检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2017年第12期39卷 1239-1244页

作者：马腾飞胡艺方瑶朱攀胡治强韩丹康少雄李倩毛旭虎第三军医大学西南医院医学检验系临床微生物及免疫学教研室重庆400038

目的建立类鼻疽杆菌(Burkholderia pseudomallei)慢性感染BALB/c小鼠模型并评价其稳定性。方法采用0.01 m L洗涤后的高、中、低剂量的类鼻疽杆菌液(菌量分别为3.3×104、3.3×103、3.3×102CFU)滴鼻感染BALB/c小鼠,密切监测... 详细信息

目的建立类鼻疽杆菌(Burkholderia pseudomallei)慢性感染BALB/c小鼠模型并评价其稳定性。方法采用0.01 m L洗涤后的高、中、低剂量的类鼻疽杆菌液(菌量分别为3.3×104、3.3×103、3.3×102CFU)滴鼻感染BALB/c小鼠,密切监测42 d,记录小鼠的生存率,探索合适的攻毒剂量。在低剂量细菌(3.3×102CFU)感染小鼠后21、28、35、42 d,计数小鼠血液、肝脏、脾脏和肺脏的细菌定植量,ELISA检测血清炎性因子TNF-α、IFN-γ的表达和血清类鼻疽杆菌特异性Ig G抗体滴度,观察肝脏、脾脏和肺脏等主要器官的病理学改变,评价动物模型的稳定性。结果低剂量类鼻疽杆菌滴鼻感染BALB/c小鼠后,小鼠42 d生存率为60%。期间小鼠体质量呈下降趋势,血液、肝脏、脾脏和肺脏均有细菌定植,并出现大量炎性细胞浸润、多灶性坏死和脓肿等病理改变;类鼻疽杆菌血清中特异性Ig G抗体滴度从感染后21 d起持续增高;实验组小鼠血清炎性因子TNF-α和IFN-γ表达明显高于对照组(P<0.05)。结论成功建立了稳定的类鼻疽杆菌慢性感染BALB/c小鼠模型。

关键词：类鼻疽杆菌动物模型感染

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类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统BPSS1395蛋白表达及其抗体制备与鉴定

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第三军医大学学报 2017年第10期39卷 941-945页

作者：胡艺胡志强马腾飞韩丹李倩方瑶毛旭虎第三军医大学西南医院医学检验系临床微生物及免疫学教研室重庆400038

目的重组表达类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统蛋白BPSS1395,利用其抗体检测该蛋白在细菌中的分布。方法以pET-22b为表达系统,采用DNA重组技术在大肠杆菌中表达BPSS1395蛋白;用纯化重组蛋白免疫新西兰大白兔,Western blot及ELISA法鉴定其免疫学性... 详细信息

目的重组表达类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统蛋白BPSS1395,利用其抗体检测该蛋白在细菌中的分布。方法以pET-22b为表达系统,采用DNA重组技术在大肠杆菌中表达BPSS1395蛋白;用纯化重组蛋白免疫新西兰大白兔,Western blot及ELISA法鉴定其免疫学性质;以制备的抗血清Western blot分析该蛋白的亚细胞定位。结果从类鼻疽杆菌BPC006株基因组DNA中PCR得到了BPSS1395目的基因,并成功构建pET-22b-BPSS1395重组质粒,转化到***宿主菌BL21(DE3)经IPTG诱导表达、纯化得到了相对分子质量为32×10~3的高纯度BPSS1395蛋白,制备的兔抗血清ELISA效价均高达1∶1 280 000,并能与目的蛋白发生特异性抗原抗体反应。亚细胞分离后BPSS1395在类鼻疽杆菌中主要定位于细胞质。结论重组表达了具有生物活性的BPSS1395蛋白,制备了其特异性多克隆抗体,证明了该蛋白定位于细胞质。

关键词：类鼻疽杆菌 Ⅲ型分泌系统蛋白抗体制备与鉴定

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类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统BPSS1617蛋白的重组表达及其抗体制备

类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统BPSS1617蛋白的重组表达及其抗体制备

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第九届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛

作者：吴利黎礼达胡艺黎元莉陈海朱雄胡志强马腾飞韩丹李倩曹刘素尹小毛毛旭虎海南省三亚市人民医院检验科第三军医大学西南医院医学检验系临床微生物及免疫学教研室重庆400038

