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中国癌症防治杂志 2023年第2期15卷 129-137页

作者：刘小丽廖达文王星琛许小君魏元元王楠张志刚孙夏承黄启超季乐乐空军军医大学基础医学院生理与病理生理学教研室西安710000 陕西中医药大学第二临床医学院西安710000 延安大学基础医学院生理与病理生理学教研室西安710000 空军军医大学基础医学院教学实验中心西安710000

目的观察溶酶体相关细胞器生物发生复合体-3(biogenesis of lysosome-related organelles complex-3,BLOC-3)亚基Hps1和Hps4对肝癌细胞中Rab32线粒体定位的影响及在肝癌细胞生长中的作用。方法通过公共数据库GenDoma,String和InBio Discover分析Hps1和Hps4与Rab32的相互作用情况。体外培养人肝癌细胞系SNU-739和Hep-3B,利用脂质体转染方法分别转染Hps1和Hps4相关的siRNAs和质粒,采用免疫荧光和Western blot观察Hps1和Hps4对Rab32线粒体定位的影响,细胞划痕、克隆形成、EdU、MTS及Transwell侵袭实验检测Hps1和Hps4调控Rab32线粒体定位后肝癌细胞迁移、增殖和侵袭的变化情况。通过公共数据库UALCAN中的数据集CPTAC分析Rab32蛋白在肝癌和正常肝脏组织中的表达差异。结果数据库分析结果显示,Hps1和Hps4均可以与Rab32相互作用;与正常肝脏组织相比,Rab32蛋白在肝癌组织中的表达显著降低(P<0.001)。在肝癌细胞系SNU-739中干涉Hps1或Hps4或同时干涉Hps1和Hps4后,Rab32线粒体定位均减少(均P<0.01),细胞线粒体Rab32蛋白表达均降低(均P<0.001),细胞增殖、迁移和侵袭能力增强(均P<0.05);在肝癌细胞系Hep-3B中过表达Hps1和Hps4后,Rab32线粒体定位增多(P<0.01),细胞线粒体Rab32蛋白表达增加(P<0.001),细胞增殖、迁移和侵袭能力均受抑制(均P<0.01),而单独过表达Hps1或Hps4时无显著抑制作用(均P>0.05)。结论BLOC-3亚基Hps1和Hps4均可与Rab32相互作用并增加Rab32线粒体定位,进而抑制肝癌细胞生长。

关键词：肝癌 BLOC-3 Rab32 线粒体迁移侵袭

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实用口腔医学杂志 2021年第1期37卷 5-9页

作者：黎哲昊卜歆封琳胡君璧申亮亮关键佳木斯大学附属口腔医院颌面外科 154002 第四军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室陕西中医药大学西安交通大学第一附属医院消化内科

目的:研究肿瘤相关中性粒细胞对人粘液表皮样癌MC3细胞上皮-间质转变(EMT)和侵袭转移过程调控的功能及机制。方法:分离培养C57小鼠骨髓中性粒细胞,Transwell检测肿瘤相关中性粒细胞对MC3侵袭和迁移的影响;Western印迹和Real-time PCR检... 详细信息

目的:研究肿瘤相关中性粒细胞对人粘液表皮样癌MC3细胞上皮-间质转变(EMT)和侵袭转移过程调控的功能及机制。方法:分离培养C57小鼠骨髓中性粒细胞,Transwell检测肿瘤相关中性粒细胞对MC3侵袭和迁移的影响;Western印迹和Real-time PCR检测Vimentin等mRNA和蛋白表达;免疫荧光等检测Vimentin表达。结果:肿瘤相关中性粒细胞中TGF-β表达增加;MC3细胞与中性粒细胞共培养后Vimentin和Snail表达增加;裸鼠体内实验表明中性粒细胞浸润程度与Vimentin表达相关。结论:肿瘤相关中性粒细胞通过TGF-β诱导MC3细胞中Snail表达,并促进肿瘤侵袭和转移。

关键词：人粘液表皮样癌肿瘤相关中性粒细胞上皮-间质转变

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经方量效关系刍议及应用体会

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国际中医中药杂志 2018年第12期40卷 1201-1203页

