检索结果-内蒙古大学图书馆

Gsdermin A3基因在小鼠皮肤角质形成细胞中对Krt6b基因表达的影响

第三军医大学学报 2016年第3期38卷 238-244页

作者：刘颖新白秀峰赖向东郭海英罗燕余裕连小华第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 第三军医大学西南医院肝胆外科重庆400038

目的初步探讨Gsdermin A3(Gsdma3)基因对Krt6b基因表达的影响。方法通过组织切片的免疫荧光观察、RT-PCR、Q-PCR、Western blot等方法检测毛囊生长期[出生后8 d(P8d)]、毛囊退化期(P16d)、毛囊静止期(P25d)的Gsdma3基因突变鼠(AE鼠)和... 详细信息

目的初步探讨Gsdermin A3(Gsdma3)基因对Krt6b基因表达的影响。方法通过组织切片的免疫荧光观察、RT-PCR、Q-PCR、Western blot等方法检测毛囊生长期[出生后8 d(P8d)]、毛囊退化期(P16d)、毛囊静止期(P25d)的Gsdma3基因突变鼠(AE鼠)和野生型鼠(WT鼠)背部皮肤Krt6b基因的表达情况。利用免疫荧光进一步观察注射有Gsdma3和RFP腺病毒的Gsdma3基因突变鼠和野生型鼠的Krt6b基因的表达情况。结果 Gsdma3基因突变鼠的Krt6b基因表达量在各个时相点均高于野生型鼠(P<0.05)。其中,在出生后16 d Krt6b基因表达量达到最高,而在出生后25 d降至最低。对Gsdma3基因突变鼠进行基因回补后,免疫荧光、实时定量PCR及Western blot检测结果显示Krt6b基因表达减弱。同时,对野生型鼠过表达Gsdma3基因后,免疫荧光、实时定量PCR及Western blot结果显示Krt6b基因表达量降低。结论小鼠皮肤角质形成细胞中,Krt6b基因的表达受Gsdma3基因抑制。

关键词： Gsdermin A3基因 Krt6b基因角质形成细胞小鼠

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稳定高表达miR-449c的5637膀胱癌细胞株的建立

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第6期32卷 760-763,769页

作者：万鹏飞黄亚琴王志王欢欢石家仲杨劲陈志文第三军医大学第一附属医院全军泌尿外科研究所重庆400038 第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038

目的构建稳定表达miR-449c的人膀胱癌细胞株。方法以HEK293细胞基因组DNA作为模板,采用高保真酶进行扩增得到pre-miR-449c序列,将所得目的片段克隆到Ftet UGW-T载体上;经测序鉴定后,感染5637人膀胱癌细胞;经嘌呤霉素筛选后,利用倒置荧... 详细信息

目的构建稳定表达miR-449c的人膀胱癌细胞株。方法以HEK293细胞基因组DNA作为模板,采用高保真酶进行扩增得到pre-miR-449c序列,将所得目的片段克隆到Ftet UGW-T载体上;经测序鉴定后,感染5637人膀胱癌细胞;经嘌呤霉素筛选后,利用倒置荧光显微镜观察筛选后的细胞增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达强度,采用荧光实时定量PCR检测miR-449c的表达,Western blot法检测其下游靶基因C-myc蛋白的水平。结果成功构建了Ftet UGW-T/miR-449c慢病毒载体,慢病毒包装后感染5637人膀胱癌细胞成功表达EGFP,感染后的细胞中高表达miR-449c,在稳定表达的膀胱癌细胞中C-myc蛋白表达较对照组显著降低。结论成功构建了稳定高表达miR-449c的5637膀胱癌细胞株。

关键词： microRNA miR-449c 膀胱癌 C-myc 稳定细胞株

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MiR-7下调LXRβ表达而抑制HepG2细胞脂质生成的作用

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第三军医大学学报 2016年第10期38卷 1085-1089页

作者：付晓红钟丹许志臻周鹏闫小晶赵力黄刚第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的初步探讨miR-7对LXRβ的抑制作用及其在肝细胞脂质生成中的作用。方法生物信息学分析,预测LXRβmRNA的3'-UTR上miR-7的可能结合位点。在人肝细胞系Hep G2中转染miR-7,以Real-time PCR、Western blot检测LXRβmRNA水平和蛋白水... 详细信息

