检索结果-内蒙古大学图书馆

中华麻醉学杂志 2024年第4期44卷 482-487页

作者：田小霞来丽娜刘款储佳钊温夏张艳王文宙长治医学院病理生理学教研室长治046000 长治医学院药理学教研室长治046000 长治医学院第一临床学院长治046000 长治医学院基础医学部长治046000

目的评价脾脏浆细胞样树突状细胞(pDCs)活化对小鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。方法动物实验:SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠36只,10周龄,体质量22~27 g,按照随机数字表法分为3组(n=12):假手术组(Sham组)、心肌缺血组(MI组)和心肌缺血再灌注... 详细信息

目的评价脾脏浆细胞样树突状细胞(pDCs)活化对小鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。方法动物实验:SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠36只,10周龄,体质量22~27 g,按照随机数字表法分为3组(n=12):假手术组(Sham组)、心肌缺血组(MI组)和心肌缺血再灌注组(MI/R组)。MI组阻断小鼠左冠状动脉前降支(LAD)40 min,MI/R组阻断LAD 40 min再灌注1 h,Sham组仅穿线不结扎。造模成功后,随机选取各组3只摘取心脏采用TTC-亚甲蓝双染色法测定心肌梗死面积,随机选取各组3只摘取心脏采用HE染色法观察心肌组织病理学结果,其余各组6只先采集腹主动脉血样,采用ELISA法检测血浆干扰素α(IFN-α)浓度,再摘取心脏后收集小鼠心脏灌洗液(CP)。细胞实验:SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠12只,10周龄,体质量22~27 g,采用免疫磁珠法分离脾脏pDCs(阳性细胞比例>85%),采用随机数字表法分为Sham组CP刺激pDCs组(pDCs+CP-Sham组)、MI组CP刺激pDCs组(pDCs+CP-MI组)、MI/R组CP刺激pDCs组(pDCs+CP-MI/R组)和PBS刺激pDCs组(pDCs+PBS组),分别采用Sham组、MI组、MI/R组小鼠CP和PBS刺激8 h。采用流式细胞术检测各组pDCs表面CD45、共刺激分子CD80、CD86和主要组织相容性复合物Ⅱ(MHCⅡ)分子的表达,采用ELISA法检测各组细胞培养上清液IFN-α的浓度。结果动物实验:与Sham组和MI组比较,MI/R组小鼠心肌梗死体积百分比升高,血浆IFN-α浓度增加(P<0.05),心肌细胞出现明显空泡变性,心肌纤维断裂严重,大量炎症细胞浸润;Sham组各指标与MI组比较差异无统计学意义(P>0.05)。细胞实验:与pDCs+CP-Sham组比较,pDCs+CP-MI组CD80、CD86和MHCⅡ分子表达上调(P<0.05),pDCs+CP-MI/R组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与pDCs+CP-MI/R组比较,pDCs+CP-MI组上述指标表达上调(P<0.05);与pDCs+CP-Sham组和pDCs+CP-MI/R组比较,pDCs+CP-MI组细胞培养上清液IFN-α浓度增加(P<0.05),pDCs+CP-Sham组与pDCs+CP-MI/R组IFN-α浓度比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论小鼠心肌缺血再灌注损伤的机制可能与心肌缺血后脾脏pDCs受刺激活化产生IFN-α有关。

关键词：树突状细胞心肌再灌注损伤炎症干扰素α

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去卵巢骨质疏松大鼠腹腔注射白藜芦醇及雌二醇的效果评价

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中国骨质疏松杂志 2024年第2期30卷 222-227页

作者：黄燕李钰娜宋丽华牛晓红冀菁荃李卿长治医学院基础医学部生化教研室山西长治046000 运城护理职业学院山西运城044000 长治医学院附属和济医院内分泌科山西长治046000 长治医学院基础医学部病生教研室山西长治046000

目的评价腹腔注射白藜芦醇(resveratrol,RSV)、雌二醇(estradiol,E)抗绝经后骨质疏松症的效果,为白藜芦醇作为潜在辅助性治疗药物提供依据。方法将大鼠随机分为正常组、假手术(Sham)组、去卵巢(OVX)组、OVX+RSV组、OVX+雌二醇(OVX+E)组... 详细信息

