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陆军军医大学学报 2024年第3期46卷 232-239页

作者：孙悦张杰张濒丹彭小勇周远群李涛刘良明陈力勇陆军特色医学中心麻醉科重庆400042 陆军特色医学中心战伤休克与输血研究室创伤与化学中毒全国重点实验室重庆400042

目的观察丙泊酚对脓毒症大鼠血管低反应性的改善作用及其机制。方法 96只12周龄的SD大鼠,雌雄不论,体质量200~220 g。采用随机数字表法分为假手术组(n=16)、脓毒症组(n=16)、丙泊酚组(n=16)、丙泊酚+ROCK抑制剂Y-27632组(n=16)、丙泊酚... 详细信息

目的观察丙泊酚对脓毒症大鼠血管低反应性的改善作用及其机制。方法 96只12周龄的SD大鼠,雌雄不论,体质量200~220 g。采用随机数字表法分为假手术组(n=16)、脓毒症组(n=16)、丙泊酚组(n=16)、丙泊酚+ROCK抑制剂Y-27632组(n=16)、丙泊酚+PKCα抑制剂GO6976组(n=16)、丙泊酚+IP3抑制剂2-APB组(n=8)以及丙泊酚+细胞缝隙连接抑制剂甲氯灭酸钠(Movens)组(n=8),采用离体血管环张力测定技术和血管环钙敏感性测定技术,研究丙泊酚对脓毒症大鼠血管低反应性的改善作用及其与RhoA/ROCK、PKCα、IP3和细胞缝隙连接的关系。结果离体血管环反应性测定实验和钙敏感性测定实验表明,与假手术组相比,脓毒症组大鼠血管对去甲肾上腺素的收缩反应性和钙敏感性均显著降低,量-效曲线右移,其中肠系膜上动脉降低最为明显,降低比例达51.42%(P<0.05);而丙泊酚组可明显改善脓毒症组血管低反应性以及钙敏感性,在股动脉的恢复作用最为显著,恢复比例达89.57%(P<0.05)。钙敏感性测定实验结果表明,与丙泊酚组相比,丙泊酚+Y-27632组和丙泊酚+GO6976组量-效曲线右移,Y-27632和GO6976可显著拮抗丙泊酚对严重脓毒症大鼠肠系膜上动脉主干血管钙敏感性的改善作用,抑制率分别为146.95%和88.63%(P<0.05)。离体血管环反应性测定实验显示,丙泊酚+Y-27632组和丙泊酚+Movens组可显著拮抗丙泊酚组对脓毒症组大鼠血管低反应性的改善作用,抑制程度分别为40.79%和169.90%(P<0.05);而丙泊酚+GO6976组和丙泊酚+2-APB组无明显变化。结论丙泊酚治疗可显著改善脓毒症大鼠血管低反应性,其机制可能是通过RhoA/ROCK通路改善血管钙敏感性。

关键词：脓毒症丙泊酚血管低反应性 RhoA/ROCK 钙敏感性

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线粒体分裂抑制剂Mdivi-1对脓毒症大鼠肠道屏障功能的保护作用

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陆军军医大学学报 2024年第5期46卷 419-426页

作者：汤春琼朱娱王易叶蕤刘良明李涛毛庆祥陆军特色医学中心麻醉科重庆400042 陆军特色医学中心野战外科研究部战伤休克与输血研究室创伤与化学中毒全国重点实验室重庆400042

目的拟探讨线粒体分裂抑制剂Mdivi-1对脓毒症大鼠肠道屏障功能的保护作用。方法采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)复制大鼠脓毒症模型,根据脓毒症救治指南采用乳酸林格氏液(35 mL/kg)进行常规复苏,输液速度3 mL/h。... 详细信息

