检索结果-内蒙古大学图书馆

基因组学与应用生物学 2018年第6期37卷 2697-2701页

作者：李春红周英顺曾静王光西张金平西南医科大学药学院药剂学教研室泸州646000 西南医科大学基础医学院病原生物学教研室泸州646000

为探讨临床鲍曼不动杆菌耐药性与耐药基因的关系,研究其耐药机制,本研究从临床标本中分离得到鲍曼不动杆菌共87株,同时进行药物敏感性试验;PCR方法检测鲍曼不动杆菌MSBLs及OXA等碳青霉烯类耐药基因并进行序列分析,结果显示其主要携带bla... 详细信息

为探讨临床鲍曼不动杆菌耐药性与耐药基因的关系,研究其耐药机制,本研究从临床标本中分离得到鲍曼不动杆菌共87株,同时进行药物敏感性试验;PCR方法检测鲍曼不动杆菌MSBLs及OXA等碳青霉烯类耐药基因并进行序列分析,结果显示其主要携带blaTEM（93.1%）和blaOXA23（74.7%）,说明本地区鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素产生耐药性的主要机制与blaTEM和blaOXA23密切相关。

关键词：鲍曼不动杆菌耐药性耐药基因

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酵母双杂交筛选与弓形虫毒力因子ROP18相互作用的宿主蛋白

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013年第1期31卷 18-22页

作者：都建安然程里陈滢沈继龙安徽医科大学基础医学院生化与分子生物学教研室合肥230032 安徽医科大学药学院合肥230032 安徽医科大学省部级基因研究重点实验室病原生物学教研室合肥230032

目的利用酵母双杂交方法,筛选与弓形虫毒力因子ROP18相互作用的宿主蛋白。方法 RT-PCR扩增弓形虫RH株速殖子ROP18基因片段,扩增产物经双酶切后插入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,将重组质粒导入酵母AH109菌株中,检测诱饵载体有无毒性和自... 详细信息

目的利用酵母双杂交方法,筛选与弓形虫毒力因子ROP18相互作用的宿主蛋白。方法 RT-PCR扩增弓形虫RH株速殖子ROP18基因片段,扩增产物经双酶切后插入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,将重组质粒导入酵母AH109菌株中,检测诱饵载体有无毒性和自激活作用,利用酵母双杂交系统从人胚胎脑cDNA文库中筛选与ROP18相互作用的宿主蛋白。结果构建了诱饵载体pGBKT7-ROP18,ROP18具有自激活功能。用ROP18^(25-25lan)为诱饵,筛选获得一系列与ROP18相互作用的宿主蛋白:DNA损伤特异性结合蛋白1(DDB1)、torsin A相互作用蛋白1(TOR1AIP1)、整联蛋白β1(integrinβ1)、溶质运载蛋白3(SLC3A2)、酪氨酸硫化转移酶2(TPST2)、Derl样域家族成员2(DERL2)和OCIA结构域蛋白1(OCIAD1)。结论通过酵母双杂交技术筛选出与弓形虫毒力因子ROP18相互作用的多种宿主蛋白。

关键词：弓形虫 ROP18^25-251aa 酵母双杂交相互作用宿主蛋白

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具有高效降解地塞米松能力的伯克霍尔德菌CQ001株的分离及功能基因组学分析

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第三军医大学学报 2017年第13期39卷 1352-1359页

作者：斯丹杨致邦蒋任举张进熊玉霞马廉举王毅重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016 重庆医科大学药学实验教学中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院免疫学教研室重庆400016

目的研究细菌对地塞米松类甾体激素的降解作用及其分子机制,为构建清除水环境医源性地塞米松类药物污染的工程菌奠定基础。方法采用富集培养法从医院废水中分离降解地塞米松的细菌,采用固相萃取-高效液相色谱(HPLC)法检测细菌对地塞米... 详细信息

