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Ad-ING4对人大细胞肺癌NCI-H460细胞移植瘤抑癌效应的体内实验研究

中华实验外科杂志 2021年第7期38卷 1295-1299页

作者：梁光辉丁志丹李振轩杨吉成赵军邢文群郑州大学附属肿瘤医院胸外科 450008 郑州大学第一附属医院胸外科 450052 苏州大学基础医学院细胞与分子生物学教研室 215123 苏州大学附属第一医院心胸外科 215000

目的:探讨腺病毒介导的ING4基因表达对NCI-H460肺癌细胞裸鼠移植瘤的抑癌增效作用及分子机制。方法:用Ad-ING4重组腺病毒在裸鼠NCI-H460移植瘤的瘤体内注射治疗,观察肿瘤生长变化,治疗结束后3 d处死裸鼠、摘取瘤体并称瘤体重量;免疫组... 详细信息

目的:探讨腺病毒介导的ING4基因表达对NCI-H460肺癌细胞裸鼠移植瘤的抑癌增效作用及分子机制。方法:用Ad-ING4重组腺病毒在裸鼠NCI-H460移植瘤的瘤体内注射治疗,观察肿瘤生长变化,治疗结束后3 d处死裸鼠、摘取瘤体并称瘤体重量;免疫组织化学检测瘤体组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、生存素(Survivin)等相关因子的表达。组间数据比较采用t检验。结果:动物实验结果表明,Ad-ING4组的平均体积明显低于磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline,PBS)对照组(720.20±23.51,t=30.64,P<0.05)和Ad-GFP空病毒组(469.90±32.57,t=14.43,P<0.05),差异有统计学意义;平均瘤体重量明显低于Ad-GFP组(0.732±0.068,t=9.26,P<0.01)和PBS组(0.757±0.049,t=15.32,P<0.05),差异有统计学意义;Ad-ING4重组腺病毒能显著抑制裸鼠NCI-H460移植瘤的生长,瘤重的抑制率达32.69%,与空病毒载体Ad-GFP组和细胞对照PBS组比较差异有统计学意义(P<0.05);免疫组织化学结果显示Ad-ING4重组腺病毒能明显上调bax和Caspase-3蛋白的表达水平,下调bcl-2和Survivin蛋白的表达水平。结论:腺病毒介导的IL-24基因可明显抑制人肺癌细胞NCI-H460移植瘤的生长,诱导其凋亡,其分子机制可能与上调bax、Caspase-3等促凋亡因子的表达,下调bcl-2、Survivin等凋亡抑制因子的表达有关。

关键词：肺癌腺病毒载体肿瘤抑制

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巨噬细胞mTOR活化促进小鼠机体有氧糖酵解

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赣南医学院学报 2020年第3期40卷 274-278页

作者：刘小琳柯志勇宋千成梁康檐南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515

目的:探讨巨噬细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活性在有氧糖酵解中的调节作用。方法:对巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠(Lysm-Cre TSC1 flox/flox)和对照小鼠(TSC1 flox/flox)进行高脂饮食造模,通过葡萄糖糖耐量实验(IPGTT)和胰岛素耐受实... 详细信息

目的:探讨巨噬细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活性在有氧糖酵解中的调节作用。方法:对巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠(Lysm-Cre TSC1 flox/flox)和对照小鼠(TSC1 flox/flox)进行高脂饮食造模,通过葡萄糖糖耐量实验(IPGTT)和胰岛素耐受实验(ITT)分析巨噬细胞mTOR活化对小鼠机体血糖的调节作用。雷帕霉素处理KO小鼠和WT小鼠的原代巨噬细胞,利用生化分析仪检测葡萄糖消耗和乳酸生成。用雷帕霉素(2 mg·g^-1)对两组小鼠灌胃处理,2周后行IPGTT实验。利用免疫荧光染色实验观察小鼠肝组织中6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-磷酸酶-3(PFKFB3)的分布。结果:通过高脂饮食造模后,小鼠体重明显增加,并出现了胰岛素抵抗。与WT小鼠比较,KO小鼠出现更加严重的胰岛素抵抗,胰岛素分泌的量也增多。雷帕霉素处理后,与WT小鼠相比,KO小鼠的原代腹腔巨噬细胞葡萄糖消耗量和乳酸生成均明显降低(P<0.05);小鼠进行雷帕霉素灌胃后,相比于WT小鼠,KO小鼠血糖值明显升高(P<0.05)。葡萄糖负荷30 min时血糖值达到最高,为21.85 mmol·L^-1。免疫荧光染色显示KO小鼠的肝组织有大量的PFKFB3蛋白表达。结论:巨噬细胞mTOR活化通过调节PFKFB3促进有氧糖酵解。