目的拟探讨线粒体分裂抑制剂Mdivi-1对脓毒症大鼠肠道屏障功能的保护作用。方法采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)复制大鼠脓毒症模型,根据脓毒症救治指南采用乳酸林格氏液(35 mL/kg)进行常规复苏,输液速度3 mL/h。同时在常规复苏的基础上静脉予以1 mg/kg Mdivi-1进行治疗。复苏结束后2 h观察各组大鼠肠道屏障功能、肠道中闭锁小带蛋白(zonula occludes-1,ZO-1)的表达、小肠病理变化、血清炎症因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和白介素1-β(Interleukin-1β,IL-1β)的浓度、平均动脉血压(mean arterial blood pressure,MAP)和生存时间及72 h存活率。结果与假手术组相比,脓毒症大鼠肠通透性明显增加,D-乳酸明显升高,血清中炎性因子TNF-α和IL-1β浓度显著增高(P<0.05);病理结果显示肠绒毛断裂,腺体萎缩,炎性细胞显著增多。常规复苏治疗后,与脓毒症组相比,血清中TNF-α和IL-1β浓度、肠通透性、D-乳酸浓度轻微降低,肠绒毛紊乱轻微改善,提示常规复苏治疗后对脓毒症的保护作用是有限的。与常规治疗组相比,常规治疗联合线粒体分裂抑制剂Mdivi-1治疗后大鼠血清中TNF-α和IL-1β浓度、肠通透性、D-乳酸浓度显著降低(P<0.05),病理结果显示肠绒毛结构清晰,炎性细胞浸润明显改善。肠组织免疫荧光结果显示,与假手术组相比,脓毒症后紧密连接发生断裂,Mdivi-1治疗后较脓毒症组紧密连接断裂发生明显好转。细胞水平上,LPS刺激后肠上皮细胞间ZO-1表达量显著降低(P<0.05),Mdivi-1治疗后可逆转LPS导致的ZO-1表达量的降低(P<0.05)。结论Mdivi-1对脓毒症大鼠的肠道屏障功能具有保护作用,其机制可能是通过调节ZO-1的表达。

关键词： Mdivi 脓毒症肠屏障功能线粒体

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ATP6V1A缺失导致脓毒症心脏驻留巨噬细胞清除能力损伤

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陆军军医大学学报 2024年第23期46卷 2599-2607页

作者：杨顺心周远群向鑫明刘良明李涛胡弋陆军特色医学中心麻醉科重庆400042 野战外科研究部战伤休克与输血研究室创伤与化学中毒全国重点实验室重庆400042

目的探讨脓毒症后心脏驻留巨噬细胞的清除能力及其机制。方法利用盲肠穿孔结扎术建立脓毒症小鼠模型,将30只雄性C57BL/6小鼠(8周龄,体质量20~25 g)按随机数字抽样法分为假手术组(Sham组,n=15)和脓毒症模型组(Sepsis组,n=15)。使用免... 详细信息

目的探讨脓毒症后心脏驻留巨噬细胞的清除能力及其机制。方法利用盲肠穿孔结扎术建立脓毒症小鼠模型,将30只雄性C57BL/6小鼠(8周龄,体质量20~25 g)按随机数字抽样法分为假手术组(Sham组,n=15)和脓毒症模型组(Sepsis组,n=15)。使用免疫荧光技术标记心肌细胞与巨噬细胞观察小鼠心肌细胞凋亡及心脏驻留巨噬细胞对心肌细胞的吞噬情况。提取心脏驻留巨噬细胞进行转录组学测序,观察脓毒症后心脏驻留巨噬细胞的功能变化。在细胞水平建立心脏驻留巨噬细胞系,即正常组(RAC组);用LPS处理RAC组细胞后,即脓毒症组(RAC+LPS组)。观察2组间对凋亡心肌细胞清除能力的差异;使用DQ-BSA-RED溶酶体活性检测探针、Lyso-Sensor yellow/bule染料、ELISA以及蛋白质印迹实验法检测心脏驻留巨噬细胞溶酶体功能、溶酶体重要水解酶活性及蛋白表达、囊泡型腺苷三磷酸酶(vacuolar-type adenosine triphosphatases,V-ATPase)含量及其相关亚基的改变。结果与Sham组相比,Sepsis组小鼠心肌细胞凋亡数量增加(P<0.05),心脏巨噬细胞对心肌细胞的吞噬增加(P<0.05),转录组学结果分析发现脓毒症后心脏驻留巨噬细胞的溶酶体相关功能显著失调。体外实验结果显示,与RAC组相比,RAC+LPS组对凋亡心肌细胞的碎片化能力降低,溶酶体的黄色荧光强度明显减弱(P<0.05),溶酶体水解酶活性降低(P<0.05)。此外,LPS处理显著降低了心脏驻留巨噬细胞V-ATPase及其主要亚基ATP6V1A的活性和表达(P<0.05)。结论脓毒症后心脏驻留巨噬细胞对凋亡心肌细胞的清除能力降低,其机制可能与其溶酶体V-ATPase重要亚基ATP6V1A和溶酶体水解酶活性降低有关。

