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基于4D-Label-free技术慢性弥漫性轴索损伤大鼠海马组织的蛋白质组学分析

解剖学报 2024年第5期55卷 515-523页

作者：张丽熊红丽朱士胜重庆中医药学院基础医学院人体解剖学与组织胚胎学教研室重庆402760 重庆市中医院博士后科研工作站重庆400021 重庆医科大学基础医学院法医学教研室重庆400016 重庆医药高等专科学校基础部解剖学教研室重庆401331

目的筛选慢性弥漫性轴索损伤(DAI)大鼠海马组织差异表达蛋白(DEPs),为探索慢性DAI潜在发病机制以及临床诊断、筛选药物治疗靶点、评估预后等提供实验依据。方法实验动物分为模型组(DAI组,n=20)和对照组(CON组,n=20),采用改良的Marmarou... 详细信息

目的筛选慢性弥漫性轴索损伤(DAI)大鼠海马组织差异表达蛋白(DEPs),为探索慢性DAI潜在发病机制以及临床诊断、筛选药物治疗靶点、评估预后等提供实验依据。方法实验动物分为模型组(DAI组,n=20)和对照组(CON组,n=20),采用改良的Marmarou法建立SD大鼠DAI模型,模型建立3周后利用4D-Label-free技术检测慢性DAI组脑海马组织中的蛋白图谱变化,以DAI组/CON组表达量变化倍数(FC)>1.2或<0.83且P<0.05筛选DEPs,运用基因本体(GO)功能注释和京都基因与基因百科全书(KEGG)通路富集分析方法对筛选的DEPs进行生物信息学分析。结果共筛选出92个DEPs,上调52个,下调40个。GO分析结果显示,DEPs主要涉及去磷酸化,ATP合成耦合电子传递,过氧化氢介导的细胞程序性死亡的正向调节及神经递质受体内化等生物过程功能。KEGG通路分析结果提示,DEPs主要参与代谢途径、活性氧、神经变性途径-多种疾病、逆行内源性大麻素信号传导、谷胱甘肽代谢等信号通路。结论通过4D-Label-free技术筛选出了慢性DAI组大鼠海马组织中的DEPs。所筛选出的DEPs及其所富集的生物过程和信号通路为慢性DAI的深入研究提供依据。

关键词：弥漫性轴索损伤蛋白质组学 4D-Label-free技术生物信息学分析大鼠

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基于iTRAQ技术对戊四氮点燃癫痫大鼠海马组织的蛋白质组学分析

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神经解剖学杂志 2023年第6期39卷 649-656页

作者：张鹏张丽熊红丽朱士胜海南医学院法医学教研室海口571199 重庆中医药学院基础医学部重庆402760 重庆医科大学基础医学院重庆400016 重庆医药高等专科学校基础部重庆401331

目的:筛选癫痫大鼠海马组织差异表达蛋白(DEPs),为进一步探索癫痫的发病机制和药物治疗靶点提供思路。方法:采用戊四氮(PTZ)诱导建立SD大鼠癫痫模型(PTZ组),利用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)联合LC-MS/MS技术检测大鼠海马组织蛋白质... 详细信息

目的:筛选癫痫大鼠海马组织差异表达蛋白(DEPs),为进一步探索癫痫的发病机制和药物治疗靶点提供思路。方法:采用戊四氮(PTZ)诱导建立SD大鼠癫痫模型(PTZ组),利用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)联合LC-MS/MS技术检测大鼠海马组织蛋白质谱,以PTZ组对control组蛋白表达量变化倍数>1.5或<0.67且P<0.05为标准筛选DEPs,并对DEPs进行基因本体(GO)功能注释和京都基因与基因百科全书(KEGG)通路富集等生物信息学分析。结果:共筛选出80个显著DEPs,其中上调39个,下调41个。GO分析显示:上调的DEPs主要涉及细胞对神经生长因子刺激的反应、轴突发育、细胞表面受体信号通路、神经元迁移、肌动蛋白细丝解聚和信号转导等生物过程;下调的DEPs主要涉及三羧酸循环、柠檬酸盐代谢过程、丙酮酸-乙酰辅酶A生物合成过程、草酰乙酸代谢过程、粘附聚集体的调节等生物过程。KEGG通路富集分析显示:上调的DEPs主要参与腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路、肌动蛋白细胞骨架的调节、鞘脂信号通路、苯丙氨酸代谢和胰岛素信号通路等5条信号通路;下调的DEPs主要参与柠檬酸循环、碳代谢、乙醛酸和二羧酸代谢、代谢途径、氨基酸的生物合成和肌萎缩侧索硬化症等6条信号通路。结论:本研究通过iTRAQ蛋白质组学方法筛选出了癫痫海马组织的DEPs,对DEPs进行生物信息学分析所富集的代谢通路可能与癫痫的发病密切相关。

