检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2006年第14期28卷 1464-1466页

作者：连继勤戴旭芳李晓辉何凤田第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 重庆师范大学特殊教育学院重庆400047 第三军医大学基础医学部药理学教研室重庆400038

目的克隆并表达具有生物学活性的人层黏连蛋白α4链LG1组件(hum an lam in in alpha4 chain LG1 modu le,hLNα4LG1)蛋白。方法RT-PCR扩增hLNα4LG1的cDNA片段并将其插入pMD-18T载体进行测序。将测序片段亚克隆入原核表达载体pET-28 a并... 详细信息

目的克隆并表达具有生物学活性的人层黏连蛋白α4链LG1组件(hum an lam in in alpha4 chain LG1 modu le,hLNα4LG1)蛋白。方法RT-PCR扩增hLNα4LG1的cDNA片段并将其插入pMD-18T载体进行测序。将测序片段亚克隆入原核表达载体pET-28 a并在BL21(DE3)大肠杆菌中进行表达,W estern b lot对表达蛋白进行鉴定。用N i-NTA亲和柱对目的蛋白进行纯化,并通过细胞黏附与伸展实验对其生物学活性进行检测。结果成功克隆了hLNα4LG1的cDNA片段,SDS-PAGE及W estern b lot分析显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET28 a-LG1总蛋白中出现一条分子量为26×103的新蛋白带。与对照组相比,N i-NTA亲和层析纯化的目的蛋白有明显促进A549细胞伸展与黏附的作用。结论克隆并原核表达了hLNα4LG1蛋白,目的蛋白具有促进细胞黏附与伸展的活性,为深入研究hLNα4LG1的功能奠定了基础。

关键词： hLNα4LG1 基因克隆原核表达

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铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶大亚单位DNA结合能力的测定

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第三军医大学学报 2006年第22期28卷 2205-2208页

作者：申晓冬张克斌李明周莹冰蹇锐胡晓梅陈志瑾饶贤才胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室第三军医大学新桥医院医学实验技术中心重庆400037

目的检测铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶大亚单位与噬菌体基因组末端cos位点的结合能力。方法通过PCR扩增出末端酶大亚单位编码基因tls,经pMD-T18载体克隆至表达载体pQE31上,IPTG诱导表达,获得包涵体蛋白,用包涵体裂解液溶解包涵体,通过N... 详细信息

目的检测铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶大亚单位与噬菌体基因组末端cos位点的结合能力。方法通过PCR扩增出末端酶大亚单位编码基因tls,经pMD-T18载体克隆至表达载体pQE31上,IPTG诱导表达,获得包涵体蛋白,用包涵体裂解液溶解包涵体,通过Ni-NTA亲和层析,分离出重组目的蛋白rTLS,透析复性后,与生物素标记的基因组末端cos片段进行结合反应,通过EMSA检测DNA滞后现象。结果成功构建了表达载体pQE-tls,获得了纯化的具有生物学活性的重组末端酶大亚单位rTLS,EMSA结果证实结合rTLS后的cos片段与无蛋白加入的对照组相比明显滞后。结论重组噬菌体PaP3末端酶大亚单位在体外可与基因组末端cos片段发生特异性结合,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。

关键词：末端酶大亚单位噬菌体PaP3 EMSA 蛋白表达

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哮喘人群STAT6基因多态性的研究

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免疫学杂志 2006年第3期22卷 308-310页

作者：吴波李亚斐熊鸿燕张立第三军医大学军事预防医学院军队流行病学教研室第三军医大学基础医学部分子生物学教研室重庆400038

目的研究信号转导和转录激活因子6(STAT6)基因3′非翻译区G2964A位点多态性与重庆哮喘人群的易感性及血浆IgE水平的关系。方法用聚合酶链反应和单链构像多态性(PCR-SSCP)的方法对42例哮喘患者及42例对照进行了STAT6基因G2964A位点多态... 详细信息