目的评价腹腔注射白藜芦醇(resveratrol,RSV)、雌二醇(estradiol,E)抗绝经后骨质疏松症的效果,为白藜芦醇作为潜在辅助性治疗药物提供依据。方法将大鼠随机分为正常组、假手术(Sham)组、去卵巢(OVX)组、OVX+RSV组、OVX+雌二醇(OVX+E)组,每组10只。OVX+RSV组腹腔注射RSV[10 mg/(kg·d)],OVX+E组腹腔注射β-雌二醇[0.1 mg/(kg·d)]。Sham组和OVX组注射生理盐水,连用12周。每4周进行全身双能X线测量分析,收集骨密度、体脂率及肌肉含量等数据。12周后,收集心脏、肝脏、胰腺、肾脏等相关数据,计算脏器系数;收集血清,测定尿素氮及肌酐水平;收集两侧股骨,分别行HE及Goldner染色。结果DXA结果显示,白藜芦醇可有效防止骨密度的降低,同时保持与正常组一致的体脂率与肌肉含量,其效果与雌激素相当。脏器系数结果显示,除白藜芦醇组肾脏系数显著降低外,肝脏、胰腺及心脏系数各组之间无显著性差异。与正常组及去卵巢组相比,白藜芦醇组大鼠空腹血清尿素氮和肌酐水平均显著降低,雌激素组肌酐水平显著降低。右侧股骨HE染色显示白藜芦醇组与雌激素组较去卵巢组的骨小梁结构均有改善,并且RSV干预后骨小梁数量和小梁间的连接改善更为明显。左侧股骨Goldner染色结果同样显示,OVX+RSV组股骨小梁数量和小梁厚度显著增加,骨小梁分离度显著降低。结论本研究结果显示RSV的抗骨质疏松作用与雌二醇相当,且未观察到对肝、肾、胰腺及心脏明显的毒副作用,此结果可为其作为临床辅助性用药提供依据。

关键词：白藜芦醇雌二醇绝经后骨质疏松症腹腔注射

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白芍总苷对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用及机制

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首都医科大学学报 2024年第2期45卷 302-311页

作者：孙婧辛灵恩冯贤珍丁雨璇张玉彪王佳长治医学院基础医学部生理教研室山西长治046000 衰老机制研究与转化应用厅市共建山西省重点实验室培育基地山西长治046000 代谢紊乱相关心血管疾病北京市重点实验室北京100069 长治医学院基础医学部免疫教研室山西长治046000 长治医学院基础医学部山西长治046000 长治医学院第二临床学院山西长治046000

目的探讨白芍总苷(total glucosides of paeony,TGP)治疗急性肺损伤小鼠的效果及机制。方法24只雌性C57小鼠采用数字表法随机分为4组:对照组、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)模型组、白芍总苷组(LPS+TGP)和地塞米松(dexamethasone,DEX)组(LPS+DEX),每组6只。采用LPS(4 ng/kg)经鼻吸入,连续5 d建立小鼠急性肺损伤模型;LPS+TGP组、LPS+DEX组分别给予50 mg·kg^(-1)·d^(-1) TGP和5 mg·kg^(-1)·d^(-1) DEX灌胃;观察记录各组小鼠的体质量变化;取肺组织做苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察肺病理损伤情况;流式细胞术检测外周血、脾脏、肺脏组织树突状细胞(dendritic cell,DC)、中性粒细胞和巨噬细胞比例变化,肺脏组织M1型、M2型巨噬细胞的比例变化;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分析支气管肺泡灌洗液中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)浓度;实时荧光定量聚合酶链反应(real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测肺组织IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)mRNA表达水平;蛋白印迹法(Western blotting)检测核转录因子-κB p65(nuclear transcription factor-κB p65,NF-κB p65)和磷酸化型核转录因子-κB p65(phospho-nuclear factor-κB p65,pNF-κB p65)蛋白含量。结果TGP和DEX可明显改善LPS引起的小鼠体质量减轻;HE染色显示LPS组小鼠肺脏组织炎性细胞浸润、肺泡间隔破坏和肺泡间质增厚,LPS+TGP组、LPS+DEX组小鼠肺部病理改变程度较LPS组减轻。外周血流式细胞结果显示:与LPS组相比,LPS+TGP组、LPS+DEX组中性粒细胞比例明显降低,DC细胞和巨噬细胞比例无明显改变;脾脏组织流式细胞结果显示:与LPS组相比,LPS+TGP组、LPS+DEX组小鼠中性粒细胞、DC细胞和巨噬细胞比例均显著下降,肺组织流式细胞分析结果显示:与LPS组相比,LPS+TGP组、LPS+DEX组肺组织巨噬细胞比例无明显改变,M1型细胞比例显著下降,M2型巨噬细胞比例升高,中性粒细胞比例下降。ELISA结果显示:与LPS组相比,支气管肺泡灌洗液中IL-6、IL-1β水平明显下降。RT-qPCR结果显示:与LPS组相比,LPS+TGP组和LPS+DEX组肺组织IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达水平显著下降;Western blotting结果显示:与LPS组相比,LPS+TGP组和LPS+DEX组NF-κB p65蛋白表达无明显改变,而pNF-κB p65蛋白表达较LPS组明显降低。结论TGP改善LPS诱导的急性肺损伤,具体机制可能与其降低外周血、肺脏中性粒细胞和脾脏炎症细胞比例,抑制肺巨噬细胞向M1型极化,抑制NF-κB炎症信号通路激活和炎症因子释放有关。

