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作者：马克乾孙静鲁润春冉然杨予涛贾旺徐志卿首都医科大学神经生物学系北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室

垂体腺瘤是颅内常见的良性肿瘤,占颅内肿瘤总数的15%。目前药物治疗效果欠佳,手术难以完全切除,术后内分泌缓解率低,复发率高。因此有必要对其侵袭生长方式机制进行研究,从而开发出新的诊治分子靶点。甘丙肽是脑内重要的神经肽之一,其... 详细信息

垂体腺瘤是颅内常见的良性肿瘤,占颅内肿瘤总数的15%。目前药物治疗效果欠佳,手术难以完全切除,术后内分泌缓解率低,复发率高。因此有必要对其侵袭生长方式机制进行研究,从而开发出新的诊治分子靶点。甘丙肽是脑内重要的神经肽之一,其受体有三个亚型,均属于G蛋白耦联受体家族,可参与许多大脑功能活动,包括情绪、学习和记忆、疼痛和镇痛、内分泌及摄食等过程,研究发现甘丙肽及其受体与下丘脑-垂体-肾上腺轴关系密切,且我们以往的工作也证明甘丙肽可以抑制肿瘤细胞的增殖。目的:探讨甘丙肽及其受体在垂体腺瘤侵袭性发生中的作用及其可能的机制,并进一步研究甘丙肽及其相关的调节因子是否可作为一种可能的治疗方法应用于临床。结果:通过实时定量PCR同时检测bFGF、甘丙肽及其三个受体亚型(甘丙肽受体1型、2型和3型)的表达,发现:(1)侵袭组中bFGF的表达高于非侵袭组,组间比较有显著性差异;(2)非侵袭组中甘丙肽的表达高于侵袭组,组间比较有显著性差异,而其三个受体亚型的表达组间的差别比较无显著性差异;(3)甘丙肽的表达与垂体腺瘤的侵袭性呈负相关。结论:甘丙肽可能可以作为评价垂体腺瘤侵袭性的生物学指标,且可能对垂体腺瘤侵袭性有抑制作用,有可能成为侵袭性垂体腺瘤临床诊治的新靶点。

关键词：垂体腺瘤侵袭性甘丙肽相关关系研究

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癫痫的甘丙肽机制研究

癫痫的甘丙肽机制研究

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：徐志卿首都医科大学神经生物学系北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室

癫痫是常见的严重危害人类健康的慢性脑部疾病之一,约60%～80%的癫痫病人经过常规抗癫痫药物治疗发作可得到控制和缓解,但是,有一部分病人对药物治疗的效果较差,从新的角度开发寻找治疗的思路和靶点成为非常迫切的问题。甘丙肽（Galani...

癫痫是常见的严重危害人类健康的慢性脑部疾病之一,约60%～80%的癫痫病人经过常规抗癫痫药物治疗发作可得到控制和缓解,但是,有一部分病人对药物治疗的效果较差,从新的角度开发寻找治疗的思路和靶点成为非常迫切的问题。甘丙肽（Galanin）是脑内重要的神经肽之一,甘丙肽及其受体在中枢神经系统内有较广泛的分布,参与许多大脑功能活动,包括情绪、学习和记忆、疼痛、内分泌及摄食等生理过程。此外,越来越多的研究报道证明甘丙肽及其受体在癫痫的发病机制中可能起重要作用。如癫痫点燃动物模型可见导致齿状回甘丙肽源性神经支配纤维的缺失,海马内注入甘丙肽受体激动剂可终止惊厥的发作。甘丙肽基因缺失小鼠比野生型小鼠具有更高的惊厥发作易感性,更短的时间即可诱导惊厥的发作及导致更严重的惊厥发作症状。而过表达甘丙肽基因小鼠可通过抑制海马CA3区的谷氨酸释放和提高海马的后放电阈值以抑制惊厥发作的进展。应用Real-time PCR技术我们发现pilocarpine癫痫大鼠持续状态（status epilepticus,SE）后24小时,甘丙肽、GalR1、GalR3在背侧和腹侧海马表达增高;SE后7天,GalR1在背侧海马的表达增高,而galanin腹侧海马的表达增高;SE后8周,背侧海马GalR1表达增高,腹侧海马没有明显变化。提示在癫痫发作的急性期galanin、GalR1和GalR3变化较为明显,而在癫痫的潜伏期和慢性期以GalR1在背侧海马变化较为明显。同时,我们发现癫痫大鼠SE后24小时,背侧海马、腹侧海马、丘脑室旁核和丘脑前背侧核可看见甘丙肽阳性神经元,提示甘丙肽可能在颞叶癫痫活动扩布的脑核团内起重要的作用。以上结果提示,甘丙肽及其受体在癫痫发生的不同时相及不同部位可能发挥着不同的作用。