目的研究细菌对地塞米松类甾体激素的降解作用及其分子机制,为构建清除水环境医源性地塞米松类药物污染的工程菌奠定基础。方法采用富集培养法从医院废水中分离降解地塞米松的细菌,采用固相萃取-高效液相色谱(HPLC)法检测细菌对地塞米松的降解效能,通过16S r DNA序列测定进行鉴定。用Illumina Hiseq4000结合第三代测序技术对降解菌的全基因组测序,并进行序列组装、注释和分析,对降解地塞米松相关基因进行RT-q PCR验证。结果分离到1株对地塞米松有较高降解作用的细菌,经鉴定属于伯克霍尔德菌属(Burkholderia),命名为Burkholderia ***001。该菌对地塞米松磷酸钠及地塞米松的降解率分别为84.8%和77.11%。全基因组测序表明Burkholderia ***001包含2条染色体和4个巨型质粒,与代谢相关基因大部分集中在2号染色体上,共3 260 157 bp。生物信息学分析表明,该菌含有甾体代谢通路中许多重要酶类的编码基因,其中与地塞米松降解相关的有ABC转运子,3-甾酮-9α-脱氢酶等,这些基因在以地塞米松磷酸钠为碳源的培养条件下表达量不同程度地高于以蔗糖为碳源的培养条件。结论 Burkholderia ***001是一株具有强大的代谢功能和代谢途径丰富的细菌,具有降解地塞米松类甾体激素的性能,该菌株为后续研究甾体激素的降解机制和构建清除水环境医源性地塞米松类药物污染的工程菌提供了菌种。

关键词：地塞米松降解伯克霍尔德菌全基因组

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约氏疟原虫基因条件修饰体系的构建及其应用分析

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中国病原生物学杂志 2020年第6期15卷 621-626,633页

作者：王姗姗赵会丽邓舒梁佳元王斯刘昂谭文彬薛庆节杜峰济宁医学院精准医学研究院山东济宁272067 济宁医学院临床医学院中国医科大学基础医学院病原生物学教研室济宁医学院基础医学院病原生物学教研室

目的构建Flp/FRT位点特异重组系统介导的致死型约氏疟原虫基因条件修饰体系,用于疟原虫红前期基因功能的研究。方法构建含有Flp酶基因序列和FRT标记耐药基因的重组质粒,通过Nucleofector电转技术将线性化质粒转染至约氏疟原虫*** 17XL... 详细信息

目的构建Flp/FRT位点特异重组系统介导的致死型约氏疟原虫基因条件修饰体系,用于疟原虫红前期基因功能的研究。方法构建含有Flp酶基因序列和FRT标记耐药基因的重组质粒,通过Nucleofector电转技术将线性化质粒转染至约氏疟原虫*** 17XL。经药物筛选并克隆后,利用PCR和核酸探针杂交进行基因型鉴定。经蚊体内发育,启动Flp酶介导的位点特异重组去除药物筛选基因(hDHFR),并利用PCR技术分析基因工程疟原虫内Flp酶介导的FRT位点间的重组效率。通过检测感染小鼠的发病情况、疟疾血症及生存曲线分析基因工程疟原虫的生物学特性。结果成功构建打靶载体pyUIS4/Flp并重组至UIS4基因的5′调控区,获同源重组疟原虫***4/Flp(R),经蚊体内发育获位点特异重组删除药物筛选基因的基因工程疟原虫***4/Flp。PCR和核酸探针鉴定基因工程疟原虫基因型正确。基因工程疟原虫内Flp酶介导的FRT位点间的重组在发育至14d的子孢子内达到近100%的重组效率。与野生型疟原虫比较,小鼠感染后3 d镜下均查见感染红细胞,其内疟原虫形态未见异常,7 d红细胞寄生率达峰值,分别为80.5%和82.7%,疟疾血症及生存曲线均无统计学差异(P>0.05)。结论成功构建基因工程疟原虫***4/Flp,其生物学特性与野生型疟原虫无明显不同,并具有较高的位点特异的重组效率,可用于疟原虫红前期基因功能的研究及减毒活疫苗的研制。

