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Forskolin上调MN9D细胞Nurr1的表达及Nurr1过表达对酪氨酸羟化酶的影响

解剖学报 2005年第4期36卷 342-345页

作者：赵咏梅张海燕刘扬赵春礼苏玉金李俊发徐群渊首都医科大学宣武医院北京100053 首都医科大学细胞生物学系北京100054 首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054

目的寻找能激活MN9D细胞内源性孤儿核受体(Nurrl)表达的信号分子,研究Nurrl表达增高对酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响,探讨激活Nurrl表达的信号机制。方法用蛋白激酶A激动剂Forskolin或蛋白激酶C激动剂PMA作用于MN9D细胞,用免疫荧光细胞化... 详细信息

目的寻找能激活MN9D细胞内源性孤儿核受体(Nurrl)表达的信号分子,研究Nurrl表达增高对酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响,探讨激活Nurrl表达的信号机制。方法用蛋白激酶A激动剂Forskolin或蛋白激酶C激动剂PMA作用于MN9D细胞,用免疫荧光细胞化学及Westernblot方法检测MN9D细胞内源性Nurrl表达的变化,以及Nurrl表达增加对TH表达的影响。利用PKA信号转导通路的特异性抑制剂H89探讨激活Nurrl表达的信号机制。结果1·从加入Forskolin1h起,直至6h,MN9D细胞Nurrl表达比未加Forskolin组明显增加(P<0·05);Forskolin主要增加MN9D细胞核内Nurrl含量,而细胞浆内Nurrl含量变化不明显;Forskolin作用后MN9D细胞TH表达无明显变化。2·用蛋白激酶A的特异性抑制剂H89预处理后,Forskolin仍具有增加Nurrl表达的作用。结论Forskolin可增加MN9D细胞内源性Nurrl表达及核转位,单纯Nurrl表达及核转位增加不影响MN9D细胞TH的表达,TH表达的激活可能还需要其他特殊的细胞(或神经元)环境或共激活因子的共同作用。Forskolin增加MN9D细胞内源性Nurrl表达及核转位的作用不是主要通过激活PKA信号转导通路完成的。

关键词：内源性孤儿核受体酪氨酸羟化酶蛋白激酶A 信号机制 MN9D细胞

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一氧化碳对脂多糖诱导大鼠纹状体炎性反应后的多巴胺能神经元的影响

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中华老年医学杂志 2007年第6期26卷 463-467页

作者：周春来张进禄李继梅霍洁薛启蓂徐群渊首都医科大学北京友谊医院神经内科神经生化室 100050 首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室

目的观察脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导大鼠纹状体炎性反应2周后，急性一氧化碳（carbonmonoxide，CO）中毒对黑质多巴胺（dopamine，DA）能神经元的影响。方法160只SD雄性大鼠随机分为CO组、LPS组、CO＋LPS组和对照组，观察... 详细信息

目的观察脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导大鼠纹状体炎性反应2周后，急性一氧化碳（carbonmonoxide，CO）中毒对黑质多巴胺（dopamine，DA）能神经元的影响。方法160只SD雄性大鼠随机分为CO组、LPS组、CO＋LPS组和对照组，观察大鼠在染毒后不同时间点的尾静脉血24h内碳氧血红蛋白（HbCO）浓度变化、行为学改变、酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase，TH）及OX-42（小胶质细胞标志物）的表达，高效液相色谱（HPLC）分析纹状体DA含量变化。结果染毒鼠均达到持续24hCO重度中毒（HbCO〉50％）。CO＋LPS组大鼠染毒后14、21、28d的30min内平均运动速度和运动距离下降（P〈0．05），小胶质细胞明显增生并异常激活，TH阳性神经元数量分别减少43．2％（P〈0．05）、46．5％（P〈0．05）和63．7％（P〈0．01）；DA分别降低33．0％、39．0％（P〈0．05）和53．6％（P〈0．01）。结论大鼠多巴胺能神经系统发生炎性反应后，将加重急性CO中毒对多巴胺能神经元的损害，增加CO中毒后患帕金森综合征的风险。

关键词：一氧化碳脂多糖类帕金森障碍多巴胺

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实时荧光定量PCR技术的原理及其应用研究进展

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中国组织化学与细胞化学杂志 2007年第4期16卷 492-497页