关键词：巨噬细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-磷酸酶-3 有氧糖酵解

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基于学生自主学习能力的教学模式——微课在《细胞生物学》教学中的应用

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中国细胞生物学学报 2019年第5期41卷 950-954页

作者：刘芳刘宽郭童童肖俐唐珉李刚南昌大学医学部基础医学院细胞生物学教研室

将多种教学方法和手段优化组合,以学生的自主学习为着眼点,全方位、多角度地培养具有岗位胜任力的医学人才是目前医学教学改革的重点。为培养学生自主学习的能力和方法,并针对《细胞生物学》现有教学方式的不足,我们在教学过程中运用了... 详细信息

将多种教学方法和手段优化组合,以学生的自主学习为着眼点,全方位、多角度地培养具有岗位胜任力的医学人才是目前医学教学改革的重点。为培养学生自主学习的能力和方法,并针对《细胞生物学》现有教学方式的不足,我们在教学过程中运用了微课教学的模式:学生围绕相应的主题进行文献的查阅并自主制作微课;课程结束后,对学生的微课制作与课外作业的完成情况进行考核,并计入最终考核成绩。结果分析表明,微课的教学模式,能达到预期教学目标,有助于优化细胞生物学教学内容和前沿知识,激发学习兴趣,充分锻炼了独立思考潜能,提高了学生自主学习的能力。

关键词：微课细胞生物学自主学习

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皮肤优势型慢性移植物抗宿主病小鼠模型的构建

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第三军医大学学报 2021年第21期43卷 2286-2293页

作者：王蔚浩杨世杰杜雨軒王筱淇洪涛何云地王瑞马超安慧慧王俊洁张云芳高强国张曦陆军军医大学(第三军医大学)第二附属医院血液病医学中心全军血液病中心创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400037 遵义医科大学第二附属医院检验科贵州遵义563099 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院细胞生物学教研室重庆400038

目的构建皮肤优势型慢性移植物抗宿主病(chronic graft-versus-host disease,cGVHD)小鼠模型。方法利用致死剂量辐照BALB/c小鼠,并接受来自B10.D2供鼠混合的骨髓细胞和脾脏细胞以构建皮肤优势型cGVHD小鼠模型,通过小鼠临床表现、病理特... 详细信息

目的构建皮肤优势型慢性移植物抗宿主病(chronic graft-versus-host disease,cGVHD)小鼠模型。方法利用致死剂量辐照BALB/c小鼠,并接受来自B10.D2供鼠混合的骨髓细胞和脾脏细胞以构建皮肤优势型cGVHD小鼠模型,通过小鼠临床表现、病理特征及靶器官细胞亚群评估模型构建情况。结果模型小鼠的临床表现以皮肤脱毛、硬化、皮屑、结痂和由皮肤皱缩硬化引起的弓背和关节僵直为主,临床病理评分随疾病进展升高,但无明显肠道cGVHD表现。病理改变中皮肤出现明显胶原沉积,毛囊减少甚至消失,而其他靶器官病理改变不明显。对以上靶器官行T细胞亚群分析,发现Th1细胞、CD4^(+)IL-13^(+)T细胞和Tc1细胞与疾病进展密切。结论成功构建可用于实验研究的皮肤优势型小鼠cGVHD模型,病理变化主要以皮肤纤维化表现为主。

关键词：慢性移植物抗宿主病皮肤肝脏肺脏 T细胞

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人脐带间充质干细胞预防小鼠急性移植物抗宿主病作用及其机制研究

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第三军医大学学报 2021年第21期43卷 2276-2285页