目的研究信号转导和转录激活因子6(STAT6)基因3′非翻译区G2964A位点多态性与重庆哮喘人群的易感性及血浆IgE水平的关系。方法用聚合酶链反应和单链构像多态性(PCR-SSCP)的方法对42例哮喘患者及42例对照进行了STAT6基因G2964A位点多态性分析。结果哮喘组与对照组STAT6基因G2964A位点的基因型频率之间无显著性差异(P>0.05),并且哮喘组各基因型之间均与血浆IgE升高无确定关系(P>0.05)。结论G2964A位点多态性与重庆人群哮喘易感性可能无明显相关性。

关键词： STAT6 基因多态性哮喘 PCR-SSCP

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肌钙蛋白I2与“孤儿”核受体ERRα1相互作用位点的鉴定

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中国生物化学与分子生物学报 2006年第3期22卷 212-216页

作者：李渝萍陈敏陈彬陈健李强娄桂予周度金第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学新桥医院检验科重庆400038

为深入研究肌钙蛋白I2（TNNI2）作为核受体相互作用蛋白参与核受体基因表达调控的分子机制，采用缺失突变联合酵母双杂交技术证明了TNNI2与ERRα1的相互作用位于TNNI2的1～128位氨基酸残基区域．该区域包括TNNI2蛋白的N末端、抑制肽段... 详细信息

为深入研究肌钙蛋白I2（TNNI2）作为核受体相互作用蛋白参与核受体基因表达调控的分子机制，采用缺失突变联合酵母双杂交技术证明了TNNI2与ERRα1的相互作用位于TNNI2的1～128位氨基酸残基区域．该区域包括TNNI2蛋白的N末端、抑制肽段（96～116位氨基酸残基）和一个核受体结合位点LXXLL模序（即NR盒）．哺乳细胞瞬时共转染实验证实，TNNI21-128缺失突变体不具备辅助活化功能，并能作为负显性突变体完全抑制野生型TNNI2的辅活化作用．研究充分证明TNNI2与核受体的相互作用定位于TNNI2蛋白1～128氨基酸残基，并从侧面进一步证实了TNNI2能辅助核受体反式激活作用的功能．

关键词：肌钙蛋白I ERRα1 相互作用位点核受体

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雄激素受体在大鼠触须毛囊干细胞中的表达研究

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第三军医大学学报 2006年第9期28卷 889-891页

作者：李远宾王韵杨恬向明明第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 第三军医大学西南医院皮肤科重庆市皮肤性病研究所重庆400038

目的探讨在毛囊周期的3个不同时期(生长期、退化期和静止期)中大鼠毛囊干细胞中以及体外培养的毛囊干细胞中雄激素受体(androgen receptor,AR)的表达规律及其意义。方法采用免疫组织化学方法检测AR表达,采用总RNA提取法及RT-PCR检测AR m... 详细信息

目的探讨在毛囊周期的3个不同时期(生长期、退化期和静止期)中大鼠毛囊干细胞中以及体外培养的毛囊干细胞中雄激素受体(androgen receptor,AR)的表达规律及其意义。方法采用免疫组织化学方法检测AR表达,采用总RNA提取法及RT-PCR检测AR mRNA的表达情况。结果①在体情况下,生长期、退化期和静止期毛囊干细胞中均有AR的表达,AR mRNA在生长期呈强表达,而在退化期和静止期表达微弱;②体外情况下,培养的毛囊干细胞中有AR的表达。结论毛囊干细胞在整个毛囊周期中均有AR的表达,是雄激素作用的靶细胞;AR mRNA在毛囊周期中呈规律性表达,提示雄激素与其受体的相互作用可能对毛囊干细胞的分化具有重要的促进作用。

关键词：雄激素受体毛囊干细胞毛囊周期细胞分化

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针对单克隆抗体MGb1的重组抗独特型抗体的筛选与鉴定(英文)

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免疫学杂志 2006年第1期22卷 86-89页

作者：郑英如李蓉芬李力黄刚张立胡大强第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科重庆400042