关键词：癫痫蛋白质组学同位素标记相对和绝对定量生物信息学分析戊四氮点燃模型大鼠

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β-石竹烯对小鼠脑缺血/再灌注白质损伤的保护作用研究

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中国药理学通报 2020年第3期36卷 360-365页

作者：王倩饶江燕王钰淳向菲徐露田晓翠董志重庆市生物化学与分子药理学重点实验室重庆400016 重庆医科大学药理学教研室重庆400016 重庆医药高等专科学校药学院重庆401331

目的研究β-石竹烯(β-caryophyllene,BCP)对小鼠脑缺血/再灌注(cerebral ischemia-reperfusion,CIR)白质损伤的保护作用。方法随机将C57BL/6小鼠分为正常对照组(Control)、模型组(CIR)、治疗组(36、72、144 mg·kg^-1)。线栓法建立小鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery oc-clusion,MCAO)模型。缺血1 h,再灌注24 h,TTC染色确定脑梗死体积,并进行神经行为学评分;干湿重法测脑含水量;HE染色及透射电镜观察胼胝体损伤情况;Luxol Fast Blue(LFB)染色标记脑神经髓鞘;Western blot测胼胝体髓鞘碱性蛋白(mbp)、神经丝蛋白(NF)、Bcl-2、Bax和caspase-3的表达。结果与模型组比较,BCP可降低神经行为学评分,减小脑梗死体积,减轻脑水肿和胼胝体髓鞘损伤,升高髓鞘染色光密度(optical density,OD),上调mbp、NF、Bcl-2表达,降低Bax和caspase-3表达。结论BCP对小鼠脑缺血/再灌注白质损伤有保护作用,可能与Bax/Bcl-2凋亡通路有关。

关键词： β-石竹烯脑缺血/再灌注白质损伤胼胝体脱髓鞘凋亡

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白藜芦醇通过促进线粒体自噬减轻小鼠脑缺血/再灌注损伤的实验研究

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中国药理学通报 2019年第6期35卷 815-821页

作者：向菲李明航徐露田晓翠刘海林刘道航董志重庆市生物化学与分子药理重点实验室重庆医科大学药理学教研室重庆400016 重庆医药高等专科学校药学院重庆401331

目的研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的保护作用及其可能作用机制。方法采用线栓法建立小鼠右侧大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。各组小鼠术前连续腹腔给药5... 详细信息

目的研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的保护作用及其可能作用机制。方法采用线栓法建立小鼠右侧大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。各组小鼠术前连续腹腔给药5 d,每日1次。术后24 h对梗死体积和神经功能进行评价; Western blot检测沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)和线粒体自噬相关蛋白p62、LC3B、PHB2、TOM20表达情况,以及细胞色素C (cytochrome C,CytC)分布情况;流式细胞术检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)变化;酶标仪检测胞内ATP水平变化;透射电镜观察线粒体形态变化。结果Res预处理减少了脑梗死体积和神经功能缺损,提高了SIRT1和线粒体自噬相关蛋白表达,减少了CytC的释放,恢复了MMP,提高了ATP水平。透射电镜结果显示,Res减轻了缺血导致的线粒体损伤。自噬抑制剂3-MA抑制了线粒体自噬,同时也逆转了Res的神经、线粒体保护作用。结论Res减轻小鼠脑组织I/R损伤可能与其对线粒体自噬的调控,最终确保线粒体质量有关。

