检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2004年第7期24卷 17-22页

作者：李娜杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054

近年来 ,围绕骨髓基质细胞分化机制的问题 ,大致有两种假说。有人认为骨髓基质细胞在其细胞的基因组内有几套“程序” ,在不同的外界环境下 ,会有相应的一套基因开启 ,从而分化成某种终末细胞。而另外一些人则认为骨髓基质细胞是通过与... 详细信息

近年来 ,围绕骨髓基质细胞分化机制的问题 ,大致有两种假说。有人认为骨髓基质细胞在其细胞的基因组内有几套“程序” ,在不同的外界环境下 ,会有相应的一套基因开启 ,从而分化成某种终末细胞。而另外一些人则认为骨髓基质细胞是通过与不同组织的细胞发生融合而实现向该组织分化的。在前人分化实验机理研究的基础上 ,认为骨髓基质细胞在分化成一些中胚层来源的细胞 ,如脂肪细胞 ,血细胞等时 ,可以直接通过靶基因的开启或关闭分化。而在跨胚层向外胚层或内胚层分化时 ,则需要通过细胞融合这一过程来最终分化成这些组织器官的特定细胞。

关键词：骨髓基质细胞干细胞分化机制融合

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骨髓基质细胞在细胞移植与基因治疗中的应用

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中国生物工程杂志 2003年第10期23卷 9-14页

作者：张敏杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054

骨髓基质细胞是研究最广泛的成体干细胞 ,用于临床细胞移植与基因治疗有诸多优点 ,论述了具有多向分化潜能的骨髓基质细胞。

关键词：骨髓基质细胞细胞移植基因治疗干细胞

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5-HT_(1A)受体蛋白在PC12细胞膜转运的动态变化

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基础医学与临床 2010年第5期30卷 487-491页

作者：金艳燕吕琼闫竹青高尔静赵春礼张进禄徐志卿首都医科大学神经生物学系北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100069

目的在神经元样PC12活细胞上进行实时、可视和定量研究5-羟色胺1A受体的时空分布、膜转运和信号传导机制。方法运用RT-PCR方法获得小鼠5-HT1A基因,并插入到pEGFP-N1真核表达载体中。采用阳离子脂质体方法将质粒转染至PC12细胞和HEK293... 详细信息

目的在神经元样PC12活细胞上进行实时、可视和定量研究5-羟色胺1A受体的时空分布、膜转运和信号传导机制。方法运用RT-PCR方法获得小鼠5-HT1A基因,并插入到pEGFP-N1真核表达载体中。采用阳离子脂质体方法将质粒转染至PC12细胞和HEK293细胞中,通过G418筛选出稳定表达5-HT1A-EGFP的PC12细胞系。运用激光共聚焦成像系统观察活细胞中5-HT1A-EGFP的表达情况,利用光漂白荧光恢复(FRAP)技术在PC12细胞膜局部漂白后观察5-HT1A-EGFP荧光蛋白在细胞膜上转运的情况。结果克隆所获得的小鼠5-HT1A基因是准确的。5-HT1A-EGFP蛋白清晰的分布于PC12和HKE293细胞膜上。通过FRAP技术观察到漂白区域的细胞膜在100s内有部分恢复,说明受体在细胞膜上发生转运。结论建立了稳定表达5-HT1A-EGFP融合蛋白的PC12细胞系,并利用活细胞成像和FRAP技术观察分析并证实了5-HT1A受体在PC12细胞的膜表面的表达和转运的动态变化。

关键词： 5-羟色胺1A受体(5-HT1A) G蛋白偶联受体(GPCRs) 绿色荧光蛋白(GFP) PC12细胞光漂白荧光恢复技术(FRAP)

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反义HLA-A2和GDNF共表达逆转录病毒载体的构建和鉴定

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神经解剖学杂志 2005年第2期21卷 103-107页

作者：段德义张海燕徐群渊李颖杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054

为构建GDNF和反义HLA -A2共表达的逆转录病毒载体,将人GDNF酶切片段(XhoI/SalI)克隆于逆转录病毒载体pLNCX2 的XhoI位点,再将HLA A2cDNA片段反向克隆于上述重组载体的HindIII/SalI位点,对其作酶切鉴定和测序后转染PA317包装细胞系进行... 详细信息

