检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业大学学报 2015年第6期20卷 68-75页

作者：石建斌杨永智王舰青海大学农林科学院西宁810016 青海省农林科学院/教育部青藏高原生物技术重点实验室/青海省高原作物种质资源与利用重点实验室西宁810016

以转基因马铃薯株系为材料,采用Real-time PCR方法,以SYBR Green I为荧光染料,以马铃薯块茎贮藏蛋白基因(Patatin)作为内参基因,以植物表达载体上的潮霉素抗性基因(HPT)为筛选标记基因,建立目的基因CT值与起始模版的相关性标准曲线,通... 详细信息

以转基因马铃薯株系为材料,采用Real-time PCR方法,以SYBR Green I为荧光染料,以马铃薯块茎贮藏蛋白基因(Patatin)作为内参基因,以植物表达载体上的潮霉素抗性基因(HPT)为筛选标记基因,建立目的基因CT值与起始模版的相关性标准曲线,通过实时荧光定量PCR分别获得每个样品中内参基因和外源基因的CT值,根据Pfaffl法计算获得了T-DNA在转基因马铃薯中的拷贝数,且与Southern blot方法进行了比较,并结合田间农艺性状,分析了外源基因拷贝数马铃薯株高及薯块产量的影响。结果表明,内参基因和外源基因标准曲线的相关系数分别为R2=0.996、R2=0.995和R2=0.990。在所测的23株转基因株系中,12株为单拷贝插入,6株为双拷贝,5株为多拷贝。Real-time PCR比Southern blot方法结果更准确、操作更简便快捷、成本更低。且插入拷贝数的多少与马铃薯田间农艺性状变化有一定的关系,发现2拷贝以上的T-DNA插入较容易引起部分性状的改变。

关键词：马铃薯实时荧光定量PCR 拷贝数农艺性状

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根癌农杆菌介导的马铃薯DM茎段遗传转化条件的优化

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分子植物育种 2016年第6期14卷 1491-1499页

作者：连欢欢杨永智王舰青海大学农牧学院西宁810016 青海省农林科学院教育部青藏高原生物技术重点实验室西宁810016 青海省农林科学院青海省高原作物种质资源创新与利用重点实验室西宁810016

本研究利用以双单倍体马铃薯DM的茎段为试验材料,对影响马铃薯遗传转化的条件进行了优化,主要从对通过抗生素浓度、预培养时间、侵染时间、农杆菌浓度和共培养时间等几个因素进行了的分析,对影响马铃薯遗传转化的条件进行了优化。研究表... 详细信息

本研究利用以双单倍体马铃薯DM的茎段为试验材料,对影响马铃薯遗传转化的条件进行了优化,主要从对通过抗生素浓度、预培养时间、侵染时间、农杆菌浓度和共培养时间等几个因素进行了的分析,对影响马铃薯遗传转化的条件进行了优化。研究表明:头孢霉素(cef)的浓度在600 mg/L时既不影响愈伤的正常生长还能有效的抑制农杆菌的生长。潮霉素(hyg)浓度在8 mg/L时对愈伤达到半致死状态,是因为较低的潮霉素浓度无法起到对抗性愈伤的筛选作用,所以合适的浓度应为愈伤达半致死状态浓度。得到更多抗性愈伤的最佳条件为:外植体预培养时间13天,侵染时间为8 min,农杆菌浓度以OD600=0.4左右,且共培养时间3天。上述的条件的优化大大的提高了马铃薯DM的遗传转化效率。

关键词：马铃薯根癌农杆菌遗传转化抗生素抗性愈伤

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马铃薯突变体赤霉素代谢关键酶基因差异表达分析

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生物技术通报 2016年第1期32卷 124-130页

作者：石建斌杨永智王舰青海大学西宁810016 青海省农林科学院教育部青藏高原生物技术重点实验室青海省高原作物种质资源与利用重点实验室西宁810016

为揭示马铃薯株高突变与赤霉素代谢途径关键酶基因的关系,以马铃薯株高突变株系4P2-9为材料,利用实时荧光定量PCR方法中的相对定量RT-PCR建立双标准曲线,以Actin基因为内参基因,对高原4号及其株高突变材料4P2-9中的赤霉素代谢相关基因... 详细信息

