检索结果-内蒙古大学图书馆

同步检测7种鱼类病毒的扩增子拯救多重PCR(Arm-PCR)方法的建立和应用

渔业科学进展 2016年第4期37卷 128-134页

作者：王胜强耿伟光史成银李晋粟子丹农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛266071 上海海洋大学水产与生命学院上海201306 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室青岛266071

淋巴囊肿病毒(LCDV)、肿大细胞病毒属虹彩病毒(Mega)、赤点石斑鱼神经坏死病毒(RGNNV)、传染性造血器官坏死病毒(IHNV)、传染性胰脏坏死病毒(IPNV)、病毒性出血败血症病毒(VHSV)和传染性鲑鱼贫血症病毒(ISAV)是养殖鱼类主要的病毒性病原... 详细信息

淋巴囊肿病毒(LCDV)、肿大细胞病毒属虹彩病毒(Mega)、赤点石斑鱼神经坏死病毒(RGNNV)、传染性造血器官坏死病毒(IHNV)、传染性胰脏坏死病毒(IPNV)、病毒性出血败血症病毒(VHSV)和传染性鲑鱼贫血症病毒(ISAV)是养殖鱼类主要的病毒性病原,危害巨大。为实现这7种病原的高通量、同步检测,本研究在分析这7种病毒基因序列的基础上,设计了9组扩增子拯救多重PCR(Arm-PCR)引物,并对扩增体系中的Taq酶、M^g(2+)、d NTP、Primer Mix浓度及退火温度等参数进行调整和优化,结合基因芯片检测技术,建立了同步检测7种鱼类病毒的Arm-PCR方法。优化后的Arm-PCR方法第一步PCR体系为:Taq酶(2.5 U/μl)1.0μl,10×PCR Buffer(含20 mmol/L的M^g(2+))5μl,d NTP(各2.5 mmol/L)5μl,10×Primer Mix(各2μmol/L)9μl,模板1μl,dd H2O补足至50μl,退火温度为56℃。研究结果显示,该方法可以在1支反应管内对上述7种病毒的9个致病基因同步进行扩增和检测,检测灵敏度分别为10~1copies/μl(RGNNV、VHSV、ISAV-NS、ISAV-MA)、10~2 copies/μl(LCDV、Mega、IHNV、IPNV)和10~3 copies/μl(大菱鲆红体病虹彩病毒,TRBIV)。该方法特异性强,与半滑舌鳎、石斑鱼、大菱鲆和牙鲆基因组DNA不产生交叉反应。本研究建立的可同步检测7种鱼类病毒的Arm-PCR方法具有高通量、高灵敏度、高准确性的优势,能有效提高工作效率,在鱼类病毒的筛查和流行病学调查领域有广泛的应用前景。

关键词：鱼类病毒多重检测高通量多重PCR

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磺胺二甲嘧啶对中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)非特异性免疫酶活性的影响

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渔业科学进展 2016年第5期37卷 92-99页

作者：孙铭葛倩倩李健葛红星翟倩倩赵法箴中国海洋大学水产学院青岛266003 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛266071 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室青岛266071

以50、100和150 mg/kg磺胺二甲嘧啶连续投喂中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)5 d,于给药期间第1、2、3、4、5天及停止投喂药物的第1、2、3、4、5、7、10天取样,测定中国明对虾免疫相关指标超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)、... 详细信息

