检索结果-内蒙古大学图书馆

首都医科大学学报 2011年第6期32卷 798-801页

作者：李爽李尧华叶懿文李昕于顺杨慧陈彪首都医科大学宣武医院老年病研究所神经生物学研究室教育部神经变性病重点实验室北京100053 首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病重点实验室北京100069

目的制备基因重组型人SORL1蛋白质片段,为探讨阿尔茨海默病的发病机制提供实验基础。方法采用PCR方法扩增人sorl1 cDNA编码区5 923～6 260 bp片段,克隆入原核表达载体pET-28a(+)中。用大肠杆菌BL21(DE3)plysS表达重组质粒,用液相色谱法... 详细信息

目的制备基因重组型人SORL1蛋白质片段,为探讨阿尔茨海默病的发病机制提供实验基础。方法采用PCR方法扩增人sorl1 cDNA编码区5 923～6 260 bp片段,克隆入原核表达载体pET-28a(+)中。用大肠杆菌BL21(DE3)plysS表达重组质粒,用液相色谱法纯化基因重组蛋白。结果 PCR扩增产物为358 bp,其ATG和TGA之间的结构与人sorl1 cDNA的5 923～6 260 bp区完全一致。基因重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中高效表达,其表达产物存在于包涵体组分中。纯化的基因重组蛋白在SDS-PAGE中表现为单一条带,表观分子量约为13 000。结论人sorl1 cDNA的5 923～6 260 bp片段在原核细胞中大量表达,纯化后的基因重组蛋白可尝试用于抗体的制备。

关键词：含L(DLR类)A重复分拣蛋白相关受体基因重组蛋白阿尔茨海默病

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大鼠脊髓损伤后胶质瘢痕形成的病理学规律

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中国康复理论与实践 2011年第3期17卷 215-218页

作者：张海燕杨朝阳李晓光首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京市100069

目的观察大鼠胸髓完全横断损伤后进入陈旧性脊髓损伤期的时间,并确定胶质瘢痕的时间、空间分布。方法 24只成年雌性Wistar大鼠采用完全横切模型,分别于术后1d、3d、7d、2周、4周、2个月、3个月、3.5个月通过组织化学和免疫组织化学方法... 详细信息

目的观察大鼠胸髓完全横断损伤后进入陈旧性脊髓损伤期的时间,并确定胶质瘢痕的时间、空间分布。方法 24只成年雌性Wistar大鼠采用完全横切模型,分别于术后1d、3d、7d、2周、4周、2个月、3个月、3.5个月通过组织化学和免疫组织化学方法检测损伤区囊腔、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和NG2表达的变化。结果囊腔大小的变化和GFAP表达水平的变化都在损伤后2个月开始减缓,并于损伤后3个月达到稳定,而NG2蛋白的表达于损伤后1个月开始趋于缓和,并于3个月达到稳定。结论脊髓损伤后于1个月开始进入陈旧期,3个月达到陈旧性损伤的稳定期。

关键词：脊髓损伤星形胶质细胞胶质瘢痕囊腔 NG2

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甘丙肽2型受体受泛素化调控的初步探讨

甘丙肽2型受体受泛素化调控的初步探讨

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：宫夏霓路雅静李天翊徐舒杨予涛徐志卿首都医科大学神经生物学系北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室

甘丙肽(Galanin)是一个广泛分布于神经系统和外周组织中的神经肽。通过与其受体结合,Galanin参与调节认知、觉醒、摄食、生殖等生理过程。目前已克隆出甘丙肽受体的三种亚型,它们都属于G蛋白耦联受体(GPCR)。本研究在瞬时转染人甘丙肽2... 详细信息

甘丙肽(Galanin)是一个广泛分布于神经系统和外周组织中的神经肽。通过与其受体结合,Galanin参与调节认知、觉醒、摄食、生殖等生理过程。目前已克隆出甘丙肽受体的三种亚型,它们都属于G蛋白耦联受体(GPCR)。本研究在瞬时转染人甘丙肽2型受体(GalR2)的HEK293细胞系中给予蛋白酶体抑制剂MG132共同培养,发现GalR2在细胞中发生积累。这提示GalR2在降解过程中可能涉及泛素-蛋白酶体途径。在前人对GPCR的研究中显示,泛素修饰的GPCR既可能经蛋白酶体途径降解,也有可能作为分选信号调控囊泡的转运。在酵母双杂交的工作中,我们用人GalR2的C端作为bait,人脑cDNA文库作为prey筛选与GalR2-C端相互作用的蛋白。在酵母双质粒转化验证成功的相互作用蛋白中,有部分是与催化泛素化相关的蛋白。这些蛋白中除了典型的蛋白-蛋白相互作用区域之外,还都存在一个具有E3泛素连接酶特征的结构域,如SOCS-box,F-box等。这从另一个侧面也提示GalR2可能受泛素化调控。