为揭示马铃薯株高突变与赤霉素代谢途径关键酶基因的关系,以马铃薯株高突变株系4P2-9为材料,利用实时荧光定量PCR方法中的相对定量RT-PCR建立双标准曲线,以Actin基因为内参基因,对高原4号及其株高突变材料4P2-9中的赤霉素代谢相关基因的表达情况进行了检测。结果显示,4P2-9的株高及节间数显著低于对照材料(P<0.05),节间长度显著高于对照(P<0.05),赤霉素代谢的关键酶基因KS、KO和GID1表达量显著下调,分别为对照材料的0.725倍、0.657倍和0.890倍;GA20ox1和GA2ox1基因的表达量表现为上调,分别为对照材料的1.557倍和1.425倍。结果表明,赤霉素代谢过程中关键酶基因表达量的改变是造成4P2-9材料株高变化的原因之一,而GA20ox1和GA2ox1基因的表达量的上调是促使株高降低的主要因素。

关键词：马铃薯株高突变赤霉素基因表达量

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密度和基质对马铃薯青薯9号脱毒微型薯产量的影响

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江苏农业科学 2013年第9期41卷 84-85页

作者：王芳青海省农林科学院/青藏高原生物技术教育部重点实验室/青海省高原作物种质资源创新与利用重点实验室青海西宁810016

马铃薯微型薯工厂化具有周期短、集约性强等特点,为达到"高效率、低成本"的规模化生产,笔者在生产实践中探讨了密度和基质对马铃薯品种青薯9号脱毒微型薯产量的影响。结果表明,在不同基质和密度下,青薯9号脱毒微型薯产量差异... 详细信息

马铃薯微型薯工厂化具有周期短、集约性强等特点,为达到"高效率、低成本"的规模化生产,笔者在生产实践中探讨了密度和基质对马铃薯品种青薯9号脱毒微型薯产量的影响。结果表明,在不同基质和密度下,青薯9号脱毒微型薯产量差异显著;通过互作分析选择最佳因子组合,建立了青薯9号快速、低成本脱毒原原种薯生产的可行性栽培模式。

关键词：马铃薯密度基质脱毒微型薯产量

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马铃薯花粉生活力测定及低温贮藏研究

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江苏农业科学 2013年第3期41卷 69-71页

作者：杨永智青海省高原作物种质资源创新与利用重点实验室培育基地/青海省农林科学院/教育部青藏高原生物技术重点实验室青海西宁810016

快速测定马铃薯花粉活力可以使马铃薯人工杂交育种有效开展。以新采摘的马铃薯花粉为材料,采用醋酸洋红染色法、碘-碘化钾染色法和氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定马铃薯花粉活力,初步研究不同马铃薯花粉在-20℃黑暗避光条件下储藏时... 详细信息

快速测定马铃薯花粉活力可以使马铃薯人工杂交育种有效开展。以新采摘的马铃薯花粉为材料,采用醋酸洋红染色法、碘-碘化钾染色法和氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定马铃薯花粉活力,初步研究不同马铃薯花粉在-20℃黑暗避光条件下储藏时间与活力的变化。结果表明,醋酸洋红染色法和碘-碘化钾染色法不适合马铃薯花粉活力的快速测定,而氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法能够快速测定马铃薯花粉活力,该方法省时省力,基本上能够反映花粉的活力大小。低温储藏试验结果表明,花粉在-20℃黑暗干燥条件下储藏3个月仍保持较高的活力。

关键词：马铃薯花粉活力检测方法低温贮藏

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应用隶属函数法对马铃薯进行抗旱性综合评价

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云南农业大学学报（自然科学版） 2014年第4期29卷 476-481页

作者：王谧王芳王舰青海大学农牧学院青海西宁810016 青海省农林科学院、教育部青藏高原生物技术重点实验室青海西宁810016 青海省农林科学院、青海省高原作物种质资源创新与利用重点实验室青海西宁810016

