目的朱砂为安神要药,具有镇静、安神和催眠等药效。本研究通过分析朱砂药效剂量口服给药对小鼠大脑皮质蛋白组学的变化,探究朱砂的神经药理作用机制。方法成年ICR雄性小鼠(18-20 g),随机分为溶剂对照和朱砂组,每组9只,每天分别灌胃等量0.5%羧甲基纤维素钠(0.5%CMC-Na)和朱砂混悬液(50 mg·kg),每天1次,连续10天。给药结束后,处死、解剖小鼠,立即冰上分离大脑皮质;提取大脑皮质全蛋白,将每组9个样本等量随机混合为3个样本后用胰酶酶解;应用二维纳升级高效液相色谱仪串联线性离子阱质谱法(nanoLC-LTQ-Orbitrap/MS)检测多肽,MaxQuant软件进行质谱鉴定和定量;用Perseus软件进行数据处理,并对差异蛋白进行非层次监督聚类分析;用DAVID(Database for Annotation,Visualization and Integrated Discovery)进行Gene ontology(GO)富集分析,用Cytoscape 3.5.1软件中ClueGO插件进行信号通路富集分析,认为差异具有统计学意义。结果①经非标定量蛋白质组学分析,对照组样品检出6187种蛋白,朱砂组样品检出5336种蛋白;朱砂显著调节的差异蛋白为130种,其中45种为显著上调,75种为显著下调。差异表达蛋白的非监督层次聚类分析可以区分对照组和朱砂组。②GO富集分析结果显示,细胞组分方面,差异蛋白主要分布于胞质(28.5%)、外泌体(17.2%)和线粒体(10.8%)。此外,在核糖体和核糖体复合物(8.6%),内体和再循环内体(7.0%)等也有分布。分子功能方面,差异蛋白主要具有蛋白结合(38.5%)、poly(A)RNA结合(16.7%)、蛋白同源二聚化(14.6%)等活性。生物学过程方面,差异蛋白主要参与(蛋白)转运过程,此外,还有囊泡融合调节和蛋白磷酸化过程等。③通路富集分析结果显示,差异蛋白主要参与跨高尔基网络逆行运输、(线粒体)翻译等信号通路。结论朱砂的神经药理活性可能主要与其影响细胞翻译和转运等信号通路及生物学过程相关。
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