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酵母双杂交筛选甘丙肽2型受体C端相互作用蛋白

酵母双杂交筛选甘丙肽2型受体C端相互作用蛋白

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中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会

作者：宫夏霓路雅静杨予涛徐志卿首都医科大学神经生物学系北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室

甘丙肽(Galanin)是一个广泛分布于神经系统和外周组织中的神经肽。通过与其受体结合,Galanin参与调节认知、觉醒、摄食、生殖等生理过程。过去的研究表明,甘丙肽2型受体(GalR2)具有抗抑郁的作用,因此我们对于GalR2进行了重点的研究。Ga... 详细信息

甘丙肽(Galanin)是一个广泛分布于神经系统和外周组织中的神经肽。通过与其受体结合,Galanin参与调节认知、觉醒、摄食、生殖等生理过程。过去的研究表明,甘丙肽2型受体(GalR2)具有抗抑郁的作用,因此我们对于GalR2进行了重点的研究。GalR2属于G蛋白耦联受体家族(GPCRs),其C端胞内区对激活下游通路和调控受体转运都起着重要作用。我们用人GalR2的C端作为bait,人脑cDNA文库作为prey进行酵母双杂交实验,筛选与GalR2-C端相互作用的蛋白。实验结果显示,与GalR2-C端相互作用的蛋白大致分为如下几类:1.与受体内在化和转运相关,如clathrin;2.参与磷酸化修饰;3.氧化还原及能量代谢相关;4.调控细胞凋亡;5.与mRNA结合调控其剪接、编辑和翻译,如含有RRM结构域的蛋白可参与mRNA前体的剪接;6.与DNA结合调控基因转录,如一些含有锌指结构的蛋白可以与DNA结合而调控转录;7.参与细胞粘附作用;8.分子伴侣;9.调控化学基团转移。这提示我们GalR2在细胞内存在复杂的调控机制。筛选和鉴定与GalR2-C端相互作用蛋白,可以为进一步研究GalR2分选、转运和调节的分子和细胞机制提供重要的实验依据和思路。

关键词：甘丙肽2型受体(GalR2) G蛋白耦联受体(GPCR) 酵母双杂交

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hGaiR2与Cript的相互作用

hGaiR2与Cript的相互作用

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：路雅静宫夏霓李天翊徐舒杨予涛徐志卿首都医科大学神经生物学系北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室

目的甘丙肽是一个含29个氨基酸的神经肽,其广泛分布于中枢和外周组织,参与多种生理过程,如:摄食,情绪,记忆,神经生长等。目前已经克隆出三种甘丙肽受体,分别是GalR1,GalR2,GalR3,它们都属于G蛋白偶联受体,在同一物种中,各种GalR之间呈... 详细信息

目的甘丙肽是一个含29个氨基酸的神经肽,其广泛分布于中枢和外周组织,参与多种生理过程,如:摄食,情绪,记忆,神经生长等。目前已经克隆出三种甘丙肽受体,分别是GalR1,GalR2,GalR3,它们都属于G蛋白偶联受体,在同一物种中,各种GalR之间呈现很低序列相似性。本研究主要关注的是GalR2的功能及转运。方法酵母双杂交实验寻找可以与GalR2相互作用的蛋白。钓出的蛋白再经酵母双转验证,再次证实两种蛋白可以发生相互作用。CO-IP再次验证两种蛋白的可以发生相互作用。结果经过以上我们找到了Cript这个蛋白,Cript是一个有101个氨基酸的小分子量蛋白,其可与微管蛋白结合,帮助PSD95蛋白与微管的锚定。而Cript与GalR2的结合发挥什么作用,需要继续去探寻。目前已经克隆出Cript,并且用CO-IP的方法验证出Cript确实可以与GalR2发生相互作用。

