检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验和临床病毒学杂志 2002年第2期16卷 132-135页

作者：胡荣马学军魏开坤王虹薛水星段招军侯云德钱振超中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052 大连医科大学病理教研室

目的　改造干扰素功能结合域 ,以提高干扰素的生物学活性。方法　在新型基因工程干扰素 (IFNα1c 86D)AB环内通过点突变技术引入 2个独立酶切位点EcoRⅤ和EstEⅡ ,用聚合酶链反应 (PCR)技术在干扰素cDNA水平对母体干扰素LoopAB的 31位... 详细信息

目的　改造干扰素功能结合域 ,以提高干扰素的生物学活性。方法　在新型基因工程干扰素 (IFNα1c 86D)AB环内通过点突变技术引入 2个独立酶切位点EcoRⅤ和EstEⅡ ,用聚合酶链反应 (PCR)技术在干扰素cDNA水平对母体干扰素LoopAB的 31位甲硫氨酸换成天冬氨酸 (M D) ,32位天冬氨酸换成脯氨酸 (D P) ,将重组基因在大肠埃希菌中表达 ,用滤泡口炎病毒 (VSV) 人羊膜传代细胞 (WISH)系统检测抗病毒活性。用比色MTT实验检测抗增殖活性。结果　通过突变 ,31和 32位氨基酸获得重组突变体 31 32IFNα1c 86D ,经限制性内切酶图分析、DNA序列和抗病毒活性测定 ,初步表明 31 32IFNα1c 86D是母体干扰素IFNα1c 86D抗病毒活性的 8倍 ,抗增殖作用与母体干扰素相比差异无显著性。结论　改造干扰素受体结合域。

关键词：干扰素α 病毒抗体 DNA突变分析干扰素受体

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重组腺伴随病毒载体表达人白细胞介素12的研究

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病毒学报 2002年第1期18卷 52-56页

作者：郝晓萌吴小兵伍志坚舒斯云侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052 第一军医大学附属珠江医院

白细胞介素 12 (IL - 12 )具有广谱抗肿瘤、抗感染的作用 ,是由两个亚单位 40kD(p40 )和 35kD(p35 )通过二硫键构成的杂合体 ,有可能通过分别表达亚单位的方式来表达有功能活性的IL - 12。该实验尝试利用重组腺伴随病毒 (rAAV)载体进行... 详细信息

白细胞介素 12 (IL - 12 )具有广谱抗肿瘤、抗感染的作用 ,是由两个亚单位 40kD(p40 )和 35kD(p35 )通过二硫键构成的杂合体 ,有可能通过分别表达亚单位的方式来表达有功能活性的IL - 12。该实验尝试利用重组腺伴随病毒 (rAAV)载体进行人IL - 12 (hIL - 12 )双亚基共表达 ,将hIL - 12的两个亚基分别克隆到AAV载体质粒pSNAV中 ,构建成 pSNAV -IL12 - p35和pSNAV -IL12 - p40质粒 ,经转染、G418筛选后建立了rAAV载体细胞株。采用先前建立的rAAV的生产方法 ,获得了rAAV -IL12 -p35和rAAV -IL12 - p40 ,在体外将两种rAAV共同感染BHK - 2 1细胞 ,48h后收集细胞培养上清进行免疫学和生物学活性检测。经ELISA检测 ,产生的hIL - 12 p70的含量为 10 185 pg/ml;在体外促进IFN -γ分泌实验中 ,加入hIL - 12的PBMC分泌的IFN -γ含量为 37 2mg/ml。实验结果说明 :采用两个AAV载体分别表达亚单位的方法可以表达具有功能活性的hIL - 12 ,为IL -

关键词：人白细胞介素12 重组腺伴随病毒载体基因治疗表达

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携带反义凝血酶受体和p21双基因共表达腺病毒伴随病毒载体的构建与包装

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生物化学与生物物理进展 2002年第4期29卷 597-603页

作者：孟宪敏吴小兵米立国伍志坚赵秀文刘冬青丁金凤中国医学科学院中国协和医科大学心血管病研究所阜外心血管病医院分子医学中心北京100037 中国预防医学科学院病毒学研究所基因工程国家重点实验室北京100052

为探讨双基因共表达对再狭窄的防治作用 ,分别构建了含反义凝血酶受体 (ATR)或 /和 p2 1单、双基因及报告基因绿色荧光蛋白 (GFP)的腺病毒伴随病毒 (AAV)载体 .上述载体经脂质体介导转染BHK 2 1细胞 ,G4 18筛选获得整合有外源基因的细胞... 详细信息