目的初步探讨miR-7对LXRβ的抑制作用及其在肝细胞脂质生成中的作用。方法生物信息学分析,预测LXRβmRNA的3'-UTR上miR-7的可能结合位点。在人肝细胞系Hep G2中转染miR-7,以Real-time PCR、Western blot检测LXRβmRNA水平和蛋白水平表达的变化;构建LXRβ3'-UTR报告基因质粒p MIR/LXRβ,Report assay检测报告基因荧光素酶活性;Real-time PCR检测miR-7对LXRβ激动剂诱导的脂质生成相关靶基因FAS、ACC的表达变化。结果在人肝细胞中,miR-7能够显著抑制LXRβ的表达(P<0.05),且miR-7能降低LXRβ重组质粒p MIR/LXRβ的荧光素酶活性(P<0.05)。同时抑制其激动剂对脂质代谢相关靶基因的诱导作用。结论 miR-7可通过结合在LXRβ3'-UTR区域而抑制其表达,进而抑制FAS、ACC的表达而抑制脂质生成。

关键词：肝X受体β miR-7 肝细胞脂质生成

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严重烧伤患者创面分离泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体的建库及相关特征分析

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中华烧伤杂志 2016年第9期32卷 517-522页

作者：杨子晨邓柳洋龚雅利殷素鹏姜北姜广涛彭毅志胡福泉第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的建立烧伤ICU住院患者创面分离泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体库并分析相关特征。方法2014、2015年，重庆市1家医院烧伤ICU住院患者创面分离出131株泛耐药鲍氏不动杆菌；2015年，广东省6家医院烧伤ICU住院患者创面分离出98株泛耐药鲍氏不... 详细信息

目的建立烧伤ICU住院患者创面分离泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体库并分析相关特征。方法2014、2015年，重庆市1家医院烧伤ICU住院患者创面分离出131株泛耐药鲍氏不动杆菌；2015年，广东省6家医院烧伤ICU住院患者创面分离出98株泛耐药鲍氏不动杆菌。收集前述229株菌进行如下实验。（1）分析重庆市、广东省来源菌株的多位点序列分型（MLST）。（2）采用污水共培养法选用上述菌株及两地来源污水分离噬菌体，记录分离噬菌体的数量及成功次数、失败次数。（3）根据2015年重庆市和广东省分型比例最大的菌株，选用其对应噬菌体与来源地所有菌株进行交叉感染，观察噬菌体与同型或不同型菌株交叉感染时的裂解情况并计算裂解比。（4）任取一型别噬菌体液等分为3份，通过倍比稀释法测定噬菌体的滴度。将每份噬菌体液再分为3小份，分别于－20 ℃、4 ℃、室温条件下采用LB液体培养基保存，保存1、2个月时检测噬菌体滴度，评价噬菌体的稳定性。对数据行Fisher确切概率法检验、χ^2检验、单因素方差分析。结果（1）2014年重庆市来源的菌株以序列型368（45%，31/69）为主，2015年重庆市来源的菌株以序列型75（26%，16/62）、序列型195（24%，15/62）为主。2015年广东省来源的菌株以序列型977（46%，45/98）为主。（2）以重庆市来源的菌株为基础使用当地来源的污水分离噬菌体的效果（成功分离8次、分离失败1次、分离9株噬菌体）明显优于使用广东省来源的污水（成功分离1次、分离失败7次、分离1株噬菌体），以广东省来源的菌株为基础使用当地来源的污水分离噬菌体的效果（分离8次均成功，分离6株噬菌体）明显优于使用重庆市来源的污水（分离7次均失败，分离0株噬菌体），差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。以两地来源菌株为基础使用各自来源地的污水分离噬菌体的效果比较，差异无统计学意义（P〉0.05）。（3）序列型75、序列型977泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体对同型菌株的裂解比分别为13/16、8/9，均明显高于它们对不同型菌株的裂解比（分别为11/115、3/53, χ^2值分别为48.23、68.46，P值均小于0.001）。（4）与保存前比较，－20 ℃、4 ℃和室温条件保存1个月噬菌体滴度降低约1个数量级，保存2个月噬菌体滴度降低约2个数量级。保存1、2个月，3种储存条件噬菌体的滴度相近（F值分别为1.29、1.07，P值均大于0.05）。结论本研究成功建立229株泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体库。不同地域、不同时间的泛耐药鲍氏不动杆菌的MLST各异，使用与菌株同一地区来源的污水分离噬菌体的效果好，噬菌体的裂解能力与菌株MLST关系密切，可按照地域划分建立噬菌体库。此外，噬菌体在LB液体培养基中稳定性良好且对储存条件无特殊要求。

