检索结果-内蒙古大学图书馆

人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子在重组痘苗病毒中的表达及对重组病毒免疫效果的影响

中华实验和临床病毒学杂志 1998年第1期12卷 47-50页

作者：刘红兵张智清姚立红侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室

目的观察人ＧＭ－ＣＳＦ（粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子）对重组痘苗病毒免疫效果的影响。方法大鼠体内观察。结果从核酸和蛋白水平均证实重组痘苗病毒ＲＶＪＳＢ１１７５Ｄ／ＧＭ－ＣＳＦ可同时表达ＧＭ－ＣＳＦ及ＨＳＶ－１ｇＤ（单... 详细信息

目的观察人ＧＭ－ＣＳＦ（粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子）对重组痘苗病毒免疫效果的影响。方法大鼠体内观察。结果从核酸和蛋白水平均证实重组痘苗病毒ＲＶＪＳＢ１１７５Ｄ／ＧＭ－ＣＳＦ可同时表达ＧＭ－ＣＳＦ及ＨＳＶ－１ｇＤ（单纯疱疹病毒ｇＤ糖蛋白），但ＲＶＪＳＢ１１７５Ｄ／ＧＭ－ＣＳＦ免疫大鼠产生的抗－ＨＳＶ１ｇＤ特异性抗体水平与ＲＶＪＳＢ１１７５Ｄ组相比无显著性差异。结论人ＧＭ－ＣＳＦ在大鼠体内对特异免疫调节作用不明显，可能与ＧＭ－ＣＳＦ主要促使非特异性细胞免疫增强所致有关。

关键词：痘苗病毒单纯疱疹病毒 GM-CSF ELISA

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一种通过表皮生长因子受体介导的基因转移系统

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中华实验和临床病毒学杂志 1998年第1期12卷 43-46页

作者：贡惠宇吴小兵舒跃龙王海林侯云德颜子颖中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室

目的发展一种针对表皮生长因子过量表达的肿瘤细胞的基因转移系统。方法人工合成了一种Ｎ端含多个赖氨酸残基，Ｃ端为人表皮生长因子（ＥＧＦ）的受体结合域的３３肽，此合成肽（Ｋ９Ｅ肽）既具有ＤＮＡ结合活性，又能为细胞表面ＥＧＦ... 详细信息

目的发展一种针对表皮生长因子过量表达的肿瘤细胞的基因转移系统。方法人工合成了一种Ｎ端含多个赖氨酸残基，Ｃ端为人表皮生长因子（ＥＧＦ）的受体结合域的３３肽，此合成肽（Ｋ９Ｅ肽）既具有ＤＮＡ结合活性，又能为细胞表面ＥＧＦ受体所识别并内在化。Ｋ９Ｅ肽与萤火虫荧光素酶表达质粒ｐＥＢｌｕｃ按一定比例结合形成核酸复合物，以此为基础，利用受体介导的基因转移技术，组建了外源基因转移系统。结果核酸复合物直接加入于类上皮癌细胞Ａ４３１的培养液中，４８小时后可从细胞裂解液中测出荧光素酶的显著表达。结论该系统可特异性地将外源基因导入ＥＧＦ受体过量表达的肿瘤细胞。

关键词：合成肽表皮生长因子受体介导基因转移

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减蛋综合征病毒pVⅢ基因和E3区序列测定及结构分析

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中国兽医学报 1998年第1期18卷 27-31页

作者：李茂祥金奇章金钢曾力宇殷震侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室

克隆了减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）中国分离株基因组ＨｉｎｄⅢ－Ｅ片段，并分析了其核苷酸序列。该片段位于基因组中央５８．７～６８．９物理图谱单位（ｍｕ），片段全长共３１９４ｂｐ。其中含有１个完整的和２个不完整的开放性读码... 详细信息