目的重组表达类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统蛋白BPSS1617,并制备其抗体,为研究其生物学功能奠定基础。方法应用pET-22b表达系统在大肠杆菌工程菌中重组表达BPSS1617蛋白,然后用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔来制备多克隆抗体,并通过Wester... 详细信息

目的重组表达类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统蛋白BPSS1617,并制备其抗体,为研究其生物学功能奠定基础。方法应用pET-22b表达系统在大肠杆菌工程菌中重组表达BPSS1617蛋白,然后用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔来制备多克隆抗体,并通过Western blot、免疫荧光和ELISA鉴定抗体的免疫学性质,最后以制备的多克隆抗体分析该蛋白在类鼻疽杆菌中的亚细胞定位。

关键词：鼻疽杆菌 Ⅲ型分泌系统蛋白蛋白表达抗体制备与鉴定

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常规消毒剂对类鼻疽伯克霍尔德菌的杀灭效果分析

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中华医院感染学杂志 2017年第3期27卷 505-509页

作者：黎元莉方瑶陈海朱雄兰红霞三亚市人民医院检验科海南三亚572000 中国人民解放军第161医院检验科湖北武汉430000 重庆市第三军医大学西南医院医学检验系临床微生物及免疫学教研室重庆400038

目的分析评价临床及科研中常用4种消毒剂对类鼻疽伯克霍尔德菌的杀灭效果,为临床类鼻疽治疗和科研活动中对该病原体的生物防护和沾染消除提供参考。方法选取临床及科研中常用4种消毒剂:碘伏,新洁尔灭,75%乙醇,"84"消毒液,在... 详细信息

目的分析评价临床及科研中常用4种消毒剂对类鼻疽伯克霍尔德菌的杀灭效果,为临床类鼻疽治疗和科研活动中对该病原体的生物防护和沾染消除提供参考。方法选取临床及科研中常用4种消毒剂:碘伏,新洁尔灭,75%乙醇,"84"消毒液,在不同温度、不同消毒液浓度条件下,观察其在单位时间内对不同浓度的类鼻疽菌菌液中活菌的杀灭效果。结果常温条件下,0.5%碘伏和0.3%氯己定处理10min能杀灭类鼻疽菌,0.5%"84"消毒液20min、2%"84"消毒液5min也能有效杀灭该病原体,PerasafeTM消毒液和75%乙醇的杀灭处理3min即能起到洗消的目的。结论临床常用消毒剂对致病性的类鼻疽菌的杀灭效果较好,以PerasafeTM消毒液和75%乙醇的灭菌效果最佳,该试验提示,在未到达足够安全级别的实验室中进行少量病原操作(如分子生物学相关实验)和非严格隔离的病房内进行类鼻疽的临床诊疗过程中,有效防范类鼻疽菌的播散和传染并不困难,但基于类鼻疽菌的严重危害性和感染的高风险性,常规消毒剂的有效性还需要在更全面的动物模型上进行评价。

关键词：消毒剂灭菌类鼻疽伯克霍尔德菌

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类鼻疽伯克霍尔德菌Ⅲ型分泌系统蛋白BsaL的制备和免疫反应性分析

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第三军医大学学报 2016年第6期38卷 585-588页

作者：方瑶胡艺朱攀任春艳马腾飞王昆毛旭虎第三军医大学西南医院医学检验系临床微生物及免疫学教研室重庆400038

目的构建表达重组的类鼻疽伯克霍尔德菌Ⅲ型分泌系统结构蛋白Bsa L的大肠工程菌,制备高纯度、高质量的重组Bsa L蛋白样品,探讨其作为类鼻疽菌检测的候选抗原的可行性。方法基因工程技术构建表达重组Bsa L蛋白的大肠工程菌,通过亲和层析... 详细信息

目的构建表达重组的类鼻疽伯克霍尔德菌Ⅲ型分泌系统结构蛋白Bsa L的大肠工程菌,制备高纯度、高质量的重组Bsa L蛋白样品,探讨其作为类鼻疽菌检测的候选抗原的可行性。方法基因工程技术构建表达重组Bsa L蛋白的大肠工程菌,通过亲和层析、凝胶过滤层析等纯化方法得到高纯度的Bsa L蛋白。包被Bsa L蛋白于96孔板,分析其用于检测临床类鼻疽菌株的敏感性和特异性。结果成功构建了表达重组Bsa L蛋白的大肠工程菌,诱导、表达及纯化后得到高纯度(>99%)、高浓度(20 mg/m L)的重组Bsa L蛋白。该蛋白在类鼻疽菌检测方面表现出较好的灵敏度(85%)和特异性(89%)。结论成功表达了重组的Bsa L蛋白,获得了高纯度的Bsa L蛋白样品,在类鼻疽菌的诊断方面展示出较好的应用价值。