关键词：烧伤重症监护病房鲍氏不动杆菌细菌噬菌体细菌分型技术泛耐药

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着色性干皮病C组基因蛋白缺失对膀胱癌细胞自噬的影响

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第三军医大学学报 2016年第12期38卷 1427-1431页

作者：刘宇王欢欢石家仲黄亚琴余瑾杨劲陈志文第三军医大学西南医院全军泌尿外科研究所重庆400038 第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038

目的探讨膀胱癌细胞中着色性干皮病C组基因(xeroderma pigmentosum group C,XPC)蛋白缺失对自噬的影响。方法利用shRNA策略,建立稳定干扰XPC的膀胱癌T24细胞模型,蛋白印迹技术检测干扰XPC后自噬表征蛋白LC3Ⅱ的表达,瞬时转染GFP-LC3,荧... 详细信息

目的探讨膀胱癌细胞中着色性干皮病C组基因(xeroderma pigmentosum group C,XPC)蛋白缺失对自噬的影响。方法利用shRNA策略,建立稳定干扰XPC的膀胱癌T24细胞模型,蛋白印迹技术检测干扰XPC后自噬表征蛋白LC3Ⅱ的表达,瞬时转染GFP-LC3,荧光显微镜观察细胞荧光聚集情况,CCK-8法检测细胞的增殖状况,免疫印迹技术检测自噬及凋亡相关蛋白的表达。结果成功建立干扰XPC的膀胱癌T24细胞模型;干扰XPC后,膀胱癌T24细胞自噬小体的形成[(1.53±0.81)%vs(3.30±0.70)%,P<0.05]明显减少,顺铂作用下膀胱癌T24细胞自噬小体的形成[(2.19±0.37)%vs(3.20±0.29)%,P<0.05]明显减少;顺铂促进XPC缺失后的膀胱癌T24细胞自噬;XPC缺失后的自噬为非保护性自噬。结论 XPC蛋白参与调控膀胱癌T24细胞的自噬。

关键词：膀胱癌着色性干皮病C组基因自噬 DNA损伤

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盐酸吡柔比星通过上调ATG4B增强HeLa细胞保护性自噬

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第三军医大学学报 2016年第2期38卷 129-135页

作者：吴亚冉倪振洪闫小晶郑英如何凤田连继勤第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科重庆400042

目的探讨盐酸吡柔比星增强宫颈癌He La细胞自噬水平的可能机制。方法采用CCK-8检测盐酸吡柔比星单独或联用自噬抑制剂氯喹对He La细胞增殖的影响;台盼蓝染色实验检测盐酸吡柔比星单独或联用自噬抑制剂氯喹对He La细胞死亡的影响;GFP-LC... 详细信息

目的探讨盐酸吡柔比星增强宫颈癌He La细胞自噬水平的可能机制。方法采用CCK-8检测盐酸吡柔比星单独或联用自噬抑制剂氯喹对He La细胞增殖的影响;台盼蓝染色实验检测盐酸吡柔比星单独或联用自噬抑制剂氯喹对He La细胞死亡的影响;GFP-LC3质粒转染He La细胞后观察盐酸吡柔比星对自噬小体形成的影响;Western blot检测细胞中自噬标志分子Ⅱ型微管相关蛋白轻链3(microtuble-associated protein light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)、自噬相关分子自噬相关蛋白4B(autophapy related 4B,ATG4B)的表达情况。CCK-8实验及台盼蓝染色实验观察在有或者无自噬抑制剂氯喹作用下以及shRNA下调He La细胞中的ATG4B后盐酸吡柔比星对He La细胞的杀伤效应的影响。结果盐酸吡柔比星能剂量依赖地抑制He La细胞的增殖并促进其死亡(P<0.05);盐酸吡柔比星处理能显著增加He La细胞中自噬小体的数量,并显著上调自噬标志分子LC3-II、自噬关键酶ATG4B的表达;自噬抑制剂氯喹可显著增强盐酸吡柔比星的杀细胞效应(P<0.05),shRNA干扰ATG4B可抑制盐酸吡柔比星对He La细胞中自噬的增强作用(P<0.05),并增强盐酸吡柔比星的杀细胞效应(P<0.05)。结论盐酸吡柔比星通过上调ATG4B而增强的自噬对He La细胞起保护作用。

