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低氧下K562细胞向红系分化进程中GATA-1与miR-451a表达的相关性研究

中国病理生理杂志 2020年第4期36卷 663-672页

作者：付成冰刘芳牛志鹏胡彩艳青海大学医学院高原医学研究中心青海西宁810000 青海大学医学院生物化学教研室青海西宁810000

目的:探讨低氧下人慢性髓细胞性白血病K562细胞向红系分化进程中GATA结合蛋白1(GATA binding protein-1,GATA-1)与微小RNA-451a(microRNA-451a,miR-451a)表达的相关性。方法:将K562细胞分为常氧组和低氧(1%O2)组,经40μmol/L氯化血红素分别诱导分化至48和72 h。RT-qPCR检测γ-珠蛋白(γ-globin)的mRNA表达,联苯胺染色观察细胞血红蛋白生成情况,流式细胞术检测CD235a的表达水平,验证K562细胞红系分化模型是否复制成功。在K562细胞向红系分化的不同时点,采用Western blot检测两组细胞GATA-1的蛋白表达情况;采用RT-qPCR检测两组细胞GATA-1 mRNA和miR-451a的表达水平并进行相关性分析。检测GATA-1过表达组、干扰组和阴性对照组K562细胞的红系分化指标,同时采用瑞氏-吉姆萨染色法分析上述组别细胞形态学的变化,明确GATA-1过表达和抑制后K562细胞的红系分化情况。RT-qPCR检测GATA-1过表达和抑制后miR-451a的表达变化。结果:两组细胞分化48 h和72 h后,γ-globin表达量、联苯胺染色阳性率和CD235a表达量均显著高于0h(P<0.05),且低氧组72 h的γ-globin表达量、联苯胺染色阳性率和CD235a表达量均显著高于常氧组(P<0.05)。低氧组GATA-1 mRNA和miR-451a的表达水平随红系分化过程均呈现上升趋势(P<0.05),并在72 h均显著高于常氧组(P<0.05)。相关性分析结果显示,低氧下GATA-1 mRNA与miR-451a的表达呈正相关(P<0.01)。GATA-1慢病毒感染K562细胞72 h后,低氧下过表达组γ-globin表达量、联苯胺染色阳性率、CD235a表达量及体积增大、核偏移和核缩小的细胞数均显著高于阴性对照组(P<0.05);72 h干扰组γ-globin表达量、联苯胺染色阳性率、CD235a表达量及体积增大、核偏移和核缩小的细胞数均显著低于阴性对照组(P<0.05)。与阴性对照组相比,低氧下过表达GATA-1后,72 h时miR-451a的表达显著增高(P<0.05);干扰GATA-1后,72 h时miR-451a的表达显著降低(P<0.05)。结论:低氧通过诱导GATA-1表达增高而上调miR-451a,从而促进K562细胞向红系分化。

关键词：低氧 GATA结合蛋白1 微小RNA-451a 红系分化 K562细胞

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阿苯达唑葡聚糖纳米颗粒大鼠体内药动学和小鼠肝脏靶向性研究

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中国医院药学杂志 2022年第4期42卷 408-415页

作者：杨海山朱吉海赵玲莉张翔郑鹏善张志平周勇君李永臻刘燕青海大学医学院基础医学研究中心青海西宁810016 青海大学附属医院检验科青海西宁810001 青海大学医学院免疫教研室青海西宁810016

目的:以葡聚糖纳米颗粒(glucan particles,GPs)负载阿苯达唑(albendazole,ABZ)得到的阿苯达唑葡聚糖纳米颗粒(ABZ-GPs)为研究对象,探索其在大鼠体内药动学特征及对小鼠肝脏的靶向性。方法:大鼠和小鼠分别灌胃给予ABZ和ABZ-GPs,并于给药... 详细信息

目的:以葡聚糖纳米颗粒(glucan particles,GPs)负载阿苯达唑(albendazole,ABZ)得到的阿苯达唑葡聚糖纳米颗粒(ABZ-GPs)为研究对象,探索其在大鼠体内药动学特征及对小鼠肝脏的靶向性。方法:大鼠和小鼠分别灌胃给予ABZ和ABZ-GPs,并于给药后不同时间点从大鼠眼脉络丛取血、小鼠解剖取肝组织,样品按相应方法处理后,利用液相色谱-高分辨质谱联用(LC-MS/MS)法建立的回归方程测定样品中的药物浓度,并分析2种ABZ剂型的药动学参数及肝靶向性差异。结果:建立的LC-MS/MS方法在血浆和肝脏组织的药物含量测定中具有良好的线性关系,日内、日间精密度及稳定性RSD均小于11%,提取回收率均大于(83.85±0.91)%,符合药典检测要求。利用该法测得48 h内ABZ-GPs组的阿苯达唑亚砜(ABZSO)的C_(max)=(0.86±0.07)μg·h·mL^(-1),t_(max)=(8.00±0.35)h,AUC_(0-t)=(8.60±1.72)μg·h·mL^(-1),MRT_(0-t)=(7.00±0.87)h。ABZSO在小鼠肝组织的最大峰浓度比(Ce)(ABZ-GPs/ABZ)为1.32,靶向指数(TI)(ABZ-GPs/ABZ)为3.27。结论:与ABZ原药相比,ABZ-GPs口服给药吸收快,肝靶向性显著,并具有明显的缓释作用。