以50、100和150 mg/kg磺胺二甲嘧啶连续投喂中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)5 d,于给药期间第1、2、3、4、5天及停止投喂药物的第1、2、3、4、5、7、10天取样,测定中国明对虾免疫相关指标超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LZM)和酚氧化酶(PO)活性的变化情况。结果显示,磺胺二甲嘧啶不同给药剂量对酶活性的作用效果不同,投喂渔药期间(0–5 d),低浓度组SOD和PO活性均极显著高于对照组(P<0.01);AKP活性于投药第2、3天极显著低于对照组(P<0.01),随后逐渐升高,于第5天显著高于对照组(P<0.05);LZM活性于投药第3、4天显著低于对照组(P<0.05),于第5天极显著低于对照组(P<0.01)。中浓度组SOD活性在前2 d显著高于对照组(P<0.05),投药3、4 d显著低于对照组(P<0.05);AKP活性于第5天活性最高,为对照组的1.14倍;LZM活性在3、4、5 d显著低于对照组(P<0.05);PO活性在投喂药物前期1–3 d呈上升趋势,极显著高于对照组(P<0.01),于第3天达到最高值。高浓度组SOD和LZM活性在投药期间显著低于对照组(P<0.05);AKP活性于投药期间显著高于对照组(P<0.05);PO活性于1、2 d极显著高于对照组(P<0.01),随后逐渐下降。停止投喂药物阶段(6–15 d),3个浓度组各免疫相关指标均恢复至对照组水平。研究表明,低浓度磺胺二甲嘧啶对中国明对虾的免疫机能具有一定的影响,高浓度磺胺二甲嘧啶对中国明对虾的免疫机能具有明显的抑制作用。在使用抗菌药物进行抑菌或杀菌的同时,要综合考虑所选择给药剂量对对虾生理机能的影响。

关键词：磺胺二甲嘧啶中国明对虾非特异性免疫

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池塘养殖仿刺参(Apostichopus japonicus)肠含物、附着基和底泥中的菌群结构及其相关性

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渔业科学进展 2016年第5期37卷 127-132页

作者：李彬廖梅杰荣小军张正王印庚陈贵平王岚范瑞用农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛266071 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室青岛266071 青岛瑞滋海珍品发展有限公司青岛266409

2014年10月,利用PCR-DGGE技术分析了标准化养殖池塘中仿刺参(Apostichopus japonicus)肠含物及附着基和底泥中细菌的菌群结构及其相关性。结果显示,仿刺参肠含物、附着基、底泥中细菌多样性较高,分别平均获得30.00±1.00、15.33... 详细信息

2014年10月,利用PCR-DGGE技术分析了标准化养殖池塘中仿刺参(Apostichopus japonicus)肠含物及附着基和底泥中细菌的菌群结构及其相关性。结果显示,仿刺参肠含物、附着基、底泥中细菌多样性较高,分别平均获得30.00±1.00、15.33±1.70、21.67±2.62条带,肠含物中细菌种类数显著高于附着基和底泥。聚类分析和戴斯系数表明,不同池塘的仿刺参肠含物样本单独聚为一支,相似性达到0.785,附着基和底泥样品聚为一支,平均相似性达到0.532。不同样品DGGE图谱中20条优势条带的切割、克隆、测序,共获得了20条细菌序列,表明肠含物细菌种类以聚球藻属(Synechococcus sp.)、脱硫杆菌属(Desulfobacterium)、脱硫叠球菌属(Desulfosarcina sp.)、极地杆菌属(Polaribacter)、Algibacter sp.为主,附着基中主要以Robiginitalea sp.和Silicibacter sp.为主,底泥样品中主要以假单胞菌属(Proteobacterium)、噬胞菌属(Cytophaga)、Desulfosarcina sp.为主,肠含物中细菌特有种类的分离与鉴定为仿刺参养殖潜在益生菌的开发提供基础数据。

关键词： PCR-DGGE 仿刺参肠含物环境细菌

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氨氮胁迫下中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)谷氨酸脱氢酶基因的表达分析

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渔业科学进展 2016年第5期37卷 83-91页

作者：何玉英李少飞王清印李健农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛266071 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室青岛266071 大连海洋大学水产与生命学院大连116023

采用RACE技术克隆获得中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)谷氨酸脱氢酶GDH基因(Fc GDH)。Fc GDH基因全长1779 bp,包括1个1659 bp的开放阅读框(ORF),编码552个氨基酸,预测分子量大小为61.3 k Da,理论等电点为6.54。同源性分析显示,Fc ... 详细信息