为探讨双基因共表达对再狭窄的防治作用 ,分别构建了含反义凝血酶受体 (ATR)或 /和 p2 1单、双基因及报告基因绿色荧光蛋白 (GFP)的腺病毒伴随病毒 (AAV)载体 .上述载体经脂质体介导转染BHK 2 1细胞 ,G4 18筛选获得整合有外源基因的细胞株 .克隆形成过程中显示单、双基因转染后细胞增殖受到了不同程度的抑制 ,克隆形成速度减慢 ,细胞形态改变 ,且双基因的作用明显大于单基因 .以绿色荧光出现说明报告基因得到表达后 ,又以DNA印迹证实ATR和p2 1单、双基因已整合于细胞基因组中 ,并维持了凝血酶受体 (TR)基因的反义位置 .半定量RT PCR证实TR基因表达降低 ,p2 1基因表达升高 ,ATR和p2 1(AP)双基因得到了共表达 .以具有可提供复制和包装功能的重组单纯疱疹病毒rHSV rc/ΔU12分别感染载有不同基因的BHK细胞株 ,包装产生重组AAV (rAAV)病毒 ,并经点杂交法测定其滴度 (每毫升病毒液中所含病毒颗粒数 ) .rAAV/AP中ATR与 p2 1的病毒颗粒数分别为 1 0 2× 10 13 /ml和 1 0 8× 10 13 /ml,单基因rAAV/ATR的滴度为 6 5 4× 10 12 /ml,rAAV/P2 1为 1 0 6× 10 13 /ml,为进一步的体内外实验奠定了物质基础 .

关键词：反义凝血酶受体 p21双基因共表达腺病毒伴随病毒载体构建包装再狭窄

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狂犬病-干扰素联合制剂的免疫原性及治疗作用

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中国生物制品学杂志 2002年第5期15卷 287-289页

作者：邹勇宋继萍吕宏亮李武平段招军侯云德兰州生物制品研究所兰州730046 中国预防医学科学院病毒学院研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052

目的研究狂犬病疫苗和干扰素组成的联合制剂的免疫原性和暴露后的治疗作用。方法将人用精制Vero细胞狂犬病疫苗（PVCRV）和基因工程干扰素（rHuIFNs）按一定比例配制成联合制剂,进行安全和效力试验,以PVCRV-HuIFNs和PVCRV分别免疫小鼠... 详细信息

目的研究狂犬病疫苗和干扰素组成的联合制剂的免疫原性和暴露后的治疗作用。方法将人用精制Vero细胞狂犬病疫苗（PVCRV）和基因工程干扰素（rHuIFNs）按一定比例配制成联合制剂,进行安全和效力试验,以PVCRV-HuIFNs和PVCRV分别免疫小鼠,在第1针免疫后9和18d,采用快速免疫荧光灶抑制试验,检测小鼠中和抗体水平,用MTT法检测特异的细胞毒作用（CTLs）。一定剂量的狂犬病病毒标准攻击株（CVS）肌肉感染小鼠后,分别用PVCRV-HuIFNs和PVCRV在0、3和7d皮内免疫感染小鼠,分别在末次免疫的第7和21d进行CTLs试验,并在30d内观察小鼠发病和死亡情况。结果联合制剂安全有效,效价高于单一疫苗,在暴露前诱导的中和抗体水平与单一疫苗比较差异有显著意义;在暴露前后激发的CTL,联合制剂均高于单一疫苗,差异有显著意义。结论联合制剂可用于狂犬病暴露后的免疫治疗。

关键词：狂犬病干扰素联合制剂免疫原性治疗作用疫苗

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抑制差减杂交克隆E1 Tor霍乱弧菌流行株与非流行株基因组差异片段及其分析

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中国生物化学与分子生物学报 2002年第5期18卷 573-577页

作者：张丽娟阚飙杨帆高守一刘延清祁国明中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所卫生部医学分子细菌学重点实验室北京102206 中国预防医学科学院病毒基因工程国家重点实验室北京100052

为了克隆与分析霍乱弧菌O1E1Tor流行株与非流行株两类菌株基因组差异片段 ,采用抑制差减杂交技术 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)分别以国内保留的流行株Wujiang 2及非流行株Js 32一株作为被检菌 ,另一株作为参考菌进行基... 详细信息