关键词：类鼻疽伯克霍尔德菌 Ⅲ型分泌系统(TTSS) BsaL ELISA

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类鼻疽伯克霍尔德菌BPSL1549基因敲除株的构建及鉴定

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第三军医大学学报 2016年第11期38卷 1210-1214页

作者：胡治强方瑶朱攀任春艳胡艺马腾飞毛旭虎第三军医大学西南医院医学检验系临床微生物及免疫学教研室重庆400038

目的构建类鼻疽菌BPSL1549基因敲除株[BP(△BPSL1549)],建立有效的类鼻疽菌毒力基因敲除平台。方法设计引物扩增类鼻疽菌BPSL1549基因上下游同源臂,连接至p K18mob Sac B自杀质粒上,通过大肠杆菌S17-1λpir以接合方式将其转入类鼻疽菌... 详细信息

目的构建类鼻疽菌BPSL1549基因敲除株[BP(△BPSL1549)],建立有效的类鼻疽菌毒力基因敲除平台。方法设计引物扩增类鼻疽菌BPSL1549基因上下游同源臂,连接至p K18mob Sac B自杀质粒上,通过大肠杆菌S17-1λpir以接合方式将其转入类鼻疽菌中。利用同源重组原理替换野生株中的BPSL1549基因,经过蔗糖筛选靶标基因敲除株,并采用PCR、Western blot检测方法鉴定敲除株,利用动物模型评价敲除株表型变化。结果 BP(△BPSL1549)菌株与野生株的BPSL1549基因两侧同源臂片段PCR产物相比缺少600 bp,Western blot检测敲除株不表达BPSL1549基因编码蛋白,成功构建类鼻疽菌BPSL1549基因敲除株。动物实验证实敲除株相比野生株毒力显著降低(P<0.05)。结论利用同源重组原理成功构建类鼻疽菌BPSL1549基因敲除株,完善了类鼻疽菌敲除平台和评价体系。

关键词：类鼻疽伯克霍尔德菌基因敲除 BPSL1549基因

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类鼻疽的实验室诊断方法及评价

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第三军医大学学报 2016年第11期38卷 1200-1204页

作者：毛旭虎胡治强第三军医大学西南医院医学检验系临床微生物及免疫学教研室重庆400038

类鼻疽是由类鼻疽伯克霍尔德菌（简称类鼻疽杆菌）引起的一种热带医学疾病,流行分布于热带及亚热带地区,主要集中在东南亚和澳洲北部地区。国内类鼻疽疫源地主要分布于海南、广东、广西南部的边缘热带地区。类鼻疽杆菌是一种腐生菌,主... 详细信息

类鼻疽是由类鼻疽伯克霍尔德菌（简称类鼻疽杆菌）引起的一种热带医学疾病,流行分布于热带及亚热带地区,主要集中在东南亚和澳洲北部地区。国内类鼻疽疫源地主要分布于海南、广东、广西南部的边缘热带地区。类鼻疽杆菌是一种腐生菌,主要存在于疫区的污水和土壤中。它可通过接触方式经破损的皮肤黏膜、呼吸道和消化道造成感染。

关键词：类鼻疽类鼻疽伯克霍尔德菌实验室诊断

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类鼻疽杆菌毒素分子BLF1的重组表达及生物学活性

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第三军医大学学报 2016年第11期38卷 1215-1219页

作者：任春艳方瑶李倩胡艺马腾飞胡治强袁顺翎周杰汪黎鸿何晓奕毛旭虎第三军医大学西南医院医学检验系临床微生物及免疫学教研室重庆400038

目的重组、表达类鼻疽杆菌毒素BLF1并研究其生物学活性。方法运用DNA重组技术,以p GEX为表达系统在大肠杆菌中表达BLF1蛋白;以纯化重组蛋白r BLF1免疫新西兰大白兔,获得抗r BLF1血清,Western blot及ELISA鉴定抗血清;不同浓度r BLF1蛋白... 详细信息

