检索结果-内蒙古大学图书馆

陆军军医大学学报 2024年第18期46卷 2046-2056页

作者：赵曼吴梓靖孙存叶演陈婷刘姝琳朱宝行赵安妮宋振杨赟孙红武曾浩陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038

目的探讨天然植物薰衣草精油对多重耐药鲍曼不动杆菌的抗菌作用及初步机制。方法用微量稀释法测定薰衣草精油对多重耐药鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度;用杀菌动力学研究进一步确定其起效和维持时间;用小鼠感染模型评价薰衣... 详细信息

目的探讨天然植物薰衣草精油对多重耐药鲍曼不动杆菌的抗菌作用及初步机制。方法用微量稀释法测定薰衣草精油对多重耐药鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度;用杀菌动力学研究进一步确定其起效和维持时间;用小鼠感染模型评价薰衣草精油对创口愈合的促进作用;用结晶紫染色定量测定法对其生物膜的抑制和清除作用进行研究;用激光共聚焦显微镜观察生物膜中细菌存活情况;用核酸蛋白测定仪器检测3 mg/mL、6 mg/mL薰衣草精油干预后的细菌DNA核酸和蛋白质泄漏量;用钾离子试剂盒测定钾离子泄漏量,并采用蛋白组学技术结合生物信息学研究方法,初步探究薰衣草精油抗多重耐药鲍曼不动杆菌的作用机制。结果薰衣草精油的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度均为6 mg/mL,在120 min时,该浓度可杀死几乎所有多重耐药鲍曼不动杆菌,且呈现明显的剂量依赖效应和时间依赖效应。整体动物模型评价表明,3 mg/mL和6 mg/mL薰衣草精油均能促进创口愈合,疗效明显。进一步研究发现,3 mg/mL薰衣草精油具有一定的多重耐药鲍曼不动杆菌生物膜抑制作用,且能显著增加DNA核酸和蛋白质的泄漏量,并能促进钾离子外流。同时,6 mg/mL薰衣草精油展现了对多重耐药鲍曼不动杆菌生物膜的清除作用。蛋白组学研究提示,薰衣草精油的抗菌作用可能与影响多重耐药鲍曼不动杆菌的氧化还原酶活性和细胞代谢过程,干扰细胞壁/膜/包膜等结构的生物合成有关。结论薰衣草精油在3 mg/mL时即可发挥对多重耐药鲍曼不动杆菌的抗菌作用,其作用机制可能与破坏细菌生物膜和干扰细菌代谢有关。

关键词：薰衣草精油多重耐药鲍曼不动杆菌抗菌作用作用机制

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WT1多肽乳佐剂疫苗的免疫增强效应及其对急性髓系白血病抗肿瘤效应研究

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陆军军医大学学报 2024年第9期46卷 1024-1033页

作者：叶演张泽珑朱宝行刘姝琳宋振袁庆鹏杨赟李海波邹全明曾浩孙红武陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系微生物与生化药学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038

目的评价Wilm瘤基因1(Wilms’ tumor gene1, WT1)多肽联合AddaVax^(TM)乳佐剂疫苗的稳定性、安全性、免疫增强效应及其对急性髓系白血病抗肿瘤效应。方法用MALDI-TOF-MS飞行时间质谱评价该佐剂疫苗中WT1多肽的稳定性;将C57BL/6雌性小... 详细信息

