检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验和临床病毒学杂志 2000年第4期14卷 309-312页

作者：马骊张智清陈爱君姚立红姜忠良王小宁广州中国人民解放军第一军医大学分子免疫学重点实验室 510515 中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室

目的　研究人血管内皮生长因子 (hVEGF16 5 )基因在Pichia .pastoris酵母中的表达 ,获得高效表达的具有生物学活性的重组VEGF16 5。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)扩增hVEGF16 5基因 ,经DNA序列分析后 ,插入含AOX1启动子和α分泌信号肽... 详细信息

目的　研究人血管内皮生长因子 (hVEGF16 5 )基因在Pichia .pastoris酵母中的表达 ,获得高效表达的具有生物学活性的重组VEGF16 5。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)扩增hVEGF16 5基因 ,经DNA序列分析后 ,插入含AOX1启动子和α分泌信号肽序列的Pichia .pastoris酵母载体中 ,构建重组表达质粒 pPIC9K hVEGF16 5 ,转化酵母宿主菌KM 71,筛选多拷贝整合转化子 ,摇瓶培养 ,1%甲醇诱导表达。结果　SDS PAGE分析显示 ,诱导 4d的培养上清中hVEGF16 5表达量达上清总蛋白的 30 %以上。ELISA及Westernblot实验表明 ,表达产物具有良好的抗原性和特异性。生物学活性检测证实其具有刺激HUVEC增殖的功能。结论　在Pichia .pastoris表达系统中实现了hVEGF16

关键词：内皮生长因子毕赤酵母基因表达

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HSV-1扩增子病毒载体介导rGDNF的体外表达

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中华实验和临床病毒学杂志 2000年第1期14卷 92-93页

作者：曹晖吴小兵蒋立新侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052 第一军医大学解剖学教研室

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新型系列病毒载体

新型系列病毒载体

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作者：颜子颍侯云德舒跃龙杨天忠吴小兵王晓丹贡惠宇乔健等中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室

该成果包括人工病毒载体和非病毒载体两类。其主要技术内容有：以EBV为基础的肝细胞和肝癌细胞导向性自主复制型人工病毒系统；腺病毒相关病毒（AAV）载体系统；单纯疱疹病毒载体系统三部分。人工病毒载体，通过模拟天然病毒通过特异性... 详细信息

标准号: 0201060320

该成果包括人工病毒载体和非病毒载体两类。其主要技术内容有：以EBV为基础的肝细胞和肝癌细胞导向性自主复制型人工病毒系统；腺病毒相关病毒（AAV）载体系统；单纯疱疹病毒载体系统三部分。人工病毒载体，通过模拟天然病毒通过特异性受体介导进入细胞，从细胞内小体中释放出来以及定位到细胞核中进行转录等过程，较好地解决了转染的靶向性和转导效率问题；AAV载体设计了多种AAV载体生产系统，确定了一种“一株前病毒细胞/一株辅助病毒”的生产策略，其中的辅助病毒是载有AAV2repcap基因的重组单纯疱疹病毒；HSV载体发明了一种高效快速产生重组HSV病毒的新方法，这种方法不仅可用于获得重组HSV病毒，而且已被成功地用于AAV载体的大量生产及无辅助病毒的扩增子载体的制备。新型系列病毒载体主要用作基因治疗的导入系统，亦用于其它各种目的的体外、离体和体内基因转移。

关键词：病毒载体病毒基因重组

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21世纪生物技术发展趋向与药物创新

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中国科技奖励 2000年第2期8卷 15-15页

作者：侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室

近10年来,由于国家'863'高技术发展计划的实施,我国从事新生物技术开发的商业性机构也迅速发展,但是大都以诊断试剂为主,规模不大.

关键词：生物技术 21世纪发展趋势药物创新

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重组腺病毒介导的白细胞介素-12(IL-12)在肝癌细胞中的表达

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病毒学报 1999年第2期15卷 119-124页

作者：王自力梁国栋付士红周国林刘礼初陈飞施侣元侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室

利用腺病毒表达系统在肝癌细胞中成功地表达了有生物活性的白细胞介素－１２（ＩＬ－１２）。ＩＬ－１２的Ｐ３５和Ｐ４０ｃＤＮＡ分别克隆到腺病毒载体ｐＡＣＣＭＶｐＬｐＡ，构建ｐＡＣ／Ｐ３５和ｐＡＣ／Ｐ４０表达质粒。与腺病毒... 详细信息