为构建GDNF和反义HLA -A2共表达的逆转录病毒载体,将人GDNF酶切片段(XhoI/SalI)克隆于逆转录病毒载体pLNCX2 的XhoI位点,再将HLA A2cDNA片段反向克隆于上述重组载体的HindIII/SalI位点,对其作酶切鉴定和测序后转染PA317包装细胞系进行病毒的包装。收获重组病毒感染的NIH3T3并进行病毒滴度的测定,GDNF及HLA- A2表达的RT -PCR检测,进一步感染人胚肺成纤维细胞,观察GDNF分泌情况。结果表明:GDNF和反义HLA -A2两片段的序列和插入方向完全正确,包装后获得的重组病毒的平均滴度为5×105 CFU/ml。RT PCR显示:在小鼠源性的PA317细胞中有人GDNF和HLA A2的表达,ELISA法测得病毒感染人胚肺成纤维细胞上清液中GDNF含量为450pg/ml。通过本实验,我们获得能共表达GDNF和反义HLA -A2的重组逆转录病毒,其转染的人成纤维细胞具有合成GDNF的能力。

关键词：反义HLA-A2 GDNF 基因表达逆转录病毒载体 Parkinson病神经退行性疾病人成纤维细胞基因治疗

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α-突触核蛋白各结构域与MN9D细胞线粒体的关系

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解剖学报 2008年第5期39卷 626-630页

作者：张韬赵焕英赵春礼杨慧首都医科大学神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室神经变性病教育部重点实验室北京100069

目的探讨α-突触核蛋白（α-synuclein）各结构域与MN9D细胞线粒体的关系。方法用PCR方法获得α-synuclein/1~65（N），α-synuclein/61~95（A）及α-synuclein/96~140（C）基因片段，克隆入真核表达质粒pLNCX2，经测序正确后以脂质体转... 详细信息

目的探讨α-突触核蛋白（α-synuclein）各结构域与MN9D细胞线粒体的关系。方法用PCR方法获得α-synuclein/1~65（N），α-synuclein/61~95（A）及α-synuclein/96~140（C）基因片段，克隆入真核表达质粒pLNCX2，经测序正确后以脂质体转染PT-67细胞，挑取单克隆并扩增，收集上清感染MN9D细胞，分别用Real Time PCR检测细胞基因表达水平，免疫组织化学染色检测蛋白表达，激光扫描共焦显微镜检测蛋白与线粒体共定位，流式细胞术检测细胞状态及线粒体膜电位状态。结果成功构建了pLNCX2/N、pLNCX2/NAC及pLNCX2/C基因片段的重组真核表达质粒，获得了可稳定表达α-synuclein各基因片段的MN9D细胞株。通过激光扫描共焦显微镜观察，可见α-synuclein/N端与线粒体存在共定位关系；α-synuclein/NAC主要在核内聚集表达；α-synuclein/C端在胞质和胞核内均有表达。JC1染色流式细胞术检测显示，过表达α-synuclein/N实验组细胞线粒体膜电位降低。结论α-synuclein的N端可能定位于线粒体，并参与调节线粒体功能；α-synuclein/NAC虽具有疏水性但却能穿过核膜，聚集在核仁周围；α-synuclein的C端定位于胞质和核内可能参与多种细胞功能。

关键词： α-突触核蛋白片段线粒体帕金森病流式细胞术免疫组织化学 MN9D细胞

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人脐血干细胞定向分化为神经细胞的诱导方法

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中国临床康复 2006年第17期10卷 143-145页

作者：王屹季凤清杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室北京市100069 首都医科大学组织学胚胎学教研室北京市100069

目的:分析人脐血干细胞在体外和体内向神经细胞分化的不同诱导条件。资料来源:应用计算机检索Medline数据库1990-01/2005-10相关脐带血干细胞向神经细胞分化文章,检索词为“umbilicalcordblood,mesenchymalstemcells,neuraldifferentiation”,分别组合进行检索,限定文章语言种类为English,同时计算机检索中文期刊数据库2000-01/2005-10相关脐带血间充质干细胞向神经分化文章,检索词为:“脐带血,间充质干细胞,神经分化”,分别组合进行检索,限定文章语言种类为中文。资料选择:初审资料,选取包括人脐血干细胞分化为神经细胞的文章。纳入标准:①脐带血间充质干细胞。②间充质干细胞向神经细胞分化。排除标准:①脐带血造血干细胞。②文献综述,重复研究,Meta分析类文章。资料提炼:共收集到68篇符合要求的文章,查找全文,选取其中近期相关文章19篇。将所有文章按照脐血干细胞诱导分化体外实验和体内实验进行分类综合。资料综合:脐带血干细胞来源丰富、采集方便、安全,且体外扩增迅速,在体外和体内一定条件下可以分化为神经细胞,然而不同的诱导条件对其分化的影响有不同,人们运用各种手段希望能找到诱导效率较高的诱导方法,包括几种化学诱导剂联合,生长因子之间配伍,化学诱导剂与生长因子联合,或应用接近生理状态的条件培养基等。在改进诱导条件的同时人们开始关注单一表型的细胞群作为实验对象是否能有效地提高诱导效率。研究者以期找到一种高效率而具有应用价值的诱导方法,为将脐带血干细胞应用于神经科学领域提供有力的证据。结论:人脐血干细胞在体外和体内一定条件下可以分化为神经细胞,应用于中枢神经系统疾病的细胞治疗具有广阔前景,然而寻找高效实用的诱导方法仍需要进一步研究。