关键词：急性肺损伤白芍总苷炎症巨噬细胞

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真性球麻痹吞咽障碍患者间歇经口至食管管饲体验

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军事护理 2024年第1期41卷 66-69页

作者：莫梦燕易琦峰张鑫吴琼王蕊长治医学院附属和平医院耳鼻咽喉科山西长治046000 中南大学湘雅三医院护理学教研室湖南长沙410013 长治医学院附属和平医院康复医学科长治医学院附属和平医院护理部

目的了解真性球麻痹吞咽障碍患者间歇经口至食管管饲(intermittent oral-esophageal tube feeding,IOE)的真实体验,为IOE在真性球麻痹吞咽障碍患者中的优化应用提供参考。方法以目的性抽样法选取2022年3月至2023年3月在长治市某三级甲... 详细信息

目的了解真性球麻痹吞咽障碍患者间歇经口至食管管饲(intermittent oral-esophageal tube feeding,IOE)的真实体验,为IOE在真性球麻痹吞咽障碍患者中的优化应用提供参考。方法以目的性抽样法选取2022年3月至2023年3月在长治市某三级甲等医院康复医学科住院的真性球麻痹吞咽障碍患者16名为研究对象,对其进行半结构化访谈,采用Colaizzi现象学资料分析法并在Nvivo 11.0软件的辅助下整理分析资料。结果共凝练3个主题,即心理应激反应、感知益处、管饲照护需求。结论医护人员应重视真性球麻痹吞咽障碍患者的应激反应,强化益处体验,提供多元化支持,优化IOE应用策略。

关键词：真性球麻痹吞咽障碍间歇经口管饲真实体验

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Rheinheimera ***胞外角蛋白酶KerQH2的生物信息学分析

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食品工业科技 2022年第9期43卷 125-130页

作者：栗学清庞鑫高慧芳张廉芸宋英达武翠玲长治医学院基础医学部生物化学与分子生物学教研室山西长治046000 长治医学院精神卫生系山西长治046000 长治医学院临床医学系山西长治046000

目的:预测海洋菌Rheinheimera ***分泌的角蛋白酶KerQH2的结构特征及与底物的互作位点,为深入研究KerQH2对角蛋白底物的降解机理提供理论依据。方法:应用生物信息学技术对KerQH2的结构特征、作用于角蛋白底物的可能位点及关键氨基酸等... 详细信息

目的:预测海洋菌Rheinheimera ***分泌的角蛋白酶KerQH2的结构特征及与底物的互作位点,为深入研究KerQH2对角蛋白底物的降解机理提供理论依据。方法:应用生物信息学技术对KerQH2的结构特征、作用于角蛋白底物的可能位点及关键氨基酸等进行分析。结果:KerQH2为S8家族丝氨酸蛋白酶,其分子表面无规则卷曲占比较高,α-螺旋与β-折叠占比较低且多位于酶分子内部。KerQH2具有保守的催化三联体(Asp8、His41和Ser197),催化三联体区域表面静电势为中性。KerQH2催化结构域中含有大量保守的极性氨基酸及芳香族氨基酸,与底物结合有关的序列富含Gly和Ala。KerQH2主要切割疏水性氨基酸Val(V)/ILe(I)和极性氨基酸Cys(C)/Gln(Q)之间形成的肽键。结论:角蛋白酶KerQH2的特殊结构有助于其降解结构复杂角蛋白分子,这可能是海洋菌对海洋寡营养环境的一种适应性。