关键词：白藜芦醇脑缺血/再灌注损伤线粒体受损沉默信息调节因子1 线粒体自噬神经保护

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阿尔茨海默病差异表达基因的生物信息学分析

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重庆医科大学学报 2019年第4期44卷 434-440页

作者：朱士胜张丽代亚磊张怡徐妍石雪萍廖勇重庆医药高等专科学校医学技术学院生物化学教研室重庆市药物制剂工程技术研究中心重庆401331 重庆医科大学基础医学院法医学教研室重庆400016

目的:应用生物信息学方法分析阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)不同病情程度的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),在分子水平上探讨AD的发病制,为研究AD提供新思路。方法:从基因表达综合数据库(gene expression ... 详细信息

目的:应用生物信息学方法分析阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)不同病情程度的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),在分子水平上探讨AD的发病制,为研究AD提供新思路。方法:从基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO)下载基因芯片数据集GSE28146,使用在线分析工具GEO2R分别筛选AD轻度组、中度组和重度组与正常对照组比较的DEGs。运用DAVID数据库对筛选出的DEGs进行基因本体(gene ontology,GO)富集分析和京都基因与基因百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路分析,通过STRING数据库构建蛋白相互作用网络,并采用Cytoscape软件筛选关键基因。结果:AD轻度组、中度组和重度组分别筛选出881、896和1142个DEGs。GO功能富集显示:轻度组与凋亡相关过程的激活、调节免疫反应、蛋白质磷酸化等生物过程密切相关,中度组与炎症反应、凋亡调节、钙离子的释放等生物过程密切相关,重度组与NF-κB的激活、蛋白质磷酸化和去磷酸化、细胞外基质的降解等生物过程密切相关。KEGG分析显示:轻度组主要富集到p53和TGF-β等信号通路,中度组主要富集到癌症途径、自然杀伤细胞介导的细胞毒性、细胞黏附分子等信号通路,重度组主要富集到细胞周期、Hippo信号通路、神经活性配体-受体相互作用等信号通路。蛋白互作网路分析各组富集程度最高的前5个关键基因:轻度组为GART、EHMT2、KRAS、ESR1、CD44;中度组为CBLB、HERC1、UBE2G1、UBE2M、HECW2;重度组为UBE2C、SOCS3、FBXW7、UBE3B、UBA6。结论:采用生物信息学方法分析不同病情程度的AD,所富集的信号通路和筛选出的关键基因可能在AD发生发展过程中起重要作用,为进一步深入研究AD提供了依据和思路。

关键词：阿尔茨海默病差异表达基因生物信息学蛋白质相互作用关键基因

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膀胱癌中衔接蛋白p66Shc的表达及临床意义

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临床与实验病理学杂志 2019年第6期35卷 674-678页

作者：王西川樊春华冉建华四川省成都市第六人民医院病理科成都610051 重庆医科大学基础医学院解剖学教研室重庆400016 重庆医药高等专科学校基础部解剖教研室重庆401331

目的观察p66Shc蛋白在膀胱癌中的表达,分析其表达与膀胱癌临床分期、病理类型、转移等的关系,以及p66Shc影响膀胱癌细胞增殖、凋亡的分子机制。方法应用免疫组化法和Western blot技术检测32例膀胱癌中p66Shc蛋白的表达,分析p66Shc蛋白... 详细信息

目的观察p66Shc蛋白在膀胱癌中的表达,分析其表达与膀胱癌临床分期、病理类型、转移等的关系,以及p66Shc影响膀胱癌细胞增殖、凋亡的分子机制。方法应用免疫组化法和Western blot技术检测32例膀胱癌中p66Shc蛋白的表达,分析p66Shc蛋白表达和临床病理特征的关系。Western blot技术检测T24细胞中PKCβ和p66Shc蛋白及其磷酸化水平,以及p53、Bax和BCL-2蛋白水平。结果膀胱癌组织中p66Shc阳性率为65.6%(21/32),其在T3+T4期膀胱癌中的表达显著高于T1+T2期膀胱癌( P <0.05);p66Shc表达与患者年龄、性别、分化程度无关( P >0.05)。LY333531下调T24细胞中PKCβ和p66Shc蛋白及其磷酸化水平,以及下调p53、Bax和上调BCL-2的蛋白水平。结论 p66Shc蛋白在膀胱癌中的表达与膀胱癌临床分期相关,随着pTNM分期增加而表达增多。p66Shc磷酸化促进肿瘤细胞的增殖和凋亡。

