检索结果-内蒙古大学图书馆

中华创伤杂志 2020年第3期36卷 275-282页

作者：彭威黎中雪卢彦竹艾秋池周江玲侯天勇陆军军医大学西南医院骨科全军矫形外科中心组织工程国家地方联合工程中心全军骨组织工程重点实验室400038

目的初步探讨大段骨缺损移植组织工程骨(TEB)后,Arpin蛋白介导的宿主骨髓间充质干细胞(BMSCs)迁移至移植区参与骨修复的作用。方法免疫荧光观察BMSCs中Arpin蛋白和肌动蛋白相关蛋白2/3(Arp2/3蛋白)的表达及相对定位。构建干扰Arpin蛋白... 详细信息

目的初步探讨大段骨缺损移植组织工程骨(TEB)后,Arpin蛋白介导的宿主骨髓间充质干细胞(BMSCs)迁移至移植区参与骨修复的作用。方法免疫荧光观察BMSCs中Arpin蛋白和肌动蛋白相关蛋白2/3(Arp2/3蛋白)的表达及相对定位。构建干扰Arpin蛋白表达慢病毒,转染BMSCs,通过qRT-PCR和Western blot检测Arpin的抑制水平。按照Arpin蛋白表达含量不同,分为空载体对照组和Arpin表达抑制组进行体外和体内实验。体外实验:用迁移小室建立细胞迁移模型,上室接种空载体对照组和Arpin表达抑制组细胞,荧光显微镜检测细胞迁移数量;6孔板接种空载体对照组和Arpin表达抑制组细胞,建立“伤口愈合实验”模型,显微镜检测“伤口愈合”情况。体内实验:选取8周龄C57BL/6小鼠,所有小鼠按照随机数字表法分为空载体对照组(6只)和Arpin表达抑制组(6只)。切除股骨中段2 mm骨干和骨膜,制作大段骨缺损并移植TEB模型。每只小鼠经尾静脉注射100万个BMSCs细胞,术后2,7 d免疫荧光染色检测BMSCs迁移至骨缺损区数量的差异。术后4周,取股骨进行Micro-CT扫描,检测骨密度(BMD)、相对骨体积(BV/TV)、骨小梁间距(***)、骨小梁厚度(***),然后标本进行病理HE和Masson染色,观察成骨质量。结果小鼠BMSCs表达Arpin蛋白,相对于Arp2/3,其定位在细胞边缘。在转染慢病毒后,BMSCs表达绿色荧光蛋白,并且Arpin表达抑制组Arpin基因及蛋白表达较空载体对照组显著降低(P<0.01)。体外细胞迁移实验中,Arpin表达抑制组细胞迁移数量[(105.7±6.5)个]较空载体对照组[(76.6±6.6)个]高(P<0.01)。“伤口愈合实验”中,Arpin表达抑制组“伤口愈合”百分比[(62.6±3.2)%]较空载体对照组[(43.8±1.9)%]高(P<0.01)。体内实验的免疫荧光结果表示,术后2 d,两组迁移细胞计数差异无统计学意义(P>0.05),几乎无标记细胞迁移;术后7 d,Arpin表达抑制组细胞迁移至移植区的数量[(11.3±1.5)个]较空载体对照组[(5.7±1.5)个]更多(P<0.01)。术后4周,Micro-CT结果显示,相对于空载体对照组[BMD:(140.0±6.0)mg/cm3,BV/TV:(23.4±0.9)%,***:(0.28±0.01)μm,***:(0.15±0.01)μm],Arpin表达抑制组[BMD:(172.7±6.0)mg/cm3,BV/TV:(28.8±1.3)%,***:(0.33±0.01)μm,***:(0.11±0.01)μm]成骨质量更高(P<0.05);病理染色提示,Arpin表达抑制组存在更多的新生骨组织。结论沉默Arpin蛋白的表达会促进BMSCs的迁移,增加宿主BMSCs迁移至骨缺损区域,提高骨修复效果。