为研究不同马铃薯品种的抗旱性,本文以抗旱性不同的马铃薯品种为材料,在水分胁迫条件下,通过测定马铃薯的丙二醛、游离脯氨酸、可溶性蛋白、可溶性糖和叶绿素等生理指标和马铃薯产量,研究了19份马铃薯材料的抗旱性,并采用主成分分析法... 详细信息

为研究不同马铃薯品种的抗旱性,本文以抗旱性不同的马铃薯品种为材料,在水分胁迫条件下,通过测定马铃薯的丙二醛、游离脯氨酸、可溶性蛋白、可溶性糖和叶绿素等生理指标和马铃薯产量,研究了19份马铃薯材料的抗旱性,并采用主成分分析法和隶属函数法对其抗旱性进行了综合评价。结果表明,模糊隶属函数法可以避免单一指标的片面性,能较全面地评价马铃薯的抗旱性,根据隶属函数平均值的大小对马铃薯抗旱性进行了排序,抗旱性由强到弱的顺序为:F12,青薯9号、克新6号、393371.58,FL1533,139,冀张薯8号、乐薯1号、Er-1,波S,R9,陇薯2号、下寨65,Pepo 418,552,石引08-1,国外品种2,俄引、Russia 2。

关键词：马铃薯水分胁迫抗旱性隶属函数法

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马铃薯茎尖玻璃化法超低温保存后DNA甲基化的遗传变异

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分子植物育种 2013年第3期11卷 351-357页

作者：王芳石茹王舰青海省农林科学院生物技术研究所西宁810016 青海大学西宁810016 教育部青藏高原生物技术重点实验室西宁810016 青海省高原作物种质资源创新与利用重点实验室西宁810016

对青薯9号、大西洋、小白花和E1074种基因型的马铃薯茎尖进行玻璃化法超低温保存，并运用甲基化敏感扩增多态性（MSAP）技术分析4种材料超低温保存前后DNA甲基化的的变异情况。结果表明：经玻璃化法超低温保存，四个品种的成活率分别为8... 详细信息

对青薯9号、大西洋、小白花和E1074种基因型的马铃薯茎尖进行玻璃化法超低温保存，并运用甲基化敏感扩增多态性（MSAP）技术分析4种材料超低温保存前后DNA甲基化的的变异情况。结果表明：经玻璃化法超低温保存，四个品种的成活率分别为86．93％,／o、78．03％、71．57％和65．82％。成活率和再生率因基因型而异，且不同基因型之间的差异显著。用MSAP技术分析超低温保存前后植株甲基化的结果显示：用16对引物组合对4个品种进行扩增，平均扩增出493条带；与对照相比，4个品种基因组的CCGG序列中有8．4％～14．3％DNA发生甲基化变化。经超低温保存后，去甲基化和甲基化都有发生，并以去甲基化变化为主要趋势。本文运用MSAP技术对马铃薯超低温保存前后植株进行胞嘧啶甲基化分析表明，使用MSAP检测超低温保存后再生植株DNA甲基化遗传变异非常有效。

关键词：马铃薯玻璃化法超低温保存 DNA甲基化甲基化敏感扩增多态性遗传变异

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农杆菌介导法马铃薯遗传转化体系的优化

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江苏农业学报 2013年第4期29卷 738-742页

作者：杨永智青海省高原作物种质资源创新与利用重点实验室培育基地青海西宁810016 青海省农林科学院青海西宁810016 教育部青藏高原生物技术重点实验室青海西宁810016

以马铃薯品种高原4号为材料,建立了一套稳定高效的农杆菌EHA105介导的马铃薯遗传转化体系,这个体系包括:IM(MS+20 g/L蔗糖)培养基为浸染培养基,以MGC(MS+16 g/L蔗糖+5.0 mg/L NAA+0.1 mg/L BA+400.0 mg/L头孢霉素+10.0 mg/L潮霉素+8 g/... 详细信息