作者：洪涛王瑞王筱淇王蔚浩杜雨軒何云地马超安慧慧王俊洁张云芳高强国杨世杰张曦陆军军医大学(第三军医大学)第二附属医院血液病医学中心全军血液病中心创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400037 遵义医科大学第二附属医院检验科贵州遵义563099 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院细胞生物学教研室重庆400038

目的探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs)对小鼠急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease,aGVHD)的预防效果并初步探索其作用机制。方法通过对接受全身辐照的雄性BALB/c小鼠移植雄性C57BL/6小鼠的骨髓细胞和脾脏细胞,构建小鼠异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)后aGVHD模型,建模部分实验分组:BM组[尾静脉注射500μL供者C57BL/6小鼠骨髓细胞(5×10^(6)/只)悬液]和aGVHD组[尾静脉注射500μL骨髓细胞(5×10^(6)/只)和脾脏细胞(5×10^(6)/只)混悬液]。观察小鼠生存率、临床评分和体质量变化;流式细胞术检测移植后嵌合度;HE染色观察aGVHD靶器官(肺脏、肝脏、结肠、小肠)的病理学改变。收集P4代HUCMSCs,于移植当天混合供者骨髓细胞和脾脏细胞输注BALB/c小鼠,实验分组:①aGVHD组(处理同建模部分);②aGVHD+MSCs组[经尾静脉注射500μL骨髓细胞(5×10^(6)/只)、脾脏细胞(5×10^(6)/只)和HUCMSCs(5×10^(5)/只)混悬液]。观察HUCMSCs对aGVHD的预防效果,应用ELISA检测各组小鼠血清IFN-γ、TNF-α浓度;流式细胞术检测CD4^(+)T细胞在靶器官中绝对数计数和凋亡水平。结果aGVHD组较BM组生存率降低、临床评分增高、体质量减轻明显(P<0.05),靶器官病理损伤更为严重(P<0.05);移植后小鼠达完全嵌合。HUCMSCs输注显著改善移植后小鼠生存、降低临床评分和靶器官病理损伤(P<0.05),并降低血清炎症因子浓度(P<0.05),增加CD4^(+)T细胞在靶器官中的凋亡,CD4^(+)T细胞绝对数计数显著下降(P<0.05)。结论HUCMSCs联合allo-HSCT能有效预防及减轻小鼠aGVHD,其作用机制主要是HUCMSCs介导淋巴细胞凋亡,减少其在靶器官中的浸润和调控炎症因子分泌。

关键词：异基因造血干细胞移植急性移植物抗宿主病人脐带间充质干细胞细胞疗法炎症因子

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巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠的构建

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宁夏医学杂志 2020年第5期42卷 385-387,I0001页

作者：刘小琳梁康檐南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515

目的为研究TSC1在巨噬细胞极化中的作用,拟建立巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠,提供稳定的动物模型。方法利用Cre-loxP系统构建巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠(LysM-Cre TSC1flox/flox),并通过PCR和Western-Blot鉴定模型建立是否成功。结果通... 详细信息

目的为研究TSC1在巨噬细胞极化中的作用,拟建立巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠,提供稳定的动物模型。方法利用Cre-loxP系统构建巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠(LysM-Cre TSC1flox/flox),并通过PCR和Western-Blot鉴定模型建立是否成功。结果通过PCR和Western-Blot鉴定LysM-Cre TSC1flox/flox模型建立成功,mTOR活性明显升高。结论成功构建巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠,为TSC1在巨噬细胞极化中的作用研究提供实验基础。

关键词：结节性硬化复合物1 巨噬细胞 mTOR 基因敲除

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亚麻叶白千层内生真菌Penicillium citrinum YMY-1次生代谢产物研究

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中南药学 2022年第10期20卷 2223-2227页

作者：张莎邓小华旷敏彭伟伟郑雨婷许立曾广源艾卫敏邹振兴中南大学湘雅药学院长沙410013 慢病诊疗小分子药物发现与转化湖南省重点实验室长沙410013 中南大学基础医学院人体解剖学与神经生物学系长沙410013 湘潭医卫职业技术学院医学基础课部人体解剖学与生理学教研室湖南湘潭411012