关键词： GalR2 Cript 酵母双杂交

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甘丙肽受体2型受体与β-arrestin在内化转运中的相互作用

甘丙肽受体2型受体与β-arrestin在内化转运中的相互作用

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中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会

作者：闫竹青金艳燕吕琼杨予涛张进禄徐志卿首都医科大学神经生物学系北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室

甘丙肽是一种含有二十九个氨基酸的神经肽,广泛分布于中枢神经系统和外周组织中,参与多种重要的生理和病理功能。目前已经克隆出三种甘丙肽受体,甘丙肽1型受体（GalR1）、甘丙肽2型受体（GalR2）和甘丙肽3型受体（GalR3）,均为G蛋白偶... 详细信息

甘丙肽是一种含有二十九个氨基酸的神经肽,广泛分布于中枢神经系统和外周组织中,参与多种重要的生理和病理功能。目前已经克隆出三种甘丙肽受体,甘丙肽1型受体（GalR1）、甘丙肽2型受体（GalR2）和甘丙肽3型受体（GalR3）,均为G蛋白偶联受体。本实验构建了带mRFP标签的β-arrestin真核表达载体,并将其转染到HEK293细胞上,进而应用免疫荧光细胞化学方法结合激光扫描共聚焦显微技术观察GalR2蛋白的亚细胞分布和膜转运过程。GalR2-EGFP主要分布在细胞膜上,少量分布于胞浆中,而β-arrestin-mRFP则只见于胞浆中。给予甘丙肽(10mol/L)刺激后,原本在胞浆中分布的β-arrestin在近膜处聚积,与GalR2-EGFP有共定位,随着时间的延长,受体内在化,并仍与β-arrestin共定位。用免疫荧光组化标记内源性β-arrestin,在稳定表达EGFP标记的GalR2融合蛋白的PC12细胞上,共聚焦显微镜下可以看到同样的现象。那么受体入胞后是否进入早期内涵体呢?将特异性定位于早期内涵体的蛋白EEA1进行免疫荧光标记,可以看到,受体入胞后与EEA1存在明显的共定位。然后选择较特异性定位于晚期内涵体的rab7进行标记,可以看到,给予刺激后,受体在胞内与rab7存在明显的共定位,且随着时间的延长共定位更加明显。本实验得出如下结论:配体激活后的GalR2与β-arrestin相互作用,共同内在化;内化后的GalR2转运到早期和晚期内涵体中。

关键词：甘丙肽受体 arrestin

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甘丙肽及其受体在抑郁症模型中的表达及相关性研究

甘丙肽及其受体在抑郁症模型中的表达及相关性研究

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中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会

作者：王鹏孙静徐志卿首都医科大学神经生物学系北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室

目的:抑郁症是常见的情感障碍之一。抑郁症的病因学机制涉及脑中单胺递质5-羟色胺(5-HT)和/或去甲肾上腺素(NA)系统的功能紊乱。5-HT和NE分别主要起源于脑干中缝核团和蓝斑(LC)并投射到海马和大脑皮层,甘丙肽在中缝背核与5-HT共存,在LC... 详细信息

