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沉默CENP-N基因表达对胃癌细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

广东医学 2022年第4期43卷 426-433页

作者：张玉扬赵津平张丹翟振华锦州医科大学附属第一医院肿瘤科辽宁锦州121000 锦州医科大学附属第一医院肿瘤血管与微环境实验室辽宁锦州121000 辽宁省健康产业集团抚矿总医院妇科辽宁抚顺113008

目的探究着丝粒蛋白-N(CENP-N)对胃癌细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能机制。方法利用基因表达谱交互式分析网站(GEPIA)中的癌症基因组图谱(TCGA)数据分析CENP-N基因在503例胃癌组织和125例癌旁组织中的表达水平;以收集的143例胃癌患... 详细信息

目的探究着丝粒蛋白-N(CENP-N)对胃癌细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能机制。方法利用基因表达谱交互式分析网站(GEPIA)中的癌症基因组图谱(TCGA)数据分析CENP-N基因在503例胃癌组织和125例癌旁组织中的表达水平;以收集的143例胃癌患者癌组织、癌旁组织以及人胃癌细胞株SNU-1、HS-746T、AGS、MGC-803及人胃黏膜细胞GES1为研究对象,qRT-PCR法检测CENP-N mRNA水平,Western blot检测CENP-N蛋白表达;体外培养胃癌SNU-1细胞株,分为空白对照组、siRNA-NC组(阴性对照组)、CENP-N-siRNA组(沉默CENP-N表达组)、通路激活剂组(CENP-N-siRNA+740Y-P组)。qRT-PCR法检测CENP-N mRNA水平;CCK-8法、流式细胞仪分别检测细胞增殖、凋亡情况;免疫印迹法检测细胞增殖相关核抗原(PCNA)、凋亡蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]及磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)通路相关蛋白表达情况。结果利用GEPIA网站发现CENP-N mRNA在胃癌组织、癌旁组织中的表达分别为4.25±0.36、1.45±0.21,差异有统计学意义(P<0.05);与癌旁组织比较,胃癌组织中CENP-N mRNA及蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与GES1细胞比较,CENP-N mRNA在胃癌SNU-1、HS-746T、AGS、MGC-803细胞中的表达水平显著升高,且CENP-N mRNA在SNU-1细胞中的表达水平最高,因此,选择SNU-1细胞进行后续实验研究。细胞成功转染;与空白对照组、siRNA-NC组比较,CENP-N-siRNA组SNU-1细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05),PCNA、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR表达显著降低(P<0.05);与CENP-N-siRNA组比较,通路激活剂组SNU-1细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达显著降低(P<0.05),PCNA、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR表达显著升高(P<0.05)。结论沉默CENP-N表达可抑制胃癌细胞增殖并诱导凋亡,可能是通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路实现的。

关键词：着丝粒蛋白-N 胃癌磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路增殖凋亡

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组织芯片技术检测SIRT6蛋白在结肠癌组织中的表达及其临床意义

引用

吉林大学学报（医学版） 2019年第4期45卷 893-898,I0007页

作者：李婳曹艳莎赵津平任甫李宁锦州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室辽宁锦州121000 锦州医科大学附属第一医院肿瘤血管与微环境实验室辽宁锦州121000 锦州医科大学生物人类学研究所辽宁锦州121000

目的:探讨NAD依赖性蛋白脱乙酰基酶sirtuin-6(SIRT6)蛋白在结肠癌组织中的表达及其与结肠癌患者临床病理参数之间的关系,阐明SIRT6蛋白在结肠癌发生发展中的作用。方法:选取术前均未行放化疗的100例结肠癌患者的结肠癌组织和癌旁组织,... 详细信息

