检索结果-内蒙古大学图书馆

肠出血性大肠杆菌O157:H7 EspA与IntiminC300融合蛋白的构建表达

解放军检验医学杂志 2007年第1期3卷 62-67页

作者：刘艳青毛旭虎王庆旭易勇邹全明第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

目的构建表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7 Ⅲ型分泌蛋白EspA与紧密粘附素C-端免疫保护性片断(IntiminC300)的融合蛋白(EspA-IntiminC300).方法采用PCR技术从EHEC O157:H7基因组中扩增EspA的编码基因espA及IntiminC300的编码基因eaeC300,T-A克隆后依次构建至表达载体pET-28a(+),转化宿主细胞*** BL21 (DE3),测序鉴定,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测其表达量及表达形式,亲和层析法纯化目的蛋白,免疫印迹分析免疫反应性.结果 PCR法H-EHEC O157:H7基因组中分别扩增出了约580bp(espA)和900bp(eaeC300)的目的片段,将二者融合构建了重组质粒pET-28a(+)-espA-eaeC300,测序结果与理论预测值一致性为99.9%(1501/1502).融合蛋白在工程菌中表达量约40%,PAGE初步测定目的蛋白的相对分子量(Mr)约54×103Da,破菌后电泳证实目的蛋白主要以包涵体形式表达,包涵体洗涤后纯化,获得目的蛋白纯度约85%.免疫印迹显示融合蛋白能分别与兔抗EspA和IntiminC300血清发生免疫反应.结论高效表达了融合蛋白(EspA-IntiminC300),此融合蛋白具有良好的免疫反应性和免疫原性,为研制EHEC O157:H7多亚单疫苗奠定了基础.

关键词：肠血性大肠杆菌(EHEC)O157 H7 Ⅲ型分泌蛋白EspA 紧密粘附索 C-端免疫保护性片断(IntiminC300) 融合蛋白疫苗

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一种新型原核融合表达载体的设计、构建及应用

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解放军检验医学杂志 2010年第1期6卷 46-54页

作者：程琰毛旭虎王庆旭余抒刘艳青张晓丽宁亚蕾邹全明第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

目的利用EspA(肠出血性大肠杆菌O157:H7Ⅲ型分泌蛋白A)作为融合伴体分子,构建一种高效原核融合表达载体.方法在EspA的羧基端设计-Linker,包括柔韧区,肠激酶酶切位点和多克隆位点.PCR分别扩增espA、Linker基因,利用重叠延伸PCR技术获... 详细信息

目的利用EspA(肠出血性大肠杆菌O157:H7Ⅲ型分泌蛋白A)作为融合伴体分子,构建一种高效原核融合表达载体.方法在EspA的羧基端设计-Linker,包括柔韧区,肠激酶酶切位点和多克隆位点.PCR分别扩增espA、Linker基因,利用重叠延伸PCR技术获得二者融合基因,T-A克隆后插入表达载体Pet-28a(+),构建高效原核表达载体-pEspA.分别将IL-24、GFP等六种基因克隆人pEspA,转化*** BL21(DE3),IPTG诱导融合蛋白表达,SDS-PAGE检测融合蛋白.以EspA单克隆抗体亲和层析柱纯化融合蛋白,融合蛋白经肠激酶酶切后再通过Ni<'2+>亲和层析柱获得外源蛋白.分别利用MTT法和紫外光激发实验鉴定IL-24、GFP生物学活性.结果构建的表达载体pEspA可高效表达外源目的蛋白,使本身不表达或表达量低的目的蛋白获得高效表达.先以EspA单克隆抗体亲和层析一步纯化获得高纯度的融合蛋白,融合蛋白经肠激酶酶切后再以Ni<'2+>亲和层析柱获得了外源蛋白,同时生物学活性实验显示纯化的IL-24、GFP具有较好的生物学活性.结论成功构建了基于EspA的新型高效原核融合表达载体,为蛋白的融合表达及纯化又提供了一种可供选择的工具.

关键词： EspA 融合表达载体肠出血性大肠杆菌O157:H7

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幽门螺杆菌尿素酶B亚单位Th表位鉴定

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位Th表位鉴定

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中华医学会第七次全国消化病学术会议

作者：石云吴超周维英邹全明第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心

目的表位疫苗是近年来发展起来的一种独特的疫苗设计思路,是目前研制感染性疾病、恶性肿瘤疫苗以及自身免疫性疾病等疫苗设计的新方向。基于表位的疫苗设计可以特异性的增强保护性免疫反应的强度而排除非保护性甚至是抑制性免疫反应的... 详细信息

目的表位疫苗是近年来发展起来的一种独特的疫苗设计思路,是目前研制感染性疾病、恶性肿瘤疫苗以及自身免疫性疾病等疫苗设计的新方向。基于表位的疫苗设计可以特异性的增强保护性免疫反应的强度而排除非保护性甚至是抑制性免疫反应的影响。幽门螺杆菌(Hp)自然感染时,机体存在免疫