目的研究亚麻叶白千层植物内生真菌Penicillium citrinum YMY-1的化学成分。方法采用大孔树脂、硅胶、ODS、Sephadex-LH-20柱色谱及Pre-HPLC现代色谱方法进行分离纯化,并通过HR-ESI-MS、NMR等波谱手段对所得化合物进行结构鉴定。结果... 详细信息

目的研究亚麻叶白千层植物内生真菌Penicillium citrinum YMY-1的化学成分。方法采用大孔树脂、硅胶、ODS、Sephadex-LH-20柱色谱及Pre-HPLC现代色谱方法进行分离纯化,并通过HR-ESI-MS、NMR等波谱手段对所得化合物进行结构鉴定。结果从中分离出12个化合物,分别鉴定为chromosulfine(1)、methyl 8-hydroxy-6-methyl-9-oxo-9H-xanthene-1-carboxylate(2)、penicitrinone A(3)、rubasperone B(4)、quinolactacin Al(5)、quinolactacin A2(6)、3,4,5-三甲基-1,2-苯二酚(7)、12-hydroxysorbicillin(8)、2-(hept-5-enyl)-3-methyl-4-oxo-6,7,8,8a-tetrahydro-4H-pyrrolo[2,1-b]-1,3-oxazine(9)、dihydrocitrinone(10)、6,8-dihydroxy-3,4,5,7-tetramethyl-3,4-dihydroisocoumarin(11)和β-麦角甾醇(12)。结论化合物4和8为首次从青霉属真菌中分离得到。

关键词：内生真菌亚麻叶白千层青霉属 Penicillium citrinum YMY-1 化学成分

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河北承德云枫岭地区长角血蜱种群动态调查分析

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河北师范大学学报（自然科学版） 2020年第1期44卷 57-61页

作者：田雪斌苏永志沈春阳陈素敏张韵秋王泽兵李邦跃刘畅许士奇承德医学院基础医学院病原生物学教研室河北承德067000 承德医学院动物实验中心河北承德067000 承德医学院基础医学院细胞生物学教研室河北承德067000 承德市中心医院河北承德067000 承德医学院基础医学院河北承德067000

长角血蜱作为河北省优势蜱,掌握其种群动态变化规律,可为京津冀地区控制蜱种群数量和预防蜱传疾病发生提供科学依据.实验采集地区位于河北省承德市云枫岭风景区,采用人工布旗法采集蜱,温湿度记录仪记录采集地点温湿度数据.结果显示:长... 详细信息

长角血蜱作为河北省优势蜱,掌握其种群动态变化规律,可为京津冀地区控制蜱种群数量和预防蜱传疾病发生提供科学依据.实验采集地区位于河北省承德市云枫岭风景区,采用人工布旗法采集蜱,温湿度记录仪记录采集地点温湿度数据.结果显示:长角血蜱成蜱每年3月开始活动,成蜱数量最高峰出现在6月,8月从植被上消失;若蜱每年3月开始活动,若蜱活动的最高峰出现在5月,随后数量逐渐减少,9月从植被上消失;幼蜱每年最早开始活动时间为5月,8月末9月初达到高峰,11月从植被上消失.

关键词：蜱温度湿度种群动态

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16q缺失调节miR-3145-5p/CYP2E1表达对肝癌细胞增殖、迁移和凋亡及患者预后的影响

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广西医科大学学报 2022年第2期39卷 227-233页

作者：邱龙凤卢玉飞吴圣明木和·穆罕默德胡启平广西医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室南宁530021 广西医科大学附属肿瘤医院影像诊断中心南宁530021 广西医科大学长寿与老年相关疾病教育部重点实验室南宁530021

目的:探讨人16号染色体长臂(16q)缺失相关差异表达基因(DEGs)和miRNAs(DEmiRs)对肝癌细胞增殖、迁移和凋亡及肝细胞癌(HCC)患者预后的影响及其机制。方法:从肿瘤与癌症基因组图谱(TCGA)数据库的HCC数据集中获取全转录组数据和拷贝数变异... 详细信息