作者：赵焕英包金风首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复重点实验室教育部神经变性病重点实验室北京100069

自从1983年Mullis发明聚合酶链式反应(polymerase chain reaction , PCR)以来,PCR技术很快成为科研、临床诊断的热点技术.但是传统PCR技术在应用中一是不能准确定量,二是容易交叉污染,产生假阳性。[第一段]

关键词：实时荧光定量PCR 荧光标记探针 DNA 结合染料

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自分化法培养大鼠骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠帕金森病的研究

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中国输血杂志 2014年第10期27卷 1000-1005页

作者：李美霖杨慧北京市通州区中心血站北京101100 首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室

目的观察自分化法培养的大鼠骨髓间充质干细胞(SDrBMSCs)向大鼠纹状体内移植大鼠帕金森病(PD)模型的治疗作用。方法 SDrBMSCs以不换液、不外加任何诱导物质培养,用免疫细胞化学染色鉴定SDrBMSCs及用普通法培养大鼠骨髓间充质干细胞(rBMS... 详细信息

目的观察自分化法培养的大鼠骨髓间充质干细胞(SDrBMSCs)向大鼠纹状体内移植大鼠帕金森病(PD)模型的治疗作用。方法 SDrBMSCs以不换液、不外加任何诱导物质培养,用免疫细胞化学染色鉴定SDrBMSCs及用普通法培养大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)的分化情况,制作大鼠PD模型,设SDrBMSCs移植组、rBMSCs移植组(PD大鼠12只/组),向PD大鼠纹状体内植入SDrBMSCs或rBMSCs(1×106个/只),以免疫荧光组织化学染色鉴定其在纹状体部细胞体内存活迁移能力,高效液相色谱电化学方法(HPLC)检测纹状体内多巴胺(DA)含量,同时设PBS模型对照组(PD大鼠12只/组)做比较。结果 SDrBMSCs培养至第4代21 d移植入PD大鼠纹状体内,在无外源干预的情况下,表达nestin、β-tublinⅢ、DCX和MAP2,而同样条件移植入rBMSCs的PD大鼠仅表达少量的nestin;SDrBMSCs或rBMSCs移植入大鼠纹状体内后均可在体内存活、迁移并与周围组织整合。SDrBMSCs移植组PD大鼠在移植后28 d能表达GFAP,并有分化为TH阳性神经元的现象,使纹状体内DA含量提高,但与移植后14 d比较无明显变化(P>0.05);PD大鼠的旋转行为以移植后56 d时改善最为明显(P<0.05),旋转降至移植前的55.02%。rBMSCs移植组PD大鼠在移植后28 d可表达GFAP,也有改善PD大鼠旋转行为的效果(P<0.05),但纹状体内DA含量明显低于植入SDrBMSCs的效果(P<0.05)。结论 SDrBMSCs脑内移植后主要分化为星形胶质细胞,极少分化为TH阳性神经元,与rBMSCs相比对PD大鼠模型有明显治疗作用。

关键词：骨髓间充质干细胞自分化移植帕金森病动物模型大鼠

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甘丙肽2型受体在HEK293细胞中的表达及内化过程

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生物物理学报 2010年第5期26卷 373-379页

作者：吕琼金艳燕吴波路雅静李晓晓赵春礼徐志卿首都医科大学神经生物学系北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室北京100069 首都医科大学组胚教研室北京100069 Departments of Neuroscience Karolinska Institutet

构建了在甘丙肽2型受体(GalR2)N端带myc表位标签的真核表达载体,并将其转染到HEK293细胞,进而应用免疫荧光细胞化学方法结合激光扫描共聚焦显微技术观察GalR2蛋白的亚细胞分布和膜转运过程。Western blot结果发现转染组myc-GalR2蛋白水... 详细信息

