检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理学报 2002年第2期34卷 176-180页

作者：伍志坚吴小兵王宏卢斌董小岩侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室中国预防医学科学院病毒学研?

为实现人促红细胞生成素 (humanerythropoietin ,hEPO)基因在体内的持续表达 ,构建了携带hEPO的重组腺伴随病毒 (recombinantadeno associatedvirus,rAAV)载体质粒 ,建立了稳定携带hEPO表达盒的rAAV载体细胞株 ,采用“一种辅助病毒感染... 详细信息

为实现人促红细胞生成素 (humanerythropoietin ,hEPO)基因在体内的持续表达 ,构建了携带hEPO的重组腺伴随病毒 (recombinantadeno associatedvirus,rAAV)载体质粒 ,建立了稳定携带hEPO表达盒的rAAV载体细胞株 ,采用“一种辅助病毒感染一个载体细胞株”的rAAV生产策略 ,制备并纯化了携带hEPO的rAAV(rAAV hEPO)。结果表明 ,rAAV介导的hEPO转移能够使hEPO在培养的BHK 2 1细胞中得到有效表达 ;用rAAV hEPO对Balb/c小鼠进行一次肌肉注射 ,可使hEPO在小鼠体内持续表达 10周以上 ,并可明显升高小鼠的红细胞比容

关键词：重组腺伴随病毒 hEPO 基因转移基因治疗载体

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一组可提供AAV载体复制和包装功能的重组HSV-1

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中华实验和临床病毒学杂志 2002年第1期16卷 74-76页

作者：伍志坚吴小兵侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052

目的　构建一组具有AAV载体复制和包装功能的重组HSV 1,从中选出功能较强者用于重组AAV的生产。方法　采用一套含有HSV 1基因组的粘粒系统构建重组HSV 1。首先将 2型腺病毒伴随病毒 (AAV 2 )rep基因的起始密码子ATG人工定点突变成ACG ;... 详细信息

目的　构建一组具有AAV载体复制和包装功能的重组HSV 1,从中选出功能较强者用于重组AAV的生产。方法　采用一套含有HSV 1基因组的粘粒系统构建重组HSV 1。首先将 2型腺病毒伴随病毒 (AAV 2 )rep基因的起始密码子ATG人工定点突变成ACG ;然后将自身启动子控制下的AAV 2rep(起始密码子突变或未突变 )和cap基因分别插入粘粒上HSV 1的UL2基因或UL44基因 ,构建成重组粘粒cos6 rmc ΔUL2、cos5 6 rc ΔUL44cos5 6 rmc ΔUL44 ;将重组粘粒上的HSV 1片段分别与HSV 1的其余片段进行同源重组 ,得到 3株重组HSV 1。连同过去报道的一株重组HSV 1一起 ,分别命名为HSV1 rc ΔUL2、HSV1 rmc ΔUL2、HSV1 rc ΔUL44、HSV1 rmc ΔUL44。结果　 4株重组HSV 1经PCR鉴定均含有rep基因 ,分别感染携带绿色荧光蛋白 (GFP)基因的AAV载体细胞株后均能产生重组AAV。重组AAV可在BHK 2 1细胞中表达GFP。HSV1 rc ΔUL2和HSV1 rmc ΔUL2对AAV载体的包装能力明显强于HSV1 rc ΔUL44和HSV1 rmc ΔUL44。结论　构建的 4株重组HSV 1均具有复制和包装重组AAV的能力。其中HSV1 rc ΔUL2和HSV1 rmc ΔUL2功能较强。

关键词：遗传重组腺病毒科人疱疹病毒 AAV载体复制包装功能

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流感病毒血凝素基因工程抗体的抗病毒实验效果观察

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中华实验和临床病毒学杂志 2002年第4期16卷 337-340页

作者：杨贵宾王艳赵小东韩峰吴淑华侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052

目的　对昆虫细胞系统表达纯化的中和性流感病毒血凝素基因工程全抗体IgG IV 2 ,IgG IV 6进行体外和体内抗病毒效果的研究。方法　对比抗体应用前后病毒在MDCK细胞中的病毒滴度和动物模型中粘膜用药前后鼠肺内病毒滴度的改变 ,验证抗体... 详细信息

目的　对昆虫细胞系统表达纯化的中和性流感病毒血凝素基因工程全抗体IgG IV 2 ,IgG IV 6进行体外和体内抗病毒效果的研究。方法　对比抗体应用前后病毒在MDCK细胞中的病毒滴度和动物模型中粘膜用药前后鼠肺内病毒滴度的改变 ,验证抗体的粘膜抗感染效果。结果　两株基因工程抗体使 4 .5log1 0 TCID50 滴度的病毒下降 1 2的剂量分别为 0 .8μg和 0 .5 μg ;动物模型的粘膜给药表明使 4 .0log1 0 TCID50 的病毒下降 1 2所需的抗体剂量IgG IV 2为 0 2 5mg kg体重 ,IgG IV 6为0 1mg kg体重 ,联合应用时为 0 .0 8mg kg体重。结论　获得的基因工程抗体具有体内体外的抗病毒效果 ,能够中和病毒毒力。