利用腺病毒表达系统在肝癌细胞中成功地表达了有生物活性的白细胞介素－１２（ＩＬ－１２）。ＩＬ－１２的Ｐ３５和Ｐ４０ｃＤＮＡ分别克隆到腺病毒载体ｐＡＣＣＭＶｐＬｐＡ，构建ｐＡＣ／Ｐ３５和ｐＡＣ／Ｐ４０表达质粒。与腺病毒重组质粒ｐＪＭ１７共转染２９３细胞，通过基因重组产生ＩＬ－１２Ｐ３５和Ｐ４０重组腺病毒。用重组腺病毒感染肝癌细胞株ＨｅｐＧ２和ＳＭＭＣ７７２１，经ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ检测证明，在这两株细胞中均有ＩＬ－１２的表达，并且经ＩＦＮ－γ诱生法检测表明，在ＨｅｐＧ２和ＳＭＭＣ７７２１细胞中表达的ＩＬ－１２具有诱导产生ＩＦＮ－γ的生物学活性。本实验为研究ＩＬ－１２对肝癌的基因治疗奠定了基础。

关键词：白细胞介素12 基因治疗基因表达肝癌腺病毒

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甲状旁腺素相关蛋白cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达

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生物工程学报 1999年第3期15卷 332-336页

作者：刘红兵熊卫东安乃莉姚立红钭理强张智清中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室

采用ＲＴＰＣＲ方法从中国人肾癌细胞株中克隆到甲状旁腺素相关蛋白（Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄｈｏｒｍｎｏｅｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ，ＰＴＨｒＰ）ｃＤＮＡ，其核苷酸序列与国外发表资料相比，有６个核苷酸不同，其中仅９２位... 详细信息

采用ＲＴＰＣＲ方法从中国人肾癌细胞株中克隆到甲状旁腺素相关蛋白（Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄｈｏｒｍｎｏｅｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ，ＰＴＨｒＰ）ｃＤＮＡ，其核苷酸序列与国外发表资料相比，有６个核苷酸不同，其中仅９２位密码子的不同导致氨基酸变异，即由脯氨酸变为丝氨酸。将克隆的ＰＴＨｒＰｃＤＮＡ插到原核表达载体ｐＥＴ３ａ的Ｔ７噬菌体启动子下游，转化大肠杆菌后得到高效表达，并经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和生物学活性检测对表达产物作了鉴定。

关键词：甲状旁腺素相关蛋白克隆表达

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痘苗病毒增强子样序列的特性研究

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病毒学报 1999年第3期15卷 212-216页

作者：秘晓林吴淑华朱民何建新杨翔侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052

利用带有氯霉素乙酰转移酶报道基因的检测载体，从痘苗病毒基因组ＤＮＡ中筛选到一个增强子样片段。序列分析表明，该片段长２８３ｂｐ，是痘苗病毒ＤＮＡ依赖性ＲＮＡ聚合酶的一部分，具有两段２４ｂｐ长的重复序列。采... 详细信息

利用带有氯霉素乙酰转移酶报道基因的检测载体，从痘苗病毒基因组ＤＮＡ中筛选到一个增强子样片段。序列分析表明，该片段长２８３ｂｐ，是痘苗病毒ＤＮＡ依赖性ＲＮＡ聚合酶的一部分，具有两段２４ｂｐ长的重复序列。采用带有β－半乳糖甘酶报道基因的载体检测发现，该片段正向可以使报道基因表达增强１０９倍，反向可以增强３８倍。ＲＮＡｄｏｔｂｌｏｔ实验证实，它对基因的增强活性表现在转录水平上。

关键词：痘苗病毒染色体增强子样序列特性

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具有AAV载体包装功能的重组HSV的产生

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科学通报 1999年第5期44卷 506-509页

作者：伍志坚吴小兵侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052

腺病毒伴随病毒（ＡＡＶ）载体有望成为理想的基因治疗载体．常规的共转染法难以大规模制备重组ＡＡＶ（ｒＡＡＶ），本研究产生了一种具有ｒＡＡＶ包装功能的重组单纯疱疹病毒（ｒＨＳＶ），为ｒＡＡＶ的大规模制备提供了新的思路．采... 详细信息

