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鲍曼不动杆菌外膜蛋白A1S1969的克隆表达及免疫保护机制初步研究

免疫学杂志 2016年第2期32卷 104-108页

作者：蔡昌芝冯强杨赟魏振波纪永军牟道华敬海明邹全明曾浩第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038

目的制备鲍曼不动杆菌(Ab)A1S_1969重组蛋白,利用小鼠全身脓毒血症感染致死模型评价A1S_1969重组蛋白的免疫保护效果,探讨可能的免疫保护机制,为筛选Ab疫苗有效的保护性抗原奠定基础。方法基于反向疫苗学技术筛选出Ab外膜蛋白A1S_1969,... 详细信息

目的制备鲍曼不动杆菌(Ab)A1S_1969重组蛋白,利用小鼠全身脓毒血症感染致死模型评价A1S_1969重组蛋白的免疫保护效果,探讨可能的免疫保护机制,为筛选Ab疫苗有效的保护性抗原奠定基础。方法基于反向疫苗学技术筛选出Ab外膜蛋白A1S_1969,利用p GEX-6P-2质粒构建GST融合表达载体,重组表达的A1S_1969蛋白经亲和层析高效纯化后与铝佐剂吸附制备而成重组A1S_1969免疫原;采用Balb/c小鼠全身感染模型评价A1S_1969重组蛋白的免疫保护效果,通过ELISA检测免疫小鼠Ig G抗体滴度和Ig G抗体亚型。制备A1S_1969重组蛋白抗血清进行体外调理吞噬杀菌实验。结果成功克隆、表达并纯化A1S_1969重组蛋白,纯度>90%。动物免疫保护结果显示A1S_1969重组蛋白组小鼠存活率为55.6%,对照组小鼠存活率为20.0%(P<0.05);末次免疫7 d后小鼠体内总Ig G抗体滴度为1∶64 000,以Ig G1亚型为主;体外调理吞噬杀菌实验结果显示A1S_1969特异性血清抗体可以增强中性粒细胞对Ab的杀菌作用,实验组杀菌率可达55%,对照组无杀菌活性。结论 A1S_1969重组蛋白可显著提高全身脓毒血症感染致死模型小鼠的存活率,具有良好的免疫保护效果。

关键词：鲍曼不动杆菌基因工程疫苗克隆表达重组蛋白免疫保护

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MicroRNA-30a在胃癌组织的表达分析及其靶基因成纤维活化蛋白α的鉴定

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第三军医大学学报 2016年第6期38卷 560-563页

作者：龚莉左钱飞余婷汪莉娜肖斌曾浩第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038

目的分析microRNA-30a(miR-30a)在胃癌中的表达水平并鉴定其新的靶基因。方法选取29例胃癌患者的肿瘤组织和癌旁组织,利用qRT-PCR检测miR-30a的表达。通过miRNA靶基因预测数据库Target Scan预测miR-30a的靶基因。构建含有miR-30a结合位... 详细信息

目的分析microRNA-30a(miR-30a)在胃癌中的表达水平并鉴定其新的靶基因。方法选取29例胃癌患者的肿瘤组织和癌旁组织,利用qRT-PCR检测miR-30a的表达。通过miRNA靶基因预测数据库Target Scan预测miR-30a的靶基因。构建含有miR-30a结合位点的3'UTR片段的荧光素酶载体(p MIR-FAPα),通过荧光素酶报告实验对预测靶基因进行检测。利用Western blot和qRT-PCR对预测靶基因成纤维活化蛋白α(fibroblast activation proteinα,FAPα)的表达进行检测。结果 miR-30a在胃癌组织样本中的表达明显下调,通过生物信息学预测(Target Scan)和荧光素酶实验表明miR-30a mimic可与FAPα基因结合,qRT-PCR和Western blot结果表明miR-30a mimic可抑制FAPαmRNA和蛋白质水平的表达。结论 miR-30a在人胃癌组织样本中表达下调,FAPα是其靶基因。

关键词：胃癌 miR-30a 成纤维活化蛋白α

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基于“卓越工程师教育培养计划”的《生物技术制药》教学改革

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中华医学教育探索杂志 2016年第11期15卷 1125-1128页

作者：肖斌郭刚赵卓曾浩邹全明第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038

《生物技术制药》是药学专业的重要课程，其课程设置和教学方式存在很多不足。为了培养复合型生物技术人才，依托本单位“国家免疫生物制品工程技术研究中心”的平台优势，基于“卓越工程师教育培养计划”的培养目标，进行课程教学改革... 详细信息