目的重组、表达类鼻疽杆菌毒素BLF1并研究其生物学活性。方法运用DNA重组技术,以p GEX为表达系统在大肠杆菌中表达BLF1蛋白;以纯化重组蛋白r BLF1免疫新西兰大白兔,获得抗r BLF1血清,Western blot及ELISA鉴定抗血清;不同浓度r BLF1蛋白腹腔注射BALB/c小鼠,观察小鼠生存率;A549细胞模型中,通过CCK-8实验研究目的蛋白的细胞毒性效应及抗体阻断作用。结果从类鼻疽杆菌基因组DNA中PCR得到了BLF1目的基因,连接到p GEX-6p-2质粒,经双酶切及测序表明重组质粒构建成功。GST-BLF1蛋白经诱导表达、酶切纯化得到了相对分子质量为23×103的高纯度r BLF1,免疫家兔抗血清ELISA效价达1∶1 280 000,Western blot鉴定在目的蛋白位置处出现特异印记条带。重组r BLF1蛋白腹腔注射BALB/c小鼠,小鼠死亡率与蛋白剂量呈正相关。r BLF1蛋白能明显杀伤A549细胞,抗体可有效阻断其杀伤作用。结论成功重组表达了具有生物活性的r BLF1,该蛋白具有明显杀伤A549肿瘤细胞的作用,同时能够导致小鼠死亡但表现出一定耐受性。

关键词：类鼻疽杆菌 BLF1蛋白毒素细胞毒性

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类鼻疽伯克霍尔德菌胞内运动相关蛋白BimA的生物学特性研究进展

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中国人兽共患病学报 2016年第3期32卷 286-289,294页

作者：胡艺方瑶毛旭虎第三军医大学西南医院医学检验系临床微生物及免疫学教研室重庆400038

类鼻疽伯克霍尔德菌是一种热带医学病原体,现被美国CDC提升为I类致病菌严加防范。类鼻疽伯克霍尔德菌所导致的疾病称为类鼻疽,致死率和复发率都很高,广泛流行于东南亚及我国南海周边地区,已成为严峻的公共卫生问题。作为一种兼性胞内菌... 详细信息

类鼻疽伯克霍尔德菌是一种热带医学病原体,现被美国CDC提升为I类致病菌严加防范。类鼻疽伯克霍尔德菌所导致的疾病称为类鼻疽,致死率和复发率都很高,广泛流行于东南亚及我国南海周边地区,已成为严峻的公共卫生问题。作为一种兼性胞内菌,类鼻疽伯克霍尔德菌的胞内运动能力为其逃逸机体免疫和细胞间的扩散提供了重要基础。胞内动力相关蛋白A(BimA)是一种类鼻疽菌自分泌的、与其胞内运动相关的关键分子,它通过操控肌动蛋白实现干预细菌的胞内运动,在类鼻疽菌的感染和致病中发挥着重要作用。全面、深入地了解BimA在类鼻疽菌感染中的作用机制对寻找有效预防和控制该病原的传播等方面具有重要意义。本文即综述了BimA蛋白的生物学特性分析,结合研究报道探讨其主导细菌胞内运动、干扰宿主胞内免疫、实现细菌胞间传播的机制及意义。

关键词：类鼻疽伯克霍尔德菌(类鼻疽菌) BimA 肌动蛋白

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IBP通过上皮间质转化促进结肠癌细胞迁移和侵袭

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第三军医大学学报 2016年第11期38卷 1281-1285页

作者：何颖张竹君第三军医大学新桥医院超声科重庆400037 第三军医大学西南医院医学检验系临床微生物及免疫学教研室重庆400038

目的探讨干扰素调节因子4结合蛋白(interferon regulatory factor-4 binding protein,IBP)能否影响结肠癌细胞上皮间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)的发生,观察IBP在肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭中作用。方法干预结肠癌细胞中IBP的表达,构建IBP过表达的HT-29-IBP细胞株与IBP沉默的HCT116-sh IBP细胞株;干预IBP表达后,采用Western blot检测结肠癌细胞EMT相关分子的蛋白表达;Transwell实验检测结肠癌细胞迁移、侵袭能力的改变;MTT实验检测结肠癌细胞增殖能力的改变。结果 HT-29-IBP细胞中上皮相关分子E-cadherin和ZO-1表达水平降低,间质相关分子Fibronectin表达升高,细胞增殖、迁移和侵袭能力增强(P<0.05);HCT116-sh IBP细胞则E-cadherin、ZO-1表达水平升高,Fibronectin及Snail表达降低,细胞增殖、迁移和侵袭能力降低(P<0.05)。结论 IBP通过调节EMT促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。

关键词：干扰素调节因子4结合蛋白结肠癌上皮间质转化迁移侵袭

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