关键词：流感病毒血凝素基因工程抗体抗病毒实验流感体外抗病毒效果免疫组织化学体内抗病毒效果

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嵌合蛋白sTNFR II-IgG Fc的克隆、表达与活性分析

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生物工程学报 2002年第2期18卷 178-181页

作者：徐春晓姚立红祖东陈爱珺黄国锦张智清中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052

肿瘤坏死因子是一种重要的炎性细胞因子 ,目前已知许多免疫疾病与之相关 ,为了抑制TNF的生物学活性 ,将可溶性TNFRII(sTNFRII)和人IgGFc分子通过柔性短肽相连 ,构建成一个嵌合蛋白 ,在大肠杆菌中进行表达 ,并获得了纯化蛋白。实验证明... 详细信息

肿瘤坏死因子是一种重要的炎性细胞因子 ,目前已知许多免疫疾病与之相关 ,为了抑制TNF的生物学活性 ,将可溶性TNFRII(sTNFRII)和人IgGFc分子通过柔性短肽相连 ,构建成一个嵌合蛋白 ,在大肠杆菌中进行表达 ,并获得了纯化蛋白。实验证明该嵌合蛋白能够自发形成聚合体 ,识别并结合TNF蛋白 ,同单体sTNFRII相比 ,对TNF的中和活性得到了较大的提高。

关键词：可溶性肿瘤坏死因子受体嵌合蛋白大肠杆菌生物学活性克隆表达

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蚓激酶的克隆及其对BHK细胞的作用

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中国生物化学与分子生物学报 2002年第6期18卷 776-779页

作者：孙兆军梁国栋陈飞付士红沈悦柴玉波李晓宇徐义辉侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052

Lumbrukinase gene from earthworm ( *** ) was obtained by RT\|PCR. The product, PI 239 , was sequenced and analyzed by biology programs and database. The gene including signal peptide coding sequence was cloned into an eukaryotic vector and the clones were obtained by transferring into BHK cells. The gene was fused with EGFP gene at C\|terminal to be detected conveniently by its fluorescence. The lumbrukinase gene PI 239 has 852 nucleotides that code for 239 amino acid residues as mature peptide chain. The N terminal of PI 239 shares certain homology with those known lumbrukinase. The enzyme contains relative more acidic amino acid residues, and has homology to serine protease. It belongs to the acidic protein, serine protease. Conformation prediction indicates that its secondary structure mainly consists of β sheet. It has two super secondary structure motifs with the active sites Asp188 and Ser189 in between. The DNA and mRNA of the whole gene could be detected in BHK clones, but no recombinant protein detected. Under cofocal microscope, the cells transferred with fused gene showed fluorescence indicating that the fused protein was expressed. In addition, the cells containing the fused gene died soon while most of the control cells were still alive. It seemed that the protein could be expressed in BHK cells as a cytotoxin, though at a low level.

关键词：蚓激酶克隆 BHK细胞作用

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Extracellular domain of kinase domain region mediated by adeno-associated virus inhibits growth and angiogenesis of bladder cancer in Balb-c mice

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Chinese Medical Journal 2002年第8期115卷 1209-1212,154页

作者：张志超张智清曾革非张立国徐春晓郭应禄北京大学第一医院泌尿外科研究所北京100034 中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052

OBJECTIVE: To verify whether the extracellular domain of kinase domain region (KDR) has anti-angiogenesis activity in vivo. METHODS: cDNA was cloned into adeno-associated virus (AAV) vector pSNAV and transfected to baby hamster kidney (BHK) cells. Recombinant AAV was obtained from the cell culture supernatant after adding helper virus. Recombinant AAV-infected human bladder cancer EJ cell line (EJ cells) were injected subcutaneously into Balb-c nude mice. Tumor specimens were removed from the mice, paraffin-embedded and sliced, then stained by immunohistochemistry. Microvessel density (MVD) was determined under a microscope. RESULTS: The tumor volume developed by EJ cells transfected with the extracellular domain of KDR was significantly smaller (1.70 +/- 0.18 cm(3)) compared with that in the control (5.62 +/- 0.67 cm(3)) (P

关键词： Gene Therapy Animals Bladder Neoplasms Cloning, Molecular Cricetinae Dependovirus Endothelial Growth Factors Female Intercellular Signaling Peptides and Proteins Lymphokines Mice Mice, Inbred BALB C Mice, Nude Neovascularization, Pathologic Research Support, Non-U.S. Gov't Vascular Endothelial Growth Factor A Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Vascular Endothelial Growth Factors

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Coltivirus病毒属研究进展

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中国病毒学 2002年第4期17卷 385-391页

作者：徐丽宏梁国栋中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052

Coltivirus病毒属(Coltivirus, Colti)为呼肠病毒科病毒，以科罗拉多蜱媒热病毒(Colorado tick fever virus, CTFV)为代表株，该病毒原为环状病毒属成员，由于其对人有致病性，可引起人的发热和脑炎，病毒核心的衣壳外面结构不同于典型... 详细信息