关键词：甘丙肽2型受体(GalR2) G蛋白耦联受体(GPCR) 泛素酵母双杂交

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甘丙肽2型受体在HEK293A细胞中的同源二聚化研究

甘丙肽2型受体在HEK293A细胞中的同源二聚化研究

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：闫竹青初晓东吕琼金艳燕李杰马克乾杨予涛张进禄徐志卿首都医科大学神经生物学系北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室

G蛋白偶联受体二聚化在受体的转运和信号转导中起着重要的调节作用。为了验证甘丙肽2型受体(GalR2)是否形成同源二聚体,本实验分别构建了N端带FLAG和HA标签的GalR2融合蛋白,转染到HEK293A细胞中。Western blot发现,除了相当于GalR2分子... 详细信息

G蛋白偶联受体二聚化在受体的转运和信号转导中起着重要的调节作用。为了验证甘丙肽2型受体(GalR2)是否形成同源二聚体,本实验分别构建了N端带FLAG和HA标签的GalR2融合蛋白,转染到HEK293A细胞中。Western blot发现,除了相当于GalR2分子量的位置有信号之外,在大约2倍于GalR2分子量的位置也有信号,提示GalR2可能是以二聚体的形式存在的。共转染HA-GalR2和FLAG-GalR2,通过免疫共沉淀的方法 ,在抗HA的免疫片段中检测到了FLAG的免疫活性,且在相当于单倍分子量和二倍分子量上均有条带;反过来,在FLAG的免疫片段中检测HA的免疫活性,条带同样出现在单倍分子量和二倍分子量上。以上结果表明甘丙肽2型受体之间形成了同源二聚体。

关键词：甘丙肽2型受体 G蛋白偶联受体同源二聚体免疫共沉淀

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癫痫的甘丙肽机制研究

癫痫的甘丙肽机制研究

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：徐志卿首都医科大学神经生物学系北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室

癫痫是常见的严重危害人类健康的慢性脑部疾病之一,约60%～80%的癫痫病人经过常规抗癫痫药物治疗发作可得到控制和缓解,但是,有一部分病人对药物治疗的效果较差,从新的角度开发寻找治疗的思路和靶点成为非常迫切的问题。甘丙肽（Galani...

癫痫是常见的严重危害人类健康的慢性脑部疾病之一,约60%～80%的癫痫病人经过常规抗癫痫药物治疗发作可得到控制和缓解,但是,有一部分病人对药物治疗的效果较差,从新的角度开发寻找治疗的思路和靶点成为非常迫切的问题。甘丙肽（Galanin）是脑内重要的神经肽之一,甘丙肽及其受体在中枢神经系统内有较广泛的分布,参与许多大脑功能活动,包括情绪、学习和记忆、疼痛、内分泌及摄食等生理过程。此外,越来越多的研究报道证明甘丙肽及其受体在癫痫的发病机制中可能起重要作用。如癫痫点燃动物模型可见导致齿状回甘丙肽源性神经支配纤维的缺失,海马内注入甘丙肽受体激动剂可终止惊厥的发作。甘丙肽基因缺失小鼠比野生型小鼠具有更高的惊厥发作易感性,更短的时间即可诱导惊厥的发作及导致更严重的惊厥发作症状。而过表达甘丙肽基因小鼠可通过抑制海马CA3区的谷氨酸释放和提高海马的后放电阈值以抑制惊厥发作的进展。应用Real-time PCR技术我们发现pilocarpine癫痫大鼠持续状态（status epilepticus,SE）后24小时,甘丙肽、GalR1、GalR3在背侧和腹侧海马表达增高;SE后7天,GalR1在背侧海马的表达增高,而galanin腹侧海马的表达增高;SE后8周,背侧海马GalR1表达增高,腹侧海马没有明显变化。提示在癫痫发作的急性期galanin、GalR1和GalR3变化较为明显,而在癫痫的潜伏期和慢性期以GalR1在背侧海马变化较为明显。同时,我们发现癫痫大鼠SE后24小时,背侧海马、腹侧海马、丘脑室旁核和丘脑前背侧核可看见甘丙肽阳性神经元,提示甘丙肽可能在颞叶癫痫活动扩布的脑核团内起重要的作用。以上结果提示,甘丙肽及其受体在癫痫发生的不同时相及不同部位可能发挥着不同的作用。