作者：杨军陕西中医药大学基础医学院伤寒教研室陕西省中医药管理局伤寒学与经方辨治疑难病重点研究室咸阳712046

俗话说:"中医不传之秘在于量""古方之妙,全在药量"。在使用经方时,正确处理方药剂量与有效性、安全性的关系,是提升中医疗效的关键,这种量效关系在《重剂起沉疴》[1]中阐述较多。在临床使用经方时,尤其是作用峻猛的... 详细信息

俗话说:"中医不传之秘在于量""古方之妙,全在药量"。在使用经方时,正确处理方药剂量与有效性、安全性的关系,是提升中医疗效的关键,这种量效关系在《重剂起沉疴》[1]中阐述较多。在临床使用经方时,尤其是作用峻猛的药,药量如果掌握不准或使用不当,轻者疗效不佳,重则可致医疗事故。所以在医疗实践中,对经方用药必须辨证准确,达到胸有成竹,才能大胆使用。以下笔者就经方的体会从量效关系、药物比例方面,作一浅析。

关键词：量效关系经方中医疗效临床使用使用不当疗效不佳医疗事故医疗实践

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组氨酸通过抗氧化作用改善移植肝缺血再灌注损伤

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空军军医大学学报 2024年第1期45卷 15-21页

作者：张志刚高铭舒李佳颖许小君魏元元杜钰璐王楠黄启超空军军医大学基础医学院生理与病理生理学教研室陕西西安710032 西北大学生命科学学院生物学教研室陕西西安710069 陕西中医药大学第二临床医学院陕西咸阳712046 延安大学基础医学院病理学教研室陕西延安716000

目的探索补充组氨酸对移植肝缺血再灌注损伤的改善作用及相关机制。方法建立移植肝缺血再灌注损伤小鼠模型,随机将30只雄性C57BL/6小鼠分为3组:假手术组、生理盐水治疗组、组氨酸治疗组;用缺氧/复氧模拟细胞缺血再灌注损伤,将人肝永生化... 详细信息

目的探索补充组氨酸对移植肝缺血再灌注损伤的改善作用及相关机制。方法建立移植肝缺血再灌注损伤小鼠模型,随机将30只雄性C57BL/6小鼠分为3组:假手术组、生理盐水治疗组、组氨酸治疗组;用缺氧/复氧模拟细胞缺血再灌注损伤,将人肝永生化(THLE)细胞分为3组:阴性对照组、生理盐水处理组和组氨酸处理组。检测指标如下:通过谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性检测小鼠肝功能;采用Western blotting检测肝组织B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bax)蛋白表达和cleaved caspase-3蛋白水平;TUNEL染色检测肝细胞凋亡细胞比例;肝组织HE染色检测病理结构变化;使用活性氧(ROS)检测试剂盒检测THLE细胞ROS水平。结果与移植肝缺血再灌注损伤小鼠模型生理盐水治疗组相比,组氨酸治疗组血清ALT和AST活性降低(P<0.05),肝病理损伤程度显著减轻,Bax表达降低,而Bcl-2上调,Bax/Bcl-2比值显著降低,cleaved caspase-3蛋白水平升高(P<0.05)。此外,THLE细胞试验表明,组氨酸处理后可减少肝细胞凋亡比例和肝细胞ROS水平。结论组氨酸可以通过抗氧化作用改善移植肝缺血再灌注损伤。该研究为肝缺血再灌注损伤临床救治提供新思路。

关键词：肝脏缺血再灌注损伤组氨酸活性氧

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CD44和MMP-9在RCC中的表达和CTC分类呈正相关

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临床医学进展 2024年第1期14卷 363-372页

作者：朱延杰贺少菲柴佳刘一雄彭阳马静空军军医大学基础医学院陕西西安陕西中医药大学医学技术学院陕西咸阳陕西省空军军医大学西京医院病理科陕西西安陕西省空军军医大学基础医学院病理学教研室陕西西安

肾细胞癌(RCC)是所有泌尿生殖系统癌中最常见的恶性肿瘤类型,其发病率迅速上升。在此,我们研究了CD44和MMP-9在肾细胞癌(RCC)中的表达与患者的临床病理特征以及循环肿瘤细胞(CTC)之间的关系。共鉴定出114例肿瘤和非癌性肾组织样本。我... 详细信息