关键词：葡聚糖纳米颗粒阿苯达唑药动学肝靶向性

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低氧暴露时间的选择与海拔落差对高原肺动脉高压大鼠模型复制的影响

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中国现代医学杂志 2022年第5期32卷 45-51页

作者：李生花杨全余嘎琴马兰靳国恩青海大学医学院基础医学部生理教研室青海西宁810001 青海大学医学院高原医学研究中心青海西宁810001

目的探讨来源于不同海拔大鼠在4300~5000 m高原现场或低压氧舱复制高原肺动脉高压大鼠模型时,低氧暴露时间与海拔落差对两种模型复制的影响。方法采用低压氧舱和高原现场两种模型复制方式。选取西安、成都、兰州、北京不同海拔来源SD大... 详细信息

目的探讨来源于不同海拔大鼠在4300~5000 m高原现场或低压氧舱复制高原肺动脉高压大鼠模型时,低氧暴露时间与海拔落差对两种模型复制的影响。方法采用低压氧舱和高原现场两种模型复制方式。选取西安、成都、兰州、北京不同海拔来源SD大鼠,根据低氧暴露时间不同分别分为第1天组、第3天组、第7天组、第15天组、第21天组和第30天组。模型复制时采用常温和低温,比较低氧暴露时间不同组不同温度下大鼠的肺动脉压;模型复制时海拔不同,比较低氧暴露时间不同组不同海拔大鼠的肺动脉压;采用Peason法分析大鼠来源地海拔和模型复制时海拔的高度落差与肺动脉增幅的相关性。结果同一海拔低氧暴露不同时间组西安SD大鼠高原现场模型的肺动脉压比较,差异有统计学意义(P<0.05),随着低氧暴露时间的延长,大鼠肺动脉压逐渐升高。低氧暴露不同时间组西安SD大鼠低压氧舱模型同一温度下的肺动脉压比较,差异有统计学意义(P<0.05)。同样6~12℃低温下和常温下,低氧暴露同一时间组西安SD大鼠高原现场和低压氧舱模型的肺动脉压比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。低氧暴露第1天组、第7天组、第15天组、第30天组不同海拔来源大鼠4500 m高原现场模型的肺动脉压比较,差异有统计学意义(P<0.05),来源地海拔较低大鼠的肺动脉压高于来源地海拔较高的大鼠;低氧暴露30 d后,15只西安SD大鼠肺动脉压≥30 mmHg,模型复制成功率为100%;17只成都SD大鼠肺动脉压≥30 mmHg,模型复制成功率为100%;10只兰州SD大鼠中只有8只达到要求,模型复制成功率为80%。低氧暴露不同时间组不同海拔来源大鼠5000 m低压氧舱模型的肺动脉压比较,差异有统计学意义(P<0.05);低氧暴露21 d后,10只北京SD大鼠肺动脉压≥30 mmHg,模型复制成功率为100%;低氧暴露30 d后,10只西安SD大鼠肺动脉压≥30 mmHg,模型复制成功率为100%;低氧暴露30 d后,10只兰州SD大鼠中只有8只达到要求,模型复制成功率为80%。大鼠来源地海拔和模型复制时低氧暴露地海拔之间的海拔落差与肺动脉压升高幅度(增幅)呈正相关(r=0.875,P=0.000)。结论高原现场模型或低压氧舱模型复制的成功率与大鼠的来源地海拔和暴露低氧时间密切相关,在同一海拔进行模型复制时,大鼠来源地海拔越低,其暴露低氧所需时间就越短,反之就越长。而温度并不影响高原肺动脉高压模型的复制。

关键词：高原肺动脉高压低氧海拔落差暴露低氧时间动物模型大鼠

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4.1蛋白家族成员merlin与ezrin在青海藏族胃癌中表达及对胃癌细胞功能的影响