为了克隆与分析霍乱弧菌O1E1Tor流行株与非流行株两类菌株基因组差异片段 ,采用抑制差减杂交技术 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)分别以国内保留的流行株Wujiang 2及非流行株Js 32一株作为被检菌 ,另一株作为参考菌进行基因组差异研究 .在进行的差减杂交实验中 ,流行株Wujiang 2共检出 34个特异差异片段 ,经同源检索共代表 35个基因片段 ,其中包括许多重要的霍乱弧菌毒力相关基因如CTX遗传单元、TLC因子及可移动外来成分如霍乱弧菌整合子RVC序列及Tn10转位酶 .非流行株Js 32共检出 14个特异差异片段 ,经同源检索未能检出同源片段 ,可能代表新基因序列 .研究表明 ,霍乱弧菌流行株与非流行株基因组存在较多差异基因 ,表现在毒力、毒力相关基因。

关键词：抑制差减杂交 El Tor霍乱弧菌流行株非流行株基因组差异片段序列分析基因克隆

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幽门螺杆菌疫苗研究进展

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微生物学免疫学进展 2002年第3期30卷 53-57页

作者：衣作安中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052

幽门螺杆菌由于在人群中具有较高的感染率及被WHO确认为I类致癌因子而受到重视 ,近年来对它的疫苗研究进展迅速。本文对幽门螺杆菌的全菌体疫苗、亚单位疫苗、重组减毒疫苗。

关键词：亚单位疫苗重组减毒疫苗微球疫苗幽门螺杆菌疫苗研究进展

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一种人新型基因工程干扰素rh-IFNα-m的高效表达、纯化和活性检测

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微生物学免疫学进展 2002年第2期30卷 22-25页

作者：吕宏亮段招军李武平陈勇刘永清魏开坤侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052 兰州生物制品研究所兰州730046

为实现干扰素 (IFNα m)的高表达与纯化 ,研究其抗病毒、抗增殖活性。应用PCR技术将已构建的IFNα m的高表达基因亚克隆到原核表达载体pBV2 2 0上 ,构建表达质粒 pBV2 2 0 /IFNα m ,转化大肠杆菌DH5α进行表达。表达产物经初步检定以... 详细信息

为实现干扰素 (IFNα m)的高表达与纯化 ,研究其抗病毒、抗增殖活性。应用PCR技术将已构建的IFNα m的高表达基因亚克隆到原核表达载体pBV2 2 0上 ,构建表达质粒 pBV2 2 0 /IFNα m ,转化大肠杆菌DH5α进行表达。表达产物经初步检定以包涵体形式存在 ,包涵体进行变性、复性 ,然后经CM Sepharose FF、DEAE Sepharose FF离子交换层析和Sephacryal HR10 0分子筛纯化 ,获得较纯的干扰素IFNα m。以IFNα 1b为对照 ,在VSV Wish系统上采用细胞病变抑制法 ,测定纯品IFNα m的抗病毒活性。在Hela细胞上用MTT法进行抗增殖实验。结果表明包涵体含量占菌体总蛋白 4 0 % ,纯化的目的蛋白IFNα m纯度在 95 % ,比活高达 1 2 6× 10 7IU/mg ,纯化收率34 4 % ,IFNα m抗病毒活性和IFNα 1b相当 (P >0 0 5 ) ,抗增殖活性高于IFNα 1b(P <0 0 1)。

关键词： IFNα-m 高交表达纯化抗病毒抗增殖

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痢疾杆菌全基因组序列及基因组岛的分析

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中国工程科学 2002年第10期4卷 40-47页

作者：刘红杨帆张笑冰张继瑜杨国威董杰薛颖侯云德袁正宏闻玉梅徐建国陈洪松马大龙王宇杨剑沈岩强伯勤吴洪涛贺秉坤吕渭川金奇病毒基因工程国家重点实验室北京100052 毒基因工程国家重点实验室北京100052 复旦大学分子病毒学实验室上海200032 中国预防医学科学院流行病学和微生物学研究所北京102206 北京大学医学部肝病研究所北京100083 人类基因组北方研究中心北京100176 华北制药集团石家庄050000

福氏 2a志贺菌 (Shigellaflexneriserotype 2a)是引起人类细菌性痢疾的主要病原体。本文在国际上首次完成了福氏 2a志贺菌 30 1株 (Sf30 1) (我国细菌性痢疾的优势流行株 )的全基因组核苷酸序列测定和初步分析。该基因组包括一条由 4 6 ... 详细信息