关键词：脓毒症心脏功能障碍心脏驻留巨噬细胞溶酶体囊泡型腺苷三磷酸酶

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筋膜切开术联合高渗盐水切口冲洗对大鼠挤压综合征的疗效

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陆军军医大学学报 2024年第24期46卷 2772-2780页

作者：温亚乾王晓戈张杰任文杰田林强刘良明新乡医学院第三附属医院骨科河南新乡453000 陆军特色医学中心战伤休克与输血研究室创伤、与化学中毒全国重点实验室重庆400042

目的探索筋膜切开术联合高渗NaCl溶液切口冲洗对挤压综合征的疗效。方法将6周龄雄性SD[体质量(250±20)g]大鼠臀部及双后肢以7.5 kg重物压迫4 h制作挤压综合征大鼠模型,以出现血尿或无尿作为建模成功标准。将24只SD大鼠[体质量(250&... 详细信息

目的探索筋膜切开术联合高渗NaCl溶液切口冲洗对挤压综合征的疗效。方法将6周龄雄性SD[体质量(250±20)g]大鼠臀部及双后肢以7.5 kg重物压迫4 h制作挤压综合征大鼠模型,以出现血尿或无尿作为建模成功标准。将24只SD大鼠[体质量(250±20)g]按随机数字表法分为2组:正常对照组(NC组)10只、挤压综合征组(CS组)14只。在挤压综合征建模完成后的6 h分别收集受挤压组织渗出的组织液,检测各组渗出液中钾离子、钙离子、肌红蛋白和乳酸的含量。另将63只6周龄雄性SD大鼠[体质量(250±20)g]按随机数字表法分为7组,每组9只:空白对照组(NC组)、挤压综合征组(CSS组)、挤压综合征筋膜切开术组(CSO组);挤压综合征筋膜切开术联合不同浓度NaCl溶液冲洗组(CSO+0.9%、3.0%、5.0%、7.0%NaCl组)。在挤压完成后的6 h,检测大鼠的肾脏血流情况;检测各组大鼠血浆中钾离子、钙离子、肌红蛋白、乳酸、AST、ALT、Cr、Urea含量,采集各组大鼠受挤压组织和肾脏组织行病理学检测。结果组织液检测结果表明,与NC组比较,CS组大鼠组织液中钾离子、肌红蛋白和乳酸含量明显升高,钙离子含量明显降低(P<0.001)。血浆检测结果表明,单纯进行筋膜切开术无明显的治疗作用,筋膜切开术后联合NaCl溶液冲洗可以使挤压综合征大鼠血浆中钾离子,肌红蛋白,乳酸,AST、ALT,Urea、Cr度显著降低,钙离子升高(P<0.05)。在使用激光血流散斑检测中,单纯使用筋膜切开术不能提高肾组织血流,筋膜切开术后联合NaCl溶液冲洗可以使挤压综合征大鼠的肾组织血流量显著提高(P<0.05)。单纯使用筋膜切开术不能减轻肾脏的病理损害,筋膜切开术后联合NaCl溶液冲洗可以减轻挤压综合征对肾脏的病理性损伤(P<0.05)。结论在大鼠实验中,筋膜切开术联合高浓度(3%)氯化钠溶液切口冲洗后能够显著减轻挤压综合征对机体的损伤。

关键词：挤压综合征筋膜切开术组织渗出液高渗盐水

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右美托咪定对高原环境暴露后失血性休克大鼠肺水肿的保护作用

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陆军军医大学学报 2023年第24期45卷 2570-2578页

作者：王易朱娱汤春琼叶蕤刘良明李涛毛庆祥胡弋陆军特色医学中心:麻醉科重庆400042 陆军特色医学中心野战外科研究部战伤休克与输血研究室创伤与化学中毒全国重点实验室重庆400042

目的探究右美托咪定对高原环境暴露后失血性休克大鼠肺水肿的保护作用。方法280只10周龄SD雄鼠(体质量180~220 g)随机均分为高原对(Sham)照组、高原环境暴露后失血性休克(HS)组、乳酸林格复苏(LR)组以及右美托咪定+乳酸林格复苏(DEX+LR... 详细信息