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基础医学与临床 2013年第1期33卷 70-76页

作者：苏占海杨生玺王荣华顾烨马红英孔繁花青海大学医学院生物教研室基础医学研究中心青海西宁810001 青海大学附属医院肿瘤放疗科青海西宁810001 青海大学医学院临床医学系青海西宁810001

目的研究4.1蛋白家族成员merlin和ezrin在青海藏族胃癌组织中突变与表达特点,同时研究二者对胃癌细胞增殖、黏附侵移能力的影响。方法用PCR及DNA测序检测merlin突变,免疫组化检测ezrin蛋白表达,用MTT方法检测胃癌细胞增殖与黏附侵移。... 详细信息

目的研究4.1蛋白家族成员merlin和ezrin在青海藏族胃癌组织中突变与表达特点,同时研究二者对胃癌细胞增殖、黏附侵移能力的影响。方法用PCR及DNA测序检测merlin突变,免疫组化检测ezrin蛋白表达,用MTT方法检测胃癌细胞增殖与黏附侵移。结果青海藏族胃癌组织中检测到merlin蛋白基因NF2外显子17两个位点突变率较高,超过50%。而ezrin蛋白表达在青海藏族胃癌组织中比正常胃黏膜组织中为高(P<0.05),其表达水平与胃癌分化程度、淋巴结转移及组织学分型有关(P<0.05)。此外,MTT检测结果显示,FERM蛋白结构域、merlin-2对胃癌细胞增殖与细胞黏附侵染无明显影响,并且ezrin对胃癌细胞黏附侵移能力亦无明显影响,但对细胞增殖具有一定抑制能力。抑癌基因蛋白merlin-1不但抑制细胞增殖,而且也对细胞黏附侵移具有抑制作用,其中抑癌基因蛋白merlin-1对细胞增殖抑制能力比ezrin蛋白更加明显。结论 Merlin和ezrin蛋白表达与青海藏族胃癌易感性具有一定关系,且两种因子参与调节胃癌细胞增殖和细胞黏附能力。

关键词： merlin ezrin 青海藏族胃癌易感性

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Ezrin蛋白表达与青海汉族和回族胃癌易感性关系研究

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中国现代医学杂志 2013年第27期23卷 47-53页

作者：苏占海王荣华杨生玺侯成荣陈娟孟楠青海大学医学院生物教研室基础医学研究中心青海西宁810001 青海大学附属医院肿瘤放疗科青海西宁810001 青海大学医学院生物教研室青海西宁810001 青海大学医学院临床医学系青海西宁810001

目的研究ezrin蛋白表达与青海汉族、回族胃癌易感性关系;同时研究ezrin对胃癌细胞形态、骨架和增殖的影响。方法利用免疫组化对正常胃黏膜组织和胃癌组织进行ezrin蛋白表达检测,用Western blot蛋白印迹法检测两者ezrin蛋白表达水平,同... 详细信息

目的研究ezrin蛋白表达与青海汉族、回族胃癌易感性关系;同时研究ezrin对胃癌细胞形态、骨架和增殖的影响。方法利用免疫组化对正常胃黏膜组织和胃癌组织进行ezrin蛋白表达检测,用Western blot蛋白印迹法检测两者ezrin蛋白表达水平,同时利用细胞转染及免疫荧光标记方法检测ezrin对胃癌细胞骨架调节的作用,而细胞增殖则用MTT方法进行检测分析。结果 ezrin蛋白在青海汉族、回族胃癌组织中表达比正常胃黏膜组织中高,具有显著性差异;同时ezrin蛋白表达水平与青海汉族、回族胃癌分化程度、淋巴结转移以及组织学分型有关,而和年龄、性别无关。此外,ezrin蛋白表达水平与青海汉族、回族民族无关,即无民族特异性。蛋白印迹法检测结果显示,肿瘤组织中ezrin蛋白表达水平比正常组织中较高。而细胞免疫荧光检测中,发现ezrin对细胞骨架、细胞形态及细微结构的调节起重要作用,同时MTT检测发现,ezrin转染的胃癌细胞增殖受到一定抑制。结论 ezrin蛋白在青海汉族和回族胃癌组织中表达水平比正常胃癌组织高,同时与胃癌分化程度、组织学分型和淋巴结转移有关;ezrin蛋白表达水平与汉族、回族不同民族无关。由于ezrin转染细胞在细胞形态、骨架和微绒毛等结构方面比对照组变化大,提示Ezrin蛋白与胃癌转染及侵移有关。

关键词： ezrin 胃癌易感性汉族和回族细胞骨架

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Bcl-2和NOD1基因多态性与青海回族胃癌易感相关性

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青海医学院学报 2013年第4期34卷 243-248页