目的评价Wilm瘤基因1(Wilms’ tumor gene1, WT1)多肽联合AddaVax^(TM)乳佐剂疫苗的稳定性、安全性、免疫增强效应及其对急性髓系白血病抗肿瘤效应。方法用MALDI-TOF-MS飞行时间质谱评价该佐剂疫苗中WT1多肽的稳定性;将C57BL/6雌性小鼠按照随机数字表法分成3组:PBS组、WT1组和WT1+AddaVax^(TM)组,使用免疫剂量为抗原50μg/只、佐剂50μg/只,按照第0、14、28天肌肉注射免疫程序进行免疫。用HE染色评价疫苗肌肉注射小鼠脏器组织毒性;用ELISA检测细胞因子水平;ELISpot检测脾细胞分泌IFN-γ细胞数量;流式细胞术检测疫苗促体外骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells, BMDCs)成熟和促淋巴细胞活化及H-2Db WT1四聚体检测特异性CD8+T细胞比例;用C1498-mWT1稳转细胞株构建小鼠白血病肿瘤模型后,评价其预防与治疗的抗肿瘤效应。结果 WT1多肽可在疫苗中稳定存在,对小鼠肌肉注射未发生明显的脏器组织变化;对小鼠肌肉注射WT1+AddaVax^(TM)疫苗后,与WT1组相比,WT1+AddaVax^(TM)组可诱导高水平的Th1细胞免疫应答γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及其Th17免疫应答白介素17A(IL-17A)(P<0.05);与WT1组相比,WT1+AddaVax^(TM)组促进脾淋巴细胞分泌IFN-γ的细胞数量增加(P<0.01),促进BMDCs成熟的标志物CD40^(+)/CD11c^(+)、CD86^(+)CD80^(+)/CD11c^(+)细胞比例增加(P<0.05),促进淋巴细胞中CD4^(+)/CD3^(+)T、CD69^(+)/CD8^(+)T细胞比例增加(P<0.05)及其特异性CD8+T细胞比例增加(P<0.05);利用C1498-mWT1小鼠急性髓系白血病皮下荷瘤模型的抗肿瘤效应中,WT1+AddaVax^(TM)组中位生存期相比于WT1组小鼠延长了6 d。在第50天时,WT1多肽+AddaVax^(TM)组小鼠生存率为28.5%,其他组小鼠全部死亡(P<0.05)。结论 WT1多肽联合AddaVax^(TM)乳佐剂疫苗具有良好的免疫学和明显抗肿瘤效果。

关键词： WT1多肽 AddaVax^(TM)乳佐剂急性髓系白血病免疫应答抗肿瘤效应

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合成生物学助力细菌疫苗研发

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合成生物学 2024年第2期5卷 321-337页

作者：章金勇顾江关山李海波曾浩邹全明陆军军医大学国家免疫生物制品工程技术研究中心陆军军医大学药学与检验医学系微生物与生化药学教研室重庆400037

细菌感染已成为全球第二大死亡因素,给人类健康与公共安全造成了巨大威胁。抗生素一直是治疗细菌感染最为主要的手段,但越来越严重的耐药问题给传统的抗生素疗法带来了严峻挑战。除了抗生素之外,疫苗被认为是防治传染性疾病传播最为科... 详细信息

细菌感染已成为全球第二大死亡因素,给人类健康与公共安全造成了巨大威胁。抗生素一直是治疗细菌感染最为主要的手段,但越来越严重的耐药问题给传统的抗生素疗法带来了严峻挑战。除了抗生素之外,疫苗被认为是防治传染性疾病传播最为科学、经济、安全和有效的手段,在人类抗击病原体感染斗争中发挥了重要作用。然而,细菌基因组庞大,致病机制复杂,研发疫苗存在有效抗原筛选、设计、制备难,抗原组合配伍难,有效性评价难,研发周期长等诸多瓶颈,导致细菌疫苗研发进展缓慢,尤其是临床常见的严重耐药致病菌尚无有效的疫苗可用。合成生物学是一门新兴的交叉学科,近年来在疫苗研究领域已经得到了广泛应用,包括抗原的筛选、理性设计、配伍组合,载体、佐剂和递送系统的设计以及免疫应答调控等。本文综述了细菌疫苗研究的现状以及耐药细菌疫苗临床试验研究进展,总结了合成生物学技术在几种重要类型细菌疫苗研发中的应用进展,最后对相关前景进行了展望。合成生物学在疫苗的形式、疫苗递送、疫苗的研制效率等方面为研究人员提供了更为广阔的空间,未来,应最大化地发挥合成生物学的优势,充分发展和应用合成生物学技术手段,建立科学、理性、有效、可行的管理制度,建设生物安全保障法律体系和监管措施,高效推动细菌疫苗研发,解决抗生素耐药问题,造福人类健康。

