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吉林大学学报（医学版） 2021年第4期47卷 888-895页

作者：杨洁贺武斌安妮孔雯聪苏荣健王学哲锦州医科大学附属第一医院检验科辽宁锦州121000 锦州医科大学附属第一医院外科学实验室辽宁锦州121000 锦州医科大学基础医学院细胞生物学教研室辽宁锦州121000 锦州医科大学基础医学院病理学教研室辽宁锦州121000

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对肝癌细胞放射敏感性的影响,初步阐明其分子机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测肝癌SMMC-7721、HepG2、PLC、Huh7和QGY-7703细胞中GRP78 mRNA和蛋白表达水平,筛选GR... 详细信息

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对肝癌细胞放射敏感性的影响,初步阐明其分子机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测肝癌SMMC-7721、HepG2、PLC、Huh7和QGY-7703细胞中GRP78 mRNA和蛋白表达水平,筛选GRP78高表达和低表达的肝癌细胞作为研究对象。采用RNA干扰技术在GRP78高表达的人肝癌SMMC-7721细胞中靶向沉默GRP78,命名为siGRP78-SMMC-7721(siGRP78组),以siNC-SMMC-7721为对照组(siNC组);采用基因重组技术在GRP78低表达的人肝癌HepG2细胞中过表达GRP78,命名为Flag-GRP78-HepG2(Flag-GRP78组),以空载体3×Flag-HepG2为对照组(3×Flag组)。各组细胞分别给予0、2、4、6、8和10 Gy剂量X射线照射后,采用MTT法检测肝癌细胞存活率,5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)荧光染色法检测肝癌细胞增殖率,Western blotting法检测肝癌细胞中磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路中磷酸化PI3K(p-PI3K)和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达水平。结果:RT-qPCR法和Western blotting法检测,SMMC-7721细胞中GRP78 mRNA和蛋白表达水平最高,HepG2细胞中GRP78 mRNA和蛋白表达水平最低,选取SMMC-7721和HepG2细胞作为研究对象。MTT法检测,随着放射剂量的增加,肝癌细胞存活率逐渐降低;与siNC组比较,6 Gy以上剂量X射线照射后,siGRP78组细胞存活率明显降低(P<0.01);与3×Flag组比较,4 Gy以上剂量X射线照射后,Flag-GRP78组细胞存活率明显升高(P<0.05或P<0.01)。EdU荧光染色法检测,与siNC组比较,siGRP78组细胞增殖率明显降低(P<0.05);与3×Flag组比较,Flag-GRP78组细胞增殖率明显升高(P<0.05)。Western blotting法检测,与siNC组比较,siGRP78组细胞中p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与3×Flag组比较,Flag-GRP78组细胞中p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:高表达水平的GRP78可降低肝癌细胞放射敏感性,其作用机制可能与GRP78激活PI3K/Akt信号通路有关。

关键词：葡萄糖调节蛋白78 肝肿瘤放射敏感性细胞凋亡磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B

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SIRT5通过调控G6PD促进结肠癌细胞的糖代谢及增殖

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中国肿瘤临床 2021年第17期48卷 876-881页

作者：刘迪张秀梅锦州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室辽宁省锦州市121001

目的:探讨SIRT5对结肠癌细胞糖代谢和增殖的作用及其可能的作用机制,以及SIRT5、G6PD在结肠癌组织中的表达情况。方法:Western blot法检测SIRT5蛋白在结肠癌细胞系HCT116、HT29中的表达水平,构建SIRT5基因过表达及siRNA沉默载体分别转染... 详细信息

目的:探讨SIRT5对结肠癌细胞糖代谢和增殖的作用及其可能的作用机制,以及SIRT5、G6PD在结肠癌组织中的表达情况。方法:Western blot法检测SIRT5蛋白在结肠癌细胞系HCT116、HT29中的表达水平,构建SIRT5基因过表达及siRNA沉默载体分别转染到SIRT5低表达与SIRT5高表达结肠癌细胞系,葡萄糖氧化酶法、比色法分别检测培养液中葡萄糖、乳酸的含量;CCK-8实验检测细胞活力;克隆形成实验检测细胞增殖能力。RT-PCR与Western blot法分别检测SIRT5对G6PD mRNA及蛋白表达的调控;免疫组织化学法检测结肠癌组织中SIRT5、G6PD的表达情况。结果:沉默SIRT5后,细胞培养液中葡萄糖的浓度明显升高、乳酸的浓度明显降低,细胞的活性和增殖能力明显减弱;过表达SIRT5后,细胞培养液中葡萄糖的浓度明显降低、乳酸的浓度明显升高,细胞的活性和增殖能力明显增强。SIRT5正向调控G6PD的基因表达与单独转染si-SIRT5相比,共转染si-SIRT5与G6PD质粒恢复了结肠癌细胞的糖代谢及增殖能力;SIRT5、G6PD在结肠癌组织中的表达明显高于癌旁组织。结论:SIRT5、G6PD在结肠癌组织中高表达,SIRT5通过调控G6PD促进结肠癌细胞糖代谢和增殖。