腺病毒伴随病毒（ＡＡＶ）载体有望成为理想的基因治疗载体．常规的共转染法难以大规模制备重组ＡＡＶ（ｒＡＡＶ），本研究产生了一种具有ｒＡＡＶ包装功能的重组单纯疱疹病毒（ｒＨＳＶ），为ｒＡＡＶ的大规模制备提供了新的思路．采用一套含有１型单纯疱疾病毒（ＨＳＶ－１）全基因组的粘粒系统（ＤａｖｉｓｏｎＡＪｅｔａｌ，１９９３），该系统含有５个粘粒，依次称为ｃｏｓ４８，ｃｏｓ２８，ｃｏｓ６，ｃｏｓ１４和ｃｏｓ５６．将ＡＡＶ的ｒｅｐ和ｃｓｐ基因克隆到粘粒ｃｏｓ６的ＨＳＶ－１　ＵＬ－２基因的Ｘｂａ　Ⅰ位点上，构建成ｃｏｓ６－ｒｃＵＬ２．将ｃｏｓ６－ｒｃＵＬ２与其他４个粘粒经ＰａｃⅠ酶切后共转染ＢＨＫ－２１对细胞，５个粘粒在细胞内发生同源重组而产生携带ｒｅｐ和ｃａｐ基因的病毒ＨＳＶ１－ｒｅ／ＵＬ２．实验结果表明，该重组病毒可稳定传代，并能将瞬时或稳定存在于细胞中的ｒＡＡＶ载体包装成具有感染能力的ｒＡＡＶ．该病毒经改进后，有望以感染载体细胞系的方式实现ｒＡＡＶ的大量生产．

关键词：重组HSV 包装功能单纯疱疹病毒腺病毒伴随病毒

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中国分离的甲属病毒YN87448毒株非结构区基因的核苷酸序列测定及分析

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中华实验和临床病毒学杂志 1999年第4期13卷 314-320页

作者：周国林梁国栋李蕾付士红李福胜金奇张海林黄文丽侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052 云南省流行病防治研究所

目的　研究我国首例从发热病人血清中分离的YN87448病毒的分子致病基础。方法　甲属病毒基因序列保守区设计引物,用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法扩增,再将扩增片段克隆到pGEMT载体。测定YN87448毒株非结构基因序列。结果　YN87448病... 详细信息

目的　研究我国首例从发热病人血清中分离的YN87448病毒的分子致病基础。方法　甲属病毒基因序列保守区设计引物,用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法扩增,再将扩增片段克隆到pGEMT载体。测定YN87448毒株非结构基因序列。结果　YN87448病毒非结构区基因序列为7613个核苷酸(不包括5′端帽子结构),编码非结构蛋白1(nsP1),非结构蛋白2(nsP2),非结构蛋白3(nsP3),非结构蛋白4(nsP4);有一个起始密码子(ATG)位于第60位碱基;含有2个终止密码子(TGA),分别位于基因组nsP3基因和nsP4基因的末端。YN87448病毒非结构区基因与辛德毕斯病毒家族中唯一能致成年小鼠死亡的***86株相应基因的核苷酸序列同源性为988%,但YN87448毒株不致成年小鼠死亡。与***86株相比,基因结构上有三点明显差异:YN87448毒株在nsP3区位于基因组5256bp5309bp含54个核苷酸的插入;位于基因组5603bp处3个核苷酸(AGT)的缺失;在nsP3和nsP4之间有乳白突变终止密码子(TGA)。此序列已输入GeneBank,序列号为AF103734。结论　YN87448为一株新的辛德毕斯病毒株。

关键词：甲病毒属分子克隆聚合酶链反应碱基序列

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PTHrP受体胞外区基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

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生物工程学报 1999年第2期15卷 154-159页

作者：钭理强张智清刘红兵周小明熊卫东安乃莉姚立红侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京医科大学第一医院泌尿外科研究所同济医科大学附属同济医院心血管内科

ＰＴＨｒＰ（甲状旁腺激素相关蛋白，Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄｈｏｒｍｏｎｅｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ）与多种肿瘤的生物学行为有关，尤其对肿瘤的骨转移起重要作用。应用其可溶性受体阻断它的病理作用是一个非常值得研究的课题。... 详细信息

ＰＴＨｒＰ（甲状旁腺激素相关蛋白，Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄｈｏｒｍｏｎｅｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ）与多种肿瘤的生物学行为有关，尤其对肿瘤的骨转移起重要作用。应用其可溶性受体阻断它的病理作用是一个非常值得研究的课题。从肾癌组织中提取ＲＮＡ，采用逆转录ＰＣＲ（ＲＴＰＣＲ）方法获得ＰＴＨｒＰ受体Ｎ端胞外区５４３碱基对的带信号肽的ｃＤＮＡ片段。将其核苷酸序列与国外发表的资料相比，基因中第２６２位核苷酸由Ｔ变为Ｃ，相应密码子由ＴＡＣ变为ＣＡＣ，导致氨基酸变异，即由酪氨酸变为组氨酸。将获得的受体基因克隆到原核表达载体ｐＥＴ３ａ，在大肠杆菌得到高效表达，经ＥＬＩＳＡ证实表达产物可与ＰＴＨｒＰ特异性结合。体外生物学活性检测表明表达产物可阻断ＰＴＨｒＰ的生物学活性。

关键词：甲状旁腺激素相关蛋白受体表达大肠杆菌

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