关键词：干细胞细胞分化综述文献神经细胞

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Nrf3通路参与星形胶质细胞对抗鱼藤酮毒性的保护作用

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中国生物工程杂志 2010年第1期30卷 19-24页

作者：苏玉金曹倩鲁玲玲孙晓红高华赵莎莎杨慧首都医科大学北京市神经外科研究所北京100069 首都医科大学北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京100069

目的:寻找星形胶质细胞在对抗由鱼藤酮导致的氧化应激中发挥保护作用的相关分子并探讨其作用机制。方法:小鼠多巴胺能MN9D细胞分别在星形胶质细胞条件培养液(ACM)与星形胶质细胞用新鲜培养基中培养24小时后加入鱼藤酮作用48小时。细胞计... 详细信息

目的:寻找星形胶质细胞在对抗由鱼藤酮导致的氧化应激中发挥保护作用的相关分子并探讨其作用机制。方法:小鼠多巴胺能MN9D细胞分别在星形胶质细胞条件培养液(ACM)与星形胶质细胞用新鲜培养基中培养24小时后加入鱼藤酮作用48小时。细胞计数,评价星形胶质细胞条件培养液对MN9D细胞的保护作用。利用基因芯片技术寻找MN9D细胞在ACM处理后发生表达上调或下调基因,并对这些基因进行分析,找出有意义基因。结果:在不同作用时间和鱼藤酮浓度梯度下,经过ACM处理的MN9D细胞活性显著高于在普通培养基中培养的细胞。初步得到104个差异表达基因,其中62个表达上调基因,42个表达下调基因。这些基因主要与凋亡、肿瘤、细胞周期、代谢、信号转导、转录调节、翻译调节和传递蛋白等相关。对其中的Atp5a1,Nrf3基因进行分析,发现Nrf3通路参与了ACM的保护作用。结论:ACM能保护MN9D细胞抵抗鱼藤酮所致的细胞毒性,Atp5a1,Nrf3,GCL,NQO1等基因经ACM处理后发生差异表达,可能是星形胶质细胞保护作用的部分下游信号通路。

关键词：帕金森病星形胶质细胞基因芯片

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人Nurr1基因克隆及其在真核细胞中的表达

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神经解剖学杂志 2005年第3期21卷 247-251页

作者：张京钟余爽段德义赵春礼徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054

为探讨Nurr1基因治疗Parkinson病的可行性,本研究克隆了中国人核相关受体1(nuclearrelatedreceptor1,Nurr1)基因,并重组携带Nurr1基因的真核表达载体,为该研究提供分子生物学基础。实验采用反转录聚合酶链式反应(RTPCR)方法从人胎儿脑... 详细信息

为探讨Nurr1基因治疗Parkinson病的可行性,本研究克隆了中国人核相关受体1(nuclearrelatedreceptor1,Nurr1)基因,并重组携带Nurr1基因的真核表达载体,为该研究提供分子生物学基础。实验采用反转录聚合酶链式反应(RTPCR)方法从人胎儿脑中获取Nurr1cDNA,将其克隆至pGEMTEasy载体中;测序鉴定后,重组携带Nurr1基因的逆转录病毒载体pLNCX2Nurr1;通过脂质体将重组载体转染PT67包装细胞系,用病毒上清感染NIH3T3细胞系以检测病毒滴度。结果发现,RTPCR扩增得到人Nurr1cDNA片段,序列与GenBank登录的序列一致;将Nurr1基因亚克隆至逆转录病毒载体得到插入方向正确的重组载体pLNCX2Nurr1,病毒上清滴度为2×105CFU/ml。结果表明本实验获得人Nurr1基因cDNA序列,检测到Nurr1基因在真核细胞中表达,并得到较高滴度的病毒上清。