《生物技术制药》是药学专业的重要课程，其课程设置和教学方式存在很多不足。为了培养复合型生物技术人才，依托本单位“国家免疫生物制品工程技术研究中心”的平台优势，基于“卓越工程师教育培养计划”的培养目标，进行课程教学改革。通过优化课程标准和教学设计,突出“生物技术制药”与“工程学”有机结合，强化实践教学环节，加强师资队伍建设，结合翻转课堂、PBL教学等；提高学生创新思维和科研应用能力。

关键词：生物技术制药卓越工程师教育培养计划研究型教学复合型人才

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鲍曼不动杆菌外膜蛋白A1S_0115的克隆、表达及免疫保护性研究

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免疫学杂志 2015年第5期31卷 380-385页

作者：魏振波蔡昌芝杨赟纪永军牟道华石云曾浩邹全明第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038

目的构建鲍曼不动杆菌外膜蛋白A1S_0115胞外区(A1S_0115A)与GST标签融合表达的原核表达载体,在大肠杆菌XL-1 blue中表达、纯化A1S_0115A蛋白后,进行抗原免疫保护性的初步研究。方法利用生物信息学技术分析A1S_0115蛋白结构,确定蛋白的... 详细信息

目的构建鲍曼不动杆菌外膜蛋白A1S_0115胞外区(A1S_0115A)与GST标签融合表达的原核表达载体,在大肠杆菌XL-1 blue中表达、纯化A1S_0115A蛋白后,进行抗原免疫保护性的初步研究。方法利用生物信息学技术分析A1S_0115蛋白结构,确定蛋白的胞外区片段,PCR扩增该基因片段后,构建重组表达载体p GEX-6P-2-A1S_0115A,将重组载体转化大肠杆菌XL-1blue,IPTG诱导表达GST-A1S_0115A融合蛋白,采用GST亲和层析填料纯化并酶切获得A1S_0115A蛋白。利用已建立的Balb/c小鼠鲍曼不动杆菌全身感染模型对该蛋白抗原的免疫保护性进行初步评价。结果重组质粒经过Bam HⅠ和NotⅠ双酶切鉴定、核酸序列测定和IPTG诱导表达及酶切后蛋白的SDS-PAGE分析表明,A1S_0115A蛋白胞外区相对分子质量大小约50 000,GST标签相对分子质量大小约26 000,与预期设想符合,目的蛋白纯度在95%以上。用A1S_0115A蛋白对小鼠进行2轮次免疫保护性实验及其抗体的被动免疫实验,免疫攻毒后小鼠的保护率分别为50%和55%,被动免疫保护率为45%和50%。结论成功构建重组表达载体p GEX-6P-2-A1S_0115A,利用大肠杆菌可溶表达系统、GST亲和层析和酶切方法获得了高纯度的A1S_0115A蛋白。动物免疫攻毒保护实验结果表明A1S_0115A蛋白具有较好的免疫保护性,为研制新型有效的鲍曼不动杆菌疫苗奠定实验基础。

关键词：鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii) A1S_0115A蛋白 GST融合蛋白免疫保护性

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HPLC法测定纳米乳漱口液中醋酸洗必泰的含量

HPLC法测定纳米乳漱口液中醋酸洗必泰的含量

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中国药学会第十三届青年药学科研成果交流会

作者：喻吉孙红武李云飞张华琦中国人民解放军第三军医大学第一附属医院药剂科国家免疫制品工程技术研究中心暨第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室重庆市精神卫生中心药剂科

目的:建立纳米乳漱口液中醋酸洗必泰的含量测定方法。方法:采用HPLC,色谱柱SEPELCO DBS C18柱（250mm×416mm,5μm）;流动相:0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液（pH=2.5）-乙腈（50:50）检测波长:275nm。结果:醋酸洗必泰在22.4～198.6μg/m... 详细信息

目的:建立纳米乳漱口液中醋酸洗必泰的含量测定方法。方法:采用HPLC,色谱柱SEPELCO DBS C18柱（250mm×416mm,5μm）;流动相:0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液（pH=2.5）-乙腈（50:50）检测波长:275nm。结果:醋酸洗必泰在22.4～198.6μg/ml之间呈良好的线性关系（R=0.9963）,平均回收率为98.72%,RSD为0.74%。结论:该测定方法简便可行、检测结果准确性高,重复性好,成本低廉,可广泛应用于该产品质量检测和质量控制。

关键词：醋酸洗必泰纳米乳漱口液 HPLC 质量控制质量检测

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一种新型有效的疫苗佐剂能够通过提高功能性抗体水平与CD4+T细胞分化能力来抵御金黄色葡萄球菌系统性感染

一种新型有效的疫苗佐剂能够通过提高功能性抗体水平与CD4+T细胞...