构建了在甘丙肽2型受体(GalR2)N端带myc表位标签的真核表达载体,并将其转染到HEK293细胞,进而应用免疫荧光细胞化学方法结合激光扫描共聚焦显微技术观察GalR2蛋白的亚细胞分布和膜转运过程。Western blot结果发现转染组myc-GalR2蛋白水平呈高表达。myc-GalR2主要分布在细胞膜上,少量分布于胞浆中。当给予甘丙肽(10-7mol/L)刺激后,5min时可见细胞膜上myc-GalR2明显减少,胞浆内myc-GalR2增多,15min时膜上myc-GalR2几乎全部消失。表明GalR2受体与配体结合后发生内化,且受体蛋白内化为时间依赖性的转运过程,证实在HEK293细胞GalR2会出现配体依赖性内化。同时,以已知膜蛋白5-HT1AR的内化作为对照,可见在给予甘丙肽刺激以后,5-HT1AR没有发生内化,受体蛋白仍然表达在膜上。此外,通过测定胞内钙水平激活情况来检测其信号通路激活情况,表明myc对GalR2功能没有明显影响。

关键词：表位标签甘丙肽2型受体(GalR2) G蛋白耦联受体(GPCRs) HEK293细胞膜转运

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6-羟多巴胺纹状体内注射制作大鼠帕金森病模型的研究

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中国组织化学与细胞化学杂志 2003年第1期12卷 16-21页

作者：赵焕英苏月杨秋慧段春礼杨慧徐群渊首都医科大学神经科学研究所北京市神经修复重点实验室100054

目的　为拓宽 6 OHDA损毁多巴胺能神经元所制备大鼠帕金森病模型的应用范围 ,采用多位点纹状体内注入 6 OHDA的途径来制备模型。方法　研究用SD大鼠 ,两个针道内四点定位注射 ,每点注射 3 μg/ μl 6 OHDA3 μl。结果　术后两周出现缓... 详细信息

目的　为拓宽 6 OHDA损毁多巴胺能神经元所制备大鼠帕金森病模型的应用范围 ,采用多位点纹状体内注入 6 OHDA的途径来制备模型。方法　研究用SD大鼠 ,两个针道内四点定位注射 ,每点注射 3 μg/ μl 6 OHDA3 μl。结果　术后两周出现缓慢旋转 ,4周旋转行为达到 7转 /分并保持稳定 ;形态学染色可见损毁 1周后注射侧黑质酪氨酸羟化酶免疫组化阳性细胞减少 2 0 % ,2周后减少 3 8% ,3～ 4周减少 70 %以上 ,6周后损伤趋缓。高效液相电化学法活体检测纹状体内多巴胺的代谢产物 3、 4 二羟基苯乙酸 (DOPAC)和高香草酸 (HVA) ,发现注射侧和非注射侧相比含量分别下降98 3 3 %和 96 0 5 % ;组织匀浆检测损毁侧黑质多巴胺含量下降了 73 %以上 ,3、 4 二羟基苯乙酸 (DOPAC)含量下降60 %。结论　纹状体内注射 6

关键词：帕金森病动物模型 6-羟多巴胺大鼠

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骨髓源干细胞向损伤脑组织迁移的可能性

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解剖学报 2004年第6期35卷 561-564页

作者：邹西峰蔡青鲁强李铁林徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054 第一军医大学珠江医院神经外科广州510282

目的　探讨骨髓源干细胞迁移至损伤脑组织的可能性。　方法　致死剂量照射的C5 7BL 6雌性小鼠 ,接受月龄相配的雄性小鼠骨髓移植。骨髓移植 2个月后制作脑外伤模型 ,1、2、4和 6周分批处死存活的动物。分别在外周血涂片和新鲜脑切片上... 详细信息

目的　探讨骨髓源干细胞迁移至损伤脑组织的可能性。　方法　致死剂量照射的C5 7BL 6雌性小鼠 ,接受月龄相配的雄性小鼠骨髓移植。骨髓移植 2个月后制作脑外伤模型 ,1、2、4和 6周分批处死存活的动物。分别在外周血涂片和新鲜脑切片上用荧光原位杂交法检测Y染色体阳性细胞。　结果　在移植后 6周的脑外伤病灶周围发现Y染色体阳性细胞。　结论　骨髓源干细胞可以迁移至脑外伤病灶周围 ,但这些细胞的性质需要进一步研究证实。

关键词：骨髓源干细胞骨髓移植神经元神经胶质小鼠

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小鼠Y染色体RNA探针的标记和应用

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解剖学报 2004年第6期35卷 664-667页

作者：邹西峰苏玉金鲁玲玲杨慧李铁林徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054 第一军医大学珠江医院神经外科广州510282