目的利用噬菌体呈现技术筛选针对抗胃癌单克隆抗体(简称单抗)MGb1的重组抗独特型抗体(抗-Id),为研制胃癌重组抗-Id瘤苗提供候选分子。方法以单克隆抗体MGb1免疫Balb/c小鼠,取脾分离mRNA。RT-PCR分别扩增抗体VL和VHcDNA,经linker DNA连... 详细信息

目的利用噬菌体呈现技术筛选针对抗胃癌单克隆抗体(简称单抗)MGb1的重组抗独特型抗体(抗-Id),为研制胃癌重组抗-Id瘤苗提供候选分子。方法以单克隆抗体MGb1免疫Balb/c小鼠,取脾分离mRNA。RT-PCR分别扩增抗体VL和VHcDNA,经linker DNA连接形成ScFv DNA。将ScFv DNA与载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经M13KO7感染后,获得重组噬菌体抗体ScFv文库。以单抗MGb1对文库进行4轮淘选后,随机挑取克隆经ELISA筛选呈现抗-Id ScFv的噬菌体单克隆,进而经竞争ELISA对其所属抗-Id类型进行初步鉴定。结果VL和VHcDNA分别约为320和340 bp,ScFv DNA约为750 bp。抗体ScFv文库经四轮淘选后,在随机筛检的50个克隆中得到18个呈现抗-Id ScFv的噬菌体单克隆。在18个克隆中,有4个呈现β或γ型抗-Id ScFv。结论经重组噬菌体抗体技术成功地筛选到了针对单抗MGb1的噬菌体呈现型抗-IdScFv,从而为进一步获得能诱导抗胃癌免疫的抗-Id ScFv奠定了基础。

关键词：胃癌抗独特型抗体噬菌体呈现技术肿瘤疫苗

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TAT修饰的小鼠IFNγ的制备

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第三军医大学学报 2006年第8期28卷 795-797页

作者：胡大强何凤田郑英如李蓉芬高会广龚薇黄刚第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科重庆400042

目的制备小鼠IFNγ-TAT,为TAT影响IFN体内分布等研究作准备。方法采用RT-PCR扩增编码mIFNγ的cDNA序列,经3轮PCR扩增编码mIFNγTAT片段,克隆到质粒pUC19,测序鉴定正确后构建到pQE80L表达质粒载体中,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后1.2%琼脂糖... 详细信息

目的制备小鼠IFNγ-TAT,为TAT影响IFN体内分布等研究作准备。方法采用RT-PCR扩增编码mIFNγ的cDNA序列,经3轮PCR扩增编码mIFNγTAT片段,克隆到质粒pUC19,测序鉴定正确后构建到pQE80L表达质粒载体中,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后1.2%琼脂糖凝胶电泳鉴定;利用SDSPAGE和Westernblot检测表达的目的蛋白。结果PCR扩增得到编码mIFNγTAT的cDNA片段,测序结果正确,SDSPAGE和Westernblot分析显示重组蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达。结论成功制备了TAT修饰的小鼠IFNγ,为进一步实验室研究奠定了基础。

关键词：干扰素蛋白转导域构建表达蛋白纯化

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人可溶性TALL-2突变体的原核表达及纯化

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第三军医大学学报 2006年第23期28卷 2346-2348页

作者：刘宝英郑英如何凤田李蓉芬龚薇黄刚第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学坪医院野战外科研究所妇产科重庆400042

目的制备人可溶性(solubleTNFandapoptosisligand-relatedleukocyte-expressedligand2,sTALL-2)的3种突变体,为寻找sTALL-2的竞争抑性制剂创造条件。方法采用一步反向PCR,将编码sTALL-2第187位谷氨酰胺(Gln)的核苷酸序列分别置换为丝氨酸(Ser)、天冬氨酸(Asp)、精氨酸(Arg)的编码序列,测序正确后,亚克隆到原核表达载体pQE-80L;经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Westernblotting鉴定表达产物,Ni2+-NTA柱层析纯化目和蛋白,进而经Sepha-dexG-75柱层析,获得同源三聚体分子。结果经一步反向PCR扩增后均得到441bp的DNA片段,测序分析表明分别为sTALL-2第187位谷氨酰胺残基置换为Ser、Asp、Arg的序列,3种突变体蛋白在大肠杆DH5α中获得成功表达,并得以有效纯化。结论成功制备了sTALL-2的3种突变体蛋白,为进一步探讨sTALL-2结构与功能的关系及寻找基于sTALL-2突变体的抗肿瘤分子奠定了基础。