肾细胞癌(RCC)是所有泌尿生殖系统癌中最常见的恶性肿瘤类型,其发病率迅速上升。在此,我们研究了CD44和MMP-9在肾细胞癌(RCC)中的表达与患者的临床病理特征以及循环肿瘤细胞(CTC)之间的关系。共鉴定出114例肿瘤和非癌性肾组织样本。我们回顾了现有的临床记录。采用免疫组化方法检测104例RCC标本和10例非癌性肾组织标本中CD44和MMP-9的表达。采用阳性富集法进行CTC试验和分类。我们发现MMP-9和CD44的阳性表达率分别为69.2%和65%。肾细胞癌患者的发病率分别高于正常肾组织患者(P < 0.05)。MMP-9和CD44的表达与WHO/ISUP核仁分级相关(P < 0.05)。CTC阳性患者中MMP-9和CD44阳性的阳性表达率(分别为60.6%和57.7%)显著高于CTC阴性患者(8.7%和7.7%;P < 0.05)。间充质型CTC患者RCC中MMP-9和CD44的阳性表达率高于混合型和上皮型CTC患者。综上所述,MMP-9和CD44过表达与肾细胞癌的病理分级、CTC数量和分类相关,提示它们可能是潜在的预后因素,成为RCC患者新的潜在治疗靶点。

关键词：肾细胞癌 CD44 MMP-9 CTC 预后

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七叶莲花醇提物通过调节PI3K/Akt/GSK-3β信号通路减轻丙泊酚所致新生大鼠神经毒性

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临床和实验医学杂志 2022年第21期21卷 2249-2253页

作者：杜引马晓真王龙袁浩峥西安交通大学第二附属医院麻醉科陕西西安710004 陕西中医药大学基础医学院生理教研室陕西咸阳712046

目的分析七叶莲花醇提物调节磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶/糖原合成酶激酶-3β(PI3K/Akt/GSK-3β)信号通路减轻丙泊酚所致新生大鼠神经毒性机制。方法清洁级健康雄性SD大鼠85只,采用随机数字表法分为5组,每组17只,对照组灌胃0.9%... 详细信息

目的分析七叶莲花醇提物调节磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶/糖原合成酶激酶-3β(PI3K/Akt/GSK-3β)信号通路减轻丙泊酚所致新生大鼠神经毒性机制。方法清洁级健康雄性SD大鼠85只,采用随机数字表法分为5组,每组17只,对照组灌胃0.9%氯化钠溶液,阳性药组(给予丙泊酚),3种不同剂量七叶莲花醇提物组:低剂量组(3.06 g/kg)、中剂量组(6.12 g/kg)、高剂量组(12.24 g/kg),均灌胃七叶莲花醇提物,连续3 d,每天注射1次,腹腔注射戊巴比妥钠,通过肢体Ⅱ型导联监测心电图显露股动脉,置入24 G套管针抽血样,显露大鼠股静脉插入套管针泵注丙泊酚,速度为2 mg·kg^(-1)·min^(-1)。离断颈椎处死解剖分离大鼠海马组织,采用TUNEL染色检出海马神经元凋亡水平,RT-聚合链反应和蛋白质印迹法检测海马组织N-甲基-D-天冬氨酸1(NMDA1)、NMDA2B表达;RT-聚合链反应检测PI3K、Akt、GSK-3β的微小核糖核酸(mRNA)表达,蛋白质印迹法检测Akt、pAkt(ser473)、GSK-3β、PGSK-3β(ser9)蛋白表达。结果低、中、高剂量组及阳性药组海马神经元凋亡率均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。中剂量组、高剂量组及阳性药组NMDA1、NMDA2B mRNA表达与两者蛋白表达均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);低剂量组、中剂量组、高剂量组NMDA1、NMDA2B mRNA表达与两者蛋白表达高于阳性药组,差异均有统计学意义(P<0.05)。阳性药组GSK-3βmRNA表达高于对照组,高剂量组GSK-3βmRNA表达低于阳性药组,差异均有统计学意义(P<0.05)。低、中、高剂量组及阳性药组pAkt(ser473)、PGSK-3β(ser9)蛋白表达、pAkt(ser473)/Akt比值低于对照组,低、中剂量组及阳性药组PGSK-3β(ser9)/GSK-3β比值低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);高剂量组pAkt(ser473)蛋白、pAkt(ser473)/Akt比值高于阳性药组,低、中、高剂量组PGSK-3β(ser9)蛋白、PGSK-3β(ser9)/GSK-3β比值高于阳性药组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论丙泊酚会导致新生大鼠海马神经元细胞损伤,使用七叶莲花醇提物可逆转丙泊酚所致神经毒性作用,其机制与调节PI3K/Akt/GSK-3β信号通路有关。