关键词：细菌感染抗生素耐药疫苗合成生物学

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新型NEA/Al(OH)_(3)复合佐剂系统的构建、优化及其增强MRSA重组亚单位疫苗的免疫保护效应研究

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免疫学杂志 2023年第2期39卷 176-184页

作者：曾小强罗兴叶演杨赟孙红武曾浩陆军军医大学药学与检验医学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038

目的以具有自主知识产权的纳米乳(NEA)和商品化的氢氧化铝[Al(OH)_(3)]作为配方组分,制备出新型NEA/Al(OH)_(3)复合佐剂系统,并对增强MRSA重组亚单位疫苗免疫应答效应的作用进行研究。方法以血清特异性IgG作为评价指标,将2种乳剂(NEA... 详细信息

目的以具有自主知识产权的纳米乳(NEA)和商品化的氢氧化铝[Al(OH)_(3)]作为配方组分,制备出新型NEA/Al(OH)_(3)复合佐剂系统,并对增强MRSA重组亚单位疫苗免疫应答效应的作用进行研究。方法以血清特异性IgG作为评价指标,将2种乳剂(NEA和MF59)和2种铝盐[Al(OH)_(3)和AlPO4]进行复配筛选;采用多因素实验设计,对初步筛选出的复合佐剂成分进行三因素三水平正交实验,确定优选的NEA/Al(OH)_(3)复合佐剂系统处方;采用金黄色葡萄球菌国际标准株(MRSA252)建立Balb/c小鼠脓毒血症动物感染致死模型,进一步对新型NEA/Al(OH)_(3)复合佐剂系统增强MRSA重组亚单位疫苗抗原HI的免疫应答效应(特异性体液免疫应答、细胞免疫应答、免疫保护效力)进行比较研究,评价其免疫增强的保护效果及初步机制。结果 NEA和Al(OH)_(3)的复配是优选的乳剂与铝盐复合佐剂组分;通过三因素三水平正交实验确定优化的NEA/Al(OH)_(3)复合佐剂系统处方为:HI抗原量60μg、佐剂量200μg、NEA与Al(OH)_(3)的配比为2:8(w/w);脓毒血症动物模型攻毒保护的研究结果表明:基于新型NEA/Al(OH)_(3)复合佐剂系统的MRSA重组亚单位疫苗可于首次免疫后第7天即产生特异性免疫应答,特异性IgG抗体效价最高可达1:143 360,同时诱导出高水平的特异性细胞免疫应答(IL-12P40、INF-γ),LD90的攻毒保护率为80%,具有优于单一佐剂组的良好免疫原性及保护效果。结论成功优选制备的新型NEA/Al(OH)_(3)复合佐剂系统可有效增强MRSA重组亚单位疫苗的免疫应答水平和保护效力,为新型复合佐剂在重组蛋白疫苗中的应用与开发提供了重要的实验基础。

关键词：纳米乳氢氧化铝复合佐剂系统 MRSA疫苗免疫应答

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金黄色葡萄球菌巨噬细胞胞内生存关键分泌蛋白筛选体系的构建

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陆军军医大学学报 2024年第8期46卷 815-821页

作者：石姚佳田湉熊廷蓉王于张笑恺邹全明河南大学药学院河南开封475004 陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系微生物与生化药学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038 陆军军医大学士官学校基础部石家庄050081

目的建立金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,***)巨噬细胞胞内感染状态下分泌蛋白高通量筛选体系,探索金葡菌胞内生存所需关键分泌蛋白。方法利用课题组建立的金葡菌分泌蛋白真核系统表达载体库,通过DNA转染表达技术,得到能够在细... 详细信息