关键词：疟原虫,约氏基因修饰位点特异重组

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瑞德西韦对感染肠道病毒71型的人横纹肌瘤细胞和ICR乳鼠的抗病毒活性

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吉林大学学报（医学版） 2021年第6期47卷 1446-1454页

作者：任晓风闫赟政李微李月香肖军海曹瑞源李永刚锦州医科大学基础医学院病原生物学教研室辽宁锦州121000 军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所北京100850

目的:探讨瑞德西韦(RDV)在细胞与动物水平对肠道病毒71型(EV71)的抗病毒活性,并阐明其抗病毒作用机制。方法:基于人横纹肌瘤(RD)细胞进行RDV抗肠道病毒活性评价,检测RDV对EV71、柯萨奇病毒A6型(CA6)、肠道病毒D68型(EVD68)和柯萨奇病毒1... 详细信息

目的:探讨瑞德西韦(RDV)在细胞与动物水平对肠道病毒71型(EV71)的抗病毒活性,并阐明其抗病毒作用机制。方法:基于人横纹肌瘤(RD)细胞进行RDV抗肠道病毒活性评价,检测RDV对EV71、柯萨奇病毒A6型(CA6)、肠道病毒D68型(EVD68)和柯萨奇病毒16型(CA16)的半数毒性浓度(CC50)和半数有效浓度(EC50),计算选择指数(SI)。将RD细胞分为细胞对照组(不处理)、病毒对照组和给药组。病毒对照组RD细胞给予EV71病毒液,给药组RD细胞再给予不同浓度(0.005、0.015、0.046、0.137、0.410、1.230、3.700、11.110、33.330和100.000μmol·L^(-1))RDV。72 h后,采用CellTiter-Glo?Luminescent检测试剂盒测定各组RD细胞活性。在抗EV71细胞活性评价实验中,将RD细胞分为给药组和病毒对照组,给药组RD细胞给予不同浓度(0.03、0.10、0.30、0.80和2.50μmol·L^(-1))RDV。30 h后,采用实时荧光定量PCR(RTqPCR)法检测各组RD细胞中EV71 RNA表达水平,采用Western blotting法和免疫荧光法检测各组RD细胞中EV71结构蛋白VP1表达量。采用加药时序实验验证RDV的抗病毒作用阶段。在抗EV71动物药效学实验中,将35只ICR乳鼠随机分为安慰剂组(给予2%Tween 80,n=12)、3.0 mg·kg^(-1)RDV组(给予3.0 mg·kg^(-1)RDV,n=12)和1.5 mg·kg^(-1)组RDV组(给予1.5 mg·kg^(-1)RDV,n=11),每只乳鼠经腹腔攻毒5×103PFU。4 h后进行第1次给药,连续给药2周,观察并记录乳鼠生存率。在攻毒后第3天采用RT-qPCR法检测各组乳鼠各种组织中病毒载量(即EV71 RNA拷贝数)。结果:RDV对EV71、CA6、EVD68和CA16的EC50分别为(0.05±0.01)、(0.14±0.06)、(0.02±0.01)和(0.10±0.03)μmol·L^(-1)。与病毒对照组比较,0.10、0.30、0.80和2.50μmol·L^(-1)RDV组RD细胞中EV71 RNA表达水平降低(P<0.05或P<0.01),0.80和2.50μmol·L^(-1)RDV组RD细胞中EV71结构蛋白VP1表达量降低。与病毒对照组比较,0.80μmol·L^(-1)RDV组RD细胞中Ⅲ和Ⅳ阶段(病毒复制阶段)时EV71病毒基因组RNA拷贝数明显降低(P<0.05)。与安慰剂组比较,各给药组乳鼠生存率差异无统计学意义(P>0.05),但有一定的保护趋势。与安慰剂组比较,3.0 mg·kg^(-1)RDV组乳鼠肺和肌肉组织中病毒载量明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:RDV对以EV71为代表的肠道病毒具有良好的细胞水平抗病毒活性,并主要作用于病毒感染后的复制阶段。RDV能明显降低小鼠肺和肌肉组织中病毒载量,提示其在动物水平有一定的治疗潜力。