关键词：盐酸吡柔比星自噬自噬相关蛋白4B 宫颈癌

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二氯乙酸盐增强盐酸吡柔比星杀伤肝癌细胞的研究

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第三军医大学学报 2016年第6期38卷 570-574页

作者：闫小晶倪振洪吴亚冉梁书龙秦利燕何凤田连继勤第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学学员旅11营重庆400038 第三军医大学西南医院血液科重庆400038

目的探讨二氯乙酸盐(Dichloroacetate,DCA)增强盐酸吡柔比星(Pirarubicin,THP)杀伤肝癌细胞的效果及可能机制。方法用40μmol/L DCA与不同浓度(0、200、400、600、800μmol/L)盐酸吡柔比星(THP)联合处理肝癌Hep G2细胞24 h,采用CCK-8法检测对细胞增殖的影响。然后用40μmol/L二氯乙酸盐与600μmol/L盐酸吡柔比星联合处理肝癌Hep G2细胞24 h,用Western blot检测细胞中PARP的表达变化及JNK的磷酸化水平;用DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS的水平。结果 DCA可显著增强不同浓度THP对肝癌Hep G2细胞的杀伤效果,与PBS组相比具有统计学差异(P<0.05);DCA联合THP处理24 h可显著升高细胞内的ROS水平,与PBS联合THP组相比具有统计学差异(P<0.05);此外,DCA联合THP可使Hep G2细胞中凋亡相关分子PARP的剪切明显增加,并增强JNK的磷酸化水平。抗氧化剂NAC可显著降低DCA与THP联合处理对Hep G2细胞中JNK的激活作用。结论 DCA可显著增强THP杀伤肝癌细胞效应,其机制可能与ROS/JNK通路的激活有关。

关键词：二氯乙酸盐肝癌盐酸吡柔比星活性氧簇 c-Jun氨基末端激酶

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过表达SARI通过抑制AP-1转录并下调抗凋亡分子Mcl-1的表达诱导宫颈癌细胞凋亡

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第三军医大学学报 2016年第4期38卷 361-366页

作者：卢星轩张艳曾益军郑英如刘东擘何凤田第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科重庆400042

目的探讨过表达SARI(suppressor of AP-1 and regulated by IFN)对宫颈癌细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法在He La细胞和Ca Ski细胞转染可表达SARI的质粒后,使用Real-time PCR和Western blot检测细胞中SARI表达水平的变化;CCK-8法... 详细信息

目的探讨过表达SARI(suppressor of AP-1 and regulated by IFN)对宫颈癌细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法在He La细胞和Ca Ski细胞转染可表达SARI的质粒后,使用Real-time PCR和Western blot检测细胞中SARI表达水平的变化;CCK-8法检测上述宫颈癌细胞模型的增殖;流式细胞术分析上述细胞模型的周期及凋亡;报告基因检测转录因子AP-1的转录活性;Western blot检测抗凋亡分子Mcl-1及Bcl-2的表达。结果成功构建过表达SARI的细胞模型。SARI表达水平上调后,细胞增殖受到抑制(P<0.01);早期凋亡细胞增加但细胞周期无明显变化。转录因子AP-1的转录活性及Mcl-1的表达明显下调(P<0.05),但Bcl-2的表达无明显变化。结论宫颈癌细胞中过表达SARI诱导宫颈癌细胞发生早期凋亡,可能是通过抑制AP-1的转录并下调抗凋亡分子Mcl-1的表达来实现的。

关键词： SARI 宫颈癌细胞增殖,AP-1 Mcl-1

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过表达长链非编码RNA H19促进miR-124-3p表达抑制肝癌细胞增殖

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第三军医大学学报 2016年第6期38卷 554-559页

作者：吕细林黄刚肖曼刘孟刚陈玥琦张楠张艳何凤田第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 海南医学院理学院生物化学与分子生物学教研室海口570102 第三军医大学大坪医院野战外科研究所肝胆外科重庆400042 第三军医大学学员旅15营重庆400038