关键词：新生儿大鼠七叶莲花醇提物 PI3K Akt GSK-3 丙泊酚神经毒性

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β淀粉样蛋白在胞内的生成和代谢

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医学综述 2020年第8期26卷 1477-1481,1488页

作者：石镜明段红玉张洁孙正启西藏民族大学基础医学院形态学教研室陕西咸阳712082 陕西中医药大学附属医院内分泌二科陕西咸阳712000

β淀粉样蛋白(Aβ)的产生和代谢是阿尔茨海默病(AD)病因的重要事件,因此,通过分析Aβ肽可能产生的亚细胞部位和代谢途径,包括β和γ两种水解酶产生和活性部位,可知Aβ在亚细胞内的代谢途径以及Aβ在动物细胞和神经元中的代谢差异。此外... 详细信息

β淀粉样蛋白(Aβ)的产生和代谢是阿尔茨海默病(AD)病因的重要事件,因此,通过分析Aβ肽可能产生的亚细胞部位和代谢途径,包括β和γ两种水解酶产生和活性部位,可知Aβ在亚细胞内的代谢途径以及Aβ在动物细胞和神经元中的代谢差异。此外,在无极性的哺乳动物细胞内Aβ最可能产生的部位很可能是内涵体、溶酶体或质膜,Aβ产生后可通过泡吐作用分泌到胞外。神经元产生的Aβ需要通过树突和轴突末梢的囊泡分泌到胞外。这些结果将帮助人们更好地理解Aβ在胞内的产生和代谢途径。

关键词： β-淀粉样前体蛋白 β-淀粉样蛋白分泌酶内涵体

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甲基化CpG结合蛋白2的泛癌分析及其对肝癌Hep3B细胞生物活性的影响

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山西医科大学学报 2022年第9期53卷 1047-1052页

作者：杨阳孙瑞芳李玉龙孙娜陕西中医药大学公共卫生学院卫生毒理学教研室咸阳712046 西安交通大学基础医学院病理学系陕西省人民医院消化内科

目的应用生物信息学方法分析甲基化CpG结合蛋白2(methyl-CpG-binding domain protein 2,MeCP2)在多种肿瘤中的作用并在肝癌细胞中对其进行验证。方法利用肿瘤免疫评估资源(Tumor Immune Estimation Resource 2.0,TIMER 2.0)、基因表达... 详细信息

目的应用生物信息学方法分析甲基化CpG结合蛋白2(methyl-CpG-binding domain protein 2,MeCP2)在多种肿瘤中的作用并在肝癌细胞中对其进行验证。方法利用肿瘤免疫评估资源(Tumor Immune Estimation Resource 2.0,TIMER 2.0)、基因表达谱交互分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis 2,GEPIA 2)和癌症基因组学门户网站(cBioPortal for Cancer Genomics,cBioPortal)分析MeCP2基因在多种肿瘤组织中的表达,MeCP2对肿瘤患者生存期的影响及其在肿瘤中遗传变异的情况。应用CCK-8及细胞周期实验分别检测过表达和沉默MeCP2对肝癌Hep3B细胞增殖及细胞周期的影响。结果TIMER2.0显示,与正常组织相比,MeCP2在乳腺浸润癌、胆管癌、食管癌、头颈鳞状细胞癌、肾嫌色细胞癌、肝细胞癌中的mRNA表达水平显著增加(P<0.05);GEPIA2结果显示MeCP2与乳腺浸润癌、结肠癌、肾乳头状细胞癌、肝细胞癌、肾透明细胞癌、葡萄膜黑色素瘤的预后相关。cBioPortal分析提示错义突变是MeCP2基因突变的主要类型。CCK-8实验表明过表达MeCP2可促进肝癌Hep3B细胞增殖(P<0.05),而抑制其表达可抑制肝癌Hep3B细胞增殖(P<0.01);细胞周期实验表明抑制MeCP2可将肝癌Hep3B细胞阻滞在G1期(P<0.01)。结论MeCP2在肝癌中可能发挥癌基因的作用。