克隆了减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）中国分离株基因组ＨｉｎｄⅢ－Ｅ片段，并分析了其核苷酸序列。该片段位于基因组中央５８．７～６８．９物理图谱单位（ｍｕ），片段全长共３１９４ｂｐ。其中含有１个完整的和２个不完整的开放性读码框架（ＯＲＦ），分别编码ｐＶⅢ蛋白、１００Ｋ蛋白基因Ｃ端和纤维蛋白Ｎ末端部分。ｐＶⅢ蛋白基因由７５３个碱基（ｎｔ）组成，编码２５０个氨基酸（ａａ），编码产物的分子量为２８５００。氨基酸水平的同源性比较表明，ＥＤＳＶ的ｐＶⅢ蛋白与禽腺病毒１型（ＦＡＶ１）及人和其他动物腺病毒ｐＶⅢ蛋白的同源性为２８％～３６％，而与羊腺病毒（ＯＡＶ）的同源性高达５２％，提示ＥＤＳＶ与ＯＡＶ间的亲缘关系更近。按照人腺病毒基因组结构的特征，在ｐＶⅢ和纤维蛋白基因之间，应为Ｅ３区，但该序列只有２４５个ｎｔ组成，序列中保留了ＴＡＴＡＢｏｘ和ｐｏｌｙＡ信号。但除了２个仅编码４９ａａ和３２ａａ多肽的ＯＲＦｓ外，不编码任何产物，且核苷酸序列与其他腺病毒的Ｅ３区无同源性，证实此区无明显Ｅ３区样结构。

关键词：减蛋综合征病毒 PVⅢ 蛋白基因序列分析

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粒细胞集落刺激因子(G-CSF)在大肠杆菌中的高效表达及快速纯化工艺的建立

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中国生物化学与分子生物学报 1998年第5期14卷 479-484页

作者：李福胜贡惠宇赵炳文余彩玲侯斌陈爱君张智清侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室

基因工程重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）主要用于癌症患者化疗后的粒细胞减少症．在正确克隆人Ｇ－ＣＳＦｃＤＮＡ的基础上，重点对Ｇ－ＣＳＦｃＤＮＡ的５′端进行了较为彻底的修饰，修饰后的基因插入ｐＢＶ２２０载体组... 详细信息

基因工程重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）主要用于癌症患者化疗后的粒细胞减少症．在正确克隆人Ｇ－ＣＳＦｃＤＮＡ的基础上，重点对Ｇ－ＣＳＦｃＤＮＡ的５′端进行了较为彻底的修饰，修饰后的基因插入ｐＢＶ２２０载体组建成功ｐＢＶ２２０／Ｇ－ＣＳＦ／２－１７４高效表达载体．表达后ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析其表达最高达５０％以上．根据Ｇ－ＣＳＦ表达形成包涵体这一特性，建立了一条简便、稳定，适用于大规模生产的分离纯化工艺流程．首先分离纯化包涵体，８ｍｏｌ／Ｌ尿素裂解包涵体，稀释复性蛋白，之后一步ＳＰ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ柱层析至均质．纯化的Ｇ－ＣＳＦ比活性达３．４×１０８Ｕ／ｍｇ蛋白，每升表达菌液回收的Ｇ－ＣＳＦ总活性达１．０６×１０１１Ｕ．纯化产物的Ｎ－端氨基酸序列分析表明，对甲硫氨酸的去除彻底。

关键词： G-CSF 原核表达纯化 pBV220 基因修饰

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Epstein-Barr病毒载体介导的白细胞介素12在肝癌细胞中的靶向表达

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中华实验和临床病毒学杂志 1998年第4期12卷 306-309页

作者：王自力梁国栋付士红施侣元王芝山侯云德武汉同济医科大学中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室

目的研究白细胞介素－１２（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１２，ＩＬ－１２）在肝癌细胞靶向性表达，探索肝癌基因治疗新方法。方法将白介素－１２分别克隆到带有人甲胎蛋白启动子和增强子的Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ（ＥＢ）病毒载体中，... 详细信息