目的探讨长链非编码RNA H19(long non-coding RNA H19,lncRNA H19)对miR-124-3p表达的影响及在肝癌细胞增殖中的作用。方法 Real-time PCR检测肝癌细胞系及临床标本中lncRNA H19和miR-124-3p的表达;在肝癌细胞系Hep G2和SMMC7721中过表达lncRNA H19,Real-time PCR检测miR-124-3p及其靶基因cyclin D1的表达;Western blot检测cyclin D1蛋白表达水平;CCK-8法检测lncRNA H19对细胞增殖的影响;过表达lncRNA H19同时加入antagomiR-124-3p后,检测miR-124-3p及其靶基因表达情况及细胞增殖情况。结果 lncRNA H19和miR-124-3p在肝癌细胞系及肝癌组织中均低表达(P<0.05);过表达lncRNA H19后miR-124-3p表达显著增加(P<0.05),miR-124-3p的靶基因cyclin D1蛋白和mRNA表达明显下降(P<0.05),细胞增殖受到抑制(P<0.05);过表达lncRNA H19同时干扰miR-124-3p后,细胞增殖抑制作用减弱(P<0.05)。结论长链非编码RNA H19通过促进miR-124-3p表达,进而抑制其靶基因cyclin D1表达而抑制肝癌细胞增殖。

关键词： lncRNA H19 miR-124-3p cyclin D1 肝癌细胞增殖

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姜黄素对乳腺癌细胞顺铂敏感性的影响

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第三军医大学学报 2016年第16期38卷 1809-1814页

作者：邹娇陈彬李强朱琳琳付晓红王祥卫第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 重庆市合川区人民医院普通外科重庆401520 第三军医大学新桥医院泌尿外科重庆400037

目的探讨姜黄素(curcumin)对乳腺癌细胞中顺铂(Cisplatin,CDDP)治疗敏感性的影响及其可能机制。方法 CCK-8检测、Hoechst染色观察CDDP、姜黄素单独及联合用药48 h对MCF7细胞增殖抑制和细胞凋亡的影响;Western blot分析MCF7细胞在CDDP(0... 详细信息

目的探讨姜黄素(curcumin)对乳腺癌细胞中顺铂(Cisplatin,CDDP)治疗敏感性的影响及其可能机制。方法 CCK-8检测、Hoechst染色观察CDDP、姜黄素单独及联合用药48 h对MCF7细胞增殖抑制和细胞凋亡的影响;Western blot分析MCF7细胞在CDDP(0、1.25、2.5、5、10、20μg/m L)、姜黄素(0、1、5、20、30、50、100μmol/L)单独及联合处理后FEN1(flap endonuclease 1)表达水平的变化;CCK-8检测沉默FEN1对MCF7细胞中CDDP敏感性的影响。结果 CDDP、姜黄素均可以剂量依赖方式抑制MCF7细胞增殖,其IC50分别为5、30μmol/L;与单独2μg/m L CDDP处理组比较,2μg/m L CDDP联合20μmol/L姜黄素、30μmol/L姜黄素处理组对细胞增殖的抑制效应明显增强[分别为(84.1±0.8)%、(51.1±0.5)%、(29.4±0.3)%,P<0.05];与单独20μmol/L姜黄素处理组比较,20μmol/L姜黄素联合2μg/m L CDDP、5μg/m L CDDP处理组对细胞增殖的抑制效应也明显增强[分别为(76.9±0.7)%、(42.4±0.3)%、(31.6±0.4)%,P<0.05];2μg/m L CDDP联合20μmol/L姜黄素组的细胞凋亡明显增强(P<0.05);与Control siRNA组比较,FEN1 siRNA+CDDP组可显著增强CDDP抑制MCF7细胞增殖的敏感性[(25.4±0.3)%vs(18.7±0.2)%,P<0.05];CDDP增殖抑制无效浓度或低浓度时,FEN1蛋白的表达随CDDP的处理剂量依赖性上调,而姜黄素可剂量依赖性下调FEN1蛋白表达;与单独CDDP和姜黄素处理组比较,2μg/m L CDDP联合20μmol/L姜黄素组可显著降低FEN1蛋白表达(P<0.05)。结论姜黄素可增强CDDP对乳腺癌细胞的敏感性,其机制与降低细胞FEN1的表达有关。

关键词：姜黄素 Cisplatin Fen1 乳腺癌

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