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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：魏超重庆市第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心 400038

佐剂的发展已经有了近80年的时间，但是在目前上市的疫苗佐剂中，其中以铝盐佐剂为代表的载药系统最为常见，但是该类佐剂并不能有效的针对胞内寄生的细菌病毒产生强有力的细胞免疫应答。目前佐剂发展一种重要方向是实现载药系统的新型... 详细信息

佐剂的发展已经有了近80年的时间，但是在目前上市的疫苗佐剂中，其中以铝盐佐剂为代表的载药系统最为常见，但是该类佐剂并不能有效的针对胞内寄生的细菌病毒产生强有力的细胞免疫应答。目前佐剂发展一种重要方向是实现载药系统的新型化，能够有效的被DC细胞吞噬并且增强抗原呈递过程，有文献报道，金黄色葡萄球菌既可以胞外寄生，并且能够胞内寄生，阻碍巨噬细胞的自噬作用，本论文以金黄色葡萄球菌的全身感染模型为实验模型，在自行研制新型佐剂基础上，结合MPLA免疫增强剂，通过包裹等多种形式来探索最有效增强免疫应答的结合方式，同时通过血清学以及细胞学等实验，我们得到如下结果：在结合免疫增强剂MPLA的基础上，采用包裹抗原成分能够更有效的引起机体产生功能性抗体，同时能够诱导CD4+T细胞向Th1/Th17方向分化，并且有效的提高细菌清除率与动物生存率，达到有效清除金黄色葡萄球菌感染的目的。

关键词：金黄色葡萄球菌免疫刺激剂乳剂DC细胞

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一种新型有效的疫苗佐剂能够通过提高功能性抗体水平与CD4+T细胞分化能力来抵御金黄色葡萄球菌系统性感染

一种新型有效的疫苗佐剂能够通过提高功能性抗体水平与CD4+T细胞...

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第十届全国免疫学学术大会

作者：魏超重庆市第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心

佐剂的发展已经有了近80年的时间,但是在目前上市的疫苗佐剂中,其中以铝盐佐剂为代表的载药系统最为常见,但是该类佐剂并不能有效的针对胞内寄生的细菌病毒产生强有力的细胞免疫应答。目前佐剂发展一种重要方向是实现载药系统的新型化,... 详细信息

佐剂的发展已经有了近80年的时间,但是在目前上市的疫苗佐剂中,其中以铝盐佐剂为代表的载药系统最为常见,但是该类佐剂并不能有效的针对胞内寄生的细菌病毒产生强有力的细胞免疫应答。目前佐剂发展一种重要方向是实现载药系统的新型化,能够有效的被DC细胞吞噬并且增强抗原呈递过程,有文献报道,金黄色葡萄球菌既可以胞外寄生,并且能够胞内寄生,阻碍巨噬细胞的自噬作用,本论文以金黄色葡萄球菌的全身感染模型为实验模型,在自行研制新型佐剂基础上,结合MPLA免疫增强剂,通过包裹等多种形式来探索最有效增强免疫应答的结合方式,同时通过血清学以及细胞学等实验,我们得到如下结果 :在结合免疫增强剂MPLA的基础上,采用包裹抗原成分能够更有效的引起机体产生功能性抗体,同时能够诱导CD4+T细胞向Th1/Th17方向分化,并且有效的提高细菌清除率与动物生存率,达到有效清除金黄色葡萄球菌感染的目的。

关键词：金黄色葡萄球菌免疫刺激剂乳剂DC细胞

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肿瘤相关中性粒细胞在胃癌中的分布、表型及其免疫抑制功能研究

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第三军医大学学报 2014年第6期36卷 587-591页

作者：王婷婷庄园陈娜彭六生程平李文华赵永亮余佩武邹全明第三军医大学:药学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038 西南医院普通外科重庆400038

目的分析胃癌患者外周血中及不同类型胃组织中的中性粒细胞的分布情况,并研究其表型,探讨胃癌组织培养上清诱导的条件性中性粒细胞对CD3+T细胞功能的影响。方法采用流式细胞术检测并分析42例胃癌患者的胃癌组织、癌旁组织、正常胃组织... 详细信息