目的研究白细胞介素－１２（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１２，ＩＬ－１２）在肝癌细胞靶向性表达，探索肝癌基因治疗新方法。方法将白介素－１２分别克隆到带有人甲胎蛋白启动子和增强子的Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ（ＥＢ）病毒载体中，得到重组表达载体ｐＥＢＡＦ／Ｐ３５和ｐＥＢＡＦ／Ｐ４０，分别在４种细胞系中作共转染，用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测各细胞系中ＩＬ－１２的表达情况。结果用ｐＥＢＡＦ／Ｐ３５和ｐＥＢＡＦ／Ｐ４０共转染４种细胞后ＩＬ－１２基因只在产生甲胎蛋白的肝癌细胞（ＨｅｐＧ２）中表达，活性检测证明，表达的ＩＬ－１２有诱使ＩＦＮ－γ产生的生物学活性。结论本研究在肝癌细胞中靶向性和组织特异性的表达了有活性的ＩＬ－１２，为既能杀死肝癌细胞，又不影响正常肝细胞功能的新型基因治疗方案做了有益的探索。

关键词： IL-12 基因治疗基因表达肝癌

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痘苗病毒VGF细胞膜外结构域在真核及原核细胞中的表达

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中华实验和临床病毒学杂志 1998年第1期12卷 26-28页

作者：金奇杨天兵侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室

目的为了进一步探索ＶＧＦ的生物学功能方法分别构建了痘苗病毒天坛株生长因子（Ｖａｃｃｉｎｉａｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＶＧＦ）基因细胞膜外结构域（ＶＧＦｓｌ）的真核及原核表达系统，在相应的细胞中获得了单独表达（真核）和... 详细信息

目的为了进一步探索ＶＧＦ的生物学功能方法分别构建了痘苗病毒天坛株生长因子（Ｖａｃｃｉｎｉａｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＶＧＦ）基因细胞膜外结构域（ＶＧＦｓｌ）的真核及原核表达系统，在相应的细胞中获得了单独表达（真核）和融合表达（原核）。结果初步纯化的ＶＧＦｓｌ表达产物能够与上皮生长因子（ＥＧＦ）的受体结合，并刺激受体中酪氨酸残基发生磷酸化反应。与ＥＧＦ相比，ＶＧＦｓｌ表达产物刺激ＥＧＦ受体自身磷酸化的能力更强。结论上述结果为ＶＧＦ在病毒感染过程中的作用以及ＶＧＦ作为新型多肽类药物的研究提供了有价值的线索。

关键词：痘苗病毒痘病毒生长因子真核表达原核表达

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肝细胞导向的促红细胞生成素基因转移在肾性贫血基因治疗的初步研究

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中华实验和临床病毒学杂志 1998年第2期12卷 161-164页

作者：隋宝全韩峰吴淑华郭德本卫生部长春生物制品研究所中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室

目的探索用受体介导方法对肾性贫血基因治疗的可行性及疗效。方法构建一种克隆了促红细胞生成素（ＥＰＯ）基因的ＥＢＶ复制子载体ｐＥＰＯ，该载体与半乳糖基化组蛋白结合形成可溶性的核酸蛋白复合物，以静脉注射的方式将复合物导入通... 详细信息

目的探索用受体介导方法对肾性贫血基因治疗的可行性及疗效。方法构建一种克隆了促红细胞生成素（ＥＰＯ）基因的ＥＢＶ复制子载体ｐＥＰＯ，该载体与半乳糖基化组蛋白结合形成可溶性的核酸蛋白复合物，以静脉注射的方式将复合物导入通过喂饲腺嘌呤造成肾性贫血大鼠，恢复正常饮食２周后，采血样检测血红蛋白的含量和红细胞数，并与对照组进行比较。结果注射ｐＥＰＯ复合物组的红细胞数和血红蛋白含量都有明显升高，实验组和对照组的红细胞数分别为每毫升４９２个和４０７个；血红蛋白含量分别１１．４ｇ／ｍｌ和９．１ｇ／ｍｌ。两组比较，Ｐ＜０．０１。提示ＥＰＯ基因已被导入动物体内并表达出目的蛋白，但肾衰症状并不改善。结论以上结果证明通过受体介导的基因转移技术可将ＥＰＯ基因导入实验动物体内并进行表达。