关键词：瑞德西韦肠道病毒71型人横纹肌瘤细胞 ICR乳鼠

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贵州白纹伊蚊感染沃尔巴克氏体以及WO噬菌体的初步调查

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中国病原生物学杂志 2020年第1期15卷 69-73,77页

作者：王政艳梁秋果杨茜陈玲玲张霞胡容程金芝吴家红贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室黔南民族医学高等专科学校基础医学部病原生物学教研室贵州医科大学公共与卫生学院

目的了解贵州白纹伊蚊种群中沃尔巴克氏体(Wolbachia)以及WO噬菌体的感染情况。方法于2017年在贵州省贵阳市、都匀市、铜仁市、凯里市、遵义市、兴义市、贵安新区、毕节市采用勺舀法采集白纹伊蚊幼虫标本,实验室饲养至成蚊。提取雌蚊基... 详细信息

目的了解贵州白纹伊蚊种群中沃尔巴克氏体(Wolbachia)以及WO噬菌体的感染情况。方法于2017年在贵州省贵阳市、都匀市、铜仁市、凯里市、遵义市、兴义市、贵安新区、毕节市采用勺舀法采集白纹伊蚊幼虫标本,实验室饲养至成蚊。提取雌蚊基因组DNA,PCR扩增沃尔巴克氏体表面蛋白基因(Wolbachia surface protein,wsp)和WO噬菌体衣壳蛋白的核糖体S7基因(Ribosomal S7 gene,orf7)。分别从8个地区的阳性检测标本中随机选取10个样品进行测序,使用DNAStar 7.0软件分析基因的基本特征;采用MEGA 4.0软件对所获基因序列进行分析比对,并构建系统进化树;采用SPSS 20.0软件对WO噬菌体侵染wAlbA、wAlbB株沃尔巴克氏体的检测结果进行关联性分析。结果贵州省8个地区的白纹伊蚊wAlbA和wAlbB株沃尔巴克氏体超感染率为84.30%(322/382),wAlbA株、wAlbB株沃尔巴克氏体单感染率分别为4.97%(19/382)和3.66%(14/382),WO噬菌体的感染率为76.44%(292/382)。通过测序获得沃尔巴克氏体的wsp序列,其中wAlbA株(379 bp)80条,wAlbB株(501 bp)78条;获得WO噬菌体的orf7序列(263 bp)73条。比对分析显示贵州省8个地区获得所有wAlbA株、wAlbB株的wsp序列、orf7序列的同源性均为100%。确切概率法分析WO噬菌体侵染与wAlbA和wAlbB株沃尔巴克氏体超感染有关联性(P<0.05)。结论贵州白纹伊蚊种群普遍感染WO噬菌体和沃尔巴克氏体,且以超感染wAlbA和wAlbB株沃尔巴克氏体为主。WO噬菌体主要侵染的对象是超感染wAlbA和wAlbB株的沃尔巴克氏体。

关键词：白纹伊蚊沃尔巴克氏体 WO噬菌体

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肌肽对脂多糖诱导星形胶质细胞炎症因子释放的抑制作用及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2021年第2期47卷 330-337页

作者：白雪于露杨文强何鑫杨新生杨菁锦州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室辽宁锦州121001 锦州卫生学校外科教研室辽宁锦州121001

目的:探讨肌肽对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞(AS)炎症因子释放的影响,初步阐明其作用机制。方法:体外培养新生大鼠大脑皮质AS并纯化,随机分为对照组、LPS组和LPS+肌肽组(10、30和90 mmol·L~(-1)肌肽)。对照组只加入完全培养基,... 详细信息