关键词： MeCP2 生物信息学肝癌增殖

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葛根及含葛根复方对重症肌无力大鼠骨骼肌及线粒体动力相关蛋白1的影响

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环球中医药 2022年第11期15卷 2046-2050页

作者：彭高强文颖娟陈茉仝武宁南方医科大学中西医结合医院质控科广州510515 陕西中医药大学基础医学院方剂教研室

目的探讨葛根复方对实验性自身免疫性重症肌无力(experimental autoimmune myasthenia gravis, EAMG)大鼠骨骼肌及线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1, Drp1)的影响。方法将大鼠随机分为空白组、模型组、葛芪组、葛根组... 详细信息

目的探讨葛根复方对实验性自身免疫性重症肌无力(experimental autoimmune myasthenia gravis, EAMG)大鼠骨骼肌及线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1, Drp1)的影响。方法将大鼠随机分为空白组、模型组、葛芪组、葛根组、葛参组、葛芪参妙组、葛妙组、强的松组,共8组,每组各10只。除空白组外,其余各组采用人工鼠源性AchR-α亚基97-116肽段乳化剂进行EAMG模型构建。每天给予葛芪组、葛根组、葛参组、葛芪参妙组、葛妙组、强的松组相应的药物灌胃,空白组和模型组给予生理盐水灌胃,每日1次,连续28天。治疗结束后,采用苏木精—伊红染色(hematoxylin-eosin staining, HE)染色法对大鼠骨骼肌组织进行染色观察、透射电镜观察线粒体超微结构以及蛋白免疫印迹(Western blot, WB)法检测各组大鼠线粒体Drp1蛋白的表达。结果与模型组比较,葛根各组及强的松组骨骼肌组织排列紊乱、核偏移、炎症浸润减少,线粒体肿胀变形、嵴结构不清、片段化有所好转,以葛芪参妙组恢复效果最好。WB检测结果显示,各组药物干预后,Drp1蛋白有不同程度降低(P<0.05),其中以葛妙、葛芪参妙组中Drp1蛋白表达降低幅度最大(P<0.01),优于强的松组(P<0.01)。结论葛根复方能够降低Drp1蛋白表达,减少线粒体分裂,促进线粒体恢复以及缓解骨骼肌组织的损伤。

关键词：重症肌无力葛根复方骨骼肌线粒体动力相关蛋白1

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PBL教学法在研究生分子生物学实验课程中的应用分析

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生物技术通讯 2016年第4期27卷 563-565页

作者：申亮亮曲璇张健药立波第四军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 陕西中医药大学陕西咸阳712046

研究生教育是我国培养高素质人才的重要环节。在医学院校,分子生物学实验课程作为衔接理论知识与实际应用的纽带,对研究生的临床实践、科学研究能力的培养具有重要意义。我们在多年教学经验的基础上,在研究生实验课程中引入了PBL(proble... 详细信息

研究生教育是我国培养高素质人才的重要环节。在医学院校,分子生物学实验课程作为衔接理论知识与实际应用的纽带,对研究生的临床实践、科学研究能力的培养具有重要意义。我们在多年教学经验的基础上,在研究生实验课程中引入了PBL(problem based learning)教学模式,以提出科学问题的方式,将实验中涉及到的质粒DNA提取、核酸电泳、蛋白印迹、细胞转染等分子生物学实验技术进行整合,增加了学生学习的热情,同时锻炼并培养了学生的提出问题、解决问题的科研思维能力。

关键词：研究生教学 PBL教学法分子生物学实验整合

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