关键词：促红细胞生成素大鼠肾性贫血受体基因转移

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核酶对鸭乙型肝炎病毒感染体内抗病毒作用效果的观察

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中华实验和临床病毒学杂志 1998年第2期12卷 118-121页

作者：李虹陈文徐纬王平郭巨涛侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室中国医学科学院医药生物技术研究所

目的观察核酶在体内抗病毒作用效果。方法选择鸭乙型肝炎（ＤＨＢＶＬＪ－７６）及其鸭动物模型作为检测系统，将针对ＤＨＢＶＰｒｅ－Ｓ７３６位点的核酶（ＲｚＤＳ）插入ｐＪ１２０质粒构建成ｐＪ－ＲｚＤＳ。与痘苗病毒天坛７６１株... 详细信息

目的观察核酶在体内抗病毒作用效果。方法选择鸭乙型肝炎（ＤＨＢＶＬＪ－７６）及其鸭动物模型作为检测系统，将针对ＤＨＢＶＰｒｅ－Ｓ７３６位点的核酶（ＲｚＤＳ）插入ｐＪ１２０质粒构建成ｐＪ－ＲｚＤＳ。与痘苗病毒天坛７６１株（ＶＶ）同源重组后获得含ＲｚＤＳ的重组痘苗病毒（Ｖ－ＲｚＤＳ）。用ＤＨＢＶ感染１日龄北京鸭，分别在感染的同时、感染后２４小时和７２小时注射Ｖ－ＲｚＤＳ和ＶＶ，１０天后检测血清中ＤＨＢＶＤＮＡ和ＤＨＢｓＡｇ的含量。结果北京鸭在感染ＤＨＢＶ的同时注射Ｖ－ＲｚＤＳ，其ＤＨＢＶＤＮＡ和ＤＨＢｓＡｇ的含量均低于ＶＶ对照组，两组之间有显著性差异。结论提示ＲｚＤＳ对ＤＨＢＶ基因组复制和表达均有抑制作用，其抑制率分别为４５％和６３％。

关键词：核酶鸭乙型肝炎病毒复制表达

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辛德毕斯病毒中国株基因组序列特征的初步分析

引用

中华实验和临床病毒学杂志 1998年第1期12卷 20+48页

作者：李蕾梁国栋周国林付士红金奇候云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室

辛德毕斯病毒中国株基因组序列特征的初步分析李蕾梁国栋周国林付士红金奇候云德作者单位：１０００５２北京中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室１９９７年１２月２８日收稿１９９８年１月１４日修回１９９０年... 详细信息

辛德毕斯病毒中国株基因组序列特征的初步分析李蕾梁国栋周国林付士红金奇候云德作者单位：１０００５２北京中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室１９９７年１２月２８日收稿１９９８年１月１４日修回１９９０年梁国栋等人在我国新疆维吾尔自治区...

关键词：辛德毕斯病毒基因组序列甲病毒属中华人民共和国

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促血小板生成素的分子生物学研究进展

引用

中华实验和临床病毒学杂志 1998年第4期12卷 394-397页

作者：汪治清杨新科中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室

促血小板生成素（Ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ，ＴＰＯ）是近年分离的一种造血生长因子，能特异地刺激巨核细胞增殖、分化、成熟和血小板的产生，对维持机体的正常凝血功能有着重要意义。本文拟对其分子生物学研究进展作一综述。１Ｔ... 详细信息

促血小板生成素（Ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ，ＴＰＯ）是近年分离的一种造血生长因子，能特异地刺激巨核细胞增殖、分化、成熟和血小板的产生，对维持机体的正常凝血功能有着重要意义。本文拟对其分子生物学研究进展作一综述。１ＴＰＯ的基因克隆与基因结构１９９４年...

关键词：促血小板生成素分子生物学基因克隆基因结构

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