目的:探讨肌肽对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞(AS)炎症因子释放的影响,初步阐明其作用机制。方法:体外培养新生大鼠大脑皮质AS并纯化,随机分为对照组、LPS组和LPS+肌肽组(10、30和90 mmol·L~(-1)肌肽)。对照组只加入完全培养基,LPS组培养基中加入终浓度为1 mg·L~(-1)LPS,体外刺激细胞24 h构建炎症损伤模型,LPS+肌肽组培养基中预先分别加入10、30和90 mmol·L~(-1)肌肽,培养1 h后再加入终浓度为1 mg·L~(-1)的LPS。MTT法检测各组AS存活率,ELISA法检测各组AS培养液中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,DCFHDA探针法检测各组AS中活性氧(ROS)水平,Hoechst 33258荧光染色法检测各组AS凋亡率,免疫荧光染色法测定各组AS中磷酸化核转录因子κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达情况和p-NF-κB p65阳性细胞数,采用Western blotting法检测各组AS中p-NF-κB p65蛋白表达水平。结果:与对照组比较,LPS组AS存活率明显降低(P<0.05),AS培养液中IL-1β和TNF-α水平升高(P<0.05),AS中ROS水平、AS凋亡率和p-NF-κB p65阳性细胞数均明显升高(P<0.05),AS中p-NF-κB p65蛋白表达水平升高(P<0.05)。与LPS组比较,LPS+肌肽组AS存活率明显升高(P<0.05),AS培养液中IL-1β和TNF-α水平降低(P<0.05),AS中ROS水平、AS凋亡率和p-NF-κB p65阳性细胞数均明显降低(P<0.05),AS中p-NF-κB p65蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:肌肽可抑制LPS引起的AS中炎症因子IL-1β和TNF-α释放,其机制可能与肌肽抑制LPS诱导AS中ROS生成、进而抑制NF-κB p65激活有关。

关键词：肌肽脂多糖星形胶质细胞炎症因子核转录因子κB p65

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问号钩体趋化相关基因特征分析

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上海第二医科大学学报 2005年第1期25卷 33-35,73页

作者：霍丽杨宏亮李文俊李振红郭晓奎姜叙诚上海第二医科大学基础医学院病理学教研室上海200025 上海第二医科大学基础医学院病原生物学教研室上海200025

目的预测问号钩体黄疸出血群赖型赖株的趋化信号传导途径,并深入分析趋化相关基因。方法使用ProtParamtool,NCBI/Blastp进行蛋白参数分析和结构域分析,使用Clustalw软件进行多序列对比,与大肠埃希菌K-12趋化相关基因进行比较。结果问号... 详细信息

目的预测问号钩体黄疸出血群赖型赖株的趋化信号传导途径,并深入分析趋化相关基因。方法使用ProtParamtool,NCBI/Blastp进行蛋白参数分析和结构域分析,使用Clustalw软件进行多序列对比,与大肠埃希菌K-12趋化相关基因进行比较。结果问号钩体趋化相关基因共30个,分为MCPs和che两组基因,功能与大肠埃希菌趋化相关基因相似,并预测出问号钩体趋化信号传导途径。结论问号钩体趋化相关基因较大肠埃希菌、苍白密螺旋体和伯氏疏螺旋体多,提示其趋化传导途径更为复杂,适应宿主的能力也更强,可能是钩体的重要毒力因子之一。

关键词：钩端螺旋体趋化性信号传导途径生物信息学

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肌肽对血管性认知障碍大鼠氧化应激及NF-κB信号途径的影响

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吉林大学学报（医学版） 2020年第2期46卷 329-334页

作者：杨文强何鑫白雪于露李宗泽张家悦杨菁锦州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室辽宁锦州121001

目的:探讨肌肽对大鼠血管性认知功能障碍(VCI)的保护作用,并阐明其作用机制。方法:50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组(双侧颈总动脉夹闭10 min→再灌注10 min→夹闭10 min)和不同剂量肌肽组(双侧颈总动脉夹闭10 min→再灌注10 min→夹... 详细信息