目的分析胃癌患者外周血中及不同类型胃组织中的中性粒细胞的分布情况,并研究其表型,探讨胃癌组织培养上清诱导的条件性中性粒细胞对CD3+T细胞功能的影响。方法采用流式细胞术检测并分析42例胃癌患者的胃癌组织、癌旁组织、正常胃组织及外周血中CD66b+中性粒细胞的比例及表型,同时采用免疫组织化学染色技术针对中性粒细胞表面标志CD15原位分析不同类型胃组织石蜡切片中中性粒细胞的浸润情况,最后用胃癌组织培养上清诱导的条件性中性粒细胞与CD3+T细胞共培养,检测其对T细胞增殖能力的影响。结果胃癌患者外周血中性粒细胞比例明显高于健康成人(P<0.01),胃癌组织中的中性粒细胞的频率也高于癌旁组织(P<0.05)和正常胃组织(P<0.05);在胃癌患者外周血及不同类型胃组织浸润的中性粒细胞可能主要为成熟的分叶核粒细胞;相较于正常胃组织,胃癌组织培养上清诱导的条件性中性粒细胞能显著抑制CD3+T细胞增殖(P<0.01)。结论中性粒细胞在胃癌微环境中浸润增高,其可能通过抑制CD3+T细胞增殖而促进胃癌进展。

关键词：胃癌中性粒细胞 CD3+T细胞

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幽门螺杆菌外膜泡对人脐静脉内皮细胞的促凋亡作用

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第三军医大学学报 2014年第9期36卷 906-909页

作者：周发英蔡晋陈彩宇王娜谭小容罗浩邹全明曾春雨周林第三军医大学大坪医院野战外科研究所心血管内科重庆市心血管病研究所重庆400042 第三军医大学药学系微生物学与生化药学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038

目的探讨幽门螺杆菌（Helicobacter Pylori, Hp）外膜泡（outer membrane vesicles，OMVs）对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）的作用及其机制。方法 Skirrow氏液体培养基培养幽门螺杆菌，... 详细信息

目的探讨幽门螺杆菌（Helicobacter Pylori, Hp）外膜泡（outer membrane vesicles，OMVs）对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）的作用及其机制。方法 Skirrow氏液体培养基培养幽门螺杆菌，经超速离心法提取HP-OMVs后用负染透射电镜和Western blot进行鉴定，将HP-OMVs与HUVECs共培养后观察其对HUVECs凋亡及增殖的影响。结果负染透射电镜显示HP-OMVs呈圆形小泡状结构，大小20-300 nm，HP-OMVs中有CagA和VacA 表达。HP-OMVs抑制HUVECs的增殖，并呈时间和浓度依赖性。流式细胞仪和TUNEL染色检测显示：HP-OMVs处理组细胞凋亡比例分别高达（27.86±2.89）%和（25.4±4.65）%，较对照组显著升高（P〈0.05）。HP-OMVs处理组Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高（P〈0.05）。HP-OMVs处理组Bcl-2家族的促凋亡蛋白Bax表达亦显著升高（P〈0.05），而抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著降低（P〈0.05）。结论幽门螺杆菌OMVs能够抑制HUVECs的增殖并促进其凋亡，其凋亡的发生可能与caspase-3的激活及Bcl-2家族的Bcl-2/Bax表达比例失衡有关。

关键词：幽门螺杆菌外膜泡动脉粥样硬化人脐静脉内皮细胞细胞凋亡

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miRNA对T细胞分化与功能的调节作用

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生命的化学 2014年第5期34卷 701-707页

作者：余婷肖斌第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038

miRNA是一类长度为19~24 nt的内源性非编码小分子RNA,主要通过抑制mRNA的翻译或使其降解对靶基因实现转录后水平的调控。miRNA与T细胞的分化及功能密切相关,参与自身免疫性疾病、感染性疾病、肿瘤等多种病理过程的免疫调控。本文综述了... 详细信息

miRNA是一类长度为19~24 nt的内源性非编码小分子RNA,主要通过抑制mRNA的翻译或使其降解对靶基因实现转录后水平的调控。miRNA与T细胞的分化及功能密切相关,参与自身免疫性疾病、感染性疾病、肿瘤等多种病理过程的免疫调控。本文综述了近年来发现的miRNA在T细胞分化与功能调节中的作用,特别是其在抗感染与抗肿瘤免疫中的作用。

关键词：微RNA T细胞抗感染免疫抗肿瘤免疫

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