目的　标记小鼠Y染色体RNA探针 ,检验该探针在检测外周血涂片和脑组织切片Y染色体阳性细胞的效率。　方法　以小鼠Y染色体重复序列pY35 3/BcDNA为模板标记RNA探针。以雌性小鼠为对照 ,用原位杂交法检测小鼠外周血涂片Y染色体阳性细胞 ;... 详细信息

目的　标记小鼠Y染色体RNA探针 ,检验该探针在检测外周血涂片和脑组织切片Y染色体阳性细胞的效率。　方法　以小鼠Y染色体重复序列pY35 3/BcDNA为模板标记RNA探针。以雌性小鼠为对照 ,用原位杂交法检测小鼠外周血涂片Y染色体阳性细胞 ;用荧光原位杂交法检测雄性小鼠脑组织切片Y染色体阳性细胞。　结果　Y染色体原位杂交法在外周血涂片Y染色体阳性的检测灵敏度和特异度均为 1 0 0 %,在脑切片检测Y染色体阳性细胞的灵敏度和特异度分别为 85 6 7%和 1 0 0 %。

关键词： Y染色体原位杂交荧光原位杂交小鼠

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神经干细胞脑内移植后的存活、迁移和分化

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中国生物工程杂志 2004年第11期24卷 13-17页

作者：王颖段德义徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经修复再生重点实验室北京100054

从胚胎或成体大鼠脑组织、人胚脑组织均能分离到神经干细胞 ,将它们进行体外原代培养扩增或永生化后植入脑内 ,均能观察到其在脑内的迁移和分化现象。其分化能力主要取决于移植部位的脑内微环境 ,但这种影响作用是相对的。同时 ,体外培... 详细信息

从胚胎或成体大鼠脑组织、人胚脑组织均能分离到神经干细胞 ,将它们进行体外原代培养扩增或永生化后植入脑内 ,均能观察到其在脑内的迁移和分化现象。其分化能力主要取决于移植部位的脑内微环境 ,但这种影响作用是相对的。同时 ,体外培养环境如培养时间和细胞融合程度、维甲酸类诱导分化剂处理、NGF转导处理再移植或与嗜铬细胞 (分泌NGF)共移植等 ,也能决定神经干细胞脑内移植后向神经元方向分化的能力。神经干细胞移植为中枢神经系统功能重建和神经再生带来新的希望。

关键词：脑内移植神经干细胞脑组织分化维甲酸类中枢神经系统功能转导成体存活培养时间

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骨髓干细胞来源的星形胶质细胞参与脑损伤后胶质界膜的形成

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南方医科大学学报 2009年第12期29卷 2391-2393页

作者：邹西峰朱军李建民张海燕赵春礼徐群渊华北煤炭医学院附属医院神经外科河北唐山063000 首都医科大学北京神经科学研究所/北京市神经再生修复研究重点实验室/教育部神经变性疾病学重点实验室北京100069 首都医科大学细胞生物学系北京100069

目的探讨骨髓干细胞来源的星形胶质细胞是否参与脑损伤后胶质界膜的形成。方法将制作好的雌性Sprague-Dawley大鼠脑损伤模型24h后经尾静脉植入GFP标记的雄性Sprague-Dawley大鼠的骨髓源干细胞。在植入后2、4和8周取脑,用GFAP荧光免疫组... 详细信息

目的探讨骨髓干细胞来源的星形胶质细胞是否参与脑损伤后胶质界膜的形成。方法将制作好的雌性Sprague-Dawley大鼠脑损伤模型24h后经尾静脉植入GFP标记的雄性Sprague-Dawley大鼠的骨髓源干细胞。在植入后2、4和8周取脑,用GFAP荧光免疫组织化学方法显示星形胶质细胞,GFP显示骨髓来源细胞,观察损伤组织边缘的胶质界膜中是否存在GFP/GFAP双阳性细胞。结果在损伤组织边缘可见骨髓干细胞来源的星形胶质细胞。结论骨髓干细胞来源星形胶质细胞参与脑损伤后胶质界膜的形成。这对脑外伤的恢复和组织工程材料的植入有重要的意义。

关键词：骨髓源干细胞星形胶质细胞胶质界膜脑损伤绿色荧光蛋白

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