关键词：人Nurr1基因基因克隆基因表达帕金森病基因治疗

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人脐血非造血干细胞的基本特性

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中国临床康复 2006年第29期10卷 50-52,i0002页

作者：王屹季凤清孙海梅赵春礼曾晓蓓杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室北京市100069 首都医科大学组织学胚胎学教研室北京市100069

目的:通过对体外培养人脐血来源非造血干细胞生长特性的观察和对细胞免疫表型的检测,探讨人脐血来源非造血干细胞的一般特性,为进一步研究人脐血来源非造血干细胞提供依据。方法:实验于2005-01/10在首都医科大学北京神经科学研究所和首... 详细信息

目的:通过对体外培养人脐血来源非造血干细胞生长特性的观察和对细胞免疫表型的检测,探讨人脐血来源非造血干细胞的一般特性,为进一步研究人脐血来源非造血干细胞提供依据。方法:实验于2005-01/10在首都医科大学北京神经科学研究所和首都医科大学组织学胚胎学教研室实验室完成。脐带血由首都医科大学附属天坛医院提供,经密度梯度离心法分离新鲜脐带血,获取的单个核细胞进行培养。①倒置显微镜下观察细胞形态。②培养基中加入白血病抑制因子或用Mescencult间充质干细胞培养基进行培养,记录细胞生长状况。③流式细胞术分析脐血单个核细胞的免疫表型。结果:①人脐血非造血干细胞形态观察:较低密度接种细胞并不能形成大量贴壁细胞,而以5×106细胞密度接种则在48～72h后出现贴壁的梭形细胞,培养过程中细胞形态逐渐形成均一梭形。②生长特性:人脐血非造血干细胞接种5d后增殖速度加快,随后的几天内保持较快的增殖速度,15d后进入平台期。高糖DMEM培养基+胎牛血清和高糖DMEM培养基+胎牛血清+白血病抑制因子,两种培养体系在细胞增殖上未显示差异,白血病抑制因子并没有显著改善人脐血非造血干细胞生长增殖速度。③免疫表型:新鲜脐血经分离得到的单个核细胞中有少量CD34阳性细胞,CD90,CD166阳性细胞比例分别为(24.18±5.46)%和(36.44±6.26)%;人脐血非造血干细胞体外培养10d左右无CD34阳性细胞,CD166阳性细胞的比例达(76.48±4.54)%,较单个核细胞中CD166阳性细胞比例明显增高,并且表达HLA-ABC,而少量表达HLA-DR。结论:合适的细胞接种密度有利于人脐血非造血干细胞贴壁生长。白血病抑制因子并不能增加体外培养的人脐血非造血干细胞的生长增殖速度。人脐血非造血干细胞体外培养10d左右可以获得纯度较高的CD166阳性细胞。

关键词：脐带胎血流式细胞术

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卡马西平增加癫痫模型大鼠脑内P-糖蛋白的表达

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基础医学与临床 2007年第11期27卷 1208-1213页

作者：吴春春丁成赟徐群渊孙晓红段德义首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京100069 首都医科大学天坛医院神经内科北京100050

目的探讨癫痫发作与抗癫痫药物卡马西平(CBZ)对多药耐药基因编码的P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。方法给雌性SD大鼠侧脑室注射海人酸(KA)或PBS,成模后再口服CBZ。成模或给药后3、5、7、14、21和28d灌杀大鼠取脑,用免疫组化和双标免疫染色... 详细信息

目的探讨癫痫发作与抗癫痫药物卡马西平(CBZ)对多药耐药基因编码的P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。方法给雌性SD大鼠侧脑室注射海人酸(KA)或PBS,成模后再口服CBZ。成模或给药后3、5、7、14、21和28d灌杀大鼠取脑,用免疫组化和双标免疫染色对脑中P-gp进行半定量及定位分析。尼氏染色观察海马神经元的变化。结果模型大鼠脑电图及行为变化与人类癫痫相似,CBZ对癫痫发作没有作用。癫痫发作后第5天脑P-gp表达水平增加,7d时最高,21d后恢复到正常水平。阳性产物主要位于海马的毛细血管内皮细胞,也见于皮层的毛细血管及神经元。CBZ对正常大鼠P-gp的表达没有影响。CBZ+KA组动物海马P-gp的表达与KA组动物相似,但7d时其表达明显增强。结论癫痫发作可诱导P-gp的表达;卡马西平在癫痫发作中也参与了P-gp的高表达。

关键词：难治性癫痫 P-糖蛋白海人酸卡马西平

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