Coltivirus病毒属(Coltivirus, Colti)为呼肠病毒科病毒，以科罗拉多蜱媒热病毒(Colorado tick fever virus, CTFV)为代表株，该病毒原为环状病毒属成员，由于其对人有致病性，可引起人的发热和脑炎，病毒核心的衣壳外面结构不同于典型的环状病毒，尤其是病毒基因组为12个双链RNA节段而不是环状病毒的10个节段，核酸分子量27 * 10~6，远比环状病毒（18 * 10~6）大，故单列一属。目前全世界已在美洲、亚洲和欧洲等地分离到数十株Colti病毒（主要病毒株的分离年代和地区见表1）棋中CT-FV和在德国、法国分离到的Eyach及其变异株Ar577和Ar578被称为欧美流行株，亚洲分离株除印尼的JKT6423、JKT6969、JKT7043、JKT7075分离株外，我国自1980年以来也从人、畜标本和野外采集的蚊虫及蜱标本分离到多株Colti病毒。

关键词： Coltivirus病毒属研究进展生物学特征基因组

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登革病毒基因组核苷酸序列与血清学分型的相关性研究

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中国病毒学 2002年第4期17卷 297-303页

作者：宋宏付士红王寰宇梁国栋中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052

为证明登革病毒基因组核苷酸序列与病毒血清学分型的相关性 ,本文以病毒全基因组和病毒 5′末端非编码区 ,E蛋白 ,NS1蛋白和 3′末端非编码区四个基因区段分别进行病毒型间比较。比较结果表明病毒全基因组和病毒的各个基因区段均明显分... 详细信息

为证明登革病毒基因组核苷酸序列与病毒血清学分型的相关性 ,本文以病毒全基因组和病毒 5′末端非编码区 ,E蛋白 ,NS1蛋白和 3′末端非编码区四个基因区段分别进行病毒型间比较。比较结果表明病毒全基因组和病毒的各个基因区段均明显分为相互独立的 4个分支 ,与病毒血清型分型完全吻合 ,不存在型间重组的现象。

关键词：登革病毒基因组核苷酸序列血清学分型相关性

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检测人Ⅰ型干扰素生物学活性的新方法

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病毒学报 2002年第1期18卷 57-60页

作者：赵军段招军王红艳李武平吕宏亮魏开坤孙立连侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052 安徽医科大学

为建立一种更简便、安全、有效的检测Ⅰ型干扰素 (IFN)的方法 ,将可被Ⅰ型IFN诱导的人 6 - 16基因启动子与表达产物容易被检测的 β -半乳糖苷酶基因相连 ,构建成重组质粒 ,然后转染人羊膜传代细胞系 ,筛选阳性克隆 ,最终建立了一种适... 详细信息

为建立一种更简便、安全、有效的检测Ⅰ型干扰素 (IFN)的方法 ,将可被Ⅰ型IFN诱导的人 6 - 16基因启动子与表达产物容易被检测的 β -半乳糖苷酶基因相连 ,构建成重组质粒 ,然后转染人羊膜传代细胞系 ,筛选阳性克隆 ,最终建立了一种适用于检测Ⅰ型IFN的简便、快速、敏感、特异和重复性好的新型方法 ,其敏感性同标准的细胞病变抑制法相同。

关键词：人I型干扰素干扰素刺激反应元件生物学活性检测

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重组腺相关病毒介导人内皮抑素抑瘤作用的实验研究

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癌症 2002年第12期21卷 1314-1318页

作者：路国秋查园园吴小兵杨建国张雪艳付明梁肖吴旻林晨中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室北京100021 中国预防医学科学院病毒研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052

背景与目的:研究表明,内皮抑素能抑制肿瘤血管的生成,进而抑制肿瘤的生长和转移,然而有关内皮抑素治疗的研究报道却很少。本研究初步探讨了重组腺相关病毒介导内皮抑素对肿瘤生长和转移的作用。方法:用RT-PCR方法获得人内皮抑素基因,构... 详细信息

背景与目的:研究表明,内皮抑素能抑制肿瘤血管的生成,进而抑制肿瘤的生长和转移,然而有关内皮抑素治疗的研究报道却很少。本研究初步探讨了重组腺相关病毒介导内皮抑素对肿瘤生长和转移的作用。方法:用RT-PCR方法获得人内皮抑素基因,构建内皮抑素可分泌表达的通用型重组腺相关病毒(rAAV)载体,包装获得重组腺相关病毒rAAV-SS-Endostatin。以动物实验分析其抗肿瘤作用。结果:C57BL/6小鼠肌肉注射1011TUrAAC-SS-Endostatin一次,该重组病毒对小鼠黑色素瘤B16F10移植瘤生长的抑制率为57.1%,在实验肺转移模型中,对转移灶的抑制率为70.7%。结论:重组腺相关病毒介导的内皮抑素能有效抑制肿瘤的生长和转移。

关键词：重组腺相关病毒内皮抑素肿瘤基因治疗实验研究

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