以马铃薯品种高原4号为材料,建立了一套稳定高效的农杆菌EHA105介导的马铃薯遗传转化体系,这个体系包括:IM(MS+20 g/L蔗糖)培养基为浸染培养基,以MGC(MS+16 g/L蔗糖+5.0 mg/L NAA+0.1 mg/L BA+400.0 mg/L头孢霉素+10.0 mg/L潮霉素+8 g/L琼脂)培养基为诱导愈伤组织培养基,以MGS培养基(MS+16 g/L蔗糖+2.20 mg/L玉米素+0.02 mg/L NAA+0.15 mg/L GA3+400.00 mg/L头孢霉素+10.00 mg/L潮霉素+8 g/L琼脂)为芽分化诱导培养基,以RM培养基(MS+20 g/L蔗糖+400 mg/L头孢霉素+10 mg/L潮霉素+8g/L琼脂)为生根培养基。优化后的转化体系转化效率稳定,两个不同载体(PLRV-1和PLRV-2)抗性愈伤组织的诱导率分别达到59.3%和64.4%,抗性芽的分化率分别达到56.9%和62.5%。

关键词：马铃薯农杆菌介导法遗传转化

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马铃薯新品种青薯9号高效再生体系的建立

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江苏农业科学 2013年第5期41卷 14-19页

作者：石虎杨永智周云龚磊王舰青海大学青海西宁810016 青海省高原作物种质资源创新与利用重点实验室培育基地青海西宁810016 青海省农林科学院青海西宁810016 教育部青藏高原生物技术重点实验室青海西宁810016

为了建立马铃薯新品种青薯9号的遗传转化体系,以青薯9号无菌苗为材料,通过对其茎段和叶片再生体系的筛选,优化了培养基添加的最佳植物激素配比浓度。试验结果表明:无菌苗的茎段比较适合诱导愈伤组织并且愈伤组织的诱导需要光照。青薯9... 详细信息

为了建立马铃薯新品种青薯9号的遗传转化体系,以青薯9号无菌苗为材料,通过对其茎段和叶片再生体系的筛选,优化了培养基添加的最佳植物激素配比浓度。试验结果表明:无菌苗的茎段比较适合诱导愈伤组织并且愈伤组织的诱导需要光照。青薯9号马铃薯茎段外植体愈伤组织诱导的最佳基础培养基为:MS无机成分+蔗糖25 g/L+琼脂6 g/L+肌醇100 mg/L+烟酸2 mg/L+盐酸吡哆醇(维生素B6)0.5 mg/L+盐酸硫胺素(维生素B1)0.4 mg/L+叶酸0.25 mg/L+生物素0.05 mg/L。愈伤组织诱导丛生芽分化的最佳基础培养基是:MS培养基+蔗糖25 g/L+琼脂8 g/L+酪蛋白的酶水解物1 g/L。最佳愈伤组织诱导培养基激素配比为:2.0 mg/L NAA+6.0 mg/L 6-BA;最佳分化培养基激素配比为:0.1 mg/L NAA+3.0 mg/L 6-BA+GA33.0 mg/L+ZTR 1.0 mg/L。

关键词：马铃薯青薯9号愈伤组织诱导植株再生

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RNA干涉转基因马铃薯对卷叶病毒抗性的研究

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湖北农业科学 2016年第8期55卷 1994-1997页

作者：龚磊王舰杨永智青海大学农牧学院/青海省农林科学院/教育部青藏高原生物技术重点实验室/青海省高原作物种质资源创新与利用重点实验室西宁810016

利用大田统计方法,结合分子生物学手段和生物信息学手段对转化的23个转基因马铃薯突变株进行抗病性鉴定,分析转化群体中外源基因的插入信息,并利用双夹心抗体酶联免疫法技术研究受侵染后马铃薯卷叶病毒基因在这些转化体中的表达情况。... 详细信息

利用大田统计方法,结合分子生物学手段和生物信息学手段对转化的23个转基因马铃薯突变株进行抗病性鉴定,分析转化群体中外源基因的插入信息,并利用双夹心抗体酶联免疫法技术研究受侵染后马铃薯卷叶病毒基因在这些转化体中的表达情况。结果表明,一些株系出现了性状突变,通过分子生物手段检测发现大部分株系都有一定的马铃薯卷叶病毒抗性,但是抗性水平差异很大。试验验证了RNA干涉技术策略的可行性。

关键词：马铃薯卷叶病毒 RNA干涉(RNAi) 酶联免疫检测

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