关键词：尿素酶细胞表位限制性亚单位幽门螺杆菌

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重组卡介苗的研究进展

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国际检验医学杂志 2007年第10期28卷 926-929页

作者：宁元元（综述）毛旭虎（审校）邹全明（审校）第三军医大学检验系临床微生物与免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

卡介苗（BCG）不仅是目前预防结核病的有效疫苗，而且随着人们对其生物遗传学性质的深入研究证实，许多外源基因都可在BCG中获得表达且具有较好的免疫效果。利用BCG表达外源基因制备重组卡介苗在预防及治疗疾病方面具有潜在的应用前景。

关键词：卡介苗重组活载体疫苗穿梭表达载体

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EspA-Stx2A1融合蛋白的表达、纯化及其免疫学活性

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解放军检验医学杂志 2010年第1期6卷 35-41页

作者：程琰罗萍张卫军顾江邹全明毛旭虎第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆38SSS

目的在原核表达系统巾表达并纯化肠出血性大肠杆菌O157:H7(EHEC O157:H7)Ⅲ型分泌蛋EspA与Stx2毒素的A1亚单位(Stx2A1)的融合蛋白.方法 PCR方法扩增espA、stx2A1全长基因,利用重叠延伸PCR技术获得espA-stx2A1融合基因,T-A克隆后插入表... 详细信息

目的在原核表达系统巾表达并纯化肠出血性大肠杆菌O157:H7(EHEC O157:H7)Ⅲ型分泌蛋EspA与Stx2毒素的A1亚单位(Stx2A1)的融合蛋白.方法 PCR方法扩增espA、stx2A1全长基因,利用重叠延伸PCR技术获得espA-stx2A1融合基因,T-A克隆后插入表达载体Pet-28a(+),构建原核表达载体Pet-28a(+)-espA-stx2A1,转化大肠杆菌BL21(DE3),分别在37℃和25℃用IPTG诱导融合蛋白表达,SDS-PAGE检测其表达量及表达形式.以EspA单克隆抗体亲和层析柱纯化目的蛋白,通过免疫动物实验,Western blotting鉴定其免疫原性和反应原性.将融合蛋白EspA-stx2A1皮下注射免疫BALB/c小鼠,再以天然Stx2毒素腹腔注射免疫后的小鼠,观察攻毒保护效果;通过细胞毒实验检测融合蛋白免疫小鼠后获得的抗血清在体外是否具有中和毒素的作用.结果重叠延伸PCR方法扩增出了1319bp(espA-stx2A1)的融合基因片段并构建了重组表达载体,重组质粒中目的基因序列与理论值一致性为100%;目的蛋白在25℃时的表达量明显高于37℃时的表达量,两种温度条件下目的蛋白均主要以包涵体形式呈现;25℃时的诱导表达量约占菌体总蛋白的40%,以亲和层析一步纯化可获得纯度为90%的重组蛋白;Western blotting结果证实融合蛋白与EspA单克隆抗体和Stx2A1单克隆抗体均发生特异免疫反应,以目的蛋白免疫Balb/c小鼠制备的抗血清能分别与O157:H7的EspA、Stx2A发生特异性免疫反应.融合蛋白免疫小鼠能够抵御致死剂量天然Stx2毒素攻击,致死保护率达到95%.免疫BALB/c小鼠后血清特异性抗体可以中和天然Stx2毒素,使Hela细胞保持正常形态.结论成功表达了EspA-Stx2A1融合蛋白,纯化的融合蛋白EspA-Stx2A1显示了较好的免疫保护效果,为研制EHEC O157:H7基因工程多亚单位疫苗奠定了基础.

关键词：肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7 EspA Stx2A1 融合蛋白免疫活性

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重组幽门螺杆菌AhpC基因的克隆表达及其初步纯化

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重庆医学 2006年第11期35卷 1012-1014,1018页

作者：张卫军邹全明毛旭虎罗萍解庆华第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

目的克隆表达幽门螺杆菌(helicobacter pylori)AhpC基因,为筛选预防或治疗幽门螺杆菌的疫苗保护性抗原奠定基础。方法用PCR方法从临床分离株9806的染色体DNA中扩增出AhpC基因片段,将目的基因插入表达载体pET-11c中,重组载体pET-AhpC经DN... 详细信息

目的克隆表达幽门螺杆菌(helicobacter pylori)AhpC基因,为筛选预防或治疗幽门螺杆菌的疫苗保护性抗原奠定基础。方法用PCR方法从临床分离株9806的染色体DNA中扩增出AhpC基因片段,将目的基因插入表达载体pET-11c中,重组载体pET-AhpC经DNA测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌*** BL21(DE3),IPTG诱导表达。采用阴离子交换层析纯化蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果PCR扩增的AhpC基因长度为597bp,经酶切和测序分析,插入到载体的基因片段与GenBank公布的序列相似性达98%,SDS-PAGE显示,经IPTG诱导目的蛋白占总蛋白的28.7%,经纯化后,蛋白纯度达70%以上。Western blot检测该蛋白与兔抗Hp的多克隆抗血清发生结合反应。结论成功构建了AhpC表达载体pET-AhpC,并在大肠杆菌中高效表达。