关键词：膀胱肿瘤 p66Shc 免疫组织化学

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基于~1H-NMR技术的SD大鼠弥漫性轴索损伤血浆代谢组学研究

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重庆医科大学学报 2018年第2期43卷 167-171页

作者：熊进成朱士胜赵鹏马若翔肖翾李红卫李剑波重庆医科大学基础医学院法医学教研室重庆400016 重庆医药高等专科学校医学技术学院生物化学教研室重庆401331 遵义医药高等专科学校基础医学部病理学教研室遵义563006 重庆市公安局刑警总队技术处重庆400021

目的:采用核磁共振氢谱(~1H-NMR)结合模式识别的方法研究SD大鼠弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAI)后血浆代谢的变化,探讨~1H-NMR在DAI中应用的可行性,并筛选出DAI的早期差异代谢物。方法:采用改良的Marmarou A法建立SD大鼠DAI... 详细信息

目的:采用核磁共振氢谱(~1H-NMR)结合模式识别的方法研究SD大鼠弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAI)后血浆代谢的变化,探讨~1H-NMR在DAI中应用的可行性,并筛选出DAI的早期差异代谢物。方法:采用改良的Marmarou A法建立SD大鼠DAI模型,分为打击致伤组(n=6),假手术组(n=6,给予打击致伤组相同的打击前准备,但不予以打击),于致伤后1 d抽取心血,分离出血浆。应用~1H-NMR结合模式识别技术对大鼠血浆进行代谢组学分析,筛选差异代谢物。结果:通过对打击致伤组与假手术组血浆代谢组差异代谢物的相关性分析及独立样本t检验,筛选出相关系数丨r丨>0.6且P<0.05的差异代谢物。结果显示,与假手术组相比,打击致伤组血浆中丙酮酸(Pyruvate)(r=-0.831,P=0.019)、赖氨酸(Lysine)(r=-0.773,P=0.030)、谷氨酸(Glutamate)(r=-0.772,P=0.042)、谷氨酰胺(Glutamine)(r=-0.772,P=0.042)、异丁酸(Isobutyrate)(r=-0.631,P=0.045)、甘油(Glycerol)(r=-0.844,P=0.032)明显升高,丙二酸二乙酯(Malonate)(r=0.699,P=0.038)、L2(r=0.786,P=0.047)、L3(r=0.666,P=0.031)、L4(r=0.715,P=0.022)、L10(r=0.663,P=0.025)、β-葡萄糖(β-Glucose)(r=0.800,P=0.030)、α-葡萄糖(α-Glucose)(r=0.808,P=0.015)明显降低。结论:基于~1H-NMR结合模式的方法对DAI后血浆的代谢组学分析是可行的,所筛选出的13种差异代谢物及其表达变化,不仅为进一步探索DAI的病理生理机制提供了新的研究基础;同时,对于临床DAI的早期诊断、治疗及法医学鉴定提供了重要的方法和依据。

关键词：弥漫性轴索损伤代谢组学 ^1H-NMR SD大鼠

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弥漫性轴索损伤生物标志物的研究进展

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现代医药卫生 2018年第13期34卷 2001-2004页

作者：朱士胜张鹏赵鹏李剑波重庆医药高等专科学校医学技术学院重庆401331 重庆医科大学基础医学院法医学教研室重庆400016 重庆市刑事侦查工程技术研究中心 400016 遵义医药高等专科学校临床系贵州遵义563006

弥漫性轴索损伤（DAI）是一种常见的脑损伤,是造成重型脑损伤患者不良预后的主要原因之一,其病理特点是轴索广泛的损害^（[1]）。DAI严重危害患者的生命健康,其病理生理机制仍不清楚,临床迄今为止尚无治疗DAI的有效药物和措施。近年来,... 详细信息

