目的:肠道作为人体的重要消化器官,其内定植的微生物在尿酸合成和代谢过程中发挥着重要作用,本研究利用含尿酸靶向培养基筛选正常人群肠道内具有降尿酸功能的细菌并鉴定。方法:依据尿酸的摩尔质量制备含不同浓度尿酸的BHI培养基,液体培养基扩增并驯化肠道粪便微生物,固体培养基分离和纯化具有尿酸降解功能的细菌。挑取固体培养基上形态一致的单个菌落进行革兰氏染色和镜检,筛选出已纯化菌株,在需氧和厌氧培养条件下测定尿酸降解率,选取降解率≥50%以上的菌株为高效尿酸降解菌的候选菌株,再测定不同温度和pH值条件下的尿酸降解率,进行降尿酸条件优化。利用16S r DNA序列测定法对尿酸降解菌进行鉴定,药敏实验测定该菌对抗生素的敏感性。结果:正常人群粪便微生物中分离获得一株高效尿酸降解菌B5C,第5天需氧条件下的尿酸降解率均>50%,与初始尿酸浓度相比具有统计学意义(P<0.05)。优化降尿酸条件后,在37℃、pH7.0时,降解率可达88.7%,经鉴定为粪肠球菌,对常见的抗生素如阿莫西林、氨苄西林和青霉素G等具有较高的敏感性。结论:本研究利用含不同尿酸浓度的靶向培养基驯化、分离和鉴定出一株人肠源性细菌,在需氧条件下也具有较高的尿酸降解率,可为今后临床降尿酸微生物制剂的开发和利用提供新的菌种资源。
目的对胎盘特异蛋白8(placenta-specific protein 8,PLAC8)的理化性质及其分子结构进行分析,为进一步研究PLAC8的功能及其作用机制提供新的思路和方向。方法应用ProtParam和Protscale,SignalP,TMHMM,PSORTⅡ,OPMA和Conserved Domain,Net...
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目的对胎盘特异蛋白8(placenta-specific protein 8,PLAC8)的理化性质及其分子结构进行分析,为进一步研究PLAC8的功能及其作用机制提供新的思路和方向。方法应用ProtParam和Protscale,SignalP,TMHMM,PSORTⅡ,OPMA和Conserved Domain,NetNGlyc、YinOYang和Netphos,STRING等软件,分析PLAC8的理化性质、信号肽结构、跨膜结构、亚细胞定位、二级结构和结构域、蛋白翻译后位点修饰以及预测相互作用蛋白,并构建系统进化树。结果PLAC8的相对分子质量为12 440.52,分子式为C_(524)H_(832)N_(154)O_(157)S_(22),理论等电点(PI)=7.34,不稳定指数为38.99,亲水性平均总值为0.125,脂肪指数为57.65,整体亲水区大于疏水区。PLAC8不具有信号肽和跨膜结构域;定位于细胞外基质(44.4%)、细胞质(33.3%)、液泡(11.1%)和细胞核(11.1%);二级结构主要由α-螺旋(47%)组成;保守结构域由77个氨基酸残基构成;有5个O-糖基化位点和4个磷酸化位点;互作蛋白主要包括中性粒细胞弹性蛋白酶(elastase,neutrophil expressed,ELANE;score:0.913)、组蛋白酶G(cathepsin G,CTSG;score:0.913)、组蛋白酶(cathepsin G,CTSC;score:0.910)等10个蛋白。人PLAC8的蛋白序列与黑猩猩相似度最高,与家兔相似度最低。结论 PLAC8是一种碱性蛋白,主要定位于细胞外基质,且具有多个糖基化和磷酸化修饰位点,能够与多个蛋白形成互作网络;人PLAC8的蛋白序列与黑猩猩相似度最高。本研究将为进一步探讨PLAC8在生命活动中的功能及其作用机制提供了新的思路。
衰老是一种复杂的生理病理现象,大脑是人体耗氧量最大的器官,对衰老非常敏感。脑组织中富含锌离子,锌离子的稳态与神经元功能关系密切。锌离子不能自由通过生物膜,其运输主要依靠锌转运体(Zinc transporters,ZnT)家族和锌转运蛋白家族(Zrt-Irt like proteins,Zip)。本研究通过Morris水迷宫实验检测小鼠的学习记忆能力;应用形态学,体视学和分子生物学技术检测锌转运体ZnT1、ZnT3、ZnT6和ZnT10在青年和衰老小鼠脑组织中的表达。结果证实老年小鼠认知能力显著下降,脑组织中神经元数量明显少于青年小鼠。ZnT1、ZnT3、ZnT6和ZnT10均表达于神经元,与青年小鼠相比,老年小鼠脑海马组织中ZnT1、ZnT3和ZnT6的表达呈不同程度的减弱,ZnT10表达高于青年小鼠。锌转运体表达的异常影响神经元功能,与衰老小鼠认知能力的下降有一定的关系。
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