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下调Pygo2抑制脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭及其cyclin D1的表达

第二军医大学学报 2011年第2期32卷 128-133页

作者：陈玉英王海东王占祥刘希尧谭国伟沈上杭厦门大学附属第一医院神经外科厦门361003 重庆邮电大学生物信息学院生物技术教学部重庆400065

目的构建RNA干扰(RNAi)重组体抑制Pygo2的表达,并探讨其对脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭的影响及其机制。方法针对Pygo2cDNA序列设计并合成一对特异性的含有短发卡的寡核苷酸序列及其阴性对照序列,经退火后插入pSuper中构建重组体。经Eco... 详细信息

目的构建RNA干扰(RNAi)重组体抑制Pygo2的表达,并探讨其对脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭的影响及其机制。方法针对Pygo2cDNA序列设计并合成一对特异性的含有短发卡的寡核苷酸序列及其阴性对照序列,经退火后插入pSuper中构建重组体。经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染脑胶质瘤U251细胞,采用实时定量PCR和蛋白质印迹方法检测Pygo2shRNA对U251细胞Pygo2mRNA和蛋白表达的干扰效果,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布,BrdU掺入法检测DNA合成,Transwell检测细胞侵袭。采用蛋白质印迹和免疫荧光法检测Pygo2shRNA对U251细胞cyclin D1、β-catenin蛋白水平和亚细胞定位的影响。结果双酶切和测序鉴定证实插入序列完全正确;Pygo2shRNA显著抑制了U251细胞Pygo2mRNA和蛋白的表达;Pygo2shRNA抑制U251细胞Pygo2表达后,细胞增殖显著降低,细胞更多地阻滞在G1期,且BrdU掺入显著减少,侵袭细胞数显著减少。此外,抑制Pygo2表达可显著下调U251细胞cyclin D1的表达但不改变其亚细胞定位。U251细胞β-catenin表达及其亚细胞定位无明显改变。结论成功构建了抑制Pygo2表达的重组载体。抑制Pygo2表达能有效地抑制脑胶质瘤U251细胞DNA合成,可能通过下调Wnt信号靶基因cyclin D1的表达,使细胞阻滞于G1期而抑制细胞增殖和侵袭。

关键词： Pygo2 胶质瘤细胞增殖短发夹RNA

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抑制Pygo2表达对U251细胞增殖的影响

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第三军医大学学报 2011年第5期33卷 497-501页

作者：陈玉英王海东王占祥谭国伟刘希尧沈上杭厦门大学附属第一医院神经外科福建厦门361003 重庆邮电大学生物信息学院生物技术教学部重庆400065

目的构建RNA干扰(RNAi)重组体抑制Pygo2的表达,并探讨其对脑胶质瘤U251细胞增殖的影响。方法针对Pygo2 cDNA序列设计并合成一对特异性的含有"短发卡"的寡核苷酸序列及其随机对照序列,经退火后插入pSuper中构建重组体。经EcoR... 详细信息

目的构建RNA干扰(RNAi)重组体抑制Pygo2的表达,并探讨其对脑胶质瘤U251细胞增殖的影响。方法针对Pygo2 cDNA序列设计并合成一对特异性的含有"短发卡"的寡核苷酸序列及其随机对照序列,经退火后插入pSuper中构建重组体。经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染脑胶质瘤U251细胞,采用RT-PCR和Western blot检测Pygo2 shRNA对U251细胞Pygo2 mRNA和蛋白的干扰效果,应用克隆形成实验和MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,BrdU掺入法检测DNA合成。结果双酶切和测序鉴定证实插入序列完全正确;Pygo2 shRNA显著抑制了其mRNA和蛋白的表达,MTT分析其细胞增殖也被显著抑制(P<0.01)。与scr shRNA组的克隆形成数(78.9±6.8)%相比,Pygo2 shRNA组克隆数(55.4±5.2)%显著减少(P<0.05)。与对照组的BrdU掺入率(20.96±2.19)%相比,Pygo2 shRNA组的BrdU掺入率(8.81±0.56)%显著减少(P<0.05),而scr shRNA组的BrdU掺入率是(20.35±1.73)%无显著变化。而且,Pygo2 shRNA使U251细胞处于S期百分比显著减少、G1期显著增加(P<0.01),致细胞周期阻滞于G1期。结论成功构建了抑制Pygo2表达的重组载体,下调Pygo2表达能有效地抑制脑胶质瘤U251细胞DNA合成,使细胞阻滞于G1期,抑制细胞增殖。

关键词： Pygo2 胶质瘤细胞增殖短发夹RNA

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下调PYG02抑制脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭及其CYCLIN D1的表达

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第二军医大学学报 2011年第2期32卷 128-133页

作者：陈玉英王海东王占祥刘希尧谭国伟沈上杭厦门大学附属第一医院神经外科厦门361003 重庆邮电大学生物信息学院生物技术教学部重庆400065

目的构建RNA干扰（RNAi）重组体抑制Pyg02的表达，并探讨其对脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭的影响及其机制。方法针对Pyg02cDNA序列设计并合成一对特异性的含有短发卡的寡核苷酸序列及其阴性对照序列，经退火后插入pSuper中构建重组体。... 详细信息