弥漫性轴索损伤（DAI）是一种常见的脑损伤,是造成重型脑损伤患者不良预后的主要原因之一,其病理特点是轴索广泛的损害^（[1]）。DAI严重危害患者的生命健康,其病理生理机制仍不清楚,临床迄今为止尚无治疗DAI的有效药物和措施。近年来,随着研究的不断深入,在DAI的早期诊断、治疗及预后等方面已取得了很大的进展,发现了较多与DAI发病机制、早期诊断与预后评估相关的特异性强、灵敏性好的生物标志物，为进一步探索DAI的病理生理机制、了解DAI患者的症状、体征及病程进展，提高DAI的诊治水平提供了重要参考。现就弥漫性轴索损伤生物标志物的研究进展进行综述。

关键词：弥漫性轴索损伤神经系统疾病生物标志物早期诊断综述

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高职高专病理生理学整合于病理学的研究与实践

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课程教育研究 2017年第29期 254-255页

作者：赵艳郭海龙重庆医药高等专科学校基础部病理教研室重庆医科大学附属第一医院第一分院

在高职高专教学中,病理生理学附属于病理学,占有少量的教学学时。随着高职高专人才培养模式的改革,作为医学基础课程的病理学的学时数越来越少,病理生理学的教学亦被忽略,学生掌握程度差,不能满足后续临床课程的要求。如何让学生扎实、... 详细信息

在高职高专教学中,病理生理学附属于病理学,占有少量的教学学时。随着高职高专人才培养模式的改革,作为医学基础课程的病理学的学时数越来越少,病理生理学的教学亦被忽略,学生掌握程度差,不能满足后续临床课程的要求。如何让学生扎实、有效地掌握病理生理学知识要点,是我们亟需解决的问题。

关键词：病理生理学病理学整合教学案例式教学法

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微管相关蛋白-1B在弥漫性轴索损伤中的表达变化与意义

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重庆医科大学学报 2016年第1期41卷 34-37页

作者：张鹏赵敏珠朱士胜刘梦高军李红卫李剑波重庆医科大学基础医学院法医学教研室重庆400016 重庆医药高等专科学校医学技术院重庆401331 重庆市公安局刑警总队技术处重庆400021

目的 :观察微管相关蛋白-1B(microtubule-associate protein 1B,MAP1B)在SD大鼠弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAI)后脑组织中表达的变化,探索其表达变化的意义。方法 :采用改良的Marmarou法建立SD大鼠DAI模型,分为空白对照组(1... 详细信息

目的 :观察微管相关蛋白-1B(microtubule-associate protein 1B,MAP1B)在SD大鼠弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAI)后脑组织中表达的变化,探索其表达变化的意义。方法 :采用改良的Marmarou法建立SD大鼠DAI模型,分为空白对照组(10只,不予任何处理),假打击组(10只,给予致伤组相同的打击前准备,但不予以打击),致伤6 h组(10只),致伤1 d组(10只)和致伤3 d组(10只),分别于打击6 h、1 d、3 d后,处死动物,提取脑组织,结合Western blot和免疫组化方法,观察SD大鼠脑组织中MAP1B表达的变化。结果:Western blot结果显示致伤6 h组(0.50±0.07)、致伤1 d组(0.56±0.07)和致伤3 d组(0.50±0.06)中MAP1B表达水平较空白对照组(0.30±0.06;P=0.001,P=0.000,P=0.001)、假打击组(0.30±0.04;P=0.001,P=0.000,P=0.001)明显升高。免疫组化结果显示致伤6 h组(4.70±0.79)、致伤1 d组(4.78±0.86)和致伤3 d组(4.70±0.89)中MAP1B表达水平较空白对照组(4.06±1.15;P=0.023,P=0.007,P=0.023)、假打击组(3.90±1.46;P=0.002,P=0.000,P=0.002)明显升高。结论:SD大鼠DAI后脑组织中MAP1B表达水平上调,提示其参与了DAI后轴索损伤的病理改变过程,并可能在稳定、修复及再生受损轴索的机制中起着重要作用。

关键词：弥漫性轴索损伤微管相关蛋白-1B 轴索修复 SD大鼠

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