关键词： sTALL-2 突变体原核表达蛋白纯化

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光化学作用增强阳离子聚合物介导EGFP转染结肠癌

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第三军医大学学报 2006年第9期28卷 922-925页

作者：肖卫东陈炜陈祖林刘嘉葛海燕第三军医大学新桥医院普通外科重庆400037 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的观察光化学基因转染技术对阳离子聚合物介导目的DNA转染结肠癌细胞效率的影响。方法以结肠癌细胞SW 480、HT29为靶细胞,激光共聚焦显微镜观察光敏剂TPPS2 a的胞内分布,MTT法观察基于TPPS2 a的光化学作用对结肠癌细胞的生长抑制作用... 详细信息

目的观察光化学基因转染技术对阳离子聚合物介导目的DNA转染结肠癌细胞效率的影响。方法以结肠癌细胞SW 480、HT29为靶细胞,激光共聚焦显微镜观察光敏剂TPPS2 a的胞内分布,MTT法观察基于TPPS2 a的光化学作用对结肠癌细胞的生长抑制作用,同时以阳离子聚合物PEI为DNA载体,EGFP质粒为目的DNA,通过流式细胞技术对比观察光化学作用对阳离子聚合物介导EGFP质粒转染结肠癌细胞的影响。结果TPPS2 a在2种结肠癌细胞系呈颗粒状分布于细胞质;基于TPPS2 a的光动力效应对结肠癌细胞的生长抑制作用随光照剂量增大而逐渐加大,SW 480细胞取得IC50的光照时间为约6 m in,而HT29取得IC50的光照时间为约12 m in;与单纯质粒转染组和阳离子聚合物转染组相比,光化学作用可将阳性细胞率分别提高至(29.61±1.15)(SW 480细胞)和(23.47±0.62)(HT29细胞)(P<0.05)。结论TPPS2 a的胞内分布与内吞密切相关;基于TPPS2 a的光化学细胞毒性作用呈剂量依赖性;与单纯质粒转染组和阳离子聚合物转染组相比,光化学作用可明显提高阳离子聚合物介导转染目的DNA的阳性细胞率。

关键词：光敏剂光动力疗法阳离子聚合物转染

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IFN-β基因启动子调控区域的分析及IRF-3报告基因的构建

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第三军医大学学报 2006年第9期28卷 896-899页

作者：蒋静胡福泉蹇锐张伟邓少丽程小星第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的对IRF-3的主要靶基因———小鼠IFN-β基因启动子区域进行分析并构建IRF-3报告基因载体。方法将小鼠IFN-β基因启动子全序列以及不同截短片段克隆到无启动子的pGF3basic/enhancer质粒中,以EGFP为报告基因,转染小鼠Raw264.7巨噬细胞... 详细信息

目的对IRF-3的主要靶基因———小鼠IFN-β基因启动子区域进行分析并构建IRF-3报告基因载体。方法将小鼠IFN-β基因启动子全序列以及不同截短片段克隆到无启动子的pGF3basic/enhancer质粒中,以EGFP为报告基因,转染小鼠Raw264.7巨噬细胞系后观察细胞对LPS刺激的反应。结果IFN-β启动子PRD调控区域上游序列、PRD I区,PRD II区和PRD IV区缺失后,LPS同样能诱导EGFP报告基因的表达。只保留PRD区及IFN-β启动子核心区的载体转染Raw264.7细胞后,可以在LPS刺激下诱导EGFP报告基因的高表达。结论构建了能检测IRF-3活性的报告基因载体,为进一步研究LPS激活IRF-3的信号转导通路奠定了基础。

关键词： IRF-3 IFN-β 启动子调控元件报告基因

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