关键词：组织工程间充质干细胞细胞迁移分析 Arpin蛋白

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组织工程骨募集宿主间充质干细胞参与骨重建的机制研究

引用

中华创伤杂志 2018年第4期34卷 362-369页

作者：殷啸龙侯天勇卢彦竹李志琳邢军超杨爱军许建中陆军军医大学西南医院骨科、全军矫形外科中心、组织工程国家地方联合工程中心、全军骨组织工程重点实验室重庆400038

目的探讨创伤后骨缺损组织工程骨（TEB）移植后，组织工程骨募集宿主骨髓间充质干细胞（BMSCs）参与骨重建的机制。方法体内实验：取8周龄FVB／N小鼠，切除股骨干中部2mm骨干和骨膜，制作大段骨缺损。缺损处分别植入脱钙骨基质（DBM）和... 详细信息

目的探讨创伤后骨缺损组织工程骨（TEB）移植后，组织工程骨募集宿主骨髓间充质干细胞（BMSCs）参与骨重建的机制。方法体内实验：取8周龄FVB／N小鼠，切除股骨干中部2mm骨干和骨膜，制作大段骨缺损。缺损处分别植入脱钙骨基质（DBM）和TEB并固定，所有小鼠按随机数字表法分为DBM组（18只）和TEB组（18只）。移植后24h流式细胞术评价宿主BMSCs入血的数量，活体动物体内成像观察两组募集循环中小鼠骨髓间充质干细胞（mBMSCs）到达损伤区域的能力，ELISA法比较两组外周血中基质细胞衍生因子-1（SDF-1）含量。体外实验：（1）迁移小室实验评估SDF-1（100ng／m1）促进人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）迁移的能力，SDF-1／趋化因子受体4（CXCR4）通路通过选择性CXCR4拮抗剂普乐沙福（AMD3100）阻断，按处理因素分为对照组、SDF-1组和SDF-1＋AMD3100组。（2）建立人脐静脉内皮细胞（hUVECs）、hBMSCs共培养体系并通过SDF-1刺激细胞，按共培养细胞和处理因素分为hBMSCs组、hBMSCs＋hUVECs组和hBMSCs＋hUVECs（AMD3100预处理）组。迁移小室实验比较各组hBMSCs迁移数量，ELISA法检测共培养上清的肝细胞生长因子（HGF）水平。（3）对体外培养的hUVECs分别通过SDF-1刺激以及AMD3100拮抗SDF-1／CXCR4，按处理因素分为对照组、SDF-1组和SDF-1＋AMD3100组，实时荧光定量PCR（qRT—PCR）评价各组HGF表达。结果体内实验：骨缺损材料移植后24h，TEB组外周血中间充质干细胞（MSCs）数量、SDF-1浓度与DBM组比较均有明显增高（P〈0．05），TEB组募集的术后注射进入循环的mBMSCs多于DBM组（P〈0．01）。体外实验：（1）单种细胞迁移小室实验中，相比对照组和SDF-1＋AMD3100组，SDF-1组显著增强hBMSCs迁移能力（P〈0．01）。（2）hBMSCs和hUVECs共培养体系迁移小室实验中，与hBMSCs组、hBMSCs＋hUVECs（AMD3100预处理）组比较，hBMSCs＋hUVEC组迁移细胞数量和HGF浓度均显著增多（P〈0．01），而hBMSCs组与hBMSCs＋hUVECs（AMD3100预处理）组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。（3）qRT—PCR显示，与对照组比较，SDF-1组HGF表达明显升高（P〈0．01）。拮抗SDF-1／CXCR4后，SDF-1＋AMD3100组HGF表达与SDF-1组比较显著降低（P〈0．05）。结论骨缺损TEB移植后可以显著提高体内趋化因子SDF-1水平，有效促进宿主MSCs的动员和循环中MSCs的募集。SDF—1不仅通过SDF-1／CXCR4直接促进hBMSCs的迁移，还可上调血管细胞HGF的表达和分泌，进一步放大SDF-1对hBMSCs的趋化作用。

关键词：组织工程间质干细胞基质细胞衍生因子-1

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