目的建立金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,***)巨噬细胞胞内感染状态下分泌蛋白高通量筛选体系,探索金葡菌胞内生存所需关键分泌蛋白。方法利用课题组建立的金葡菌分泌蛋白真核系统表达载体库,通过DNA转染表达技术,得到能够在细胞内表达金葡菌分泌蛋白的RAW264.7巨噬细胞阵列。金葡菌感染RAW264.7后,清除胞外菌,观察金葡菌胞内生存情况。最后通过构建相应分泌蛋白的过表达及敲除金葡菌验证筛选结果。结果通过探索RAW264.7质粒转染剂量、金葡菌感染复数(multiplicity of infection,MOI)以及感染时间,确立筛选体系的最优质粒转染剂量为1.0μg/孔、MOI为1.0、感染时间为4 h。筛选结果结合相应分泌蛋白过表达和敲除菌株验证,成功筛选出hypothetical protein、Serine protease E等分泌蛋白具有促进胞内金葡菌生存功能。结论成功构建金葡菌巨噬细胞胞内生存关键分泌蛋白筛选体系。

关键词：金黄色葡萄球菌巨噬细胞胞内感染分泌蛋白

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植物源性免疫刺激分子麦冬皂苷的免疫增强效应及初步机制

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陆军军医大学学报 2025年第4期47卷 350-359页

作者：刘姝琳魏静朱宝行叶演潘佳乐赵安妮宋振彭六生李海波孙红武邹全明陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系微生物与生化药学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心佳木斯大学临床医学黑龙江佳木斯重庆理工大学药学院重庆

目的探究植物源性免疫刺激分子麦冬皂苷对以冠状病毒刺突蛋白受体结合域(receptor binding domain,RBD)为抗原的亚单位疫苗的免疫应答增强效应及初步机制。方法用CCK-8法评价麦冬皂苷D’(ophiopogonin D’,OPD’)对骨髓来源的树突状细胞... 详细信息

目的探究植物源性免疫刺激分子麦冬皂苷对以冠状病毒刺突蛋白受体结合域(receptor binding domain,RBD)为抗原的亚单位疫苗的免疫应答增强效应及初步机制。方法用CCK-8法评价麦冬皂苷D’(ophiopogonin D’,OPD’)对骨髓来源的树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cell,BMDCs)的细胞毒性;将Balb/c雌性小鼠按照随机数字表法分成4组:Control组、RBD组、RBD/OPD’组、RBD/Alum组,使用免疫剂量为抗原5μg/只、佐剂100μg/只,按照第0、21、42天肌肉注射免疫程序进行免疫;监测小鼠体质量、生化指标等评价其体内安全性;用ELISA检测特异性IgG及其亚型抗体滴度;用ELISA试剂盒检测脾细胞上清中细胞因子水平;ELISpot检测脾细胞分泌γ干扰素(interferon-gamma,IFN-γ)的细胞数量;用激光共聚焦显微镜观察BMDCs对抗原的摄取;流式细胞术定量分析BMDCs对抗原的吞噬能力;用转录组学技术结合生物信息学研究方法,初步探究其增强免疫效应的机制。结果当OPD’浓度<5μg/mL时BMDCs存活率为100%;小鼠单次肌肉注射后除体质量略有下降外,生化指标结果均处于正常范围;疫苗肌肉注射免疫后,RBD/OPD’组血清特异性IgG、IgG1和IgG2a滴度与RBD组相比均显著升高(P<0.05);与RBD组相比,RBD/OPD’组Th1细胞免疫应答的细胞因子IL-1β、TNF-α、IFN-γ显著增高(P<0.01),促进淋巴细胞分泌IFN-γ的细胞数量显著增加(P<0.001);激光共聚焦显微镜发现,OPD’处理后的BMDCs能摄取更多抗原,流式细胞术定量分析结果显示OPD’能显著提高BMDCs的抗原摄取率(P<0.01);转录组学结果显示,与RBD组相比RBD/OPD’组PPAR信号通路显著富集。结论麦冬皂苷D’可有效增强RBD亚单位疫苗的免疫应答水平,且其作用机制可能与激活PPAR信号通路有关。

关键词：麦冬皂苷佐剂免疫应答蛋白疫苗

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TLR2/TLR9激动剂对鲍曼不动杆菌肺部感染的保护作用

