受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)及NF-κB的磷酸化等的表达。结果骨化三醇单独刺激时,大鼠肾小管上皮细胞上的E-cadherin和α-SMA的表达未发生明显变化;较对照组,AGEs培养后,NRK52E细胞E-cadherin表达显著下调,α-SMA表达明显上调,AGEs特异性受体显著表达增多,NF-κB途径活化;以上变化都能够被骨化三醇所逆转(P<0.05),抗RAGE中和抗体(AF1616)可抑制AGEs引起的E-cadherin下调和α-SMA上调,骨化三醇抑制AGEs诱导RAGE的上调能够被NF-κB磷酸化抑制剂(IMD0354)部分阻断。结论骨化三醇通过降低RAGE的表达和阻断NF-κB的磷酸化来抑制肾小管上皮细胞上皮间质转化。
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