关键词：结肠癌 SIRT5 G6PD 有氧糖酵解

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脑缺血再灌注损伤程度与自噬相关基因LC3、mTOR表达的相关性研究

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中国临床解剖学杂志 2018年第2期36卷 182-186页

作者：李丹丹肖学进秦书俭包翠芬锦州医科大学细胞生物学教研室辽宁锦州121001 锦州医科大学解剖学教研室辽宁锦州121001 锦州医科大学基础医学实验教学中心辽宁锦州121001

目的探讨局灶性脑缺血再灌注损伤（cerebral ischemia reperfusion,CIR）程度与自噬微管相关蛋白轻链3抗体-Ⅱ（Autophagy microtubule associated protein light chain 3 antibody-Ⅱ,LC3-Ⅱ）、雷帕霉素靶蛋白抗体（Rapamycin target protein antibody,m TOR）表达的相关性。方法采用线栓阻断法阻塞大脑中动脉2 h制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型;观察各组间的神经功能缺失评分、TTC梗死体积;应用免疫印迹、免疫荧光法检测大脑顶叶的LC3-Ⅱ、m TOR的表达。结果 TTC染色显示,梗死体积在缺血再灌24 h达高峰。WB、免疫荧光显示,LC3-Ⅱ在IR中表达增加,且在缺血再灌24 h表达最高;m TOR在缺血再灌24 h、48 h表达最低。相关性分析显示,TTC染色梗死体积与LC3-Ⅱ表达水平高度正相关。结论脑缺血再灌注损伤程度可能与LC3、m TOR的表达水平相关。

关键词：自噬局灶性脑缺血再灌注自噬微管相关蛋白轻链3抗体雷帕霉素靶蛋白抗体

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miRNA-21对肺癌A549细胞抑癌基因PTEN表达的调控

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中国生物制品学杂志 2009年第4期22卷 341-343页

作者：徐晓明张政彭惠民晏宁重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室重庆400016

目的探讨miRNA-21对肺癌A549细胞抑癌基因PTEN表达的调控作用。方法人工合成miRNA-21序列,插入到质粒pGenesil-1中,构建重组真核表达质粒,并转染至肺癌A549细胞,采用RT-PCR和Western blot分别检测细胞PTEN基因mRNA转录水平和蛋白的表达... 详细信息

目的探讨miRNA-21对肺癌A549细胞抑癌基因PTEN表达的调控作用。方法人工合成miRNA-21序列,插入到质粒pGenesil-1中,构建重组真核表达质粒,并转染至肺癌A549细胞,采用RT-PCR和Western blot分别检测细胞PTEN基因mRNA转录水平和蛋白的表达水平。结果经酶切和测序鉴定,表明重组真核表达质粒构建正确。转染重组真核表达质粒的A549细胞PTEN基因mRNA转录水平与未转染组相比,差异无统计学意义,蛋白表达水平较未转染组明显降低。结论miRNA-21可能主要在翻译水平调控PTEN基因的表达。

关键词：微小RNA-21 真核表达载体肺癌 PTEN基因

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紫杉醇对大肠癌细胞的体外杀伤作用

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中国医科大学学报 1999年第4期28卷 241-242页

作者：方瑾宋今丹中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室沈阳110001

目的：定量评价紫杉醇对人大肠癌细胞的杀伤作用和药物敏感性。方法：用ＭＴＴ方法检测紫杉醇对体外培养人大肠癌细胞ＣＣＬ１８７、ＣＣＬ２２９、ＣＸ１和ＣｌｏｎｅＡ的杀伤作用。结果：在最大生理耐受浓度（... 详细信息