目的:抑郁症是常见的情感障碍之一。抑郁症的病因学机制涉及脑中单胺递质5-羟色胺(5-HT)和/或去甲肾上腺素(NA)系统的功能紊乱。5-HT和NE分别主要起源于脑干中缝核团和蓝斑(LC)并投射到海马和大脑皮层,甘丙肽在中缝背核与5-HT共存,在LC与NE共存,并对这些神经元有调节作用。因此,探讨甘丙肽及其受体在抑郁症动物模型中的表达变化将有助于阐明抑郁症发病机理。方法:本实验构建慢性温和应激抑郁症动物模型(CMS),用激光捕获显微切割(LMD)的方法精确定位核团,检测甘丙肽及其受体在相关脑区的定位定量分析,以期进一步揭示甘丙肽及其受体在抑郁症中的作用机理。结果:(1)在Open Field实验中,CMS模型组大鼠表现为水平和垂直运动得分均较对照组显著减低。在强迫游泳实验(FST)中,CMS模型组表现出更多的行为绝望,与对照组相比不动时间增多,爬行时间减少。在体重增加量的测量结果为CMS模型组显著减低。在糖水偏好实验中,CMS模型组糖水引用百分比较对照组明显减低。因此,行为学实验均证明我们很好的复制了慢应激抑郁症模型。(2)我们利用LMD技术精确定位核团,结果发现在CMS模型中,海马结构齿状回和LC中的甘丙肽2型受体的mRNA出现上调,中缝背核内侧和中缝背核外侧中的甘丙肽1型受体的mRNA出现上调,而在所有脑区中Gal的mRNA水平均没有出现显著性变化。(3)在相关性研究中表明,LC中甘丙肽2型受体的mRNA表达水平与FST中爬行时间呈负相关。结论:甘丙肽可能是通过其受体参与了抑郁症发病过程,并且不同的受体在不同脑区在抑郁症的发病过程中发挥不同的作用。

关键词：抑郁症模型 CMS 甘丙肽中缝背核模型组相关性研究

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大鼠脊髓损伤后运动终板内乙酰胆碱酯酶和降钙素基因相关肽的变化

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中国康复理论与实践 2008年第11期14卷 1030-1032页

作者：张皑峰欧喜超杨朝阳刘玉军鲁强李晓光首都医科大学附属友谊医院口腔科北京市100050 首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京市100069

目的观察大鼠不同类型脊髓损伤后降钙素基因相关肽(CGRP)与乙酰胆碱酯酶(AChE)在后肢腓肠肌运动终板内的变化,以探讨不同类型脊髓损伤后CGRP和AChE与运动终板退变的关系。方法60只成年Wistar大鼠随机分为假手术组(A组)、切割型脊髓损伤... 详细信息

目的观察大鼠不同类型脊髓损伤后降钙素基因相关肽(CGRP)与乙酰胆碱酯酶(AChE)在后肢腓肠肌运动终板内的变化,以探讨不同类型脊髓损伤后CGRP和AChE与运动终板退变的关系。方法60只成年Wistar大鼠随机分为假手术组(A组)、切割型脊髓损伤组(B组)和撞击型脊髓损伤组(C组),术后1、2、4、10周分别用Karnovsky-Roots直接法染色检测AChE、免疫组化法检测CGRP的变化。结果两损伤组大鼠术后运动终板中CGRP和AChE浓度均下降,但C组10周时有了明显恢复,而B组一直处于较低水平;CGRP的改变早于AChE。结论在大鼠不同类型脊髓损伤后,CGRP和AChE的活性和浓度与运动终板退变的程度不同。

关键词：脊髓损伤运动终板降钙素基因相关肽乙酰胆碱酯酶大鼠

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大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复及前角运动神经元功能的改变

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中国康复理论与实践 2008年第3期14卷 231-233,F0003页

作者：欧喜超杨朝阳刘玉军鲁强张皑峰李晓光首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京市100069 首都医科大学附属友谊医院口腔科北京市100050

目的观察大鼠不同方式脊髓损伤后损伤下段脊髓前角运动神经元内降钙素基因相关肽（CGRP）与乙酰胆碱酯酶（AChE）的变化,并对损伤后后肢运动功能的恢复情况进行比较。方法60只成年Wistar大鼠随机分为假手术组、切割型脊髓损伤组和撞击... 详细信息

目的观察大鼠不同方式脊髓损伤后损伤下段脊髓前角运动神经元内降钙素基因相关肽（CGRP）与乙酰胆碱酯酶（AChE）的变化,并对损伤后后肢运动功能的恢复情况进行比较。方法60只成年Wistar大鼠随机分为假手术组、切割型脊髓损伤组和撞击型脊髓损伤组,采用联合均分（ACOS）神经行为学评定观察损伤后大鼠运动功能的恢复,术后1、2、4、10周,用Karnovsky-Roots直接法染色检测L2～L4段脊髓AChE、免疫组化方法检测CGRP的水平。结果术后1～10周内,撞击组大鼠ACOS得分明显高于切割组,两损伤组大鼠术后前角运动神经元CGRP和AChE的含量均下降,但撞击组10周时有了明显恢复,而切割组一直处于较低水平,且CGRP的改变早于AChE。结论在大鼠不同脊髓损伤后,运动功能变化与前角运动神经元的功能状态具有一定联系;CGRP和AChE可能在对脊髓损伤后运动功能的恢复中起一定作用。