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陆军军医大学学报 2024年第8期46卷 829-836页

作者：程浩杨赟孙红武邓炎李郭成曹静文魏静迟宇李海波陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系微生物与生化药学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038 佳木斯大学临床医学院黑龙江佳木斯154007

目的评价toll-like receptor(TLR)2/TLR9激动剂对肺部感染鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,Ab)小鼠的保护作用。方法将6~8周龄雌性C57小鼠分为PBS组、Pam_(2)CSK_(4)(Pam)组、CpG ODN(CpG)组和Pam+CpG组,以不同剂量滴鼻免疫后24 h进行Ab肺部致死性感染,观察小鼠生存率。构建亚致死剂量Ab肺部感染模型,测定感染后小鼠血液、肺脏、肝脏、肾脏和脾脏的细菌定植量,并取小鼠肺脏和肾脏进行HE染色,分析病理损伤程度。探索免疫1、3、7 d后对小鼠Ab感染的保护作用,明确保护时间窗。Pam+CpG体外刺激A549上皮细胞和RAW264.7细胞,考察两种细胞对Ab的杀伤或吞噬作用。结果与PBS组比较,Pam+CpG组能显著提高Ab致死感染小鼠的生存率(P<0.05,P<0.01),降低亚致死感染后小鼠血液(P<0.01)、肺脏(P<0.01)、肝脏(P<0.05)、肾脏(P<0.01)和脾脏(P<0.01)的细菌定植量,减轻感染导致的病理损伤;在感染之前1 d或3 d免疫均可显著提高小鼠的生存率(P<0.05),其中免疫后3 d保护效果最好。与PBS、Pam、CpG组比较,Pam+CpG组可以显著促进A549上皮细胞和R AW264.7细胞对Ab的杀伤或吞噬作用(P<0.01)。结论TLR2/TLR9激动剂合用对Ab致死和亚致死感染均具有显著的保护作用,可能的机制是其促进了肺上皮细胞和巨噬细胞对Ab的杀伤或吞噬作用。

关键词：鲍曼不动杆菌 TLR2 TLR9 滴鼻免疫肺部感染

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ZHZ-33-1抑制金黄色葡萄球菌感染引发巨噬细胞炎症反应的机制研究

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免疫学杂志 2024年第12期40卷 877-882页

作者：郑月熊廷蓉武晓艳王于张笑恺曾浩陆军军医大学药学与检验医学系微生物与生化药学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038 重庆大学药学院 401331

目的探讨新骨架小分子化合物ZHZ-33-1对金黄色葡萄球菌感染小鼠巨噬细胞所致炎症反应的调控作用及其机制。方法采用qRT-PCR技术检测巨噬细胞炎性因子Tnf、Il1b、Il6、Il12p40的mRNA表达水平;利用ELISA方法测定细胞上清中TNF-α、IL-1β... 详细信息

目的探讨新骨架小分子化合物ZHZ-33-1对金黄色葡萄球菌感染小鼠巨噬细胞所致炎症反应的调控作用及其机制。方法采用qRT-PCR技术检测巨噬细胞炎性因子Tnf、Il1b、Il6、Il12p40的mRNA表达水平;利用ELISA方法测定细胞上清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12的蛋白水平;通过Western blot技术分析NF-κB和MAPK关键信号通路蛋白的磷酸化情况;运用CCK-8检测法评估ZHZ-33-1对巨噬细胞活力的影响;测定吸光值探究ZHZ-33-1对金黄色葡萄球菌生长的影响。结果80μmol/L ZHZ-33-1对细菌的增殖无显著影响(P>0.05),且对巨噬细胞无明显的毒性作用(P>0.05)。在金黄色葡萄球菌(USA300)感染巨噬细胞后,与DMSO组相比,ZHZ-33-1能够在mRNA和蛋白水平上显著抑制炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12(P<0.05)。进一步研究发现,ZHZ-33-1可抑制野生型巨噬细胞的NF-κB和MAPK通路,而对TLR2-/-巨噬细胞的NF-κB和MAPK通路无显著影响。结论ZHZ-33-1可能通过抑制巨噬细胞TLR2介导的NF-κB和MAPK信号通路来抑制金黄色葡萄球菌感染引发的巨噬细胞炎症反应,有望成为治疗金黄色葡萄球菌诱导的过度炎症反应的新型候选药物。