目的构建RNA干扰（RNAi）重组体抑制Pyg02的表达，并探讨其对脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭的影响及其机制。方法针对Pyg02cDNA序列设计并合成一对特异性的含有短发卡的寡核苷酸序列及其阴性对照序列，经退火后插入pSuper中构建重组体。经EcoRI和HindⅢ双酶切鉴定和DNA测序后，用脂质体2000将其转染脑胶质瘤U251细胞，采用实时定量PCR和蛋白质印迹方法检测Pyg02shRNA对U251细胞Pyg02 mRNA和蛋白表达的干扰效果，MTT法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期分布，BrdU掺人法检测DNA合成，Transwell检测细胞侵袭。采用蛋白质印迹和免疫荧光法检测Pyg02 shRNA对U251细胞cyclinD1、βcatenin蛋白水平和亚细胞定位的影响。结果双酶切和测序鉴定证实插入序列完全正确；Pyg02 shRNA显著抑制了U251细胞Pyg02 mRNA和蛋白的表达；Pyg02 shRNA抑制U251细胞Pyg02表达后，细胞增殖显著降低，细胞更多地阻滞在G期，且BrdU掺人显著减少，侵袭细胞数显著减少。此外，抑制Pyg02表达可显著下调U251细胞cyclinD1的表达但不改变其亚细胞定位。U251细胞β-catenin表达及其亚细胞定位无明显改变。结论成功构建了抑制Pyg02表达的重组载体。抑制Pyg02表达能有效地抑制脑胶质瘤U251细胞DNA合成，可能通过下调wnt信号靶基因cyclin D1的表达，使细胞阻滞于G1期而抑制细胞增殖和侵袭。

关键词： Pyg02 胶质瘤细胞增殖短发夹RNA

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下调Pygo2对U251细胞增殖、侵袭及cyclinD1表达的抑制

下调Pygo2对U251细胞增殖、侵袭及cyclinD1表达的抑制

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中国医师协会神经外科医师分会第六届全国代表大会

作者：陈玉英王海东王占祥刘希尧谭国伟沈上杭厦门大学附属第一医院重庆邮电大学生物信息学院生物技术教学部

＜正＞胶质瘤多呈侵袭性生长,手术难以完全切除,而多数恶性胶质瘤细胞对放疗及化疗抵抗,使临床治疗疗效欠佳。恶性脑胶质瘤被认为是一系列多基因改变累及的结果。经典Wnt通路失调及核心成员异常表达是肿瘤发生及发展的重要原因。Wnt信... 详细信息

＜正＞胶质瘤多呈侵袭性生长,手术难以完全切除,而多数恶性胶质瘤细胞对放疗及化疗抵抗,使临床治疗疗效欠佳。恶性脑胶质瘤被认为是一系列多基因改变累及的结果。经典Wnt通路失调及核心成员异常表达是肿瘤发生及发展的重要原因。Wnt信号系统的激活与脑胶质瘤密切相关,不同级别胶

关键词： Pygo2 细胞增殖 cyclinD1 抑制作用

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制Pygo2表达对U251细胞增殖的影响

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第三军医大学学报 2011年第5期33卷 497-501页

作者：陈玉英王海东王占祥谭国伟刘希尧沈上杭厦门大学附属第一医院神经外科福建厦门361003 重庆邮电大学生物信息学院生物技术教学部重庆400065

目的:构建RNA干扰(RNAi)重组体抑制Pygo2的表达,并探讨其对脑胶质瘤U251细胞增殖的影响。方法:针对Pygo2 cDNA序列设计并合成一对特异性的含有"短发卡"的寡核苷酸序列及其随机对照序列,经退火后插入pSuper中构建重组体。经Eco... 详细信息

目的:构建RNA干扰(RNAi)重组体抑制Pygo2的表达,并探讨其对脑胶质瘤U251细胞增殖的影响。方法:针对Pygo2 cDNA序列设计并合成一对特异性的含有"短发卡"的寡核苷酸序列及其随机对照序列,经退火后插入pSuper中构建重组体。经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染脑胶质瘤U251细胞,采用RT-PCR和Western blot检测Pygo2 shRNA对U251细胞Pygo2 mRNA和蛋白的干扰效果,应用克隆形成实验和MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,BrdU掺入法检测DNA合成。结果:双酶切和测序鉴定证实插入序列完全正确;Pygo2 shRNA显著抑制了其mRNA和蛋白的表达,MTT分析其细胞增殖也被显著抑制(P<0.01)。与scr shRNA组的克隆形成数(78.9±6.8)%相比,Pygo2 shRNA组克隆数(55.4±5.2)%显著减少(P<0.05)。与对照组的BrdU掺入率(20.96±2.19)%相比,Pygo2 shRNA组的BrdU掺入率(8.81±0.56)%显著减少(P<0.05),而scr shRNA组的BrdU掺入率是(20.35±1.73)%无显著变化。而且,Pygo2 shRNA使U251细胞处于S期百分比显著减少、G1期显著增加(P<0.01),致细胞周期阻滞于G1期。结论:成功构建了抑制Pygo2表达的重组载体,下调Pygo2表达能有效地抑制脑胶质瘤U251细胞DNA合成,使细胞阻滞于G1期,抑制细胞增殖。