目的:探讨肌肽对大鼠血管性认知功能障碍(VCI)的保护作用,并阐明其作用机制。方法:50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组(双侧颈总动脉夹闭10 min→再灌注10 min→夹闭10 min)和不同剂量肌肽组(双侧颈总动脉夹闭10 min→再灌注10 min→夹闭10 min+100、300和900 mg·kg^-1·d^-1肌肽),每组10只。肌肽于造模前21 d至造模后12 d灌胃给药,每日1次。于术后第7天开始进行水迷宫实验测定各组大鼠学习记忆能力;术后第12天取大鼠海马,高效液相色谱(HPLC)法测定各组大鼠海马组织中肌肽和还原性谷胱甘肽(GSH)水平。免疫组织化学法观察各组大鼠海马CA1区中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达情况,Western blotting法检测各组大鼠海马组织中磷酸化核因子κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达水平,ELISA法检测各组大鼠海马组织中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠海马CA1区锥体细胞部分缺失,逃避潜伏期明显延长(P<0.01),在平台象限停留时间明显缩短(P<0.01);大鼠海马组织中肌肽和GSH水平降低(P<0.01),GFAP阳性细胞数增加,p-NF-κB p65蛋白表达水平升高(P<0.01),IL-1β和TNF-α水平升高(P<0.01)。与模型组比较,不同剂量肌肽组大鼠海马CA1区锥体细胞排列整齐,逃避潜伏期明显缩短(P<0.01),平台象限停留时间明显增加(P<0.01);大鼠海马组织中肌肽和GSH水平升高(P<0.05或P<0.01),GFAP阳性细胞数减少,p-NF-κB p65蛋白表达水平降低(P<0.01),IL-1β和TNF-α水平降低(P<0.01)。结论:肌肽对大鼠VCI具有保护作用,其作用机制可能与提高大鼠抗氧化能力、抑制NF-κB途径激活、进而抑制星形胶质细胞的异常激活并减少炎症有关。

关键词：肌肽血管性认知障碍核因子κB 谷胱甘肽星形胶质细胞

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肌肽对糖尿病肾病大鼠氧化应激及NF-κB信号通路的影响

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中国临床解剖学杂志 2020年第3期38卷 289-294页

作者：何鑫杨文强李宗泽于露赵艳鲁美丽杨菁锦州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室辽宁锦州121001

目的探讨肌肽对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织的保护作用及其对氧化应激、NF-κB信号通路的影响。方法60只SPF级8周龄雄性SD大鼠,随机选取12只为对照组,其余予以高糖高脂饮食+链脲佐菌素腹腔注射建立糖尿病模型。注射链脲佐菌素3 d后,将符... 详细信息

目的探讨肌肽对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织的保护作用及其对氧化应激、NF-κB信号通路的影响。方法60只SPF级8周龄雄性SD大鼠,随机选取12只为对照组,其余予以高糖高脂饮食+链脲佐菌素腹腔注射建立糖尿病模型。注射链脲佐菌素3 d后,将符合糖尿病标准大鼠随机分为模型组、肌肽(100、300、900 mg/kg)组。肌肽各组分别灌胃100、300、900 mg/kg肌肽,每日1次。8周后,检测空腹血糖(FBG)、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24 h尿微量白蛋白(mAlb)。PAS染色法观察大鼠肾形态学变化;试剂盒检测肾组织的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;免疫组织化学及Western blot检测肾组织P-NF-κB P65蛋白的表达。结果DN大鼠建模成功。与模型组相比,肌肽组肾组织病理损伤明显减轻。肌肽各组大鼠mAlb、FBG、BUN水平下降,呈量-效依赖性关系(P<0.05),而SOD、GSH、GSH-Px的含量逐级升高,同时MDA和P-NF-κB P65含量减少。结论肌肽对DN模型大鼠肾组织具有保护作用,其机制可能与抑制氧化应激和NF-κB信号通路异常激活有关。

关键词：糖尿病肾病肌肽氧化应激 NF-κB 大鼠模型

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