作者：李建华李长兴苏占海青海大学医学院解剖教研室青海大学医学院生物教研室基础医学研究中心

目的探讨Bcl-2(-938C>A)和NOD1(796G>A)的基因多态性与青海回族胃癌易感性关系。方法采集62例青海回族患者胃癌组织和51例正常胃粘膜组织DNA,应用PCR-RFLP技术方法,分析青海回族胃癌患者Bcl-2(-938C>A)三种基因型CC、AC、AA和N... 详细信息

目的探讨Bcl-2(-938C>A)和NOD1(796G>A)的基因多态性与青海回族胃癌易感性关系。方法采集62例青海回族患者胃癌组织和51例正常胃粘膜组织DNA,应用PCR-RFLP技术方法,分析青海回族胃癌患者Bcl-2(-938C>A)三种基因型CC、AC、AA和NOD1(796G>A)三种基因型GG、GA、AA多态性特点。结果 Bcl-2(-938C>A)CC、CA、AA基因型在对照组中分别是29.4%、25.0%和11.0%,而在胃癌组中分别是48.4%、41.9%和9.7%。CC基因型和CA+AA基因型在对照组和胃癌组中相比具有差异(P=0.04)。NOD1(796G>A)基因型GG、GA、AA在对照组中分别是37.3%、45.1%和17.6%,而在胃癌组中分别是32.3%、45.2%和22.3%,各基因型在对照组及胃癌组中相比没有明显差异(P>0.05)。结论 Bcl-2(-938C>A)基因型CC与青海回族胃癌易感性相关,而NOD1(796G>A)基因多态性与青海回族胃癌易感性无关。

关键词： Bcl-2 NOD1 多态性胃癌回族

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低氧条件下Ezrin蛋白对乳腺癌细胞增殖和黏附能力影响的研究

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中国妇幼保健 2014年第16期29卷 2602-2605页

作者：苏占海刘永年李斌王荣华乔金婉解亚丽青海大学医学院基础医学部青海西宁810001 青海大学病理生理学教研室青海大学流行病学教研室青海大学附属医院肿瘤放疗科青海大学生物教研室青海大学基础医学研究中心

目的:研究低氧条件下,Ezrin蛋白对乳腺癌细胞增殖、黏附能力及细胞骨架表达的调节作用。方法:用MTT方法检测常氧或低氧条件下,Ezrin对乳腺癌原代细胞增殖、黏附、侵袭的影响;免疫荧光染色法检测常氧或低氧条件下Ezrin对乳腺癌细胞骨架... 详细信息

目的:研究低氧条件下,Ezrin蛋白对乳腺癌细胞增殖、黏附能力及细胞骨架表达的调节作用。方法:用MTT方法检测常氧或低氧条件下,Ezrin对乳腺癌原代细胞增殖、黏附、侵袭的影响;免疫荧光染色法检测常氧或低氧条件下Ezrin对乳腺癌细胞骨架、细胞形态及细胞表面微绒毛表达的影响。结果:常氧或低氧条件下,Ezrin蛋白对乳腺癌细胞增殖均有抑制能力(P常氧<0.05,P低氧<0.05)。黏附能力检测结果显示,在常氧条件下Ezrin蛋白对乳腺癌细胞黏附能力没有明显影响(P常氧>0.05),但是低氧条件下对乳腺癌细胞黏附能力有增强作用(P低氧<0.05)。在对细胞骨架、细胞形态变化及细胞微绒毛表达实验中,观察到Ezrin在低氧条件下可加强细胞表面微绒毛表达及细胞形态变化。结论:低氧条件下,Ezrin蛋白对乳腺癌细胞的黏附能力有影响,对细胞骨架表达、细胞形态改变和细胞表面微绒毛表达的调节作用较为显著。

关键词： Ezrin蛋白低氧乳腺癌细胞增殖细胞黏附侵袭

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藏药四味黄芪散对慢性低氧损伤大鼠的影响

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中国中西医结合杂志 2017年第10期37卷 1233-1236页

作者：李胜孙莉靳国恩李生花青海省地方病预防控制所鼠疫防治科西宁811602 青海大学医学院基础医学部生理教研室西宁810001 青海大学医学院高原医学研究中心西宁810001

目的观察藏药四味黄芪散对慢性低氧损伤大鼠的影响。方法将100只大鼠随机分为两组:低氧对照组和低氧药物组(海拔5 000 m),每组再根据暴露低氧时间分为1、3、7、15、30天等5个亚组,每组10只。另设10只为常氧对照组,暴露于西宁大气环境(海... 详细信息