关键词：幽门螺杆菌 AhpC基因克隆

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单纯疱疹病毒型特异性的鉴别诊断

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国际检验医学杂志 2006年第8期27卷 739-740页

作者：姬小薇毛旭虎邹全明第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)分为HSV-1、HSV-2两个型别。两型的DNA有50%的同源性。目前血清学检测无法区分HSV型别。有效地鉴别HSV两型对疾病的诊断治疗和患者的身心健康至关重要。现对Ⅰ、Ⅱ型单纯疱疹病毒的鉴别诊断方法... 详细信息

单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)分为HSV-1、HSV-2两个型别。两型的DNA有50%的同源性。目前血清学检测无法区分HSV型别。有效地鉴别HSV两型对疾病的诊断治疗和患者的身心健康至关重要。现对Ⅰ、Ⅱ型单纯疱疹病毒的鉴别诊断方法作一综述。

关键词：单纯疱疹病毒属疱疹病毒Ⅰ型,人疱疹病毒Ⅱ型,人诊断,鉴别

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肠出血性大肠杆菌 (EHEC) O157:H7 志贺毒素研究进展

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解放军检验医学杂志 2007年第1期3卷 24-27页

作者：陈洪章邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7于1975年被首次分离,为革兰氏阴性杆菌,对酸耐受性强,在pH3～5条件下,可长期生存,能产生致死性志贺毒素 (Shiga toxin,Stx),1982年被确认为严重致病菌.其感染具有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性和抗...

肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7于1975年被首次分离,为革兰氏阴性杆菌,对酸耐受性强,在pH3～5条件下,可长期生存,能产生致死性志贺毒素 (Shiga toxin,Stx),1982年被确认为严重致病菌.其感染具有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性和抗生素治疗可加剧病情的危险性等特点,已经成为全球性的公共卫生问题,对人们的健康构成了巨大威胁.

关键词：

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新型免疫调节肽佐剂CEL-1000

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医学研究生学报 2006年第3期19卷 261-262,266页

作者：刘艳青毛旭虎邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

CEL-1000是一种新型的免疫调节肽,它在抗疟疾、人类免疫缺陷病毒(H IV)、单纯疱疹病毒(HSV)感染和肿瘤疫苗的研制方面具有潜在的佐剂活性,能促进1型辅助性T淋巴细胞(Th1)型免疫应答。

关键词： CEL-1000肽佐剂 1型辅助性T淋巴细胞型免疫应答

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幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白分子内佐剂融合疫苗的构建、纯化及活性研究

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中国药业 2006年第18期15卷 11-13页

作者：高原邹全明张卫军第三军医大学临床微生物学及临床免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

目的构建幽门螺杆菌(HP)中性粒细胞激活蛋白基因(napA)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(heat-labileenterotoxinBsubunit,LTB)的分子内佐剂融合蛋白疫苗,并通过口服免疫小鼠研究其抗原性,为疫苗的开发奠定基础。方法利用分子克隆技术构... 详细信息

目的构建幽门螺杆菌(HP)中性粒细胞激活蛋白基因(napA)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(heat-labileenterotoxinBsubunit,LTB)的分子内佐剂融合蛋白疫苗,并通过口服免疫小鼠研究其抗原性,为疫苗的开发奠定基础。方法利用分子克隆技术构建携带napA-LTB融合基因的重组原核表达质粒pET-22b-napA-LTB,转化***21(DE3),进行原核表达,重组表达蛋白采用亲和层析柱ChelatingSepharose进行纯化,Tris-Tricine电泳和Westernblot鉴定,GM1-ELISA检测rNAP-LTB与神经节苷脂的结合。口服免疫BALB/c小鼠,检测重组融合蛋白的抗原性。结果重叠延伸PCR扩增出了约760bp的napA-LTB融合基因,其核苷酸序列与GenBank公布的相关序列一致。重组融合蛋白以可溶和包涵体两种形式表达,表达量约占细菌总蛋白的30%,Tris-Tricine初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约29000,纯化后纯度大于90%。Westernblot检测其具有良好的抗原性。该重组蛋白保持了与GM1神经节苷脂结合的生物学活性。动物实验表明,分子内佐剂疫苗口服免疫小鼠后血清特异性IgG,IgA和胃黏液、肠黏液的抗原特异性sIgA抗体显著高于无佐剂单一亚单位疫苗。结论所获得的重组融合蛋白具有良好的抗原性和黏膜佐剂活性,为进一步的疫苗研究奠定了基础。

关键词：幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位疫苗分子内佐剂

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