关键词：脊髓损伤评定运动功能降钙素基因相关肽(CGRP) 乙酰胆碱酯酶(AChE) 大鼠

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炎症因素与黑质多巴胺能神经元选择性变性相关性研究

炎症因素与黑质多巴胺能神经元选择性变性相关性研究

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中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第八届全国学术会议

作者：张艳新李军泉徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室

目的观察脑内炎症反应对不同类型神经元的毒性作用,探讨脑内炎症反应在多巴胺能神经元变性过程中的作用。方法健康SD雄性大鼠8只,随机分为生理盐水组和25μg脂多糖组,定位生理盐水或脂多糖注射到右侧脑室,术后12M免疫组化观察多巴胺能... 详细信息

目的观察脑内炎症反应对不同类型神经元的毒性作用,探讨脑内炎症反应在多巴胺能神经元变性过程中的作用。方法健康SD雄性大鼠8只,随机分为生理盐水组和25μg脂多糖组,定位生理盐水或脂多糖注射到右侧脑室,术后12M免疫组化观察多巴胺能神经元,5-羟色胺能神经元,胆碱能神经元的变化。结果（1）免疫组化显示:25μg脂多糖组与对照组相比,多巴胺能神经元胞体变小,突起减少甚至消失,染色变浅;5-羟色胺能神经元及胆碱能神经元没有明显改变。（2）三种类型神经元记数及直径测量显示25μg脂多糖组多巴胺能神经元数目与对照组相比,减少26%（P＜0.01）,其直径与对照组相比减少28.5%（P＜0.01）;25μg脂多糖组5-羟色胺能神经元及胆碱能神经元的数目和直径测量分别与对照组相比没有统计学差异。结论脑室注射脂多糖引发的脑内炎症反应可以导致黑质多巴胺能神经元选择性变性。

关键词：炎症选择性

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PI3K/AKT通路在KA损伤大鼠海马细胞凋亡中的作用

PI3K/AKT通路在KA损伤大鼠海马细胞凋亡中的作用

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中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第八届全国学术会议

作者：方金林徐群渊段德义首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病重点实验室

目的研究PI3K/AKT信号通路在海人酸（KA）损伤SD大鼠海马神经细胞凋亡中的相关作用。方法成年SD大鼠,侧脑室注射KA 1.0μg,术后选取5个时间点（8 h,16 h,1 d,3 d,5 d）通过免疫组化利Westernblot等方法观察相关指标（AKT,P-AKT,mTOR,p-m... 详细信息

目的研究PI3K/AKT信号通路在海人酸（KA）损伤SD大鼠海马神经细胞凋亡中的相关作用。方法成年SD大鼠,侧脑室注射KA 1.0μg,术后选取5个时间点（8 h,16 h,1 d,3 d,5 d）通过免疫组化利Westernblot等方法观察相关指标（AKT,P-AKT,mTOR,p-mTOR,bcl-2,bax,caspase 3,VEGF,Hif-1 a）的改变,对照组注射生理盐水观察同样指标。结果尼氏染色显示海马CA3区锥体细胞8 h时即开始有死亡,3 d时累及CA1区,5 d时可累及整个锥体细胞层。Western blot结果表明AKT在KA损伤大鼠海马内8 h有激活,5 d达最高,bcl-2 8 h,16 h表达增加,1 d,3 d,5 d有所减弱;bax于3 d时表达最强,5 d时有所减弱;VEGF 16 h、1 d表达增加,5 d有所减弱。免疫组化显示Caspase-3于1 d、3 d时表达增加。对照组AKT无激活,bcl-2、bax、VEGF水平无变化,锥体细胞无损伤。结论 KA损伤SD大鼠海马组织中bcl-2和VEGF等抗凋亡蛋白早期即升高,但凋亡成分bax和Caspase-3蛋白随之明显升高,最终导致细胞发生凋亡。

关键词：海人酸 PI3K/AKT通路大鼠

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