目的：定量评价紫杉醇对人大肠癌细胞的杀伤作用和药物敏感性。方法：用ＭＴＴ方法检测紫杉醇对体外培养人大肠癌细胞ＣＣＬ１８７、ＣＣＬ２２９、ＣＸ１和ＣｌｏｎｅＡ的杀伤作用。结果：在最大生理耐受浓度（１×１０－７ｍｏｌ／Ｌ）下，药物持续作用７２ｈ，紫杉醇对４种大肠癌细胞的生长抑制率ＣＣＬ１８７为３４５４％，ＣＣＬ２２９为５８７１％，ＣＸ１为６７４０％，ＣｌｏｎｅＡ为７０８７％。其中对ＣＸ１和ＣｌｏｎｅＡ呈高度敏感性，ＩＣ５０分别为９０×１０－１０ｍｏｌ／Ｌ和４０×１０－９ｍｏｌ／Ｌ。紫杉醇对大肠癌细胞的杀伤作用随药物浓度和作用时间的增加而增加。结论：紫杉醇对人大肠癌细胞具有体外敏感性，对ＣＸ１和ＣｌｏｎｅＡ呈高度有效性。药物作用表现出明显的时间和剂量依赖性。

关键词：紫杉醇大肠癌生物抑制药物疗法

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γ-干扰素诱导大肠癌CCL229细胞表达LEA抗原的电镜研究

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中国医科大学学报 2000年第2期29卷 101-102页

作者：周伟强宋今丹中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室沈阳110001

目的 :探讨 γ-干扰素对人大肠癌细胞系肿瘤相关抗原 L EA表达的诱导作用。方法 :将 γ-干扰素与人大肠癌 CCL 2 2 9细胞共育培养 ,通过免疫铁蛋白电镜观察γ-干扰素对人大肠癌细胞系 CCL 2 2 9诱导作用的超微结构变化。结果 :电镜观察... 详细信息

目的 :探讨 γ-干扰素对人大肠癌细胞系肿瘤相关抗原 L EA表达的诱导作用。方法 :将 γ-干扰素与人大肠癌 CCL 2 2 9细胞共育培养 ,通过免疫铁蛋白电镜观察γ-干扰素对人大肠癌细胞系 CCL 2 2 9诱导作用的超微结构变化。结果 :电镜观察发现 ,γ-干扰素诱导后 ,CCL 2 2 9细胞表面皱褶增多 ,形成大量不规则突起 ,并且 CCL 2 2 9细胞针状伪足萎缩 ,微绒毛大多呈球状分布于胞体四周。结论 :电镜超微结构的变化与 γ-干扰素诱导后 L EA抗原表达量增加有关 ,并且 γ-干扰素可能有抑制肿瘤细胞游走性、降低肿瘤细胞转移性的作用。

关键词： γ-干扰素诱导作用大肠癌 LEA抗原电镜

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NO信号通过I-kappaB磷酸化激活人肝细胞内源凝血因子Ⅷ重表达的调控作用

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吉林大学学报（医学版） 2014年第6期40卷 1155-1160页

作者：温泉何玉霞周云飞王娟张军重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的:建立一氧化氮(NO)前体化合物L-精氨酸激活人肝细胞L02内源凝血因子Ⅷ(FⅧ)重表达的分子细胞生物学模型,探讨NO信号激活L02中内源FⅧ重表达的调控通路及分子基础。方法:取对数生长期L02细胞随机分为对照组、加药组(L-精氨酸)、抑制... 详细信息

目的:建立一氧化氮(NO)前体化合物L-精氨酸激活人肝细胞L02内源凝血因子Ⅷ(FⅧ)重表达的分子细胞生物学模型,探讨NO信号激活L02中内源FⅧ重表达的调控通路及分子基础。方法:取对数生长期L02细胞随机分为对照组、加药组(L-精氨酸)、抑制剂组(L-NAME和L-精氨酸)和抑制剂对照组(L-NAME),分别培养12、24、36、48和60h,采用流式细胞术检测作用48h后L02中人FⅧ蛋白的表达,Griess法检测不同时间点L02细胞内NO水平,RT-PCR法检测L02中人FⅧ基因、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因、核转录因子(NF-κB1)基因和核因子κB(免疫球蛋白κ轻链基因增强子)抑制蛋白α亚基(I-κB alpha)基因的转录水平,Western blotting法检测L02中人磷酸化I-kappaB(磷酸化I-κB)表达水平。结果:流式细胞术检测,加L-精氨酸培养48h后L02中出现人FⅧ蛋白的表达。Griess法检测,加药组L02在3、6和12h内NO表达水平显著增加(P<0.05),随后又基本恢复到正常水平,正常组、抑制剂组和抑制剂对照组L02细胞内NO水平无变化;RT-PCR检测,加药组L02中人FⅧmRNA转录;对照组、抑制剂组和抑制剂对照组均无人FⅧmRNA的转录,加药组iNOS、NF-κB1和I-κB alpha转录水平均上升(P<0.05),对照组、抑制剂组和抑制剂对照组上述基因转录水平均无明显变化。Western blotting法检测,加入L-精氨酸后,磷酸化I-κB表达水平明显增加(P<0.05),其他组则无此变化。结论:L-精氨酸通过NO信号通路进而激活I-κB磷酸化,导致人FⅧ基因启动子上游调控相关的转录因子NF-κB1进入胞核从而激活人离体肝细胞L02中内源人FⅧ的表达。