关键词：角蛋白酶 KerQH2 海洋菌 Rheinheimera sp. 生物信息学

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Siglec-15在肿瘤免疫微环境中的表达及意义的研究进展

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现代肿瘤医学 2023年第22期31卷 4280-4284页

作者：俞凯杰马丽莉贾建桃王金胜长治医学院第一临床学院病理学教研室山西长治046000 长治医学院附属和平医院病理科山西长治046000 山西省卫生健康委食管癌基础研究与临床转化重点实验室(长治医学院附属和平医院) 山西长治046000 长治医学院基础医学部病理生理学教研室山西长治046000

阻断程序性细胞死亡-1(PD-1)/PD-1配体1(PD-L1)是最广泛使用的免疫检查点阻断疗法,但PD-1/PD-L1通路在肿瘤免疫逃逸机制中所占比例不到40%,唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素15(Siglec-15)虽与PD-L1的同源性超过30%,但Siglec-15的免疫抑制... 详细信息

阻断程序性细胞死亡-1(PD-1)/PD-1配体1(PD-L1)是最广泛使用的免疫检查点阻断疗法,但PD-1/PD-L1通路在肿瘤免疫逃逸机制中所占比例不到40%,唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素15(Siglec-15)虽与PD-L1的同源性超过30%,但Siglec-15的免疫抑制功能独立于PD-1轴。目前国内外对其研究主要集中于Siglec-15在肿瘤免疫微环境(TIME)中的表达及其与预后的关系,本文回顾并总结了Siglec-15在TIME中的表达、预后以及治疗等方面的研究进展,阐述关于Siglec-15研究前景以及研究存在的不足,为Siglec-15进一步的研究奠定基础。

关键词： Siglec-15 肿瘤免疫微环境免疫调节免疫正常化

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多靶点蛋白酪氨酸激酶抑制剂Ponatinib对人肝癌细胞SK-Hep-1增殖、黏附和迁移能力的影响

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中国生物制品学杂志 2023年第6期36卷 668-672,679页

作者：刘畅裴晋红穆秀丽于保锋长治医学院基础部生物化学与分子生物学教研室山西长治046000 山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室山西太原030001

目的探讨多靶点蛋白酪氨酸激酶抑制剂Ponatinib对人肝癌细胞SK-Hep-1增殖、黏附和迁移能力的影响。方法常规培养SK-Hep-1细胞,分别加入Ponatinib等24种酪氨酸激酶抑制剂,MTT法检测Ponatinib对SK-Hep-1细胞存活和增殖的影响。常规培养SK-... 详细信息

目的探讨多靶点蛋白酪氨酸激酶抑制剂Ponatinib对人肝癌细胞SK-Hep-1增殖、黏附和迁移能力的影响。方法常规培养SK-Hep-1细胞,分别加入Ponatinib等24种酪氨酸激酶抑制剂,MTT法检测Ponatinib对SK-Hep-1细胞存活和增殖的影响。常规培养SK-Hep-1细胞至融合度达90%,分别加入0.1、0.5和1.0μmol/L Ponatinib,同时设对照组(不加Ponatinib),细胞缓慢聚集试验和细胞分离试验检测Ponatinib对SK-Hep-1细胞黏附能力的影响;划痕试验检测Ponatinib对SK-Hep-1细胞迁移能力的影响;Western blot法检测Ponatinib对SK-Hep-1细胞中E-cadherin蛋白表达水平的影响。结果24种酪氨酸激酶抑制剂对SK-Hep-1细胞均有抑制作用,其中Ponatinib抑制作用最强,IC_(50)达(0.288±0.044)μmol/L。与对照组比较,0.1、0.5和1.0μmol/L Ponatinib组细胞团块数明显减少(t分别为16.143、44.002、44.853,P均<0.001),含EDTA(TE)及CaCl_(2)(TC)胰酶消化后单个细胞数(N)的比值(N_(TC)/N_(TE))明显降低(t分别为4.276、10.625、27.571,P均<0.05),E-cadherin蛋白表达水平显著升高(t分别为-3.757、-4.561、-6.922,P均<0.05);划痕24及48 h后,0.1μmol/L Ponatinib组细胞划痕迁移率差异无统计学意义(t分别为0.473和0.872,P均>0.05),但0.5及1.0μmol/L Ponatinib组明显减小(t=6.272~16.733,P均<0.01)。结论Ponatinib可抑制SK-Hep-1细胞增殖和迁移,促进细胞黏附。