关键词：

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hGaiR2与Cript的相互作用

hGaiR2与Cript的相互作用

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：路雅静宫夏霓李天翊徐舒杨予涛徐志卿首都医科大学神经生物学系北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室

目的甘丙肽是一个含29个氨基酸的神经肽,其广泛分布于中枢和外周组织,参与多种生理过程,如:摄食,情绪,记忆,神经生长等。目前已经克隆出三种甘丙肽受体,分别是GalR1,GalR2,GalR3,它们都属于G蛋白偶联受体,在同一物种中,各种GalR之间呈... 详细信息

目的甘丙肽是一个含29个氨基酸的神经肽,其广泛分布于中枢和外周组织,参与多种生理过程,如:摄食,情绪,记忆,神经生长等。目前已经克隆出三种甘丙肽受体,分别是GalR1,GalR2,GalR3,它们都属于G蛋白偶联受体,在同一物种中,各种GalR之间呈现很低序列相似性。本研究主要关注的是GalR2的功能及转运。方法酵母双杂交实验寻找可以与GalR2相互作用的蛋白。钓出的蛋白再经酵母双转验证,再次证实两种蛋白可以发生相互作用。CO-IP再次验证两种蛋白的可以发生相互作用。结果经过以上我们找到了Cript这个蛋白,Cript是一个有101个氨基酸的小分子量蛋白,其可与微管蛋白结合,帮助PSD95蛋白与微管的锚定。而Cript与GalR2的结合发挥什么作用,需要继续去探寻。目前已经克隆出Cript,并且用CO-IP的方法验证出Cript确实可以与GalR2发生相互作用。

关键词： GalR2 Cript 酵母双杂交

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hGalR2与Cript的相互作用

hGalR2与Cript的相互作用

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五届会员代表大会

作者：路雅静宫夏霓李天翊徐舒杨予涛徐志卿首都医科大学神经生物学系北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室北京100069

目的甘丙肽是一个含29个氨基酸的神经肽,其广泛分布于中枢和外周组织,参与多种生理过程,如：摄食,情绪,记忆,神经生长等.目前已经克隆出三种甘丙肽受体,分别是GalR1,GalR2,GalR3,它们都属于G蛋白偶联受体,在同一物种中,各种GalR之间呈... 详细信息

目的甘丙肽是一个含29个氨基酸的神经肽,其广泛分布于中枢和外周组织,参与多种生理过程,如：摄食,情绪,记忆,神经生长等.目前已经克隆出三种甘丙肽受体,分别是GalR1,GalR2,GalR3,它们都属于G蛋白偶联受体,在同一物种中,各种GalR之间呈现很低序列相似性.本研究主要关注的是GalR2的功能及转运.方法酵母双杂交实验寻找可以与GalR2相互作用的蛋白.钓出的蛋白再经酵母双转验证,再次证实两种蛋白可以发生相互作用.CO-IP再次验证两种蛋白的可以发生相互作用.结果经过以上我们找到了Cript这个蛋白,Cript是一个有101个氨基酸的小分子量蛋白,其可与微管蛋白结合,帮助PSD95蛋白与微管的锚定.而Cript与GalR2的结合发挥什么作用,需要继续去探寻.目前已经克隆出Cript,并且用CO-IP的方法验证出Cript确实可以与GalR2发生相互作用.

关键词： GalR2 Cript 酵母双杂交

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Nurr1及其在帕金森病诊断与基因治疗中的应用

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生理科学进展 2010年第3期41卷 205-208页

作者：杨爽鲁玲玲杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京100069 首都医科大学

Nurr1是属于核受体超家族的一种转录因子,对多巴胺能神经元的分化、存活和功能维持起重要作用,其功能异常与帕金森病密切相关。本文将从Nurr1在中枢神经系统的分布、Nurr1与多巴胺能神经元发育、Nurr1与帕金森病发病的关系及其在帕金森... 详细信息