目的观察藏药四味黄芪散对慢性低氧损伤大鼠的影响。方法将100只大鼠随机分为两组:低氧对照组和低氧药物组(海拔5 000 m),每组再根据暴露低氧时间分为1、3、7、15、30天等5个亚组,每组10只。另设10只为常氧对照组,暴露于西宁大气环境(海拔2 260 m)不干预。低氧药物组予藏药四味黄芪散混悬液(0.1 g/100 g)灌胃,低氧对照组予生理盐水灌胃,每天1次,持续30天。分别于暴露低氧时间结束后检测肺动脉压(Ppa)、左右心室比值[RV/(LV+S)]、血红蛋白(Hb)和红细胞压积(Hct)值。结果与常氧对照组比较,低氧对照组大鼠Hb、Hct、Ppa和RV/(LV+S)均升高(P<0.01),并随着暴露低氧时间的延长而逐渐升高;与低氧对照组比较,低氧药物组大鼠Hb、Hct、Ppa和RV/(LV+S)水平降低(P<0.01),且低氧环境中,低氧药物组大鼠Hb、Hct、Ppa和RV/(LV+S)平均增幅值亦较低。结论藏药四味黄芪散能够预防慢性低氧对机体的损伤。

关键词：藏药四味黄芪散预防慢性低氧

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高强度聚焦超声诱导阿苯达唑热敏脂质体杀伤原头蚴的实验研究

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第三军医大学学报 2014年第23期36卷 2358-2362页

作者：王梦莹张静叶彬张潞渝赵毅峰赵海龙重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 青海大学附属医院介入科西宁810001 青海大学医学院病原生物学教研室西宁810001

目的探索高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound,HIFU)诱导阿苯达唑热敏脂质体(Albendazolethermosensitive liposomes,TSL-ABZ)杀伤原头蚴的效果。方法采用薄膜分散法制备阿苯达唑热敏脂质体。设立假照超声组,单纯HIFU组,HIFU+ABZ水剂100μL组,HIFU+TSL-ABZ 100μL组,HIFU+TSL-ABZ 200μL组,HIFU+TSL-ABZ 300μL组,HIFU+TSL-ABZ 600μL组,HIFU+TSL-ABZ 1 000μL组,实验组为原头蚴悬液1 m L加入含不同浓度的脂质体PBS缓冲液1 m L,每组均予以HIFU 75W×12 s进行照射,处理后悬液行伊红染色,光镜下观察原头蚴形态改变并计数死亡率;琼脂糖固定原头蚴切片,HE染色观察。结果制备的阿苯达唑热敏脂质体形态规则且分散性良好,与高强度聚焦超声联合使用后,对原头蚴的杀伤有很好的效果。其中HIFU+TSL-ABZ 1 000μL组杀伤效果最为显著,形态观察可见皮层破坏严重,钙颗粒消失,空泡化明显,头钩脱落,部分结构甚至消失,死亡率较其他各组更高[(88.25±0.01),(P<0.01)]。结论 HIFU联合TSL-ABZ对原头蚴的杀伤效果均优于单纯使用HIFU照射。HIFU功率一定时,在一定TSL-ABZ浓度范围内,原头蚴的死亡率随药物浓度的增加而升高。

关键词：原头蚴高强度聚焦超声阿苯达唑热敏脂质体

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钒化钠对人食管癌细胞系EC109 p-ERK1/2蛋白表达的影响

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中国药理学通报 2009年第10期25卷 1398-1399页

作者：吕军周立社邵国闫少春付玉华黄丽华龚向峰包头医学院基础医学部生理学教研室包头医学院生物医学研究中心内蒙古包头014060 汕头大学医学院中心实验室广东汕头515041

钒的药理作用报道最多的是它的降血糖作用。Ray等研究显示,钒化钠可以通过促进乳腺癌MCF7细胞凋亡而抑制其增殖,显示了钒化钠作为有效的化疗制剂的潜能。我们前期研究显示,一定浓度的钒化钠能明显抑制食管癌细胞系EC109细胞株的生长,钒... 详细信息

钒的药理作用报道最多的是它的降血糖作用。Ray等研究显示,钒化钠可以通过促进乳腺癌MCF7细胞凋亡而抑制其增殖,显示了钒化钠作为有效的化疗制剂的潜能。我们前期研究显示,一定浓度的钒化钠能明显抑制食管癌细胞系EC109细胞株的生长,钒化钠的抗肿瘤机制可能与cyclinD1蛋白表达降低有关。本研究进一步揭示钒化钠抗肿瘤作用的分子机制,为钒化钠进一步发展成一种新型的抗肿瘤药物提供理论依据。

关键词：钒化钠食管癌信号转导 p-ERK1/2

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