目的:探讨NAD依赖性蛋白脱乙酰基酶sirtuin-6(SIRT6)蛋白在结肠癌组织中的表达及其与结肠癌患者临床病理参数之间的关系,阐明SIRT6蛋白在结肠癌发生发展中的作用。方法:选取术前均未行放化疗的100例结肠癌患者的结肠癌组织和癌旁组织,采用组织芯片技术和免疫组织化学SP法检测结肠癌组织和癌旁组织中SIRT6蛋白表达水平,采用秩和检验分析SIRT6蛋白表达水平与结肠癌患者临床病理参数的关系,采用Kaplan-Meier生存曲线、单因素和多因素生存分析法分析结肠癌患者临床病理参数与预后的关系。结果: SIRT6蛋白在结肠癌组织细胞核和胞浆中的表达水平均明显高于癌旁组织(Z=-4.603,P=0.000;Z=-7.610,P=0.000)。Kaplan-Meier单因素和多因素分析,细胞核中SIRT6蛋白高表达的结肠癌患者预后更好且是其独立预后影响因子(HR=2.345,P=0.003),年龄较小及T、N分期较低的患者生存率更高(HR=0.394,P=0.004;HR=2.301,P=0.012;HR=2.423,P=0.048),细胞浆中SIRT6蛋白高表达与结肠癌患者预后无关联性(HR=1.309,P=0.333)。结论: SIRT6蛋白在结肠癌细胞核中高表达可作为结肠癌预后良好的评价指标。

关键词：结肠肿瘤 NAD依赖性蛋白脱乙酰基酶sirtuin-6 组织芯片免疫组织化学

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BAG3蛋白Ser187磷酸化位点定点突变促进FRO细胞迁移和侵袭

引用

中国生物化学与分子生物学报 2018年第8期34卷 868-875页

作者：李宁曹艳莎李婳赵津平任甫李克研锦州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室辽宁锦州121000 锦州医科大学附属第一医院肿瘤血管与微环境实验室辽宁锦州121000 锦州医科大学生物人类学研究所辽宁锦州121000 锦州医科大学附属第一医院心内科辽宁锦州121000

Bcl-2相关抗凋亡蛋白3(Bcl-2 associated athanogene 3,BAG3)是BAG家族的重要成员,调节肿瘤细胞的黏附、迁移和侵袭,促进恶性肿瘤的复发和转移。我们的前期工作证明,PKCδ可催化BAG3的Ser187位点磷酸化。本文研究BAG3蛋白磷酸化修饰对... 详细信息

Bcl-2相关抗凋亡蛋白3(Bcl-2 associated athanogene 3,BAG3)是BAG家族的重要成员,调节肿瘤细胞的黏附、迁移和侵袭,促进恶性肿瘤的复发和转移。我们的前期工作证明,PKCδ可催化BAG3的Ser187位点磷酸化。本文研究BAG3蛋白磷酸化修饰对甲状腺癌FRO细胞迁移、侵袭的影响及其可能机制。通过定点突变的方法,将BAG3蛋白的187位丝氨酸突变为天冬氨酸(S187D)模拟磷酸化,或者将丝氨酸突变为丙氨酸(S187A)抵抗磷酸化,从而间接推测BAG3蛋白Ser187位点磷酸化对FRO细胞迁移、侵袭的影响。FRO细胞转染野生型BAG3、模拟磷酸化型BAG3、阻碍磷酸化型BAG3,通过划痕愈合实验和Transwell转移小室实验,观察BAG3蛋白磷酸化对FRO细胞迁移、侵袭的影响。进一步通过PKC激活剂和抑制剂,研究BAG3蛋白磷酸化对FRO细胞迁移、侵袭影响的机制。结果显示,FRO BAG3-S187D模拟磷酸化组细胞在培养24 h、48 h时,划痕愈合率分别达到35%和80%。Transwell及三维Matrigel转移小室实验显示,平均每个视野穿膜细胞数分别达到180和350个,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。PKC激活剂TPA及抑制剂Rottelerin处理FRO WT-BAG3细胞,24 h愈合率分别为40%和15%,48 h划痕愈合率分别为55%和18%,Transwell穿膜细胞数分别为240和70个,与对照组细胞相比,差异显著(P<0.05)。本研究提示,BAG3蛋白Ser187磷酸化修饰,可促进甲状腺癌FRO细胞迁移、侵袭,其机制可能与PKC信号通路有关。

关键词： Bcl-2相关抗凋亡蛋白3 磷酸化迁移侵袭

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