关键词：多靶点蛋白酪氨酸激酶抑制剂Ponatinib 肝癌 SK-Hep-1细胞增殖黏附迁移

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山西长治地区蜱媒病原微生物流行现状分析

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中国病原生物学杂志 2023年第9期18卷 1065-1069页

作者：崔佳李瑞晓刘益萍于娟缪玉徐爱玲栗冬梅饶华祥长治医学院基础医学部微生物学教研室山西长治046000 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所媒介生物控制室传染病预防控制国家重点实验室长治医学院基础医学部寄生虫学教研室长治医学院公共卫生与预防医学系流行病与卫生统计学教研室

目的了解山西长治地区蜱媒病原体,为科学进行媒介生物防控提供理论依据。方法采集山西省长治市5个县(区)的游离蜱、寄生蜱标本,首先采用形态学与DNA条码技术分类鉴定蜱标本,再采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)... 详细信息

目的了解山西长治地区蜱媒病原体,为科学进行媒介生物防控提供理论依据。方法采集山西省长治市5个县(区)的游离蜱、寄生蜱标本,首先采用形态学与DNA条码技术分类鉴定蜱标本,再采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)方法检测巴尔通体(Bartonella spp)、伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、莫氏立克次体(Rickettsia mooseri)、噬吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum)、土拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis)5种病原体,另外,随机挑取了来自不同地区的12个样品进行三代纳米孔测序(Nanopore sequencing)检测。结果本研究采集蜱虫标本523只,均为长角血蜱(Haemaphysalis longicornis),其中游离蜱109只,寄生蜱414只,雌性成蜱192只,雄性成蜱244只,若蜱87只。结果显示巴尔通体阳性5份,伯氏疏螺旋体、莫氏立克次体和噬吞噬细胞无形体阳性各1份,未检出土拉弗朗西斯菌。Nanopore测序结果发现蜱共生微生物主要分布在变形菌门(Proteobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes),属水平上主要分布在甲基菌属(Methylobacterium),鞘脂单胞菌属(Sphingomonas),青枯菌属(Ralstonia),食酸菌属(Acidovorax),丛毛单胞菌属(Comamonas),不动杆菌属(Acietobacter),假单胞菌属(Pseudomonas),葡萄球菌属(Staphylococcus),链球菌属(Streptococcus)。结论 qPCR方法与第三代测序技术Nanopore相结合能全面反应山西长治地区长角血蜱中病原微生物与其他潜在致病微生物的分布,提示可能存在人类致病风险。

关键词：长角血蜱蜱媒微生物荧光定量PCR Nanopore 山西长治

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酪氨酸激酶抑制剂BGJ398对人肝癌Huh-7细胞增殖、凋亡及迁移的影响及其作用机制

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中国生物制品学杂志 2023年第8期36卷 947-954页

作者：刘畅余安琪池奋清弓韬梁文婷于保锋长治医学院基础部生物化学与分子生物学教研室山西长治046000 长治医学院第一临床学院山西长治046000 山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室山西太原030001 山西大学环境科学研究所山西太原030001

目的评价酪氨酸激酶抑制剂BGJ398对人肝癌Huh-7细胞增殖、凋亡和迁移的影响,并探讨其作用机制。方法 MTT法检测10种酪氨酸激酶抑制剂对Huh-7细胞存活的影响,并分别采用单靶点动力学公式和双相动力学公式分析Huh-7细胞对BGJ398的敏感性... 详细信息