关键词：人凝血因子Ⅷ L-精氨酸一氧化氮信号通路磷酸化 human coagulation factor Ⅷ

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大肠癌细胞凋亡模型的建立及凋亡细胞内质网膜系统的变化

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中国医科大学学报 2000年第3期29卷 164-166页

作者：高丰宋今丹中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室沈阳110001

目的 :建立全反式维甲酸 (ATRA)诱导人大肠癌细胞凋亡的体外模型 ,观察凋亡细胞内质网膜系统的变化。方法 :应用光镜、透射及扫描电镜、DNA凝胶电泳、流式细胞术及末端脱氧核苷酰转移酶原位标记 (TU NEL法 ) ,观察维甲酸诱导的人大肠癌 ... 详细信息

目的 :建立全反式维甲酸 (ATRA)诱导人大肠癌细胞凋亡的体外模型 ,观察凋亡细胞内质网膜系统的变化。方法 :应用光镜、透射及扫描电镜、DNA凝胶电泳、流式细胞术及末端脱氧核苷酰转移酶原位标记 (TU NEL法 ) ,观察维甲酸诱导的人大肠癌 CCL2 2 9细胞凋亡特征。结果 :维甲酸诱导 CCL2 2 9细胞凋亡 ,产生典型的形态学改变 ,在琼脂糖凝胶电泳上呈现特征性的 DNA ladder,DNA直方图上显示亚二倍体峰 ,具有时间和剂量依赖性。CCL2 2 9细胞在被维甲酸诱导成熟分化后发生凋亡。凋亡过程中内质网膜系统的结构与分布变化为 :内质网逐渐减少 ,向核周聚集 ,部分呈扩张状态 ,形成大小不等的小泡状或短管状结构。结论

关键词：细胞凋亡大肠癌细胞内质网体外模型维甲酸

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铁蛋白标记抗体制备及其在免疫电镜中的应用

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中国医科大学学报 1999年第4期28卷 256-257,260页

作者：周伟强宋今丹中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室沈阳110001

目的：应用铁蛋白标记技术对结肠癌细胞系ＣＣＬ２２９细胞膜表面抗原ＬＥＡ的分布进行电镜观察，研究其在免疫电镜中的应用。方法：利用铁蛋白二步法标记羊抗鼠ＩｇＧ抗体示踪ＣＣＬ２２９细胞表面ＬＥＡ抗原的分... 详细信息

目的：应用铁蛋白标记技术对结肠癌细胞系ＣＣＬ２２９细胞膜表面抗原ＬＥＡ的分布进行电镜观察，研究其在免疫电镜中的应用。方法：利用铁蛋白二步法标记羊抗鼠ＩｇＧ抗体示踪ＣＣＬ２２９细胞表面ＬＥＡ抗原的分布。结果：在ＣＣＬ２２９细胞膜上有黑色铁蛋白颗粒存在，其颗粒大、反差强。结论：铁蛋白在膜表面抗原标记上有较广泛的应用，与其它电镜标记物相比具有很大的优越性。

关键词：铁蛋白标记抗体免疫电镜制备

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高压液相色谱法纯化抗人大肠癌单克隆抗体

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中国医科大学学报 1997年第5期26卷 453-455页

作者：方瑾宋今丹沈阳中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室110001

采用Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司的ＭＡＰＳ１００单克隆抗体纯化系统，利用羟基磷灰石层析柱对鼠腹水中抗人大肠癌单克隆抗体进行分离纯化。结果：还原性ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示所获抗体为单一组分，ＥＬＩＳＡ证实抗体活性满意，所获抗体收率为... 详细信息

采用Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司的ＭＡＰＳ１００单克隆抗体纯化系统，利用羟基磷灰石层析柱对鼠腹水中抗人大肠癌单克隆抗体进行分离纯化。结果：还原性ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示所获抗体为单一组分，ＥＬＩＳＡ证实抗体活性满意，所获抗体收率为２３％～５２％，重复进样收率稳定（３８．６３±２．２６）％，ｎ＝３。

关键词：单克隆抗体纯化大肠肿瘤高效液相色谱

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