关键词：金黄色葡萄球菌 ZHZ-33-1 NF-κB MAPK

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不同佐剂对重组鲍曼不动杆菌PKF的免疫效果研究

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陆军军医大学学报 2023年第9期45卷 957-963页

作者：张珊珊李郭成冯壤薛若怡段浩曹宇刘婧怡李海波高英英佳木斯大学临床医学院黑龙江佳木斯154007 陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系微生物与生化药学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038

目的比较不同免疫方式、不同佐剂对重组鲍曼不动杆菌PKF的免疫效果。方法构建重组质粒,经诱导表达纯化获得重组PKF,分别联合氢氧化铝、AS03肌注(intramuscular,im)免疫以及LTK63、LP1-34滴鼻(intranasally,in)免疫小鼠,共分为7组:PBS组... 详细信息

目的比较不同免疫方式、不同佐剂对重组鲍曼不动杆菌PKF的免疫效果。方法构建重组质粒,经诱导表达纯化获得重组PKF,分别联合氢氧化铝、AS03肌注(intramuscular,im)免疫以及LTK63、LP1-34滴鼻(intranasally,in)免疫小鼠,共分为7组:PBS组;肌注免疫组:PKF(im)组、PKF+Al(im)组、PKF+AS03(im)组;滴鼻免疫组:PKF(in)组、PKF+LTK63(in)组、PKF+LP1-34(in)组。ELISA检测免疫后小鼠血清中特异性IgG以及黏膜部位sIgA的水平;构建鲍曼不动杆菌肺部感染亚致死模型,测定攻毒后小鼠血液和肺部细菌定植量,评价疫苗保护作用。结果肌注免疫组中,AS03辅助PKF诱导最高的特异性IgG抗体水平(P<0.01);滴鼻免疫组中,LTK63显著提升肺泡灌洗液中特异性sIgA水平(P<0.01);攻毒后细菌定植量检测结果显示,PKF+AS03肌注组细菌定植量与单用PKF组相当,而滴鼻组中LTK63可以显著降低细菌定植量(P<0.01)。结论LTK63可以辅助PKF更好地发挥对鲍曼不动杆菌肺部感染的保护作用,表明疫苗介导的黏膜免疫应答对保护感染可能更加重要。

关键词：鲍曼不动杆菌佐剂 PKF 免疫效果

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新型冠状病毒疫苗佐剂的研究现状与展望

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陆军军医大学学报 2022年第23期44卷 2353-2359页

作者：李海波程浩陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系微生物与生化药学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038

疫苗是预防新冠病毒感染最经济和最有效的手段。佐剂能增强抗原特异性免疫应答,减少抗原剂量和接种次数,重塑适应性免疫反应,对提高新冠病毒疫苗的保护效果至关重要。本文评述了已经授权紧急使用或正在开展临床试验的新冠病毒疫苗所用... 详细信息

疫苗是预防新冠病毒感染最经济和最有效的手段。佐剂能增强抗原特异性免疫应答,减少抗原剂量和接种次数,重塑适应性免疫反应,对提高新冠病毒疫苗的保护效果至关重要。本文评述了已经授权紧急使用或正在开展临床试验的新冠病毒疫苗所用佐剂及其作用机制和优缺点,分析了新冠病毒疫苗研发中应用佐剂须考虑的问题,并对新冠病毒疫苗佐剂的未来研究方向进行了展望:(1)针对免疫功能不全人群的佐剂;(2)增强T细胞应答的佐剂;(3)新型黏膜免疫佐剂;(4)复合佐剂的合理设计。

关键词：新冠病毒疫苗佐剂研究现状展望

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