采用RACE技术克隆获得中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)谷氨酸脱氢酶GDH基因(Fc GDH)。Fc GDH基因全长1779 bp,包括1个1659 bp的开放阅读框(ORF),编码552个氨基酸,预测分子量大小为61.3 k Da,理论等电点为6.54。同源性分析显示,Fc GDH氨基酸序列与其他动物高度保守,其中,与凡纳滨对虾最为相似,高达98%,其次为中华绒螯蟹,为89%。系统进化树分析显示,Fc GDH氨基酸序列与凡纳滨对虾GDH聚为一支,之后依次为:中华绒螯蟹、黑腹果蝇、埃及按蚊。组织表达分析发现,Fc GDH基因在肌肉、鳃、肝胰腺、胃、肠、淋巴和血淋巴中均有表达,其中,肌肉中表达量最高。氨氮胁迫后,Fc GDH基因在肌肉和肝胰腺组织中变化显著,在胁迫后期,Fc GDH基因表达量均上调,且与对照组相比差异显著(P<0.05),说明Fc GDH基因在氨氮解毒代谢过程中发挥了重要作用。

关键词：中国明对虾谷氨酸脱氢酶基因克隆基因表达氨氮胁迫

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凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)微卫星多重PCR体系的建立及其在家系亲权鉴定中的应用

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渔业科学进展 2016年第3期37卷 58-67页

作者：李东宇孔杰孟宪红栾生罗坤卢霞曹宝祥南京农业大学无锡渔业学院无锡214081 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛266071 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室青岛266071

为了在遗传分析研究中提高效率并节约成本,本研究从已报道的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)微卫星位点中选取多态性较高的位点,基于各位点的扩增片段大小及退火温度等因素进行微卫星位点的组合。通过不断优化位点组合、反应体系及反... 详细信息

为了在遗传分析研究中提高效率并节约成本,本研究从已报道的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)微卫星位点中选取多态性较高的位点,基于各位点的扩增片段大小及退火温度等因素进行微卫星位点的组合。通过不断优化位点组合、反应体系及反应程序,成功建立了1个五重、2个四重和1个三重PCR反应体系,并将其应用于11个凡纳滨对虾家系的亲权鉴定。结果显示,四组多重PCR体系中的16个微卫星位点在11个凡纳滨对虾家系中的平均等位基因数(Na)为6,平均多态信息含量(PIC)为0.5813,平均观测杂合度(Ho)为0.513,平均期望杂合度(He)为0.636。利用Cervus3.0软件,对已知系谱关系的11个凡纳滨对虾家系进行亲权分析,其第一亲本累积排除率(CE-1P)、第二亲本累积排除率(CE-2P)和双亲累积排除率(CE-PP)分别为0.99525487、0.99990862和0.99999986。进一步分析表明,当同时使用四组多重PCR体系进行亲权分析时,其模拟配对率和亲权鉴定准确率均为100%,全同胞和半同胞家系鉴别效果良好,表现出准确的鉴别能力。本研究所建立的四组凡纳滨对虾微卫星多重PCR体系均可为后续的凡纳滨对虾遗传多样性分析和亲权鉴定提供高效、准确的检测手段。

关键词：凡纳滨对虾微卫星多重PCR 亲权鉴定

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饲料镁不影响鲈鱼(Lateolabrax japonicas)幼鱼的生长及鱼体镁含量

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渔业科学进展 2016年第2期37卷 56-61页

作者：赵敏梁萌青谈枫郑珂珂徐后国燕磊中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛266071 新希望六和股份有限公司北京100102 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室青岛266071

以鱼粉和豆粕为主要蛋白源,以鱼油和豆油为脂肪源,向基础饲料中分别添加0、1.53、3.57、5.61、7.65、9.69 g/kg Mg SO4·7H2O,配制镁含量分别为186、350、542、735、950、1220 mg/kg的6种实验饲料,用于饲养初始体重为(28.0±2.... 详细信息