目的:探讨人16号染色体长臂(16q)缺失相关差异表达基因(DEGs)和miRNAs(DEmiRs)对肝癌细胞增殖、迁移和凋亡及肝细胞癌(HCC)患者预后的影响及其机制。方法:从肿瘤与癌症基因组图谱(TCGA)数据库的HCC数据集中获取全转录组数据和拷贝数变异(CNV)数据,就16q缺失对数据集进行DEGs和DEmiRs筛选;从Kaplan-Meier Plotter数据库中获取DEGs对患者生存影响图谱;通过miRWalk网站预测DEGs表达调节相关的miRNAs。构建miRNA mimic慢病毒载体转染Huh7细胞,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blotting法检测DEmiRs(miR-3145-5p)、DEGs(CYP2E1)的表达,分别采用CCK-8、细胞克隆形成实验、Transwell侵袭实验、细胞划痕实验和流式细胞术检测细胞增殖、侵袭、迁移、细胞周期和凋亡。结果:从数据集中筛选出与16q缺失相关的8个miRNAs和12个关键DEGs;根据miRWalk网站预测和分析结果,选择miR-3145-5p与CYP2E1进行后续实验验证。与NC-con294组比较,miR-3145-5p mimic组miR-3145-5p表达和细胞凋亡率升高,CYP2E1蛋白表达水平降低,细胞增殖和侵袭能力增强(均P<0.01),两组各周期细胞所占百分比和细胞迁移能力比较无明显差异(P>0.05)。结论:16q缺失可能通过上调miR-3145-5p靶向下调CYP2E1表达来促进HCC细胞的增殖和侵袭而进一步增加细胞的恶性表型,其将来可作为16q缺失亚型HCC的潜在治疗靶标,为HCC的诊断与治疗提供新的依据。

关键词： 16q缺失拷贝数变异 miR-3145-5p CYP2E1 肝细胞癌预后

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KIF3A在单侧输尿管梗阻小鼠肾脏中的表达及意义

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南方医科大学学报 2020年第2期40卷 219-224页

作者：古文清潘文斌朱茜肖潇赵岩岩刘雅琴刘俊李明基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515 中山大学孙逸仙纪念医院生物样本库广东广州510120 南方医科大学药学院广东广州510515 南方医科大学珠江医院泌尿外科广东广州510028

目的通过研究KIF3A在单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠和TGF-β1诱导的NRK-52E细胞中的表达情况,探讨KIF3A在肾间质纤维化中的作用。方法将36只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(Sham,n=18)和单侧输尿管梗阻组(UUO,n=18),分别于术后7、14、21 d处... 详细信息

目的通过研究KIF3A在单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠和TGF-β1诱导的NRK-52E细胞中的表达情况,探讨KIF3A在肾间质纤维化中的作用。方法将36只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(Sham,n=18)和单侧输尿管梗阻组(UUO,n=18),分别于术后7、14、21 d处死小鼠。苏木素-伊红(HE)染色、马松(Masson)三色法染色和天狼星红(Sirius Red)染色观察小鼠肾间质纤维化程度,RT-PCR、免疫组织化学(IHC)和免疫印迹(Western blot)检测小鼠肾组织KIF3A的表达和分布。免疫印迹检测小鼠肾组织KIF3A、E-cadherin和α-SMA蛋白的表达。TGF-β1诱导NRK-52E细胞转分化后,免疫印迹检测KIF3A、E-cadherin、α-SMA、Wnt4和β-catenin蛋白的表达。结果与Sham组相比,UUO小鼠肾间质纤维化程度随着梗阻时间延长而增加,表明造模成功。同时,KIF3A mRNA和蛋白表达均增高,于21 d达到高峰,α-SMA蛋白表达显著上调,E-cadherin蛋白表达明显降低。NRK-52E细胞发生转分化时,KIF3A蛋白的表达增多(P<0.001),同时wnt/β-catenin信号通路中Wnt4和β-catenin蛋白表达增加(P<0.05,P<0.0001)。结论KIF3A可能通过wnt/β-catenin信号通路介导的上皮细胞-间充质转化参与肾纤维化的发生发展过程。

关键词： KIF3A 肾间质纤维化 wnt/β-catenin信号通路 EMT

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