目的评价酪氨酸激酶抑制剂BGJ398对人肝癌Huh-7细胞增殖、凋亡和迁移的影响,并探讨其作用机制。方法 MTT法检测10种酪氨酸激酶抑制剂对Huh-7细胞存活的影响,并分别采用单靶点动力学公式和双相动力学公式分析Huh-7细胞对BGJ398的敏感性。将10、30和90 nmol/L BGJ398分别加入Huh-7细胞,同时设对照组(不加药物),37℃培养24 h,流式细胞术检测BGJ398对Huh-7细胞凋亡和周期的影响;划痕试验检测BGJ398对Huh-7细胞迁移能力的影响;Western blot法检测BGJ398对Huh-7细胞多条通路相关蛋白表达水平的影响。结果 10种酪氨酸激酶抑制剂均可抑制Huh-7细胞增殖,其中Huh-7细胞对BGJ398最敏感,IC50为(0.020±0.013)μmol/L;Huh-7细胞对BGJ398的反应由两相组成,其中F1相占92.8%(Kd1为36 nmol/L),F2相占7.2%(Kd2>1 000μmol/L)。与对照组比较,30和90 nmol/L BGJ398组Huh-7细胞凋亡率及处于G1期的细胞百分比均显著上升(t=-6.407~-4.459,P均<0.05),10、30和90 nmol/L BGJ398组处于S期的细胞百分比明显减少(t分别为2.982、7.859和12.425,P均<0.05);划痕24及48 h后,30、90 nmol/L BGJ398组划痕面积均明显减小(t=5.376~18.197,P均<0.05);30、90 nmol/L BGJ398组磷酸化成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor,FGFR)及磷酸化胞外信号调节激酶1/2(Erk1/2)蛋白的表达水平均明显下降(t=4.015~6.729,P均<0.01)。结论 BGJ398能够抑制人肝癌Huh-7细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞,可能是通过抑制FGFR磷酸化及MAPK信号通路实现的,BGJ398有望成为治疗肝癌的潜在药物。

关键词：酪氨酸激酶抑制剂BGJ398 细胞增殖细胞凋亡细胞周期细胞迁移信号通路

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铜绿假单胞菌丙酸代谢关键酶基因的克隆表达及生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2023年第5期18卷 547-551,556页

作者：崔国艳李壮崔佳刘建玲长治医学院微生物教研室山西长治046000 西北大学西部资源生物学与生物技术教育部重点实验室

目的克隆表达丙酸代谢关键酶基因prpB、prpC和prpD,分析预测相应表达蛋白潜在的结构和功能,为铜绿假单胞菌新型抗菌靶点的开发奠定基础。方法对铜绿假单胞菌中丙酸代谢关键基因prpB、prpC、prpD克隆入大肠埃希菌,构建相应的基因工程重组... 详细信息

目的克隆表达丙酸代谢关键酶基因prpB、prpC和prpD,分析预测相应表达蛋白潜在的结构和功能,为铜绿假单胞菌新型抗菌靶点的开发奠定基础。方法对铜绿假单胞菌中丙酸代谢关键基因prpB、prpC、prpD克隆入大肠埃希菌,构建相应的基因工程重组菌,通过镍柱亲和层析纯化重组蛋白,SDS-PAGE检测PrpB、PrpC和PrpD蛋白的分子质量及纯度。利用生物信息学软件预测PrpB、PrpC和PrpD蛋白的理化性质、疏水性、信号肽、二级结构和三级结构。结果重组菌用0.5 mmol/L IPTG于16℃条件下诱导,表达的重组蛋白PrpB、PrpC和PrpD主要以可溶性形式存在于上清中,经Ni柱亲和层析纯化得到相对分子质量分别为32×10^(3)、42×10^(3)、55×10^(3)的目的蛋白,与预期一致。生物信息学分析PrpB、PrpC和PrpD蛋白分别由298、375、494个氨基酸组成,相对分子质量分别为32.14×10^(3)、41.69×10^(3)、54.88×10^(3),等电点分别为5.33、6.03、6.15。3种蛋白均为亲水性蛋白,无信号肽,无跨膜结构。蛋白亚细胞定位于细胞质中,α螺旋和无规则卷曲是PrpB、PrpC和PrpD二级结构的主要蛋白质元件。结论成功表达了重组蛋白PrpB、PrpC和PrpD并进行了纯化。生物信息学预测PrpB、PrpC和PrpD含有丰富的α螺旋和无规则卷曲结构,为揭示PrpB、PrpC和PrpD蛋白的结构及丙酸代谢在铜绿假单胞菌中的生物学功能奠定了理论基础。

关键词：铜绿假单胞菌丙酸代谢蛋白表达生物信息学

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