以鱼粉和豆粕为主要蛋白源,以鱼油和豆油为脂肪源,向基础饲料中分别添加0、1.53、3.57、5.61、7.65、9.69 g/kg Mg SO4·7H2O,配制镁含量分别为186、350、542、735、950、1220 mg/kg的6种实验饲料,用于饲养初始体重为(28.0±2.5)g的鲈鱼(Lateolabrax japonicas)为56 d,每组设3个重复,实验在流水系统中进行,水体镁的含量为1220 mg/L。结果显示,不同水平的饲料镁对鲈鱼幼鱼成活率、特定生长率、饲料效率无显著影响(P>0.05);不同水平的饲料镁对鲈鱼幼鱼肝体比(HSI)、脏体比(VSI)及肥满度(CF)无显著影响(P>0.05);饲料镁对鲈鱼幼鱼肌肉粗蛋白、粗脂肪及灰分无显著影响(P>0.05);饲料镁对鲈鱼幼鱼肌肉、脊椎骨及血清镁含量无显著影响(P>0.05)。研究表明,鲈鱼幼鱼可以从海水或基础饲料原料中吸收的镁足够满足自身对镁的需求,因此,不需要在饲料中额外补充镁。

关键词：鲈鱼镁生长性能鱼体成分

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恩诺沙星在大菱鲆(Scophthalmus maximus)、牙鲆(Paralichthys olivaceus)和半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)体内的残留消除规律

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渔业科学进展 2016年第5期37卷 16-21页

作者：常志强李东利李健农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛266071 上海海洋大学水产与生命学院上海201306 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室青岛266071

本研究比较了在20℃水温条件下恩诺沙星(Enrofloxacin)在3种主要养殖鲆鲽鱼[大菱鲆(Scophthalmus maximus)、牙鲆(Paralichthys olivaceus)和半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)]体内的残留消除规律。选择体重为300–400 g的健康2龄大菱鲆、牙鲆和半滑舌鳎,以10 mg/kg的剂量连续3 d通过灌胃的方式分别给予恩诺沙星后,于1、3、6、10、15、20、25、30、35、40 d采集血浆、肝、鳃、肌肉和肾组织。利用高效液相色谱法检测血浆和各组织中的恩诺沙星浓度,拟合恩诺沙星在3种鲆鲽鱼体内的消除曲线,计算消除半衰期。结果显示,3种鲆鲽鱼的组织中,恩诺沙星在肾中残留浓度最高,其消除速度依次为牙鲆>大菱鲆>半滑舌鳎,其消除半衰期分别为3.75、6.54、7.37 d;恩诺沙星在大菱鲆、牙鲆和半滑舌鳎血浆中的消除比其代谢产物环丙沙星慢;综合比较恩诺沙星在3种鲆鲽鱼血浆和大多数组织中的消除规律,均呈现出牙鲆体内消除最快,大菱鲆次之,半滑舌鳎最慢的趋势。依据我国无公害水产品中恩诺沙星最高残留限量为50μg/kg的标准,建议在20℃水温条件下使用恩诺沙星防治鲆鲽鱼细菌性疾病时的休药期为:大菱鲆44 d、牙鲆33 d、半滑舌鳎47 d以上。

关键词：恩诺沙星大菱鲆牙鲆半滑舌鳎药物残留

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复合益生菌在凡纳滨对虾苗种培育中的应用评价

复合益生菌在凡纳滨对虾苗种培育中的应用评价

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2017年中国水产学会学术年会

作者：孙博超宋晓玲黄倢中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海水养殖病害防治重点实验室青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室上海海洋大学青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室

将复合益生菌假交替单胞菌CDM8、短小芽孢杆菌LV012以及硝化细菌BC107交替添加到凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)苗种培育水体中,研究其对凡纳滨对虾幼体存活率、变态率、水体以及幼体体内可培养微生物数量、细胞免疫相关基因表达水... 详细信息