Nurr1是属于核受体超家族的一种转录因子,对多巴胺能神经元的分化、存活和功能维持起重要作用,其功能异常与帕金森病密切相关。本文将从Nurr1在中枢神经系统的分布、Nurr1与多巴胺能神经元发育、Nurr1与帕金森病发病的关系及其在帕金森病的诊断与基因治疗中的应用等方面作一简要综述。

关键词：核受体相关因子1 多巴胺能神经元帕金森病

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Nrf3通路参与星形胶质细胞对抗鱼藤酮毒性的保护作用

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中国生物工程杂志 2010年第1期30卷 19-24页

作者：苏玉金曹倩鲁玲玲孙晓红高华赵莎莎杨慧首都医科大学北京市神经外科研究所北京100069 首都医科大学北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京100069

目的:寻找星形胶质细胞在对抗由鱼藤酮导致的氧化应激中发挥保护作用的相关分子并探讨其作用机制。方法:小鼠多巴胺能MN9D细胞分别在星形胶质细胞条件培养液(ACM)与星形胶质细胞用新鲜培养基中培养24小时后加入鱼藤酮作用48小时。细胞计... 详细信息

目的:寻找星形胶质细胞在对抗由鱼藤酮导致的氧化应激中发挥保护作用的相关分子并探讨其作用机制。方法:小鼠多巴胺能MN9D细胞分别在星形胶质细胞条件培养液(ACM)与星形胶质细胞用新鲜培养基中培养24小时后加入鱼藤酮作用48小时。细胞计数,评价星形胶质细胞条件培养液对MN9D细胞的保护作用。利用基因芯片技术寻找MN9D细胞在ACM处理后发生表达上调或下调基因,并对这些基因进行分析,找出有意义基因。结果:在不同作用时间和鱼藤酮浓度梯度下,经过ACM处理的MN9D细胞活性显著高于在普通培养基中培养的细胞。初步得到104个差异表达基因,其中62个表达上调基因,42个表达下调基因。这些基因主要与凋亡、肿瘤、细胞周期、代谢、信号转导、转录调节、翻译调节和传递蛋白等相关。对其中的Atp5a1,Nrf3基因进行分析,发现Nrf3通路参与了ACM的保护作用。结论:ACM能保护MN9D细胞抵抗鱼藤酮所致的细胞毒性,Atp5a1,Nrf3,GCL,NQO1等基因经ACM处理后发生差异表达,可能是星形胶质细胞保护作用的部分下游信号通路。

关键词：帕金森病星形胶质细胞基因芯片

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5-HT_(1A)受体蛋白在PC12细胞膜转运的动态变化

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基础医学与临床 2010年第5期30卷 487-491页

作者：金艳燕吕琼闫竹青高尔静赵春礼张进禄徐志卿首都医科大学神经生物学系北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100069

目的在神经元样PC12活细胞上进行实时、可视和定量研究5-羟色胺1A受体的时空分布、膜转运和信号传导机制。方法运用RT-PCR方法获得小鼠5-HT1A基因,并插入到pEGFP-N1真核表达载体中。采用阳离子脂质体方法将质粒转染至PC12细胞和HEK293... 详细信息

目的在神经元样PC12活细胞上进行实时、可视和定量研究5-羟色胺1A受体的时空分布、膜转运和信号传导机制。方法运用RT-PCR方法获得小鼠5-HT1A基因,并插入到pEGFP-N1真核表达载体中。采用阳离子脂质体方法将质粒转染至PC12细胞和HEK293细胞中,通过G418筛选出稳定表达5-HT1A-EGFP的PC12细胞系。运用激光共聚焦成像系统观察活细胞中5-HT1A-EGFP的表达情况,利用光漂白荧光恢复(FRAP)技术在PC12细胞膜局部漂白后观察5-HT1A-EGFP荧光蛋白在细胞膜上转运的情况。结果克隆所获得的小鼠5-HT1A基因是准确的。5-HT1A-EGFP蛋白清晰的分布于PC12和HKE293细胞膜上。通过FRAP技术观察到漂白区域的细胞膜在100s内有部分恢复,说明受体在细胞膜上发生转运。结论建立了稳定表达5-HT1A-EGFP融合蛋白的PC12细胞系,并利用活细胞成像和FRAP技术观察分析并证实了5-HT1A受体在PC12细胞的膜表面的表达和转运的动态变化。

关键词： 5-羟色胺1A受体(5-HT1A) G蛋白偶联受体(GPCRs) 绿色荧光蛋白(GFP) PC12细胞光漂白荧光恢复技术(FRAP)

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