目的探究右美托咪定对高原环境暴露后失血性休克大鼠肺水肿的保护作用。方法280只10周龄SD雄鼠(体质量180~220 g)随机均分为高原对(Sham)照组、高原环境暴露后失血性休克(HS)组、乳酸林格复苏(LR)组以及右美托咪定+乳酸林格复苏(DEX+LR)组。使用低压缺氧舱模拟5000 m海拔,大鼠进舱接受48 h预处理,出舱后立即经尾静脉注入油酸处理,油酸诱导0.5 h后,经股动脉缓慢抽血至全身血量的40%~50%,建立高原环境暴露后失血性休克模型。预防性给予右美托咪定后,通过肺含水量、肺微血管通透性、肺泡灌洗液蛋白浓度的变化,观察右美托咪定对肺血管通透性的影响;通过测定呼吸频率、潮气量等指标,观察右美托咪定对呼吸功能的作用;通过HE染色观察肺组织病理变化;通过血气分析观察右美托咪定对动脉血气的影响和右美托咪定对存活率的影响。结果与Sham组比较,HS组大鼠肺含水量、肺微血管通透性、肺泡灌洗液蛋白浓度升高(P<0.05),呼吸频率上升(P<0.05),潮气量、分钟通气量下降(P<0.05)。HS组HE染色结果显示,其肺泡壁增厚,肺泡腔部分缩小,腔内少许渗出,肺泡壁伴有炎性细胞浸润。HS组动脉血气结果提示酸中毒,大鼠处于缺氧状态(P<0.05)。与HS组比较,LR组大鼠肺水肿加重,HE染色结果显示肺泡囊融合、肺组织结构破坏、炎性细胞浸润明显;呼吸频率、潮气量上升,且动脉血气进一步恶化(P<0.05)。右美托咪定可显著改善高原环境暴露后失血性休克肺水肿大鼠的肺功能,与LR组比较,DEX+LR组大鼠肺微血管通透性、肺含水量、肺泡灌洗液蛋白浓度降低(P<0.05),大鼠潮气量、呼吸频率、分钟通气量趋于Sham组(P<0.05),HE染色结果显示肺泡结构趋于完整,肺泡腔内渗出减少甚至消失;动脉血气分析提示酸中毒改善(P<0.05),最终提高存活率。结论高原环境暴露后失血性休克大鼠在常规复苏时更容易诱发或加重肺水肿,预防性给与右美托咪定(10μg/kg)能够有效预防肺水肿的发生。

关键词：右美托咪定高原失血性休克肺水肿

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丙泊酚对脓毒症心肌收缩功能障碍的改善作用及机制

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陆军军医大学学报 2023年第22期45卷 2310-2318页

作者：张濒丹张杰孙悦周远群李涛刘良明胡弋陆军特色医学中心:麻醉科重庆400042 陆军特色医学中心野战外科研究部战伤休克与输血研究室创伤与化学中毒全国重点实验室重庆400042

目的探讨丙泊酚对脓毒症心肌收缩功能障碍的改善作用及其机制。方法采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)建立大鼠脓毒症模型,24只成年SD大鼠按照随机数字表法分为3组,①假手术组;②脓毒症组:造模12 h后取材;③丙泊酚... 详细信息