将复合益生菌假交替单胞菌CDM8、短小芽孢杆菌LV012以及硝化细菌BC107交替添加到凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)苗种培育水体中,研究其对凡纳滨对虾幼体存活率、变态率、水体以及幼体体内可培养微生物数量、细胞免疫相关基因表达水平以及体内微生物结构的影响。研究结果显示,添加益生菌的实验组较对照组存活率提高14.9%,同时,在每一变态时期,实验组变态率均高于对照组。在蚤状幼体、糠虾幼体以及仔虾幼体时期,实验组水体以及对虾幼体内的可培养细菌总数显著增加(P<0.05),水体中可培养弧菌的数量显著下降(P<0.05)。结果表明,在凡纳滨对虾苗种培育阶段,添加益生菌可以有效提高幼体存活率,提升每个发育期变态率,增加水体以及幼体体内菌的含量,抑制弧菌增殖。

关键词：凡纳滨对虾复合益生菌微生物数量微生物结构

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海水养殖容量评估方法及在养殖管理上的应用

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中国工程科学 2016年第3期18卷 85-89页

作者：张继红蔺凡方建光中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室山东青岛266071

随着海水养殖规模的增大,超负荷养殖使得养殖水环境遭到严重破坏,病害加剧,危及养殖产业的可持续发展。亟待加强养殖容量研究,建立科学的适应性管理对策。本文综述了国内外有关海水网箱、贝类、藻类等养殖容量研究进展、存在的问题。指... 详细信息

随着海水养殖规模的增大,超负荷养殖使得养殖水环境遭到严重破坏,病害加剧,危及养殖产业的可持续发展。亟待加强养殖容量研究,建立科学的适应性管理对策。本文综述了国内外有关海水网箱、贝类、藻类等养殖容量研究进展、存在的问题。指出了容量评估的关键技术,主要包括:生态容量评估的指标体系、养殖生物个体生长数值模型、水动力过程与生态模型的耦合。分析了养殖容量研究在指导养殖密度调整、优化养殖布局、拓展养殖空间以及构建新型养殖模式中的作用。对于未来开展养殖容量研究提出了三点建议:建立养殖水域的容量评估制度、设立近海养殖结构与养殖容量评估的长期监测实验站、设立养殖容量研究和布局与结构调整专项,以建立生态系统水平的养殖管理策略。

关键词：海水养殖容量管理模型

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软体动物Hox基因的组成、表达模式及进化分析

软体动物Hox基因的组成、表达模式及进化分析

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中国细胞生物学学会2017年全国学术大会

作者：杨志辉李语丽王师包振民海洋生物遗传学与育种教育部重点实验室中国海洋大学海洋生命学院山东青岛 266003 海洋生物遗传学与育种教育部重点实验室中国海洋大学海洋生命学院山东青岛 266003 海洋生物学与生物技术功能实验室青岛海洋科学与技术国家实验室山东青岛266237 海洋生物遗传学与育种教育部重点实验室中国海洋大学海洋生命学院山东青岛 266003 海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室青岛海洋科学与技术国家实验室山东青岛266237

Hox基因是动物基因组内高度保守的一类转录因子，在动物体轴形成中起着重要的作用，是一类重要的发育调控基因。动物形态的进化和多样性与Hox基因的数目、序列及其表达模式密切相关，过去Hox基因在模式生物系统中得到了广泛的研究，但... 详细信息

Hox基因是动物基因组内高度保守的一类转录因子，在动物体轴形成中起着重要的作用，是一类重要的发育调控基因。动物形态的进化和多样性与Hox基因的数目、序列及其表达模式密切相关，过去Hox基因在模式生物系统中得到了广泛的研究，但对于软体动物中Hox基因的了解还相对较少，软体动物具有高度的躯体结构多样性，研究软体动物的Hox基因对于理解和解释其形态多样性的产生具有重要意义。本研究分析了软体动物Hox基因的组成、表达模式及进化。结合相关基因组数据对软体动物Hox基因的组成分析，发现虾夷扇贝与帽贝的Hox基因簇一样都是由11个Hox基因组成的完整的单一基因簇，且它们的Hox基因具有一致的转录方向。

关键词：软体动物 Hox基因分段共线性进化

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