福氏 2a志贺菌 (Shigellaflexneriserotype 2a)是引起人类细菌性痢疾的主要病原体。本文在国际上首次完成了福氏 2a志贺菌 30 1株 (Sf30 1) (我国细菌性痢疾的优势流行株 )的全基因组核苷酸序列测定和初步分析。该基因组包括一条由 4 6 0 72 0 3个碱基对 (bp)组成的环状染色体和一个含 2 2 16 18bp的侵袭性大质粒pCP30 1以及另外两个小质粒。通过将Sf30 1的染色体序列与其亲源关系相近的非致病性大肠杆菌K - 12菌株MG16 5 5进行比较基因组学研究 ,发现Sf30 1的染色体上有 5 72Kb特异性序列 ,并形成了 32 0个长度大于 5 0bp的“痢疾岛” (Shigella island ,SIs) ,其中大于 1Kb的共计 131个。这些岛共包含 5 19个开放读码框架 (OpenReadingFrames,ORFs) ,多数SIs的一侧或两侧均伴有插入序列元件、转座子或者tRNAs。G +C含量及密码子使用频率等分析显示出部分SIs的外源性。通过结构及ORF编码产物功能的分析 ,鉴别出 9个可能与痢疾杆菌致病性有关的“毒力岛” ,其中

关键词：福氏2a志贺菌301株全基因组序列测定痢疾岛毒力岛痢疾杆菌痢疾传染病

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VEGF受体KDR胞外区基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达

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生物工程学报 2001年第2期17卷 140-144页

作者：曾革非张智清张立国陈爱君姚立红侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052

VEGF(血管内皮细胞生长因子 ,VascularEndothelialGrowthFactor)是刺激内皮细胞增殖和新生血管形成的最重要因子 ,与多种实体瘤的生长和转移密切相关。应用其可溶性受体阻断它的病理作用是一个非常有前景的课题。将VEGF受体KDR胞外区前... 详细信息

VEGF(血管内皮细胞生长因子 ,VascularEndothelialGrowthFactor)是刺激内皮细胞增殖和新生血管形成的最重要因子 ,与多种实体瘤的生长和转移密切相关。应用其可溶性受体阻断它的病理作用是一个非常有前景的课题。将VEGF受体KDR胞外区前三个Loop 96 9碱基对的cDNA片段克隆到杆状病毒表达载体pFastBacI,与杆状病毒表达载体Bacmid同源重组后 ,转染昆虫细胞SF 9,获得重组杆状病毒并证明了目的基因的高效表达。经Westernblot证实表达产物的特异性。经ELISA和体外生物学活性检测表明表达产物可阻断VEGF的生物学活性 ,抑制鸡胚CAM血管的生长。

关键词：血管内皮细胞生长因子受体克隆杆状病毒表达昆虫细胞表达

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TNF受体(P55)和IgGFc的融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达

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中华实验和临床病毒学杂志 2001年第2期15卷 116-119页

作者：安乃莉徐春晓姚立红陈爱君曾革非张立国张智清中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052

目的　在真核细胞表达具有生物活性的可溶性肿瘤坏死因子 (TNF)受体蛋白 ,用于中和TNF的毒性。方法　将TNFR(P5 5 )的胞外区基因和人IgGFc段基因通过 18个碱基的凝血酶切点连接 ,克隆入真核表达载体pcDNA3 1(+ ) ,在COS7和BHK细胞分别... 详细信息

目的　在真核细胞表达具有生物活性的可溶性肿瘤坏死因子 (TNF)受体蛋白 ,用于中和TNF的毒性。方法　将TNFR(P5 5 )的胞外区基因和人IgGFc段基因通过 18个碱基的凝血酶切点连接 ,克隆入真核表达载体pcDNA3 1(+ ) ,在COS7和BHK细胞分别得到目的蛋白的表达。结果　在真核表达系统表达了TNFR(P5 5 )胞外区与人IgGFc段的融合蛋白 ,免疫学实验及L92 9细胞体外实验均表明该蛋白具有TNFR(P5 5 )特异的抗原性、与TNF结合的活性以及抑制TNF的活性。结论　真核表达的融合蛋白产物具有可溶性TNF受体 (P5 5 )的生物学活性。

关键词：肿瘤坏死因子融合蛋白质真核表达系统

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