目的探讨丙泊酚对脓毒症心肌收缩功能障碍的改善作用及其机制。方法采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)建立大鼠脓毒症模型,24只成年SD大鼠按照随机数字表法分为3组,①假手术组;②脓毒症组:造模12 h后取材;③丙泊酚治疗组:造模后腹腔注射丙泊酚(Propofol,10 mg/kg),12 h后再次注射丙泊酚,3 h后取材。利用细胞微张力仪,测量急性分离心肌细胞的肌节长度和细胞内钙离子荧光强度的变化情况。急性分离丙泊酚组心肌细胞,分别加入肌醇1,4,5-三磷酸受体(inositol-1,4,5-triphosphate receptor,IP_(3)R)抑制剂[2-aminoethyl diphenylborinate(2-APB)]、肌浆网Ca^(2+)-ATP酶(sarco/endoplasmic reticulum Ca^(2+)-ATPase,SERCA)抑制剂[2,5-di-t-butyl-1,4-benzohydroquinone(BHQ)]、雷诺丁受体(Ryanodine receptors,RyRs)抑制剂Azumolene及大电导钙激活钾通道(large conductance Ca^(2+)-activated K^(+)channels,BKCa)抑制剂Paxiline后,检测心肌细胞的肌节长度和细胞内钙离子荧光强度的变化情况。结果与假手术组相比,脓毒症组心肌细胞收缩功能和钙瞬变幅度显著下降;丙泊酚治疗可显著恢复脓毒症心肌细胞的收缩功能和钙释放能力,最大收缩幅度恢复27.6%(P<0.05),最大钙瞬变幅度恢复41.2%(P<0.05),2-APB和BHQ明显抑制丙泊酚对心肌细胞的收缩功能的改善作用,其抑制率分别为62.61%(P<0.05)和42.15%(P<0.05),但Azumolene对收缩功能无显著影响。2-APB、BHQ和Azumolene对丙泊酚改善钙瞬变都有不同程度的抑制作用,其中Azumolene对钙瞬变抑制效果最小,其抑制率为46.94%(P<0.05),而2-APB和BHQ的抑制率分别为65.28%(P<0.05)、65.33%(P<0.05)。Paxiline对丙泊酚改善心肌细胞收缩功能和钙瞬变无显著影响。结论丙泊酚可改善脓毒症心肌细胞的收缩功能,其机制可能与其通过IP_(3)R和SERCA调节钙离子浓度相关。

关键词：丙泊酚脓毒症心肌收缩功能障碍钙通道 SERCA/IP3R

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右美托咪定预处理周细胞增强细胞治疗对脓毒症小鼠急性肺损伤的保护作用

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陆军军医大学学报 2025年第2期47卷 101-111页

作者：罗茜张紫森杨傲刘良明李涛胡弋陆军特色医学中心(第三军医大学大坪医院)麻醉科重庆陆军特色医学中心(第三军医大学大坪医院)野战外科研究部战伤休克与输血研究室创伤与化学中毒全国重点实验室重庆

目的探究右美托咪定(dexmedetomidine, Dex)预处理的周细胞对脓毒症小鼠急性肺损伤(acute lung injury, ALI)的影响及其作用机制。方法采用腹腔内注射脂多糖(LPS) 10 mg/kg复制脓毒症小鼠模型。96只C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为... 详细信息

目的探究右美托咪定(dexmedetomidine, Dex)预处理的周细胞对脓毒症小鼠急性肺损伤(acute lung injury, ALI)的影响及其作用机制。方法采用腹腔内注射脂多糖(LPS) 10 mg/kg复制脓毒症小鼠模型。96只C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为假手术(Sham)组、急性肺损伤(ALI)组、周细胞治疗(PC)组、右美托咪定(1μmol/L)预处理后周细胞治疗(Dex-PC)组。PC组、Dex-PC组尾静脉内分别给予PC和Dex-PC(5×105个/只),Sham组和ALI组尾静脉内给予等量生理盐水作为对照。采用流式细胞术、免疫荧光、全身体积描记系统、ELISA等方法,观察PC定植数量、肺血管通透性和肺功能的变化、血清中TNF-α和IL-6含量,以及72 h小鼠存活率和存活时间。体外使用LPS(10μg/mL)刺激PC和Dex-PC,观察周细胞胞内ROS含量的变化。结果与Sham组比较,ALI组小鼠肺血管内皮细胞通透性增加,伊文思蓝大量外渗,肺组织结构严重破坏并伴随大量炎性细胞浸润,肺湿/干质量比和血清中TNF-α和IL-6表达显著升高,肺功能显著下降,且72 h无小鼠存活(P<0.05);细胞治疗后,PC组和DexPC组均可有效改善肺血管内皮渗漏、单位组织伊文思蓝含量、肺病理结构、肺功能以及炎症反应,明显提高存活率(P<0.05),其中Dex-PC组的治疗效果明显优于PC组(P<0.05)。LPS刺激PC后,ROS大量蓄积,而Dex预处理能显著抵抗LPS引起的ROS蓄积(P<0.05)。结论右美托咪定预处理周细胞后可显著增强其对脓毒症小鼠肺血管内皮屏障功能的保护作用,其作用机制可能是其增强了周细胞抗氧化应激能力。

关键词：右美托咪定周细胞脓毒症急性肺损伤肺血管屏障功能

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