检索结果-内蒙古大学图书馆

中国临床康复 2005年第9期9卷 148-150页

作者：梁源杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室北京市100054

目的:帕金森病是临床上最常见的神经退行性疾病之一,其确切的病因和发病机制目前尚不清楚。目前一般认为该病主要是由于环境和/或遗传所导致的线粒体功能受损及α-突触核蛋白异常聚集所致。线粒体功能受损尤其表现在complexⅠ功能下降,... 详细信息

目的:帕金森病是临床上最常见的神经退行性疾病之一,其确切的病因和发病机制目前尚不清楚。目前一般认为该病主要是由于环境和/或遗传所导致的线粒体功能受损及α-突触核蛋白异常聚集所致。线粒体功能受损尤其表现在complexⅠ功能下降,线粒体DNA的变化,氧应激和凋亡的发生,文章将重点阐述以上内容的研究新进展,以期寻找线粒体损伤和α-突触核蛋白在帕金森病中的确切作用。资料来源:应用计算机检索Medline数据库1980-01/2004-06期间的相关文章,检索词为“pakinson'sdisease和“α-synuclein,mitochondria,complexⅠ,oxidativestress,mtDNA,apoptosis,分别地组合进行检索,限定文章语言种类为英文。同时计算机检索中国期刊全文数据库1999-01/2004-06期间的相关文章,检索词“α-突触核蛋白,线粒体,复合酶Ⅰ,氧应激,线粒体DNA,凋亡,限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,从查到的资料中选取与α-突触核蛋白,线粒体在帕金森病发病机制中的作用有关的文章。资料提炼:共收集到62篇符合上述要求的文章,查找全文,有48篇文章找到了全文。将观点非常相似的文章进行对比,筛出阐述详尽,近期发表的文章共26篇,其余排除。资料综合:将所选文章按其所述机制与α-突触核蛋白,复合酶Ⅰ,氧应激,线粒体DNA,凋亡的?

关键词：帕金森病线粒体神经组织蛋白质类

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星形胶质细胞神经保护作用及对干细胞分化的促进机制

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中国临床康复 2005年第13期9卷 132-135页

作者：魏灵荣杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复重点实验室北京市100054

目的:认识星形胶质细胞的神经保护作用和促进干细胞神经分化功能的作用及其机制。资料来源:应用计算机检索Pubmed数据库1990-01/2005-01关于星形胶质细胞神经生物学功能、营养、保护、促分化作用的相关文章,检索词为“astrocyte和“neur... 详细信息

目的:认识星形胶质细胞的神经保护作用和促进干细胞神经分化功能的作用及其机制。资料来源:应用计算机检索Pubmed数据库1990-01/2005-01关于星形胶质细胞神经生物学功能、营养、保护、促分化作用的相关文章,检索词为“astrocyte和“neuron,protection,differentiation,mechanism,分别组合进行检索,限定文章语言种类为English。同时计算机检索万方数据库1995-01/2005-01关于星形胶质细胞神经生物学功能、营养、保护、促分化作用的文章,检索词星形胶质细胞,神经元,保护作用,分化,机制,限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,选取有关星形胶质细胞的神经营养、保护及促分化作用的研究。纳入标准:①随机对照临床和基础研究,采用单盲,双盲或非盲法。②实验包含平行对照组。排除标准:重复性研究。资料提炼:共收集到322篇关于星形胶质细胞生物学功能研究的文章入选28篇,因为这些文章能包含其他文章的内容,体现了星形胶质细胞功能的研究进展。资料综合:在入选的28篇文章中,星形胶质细胞神经保护功能22篇星形胶质细胞促进干细胞分化的6篇。除了传统上认识到的生物学功能,星形胶质细胞还参与中枢神经系统疾病和损伤的过程,表现为脑损伤后胶质的活化增生;并且有促进神经分化的作用。

关键词：星形细胞神经元综述文献

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外源性Nurr1基因过表达增强SK-N-SH细胞对神经毒素6-OHDA敏感性的研究

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中国药理学通报 2005年第10期21卷 1171-1176页

作者：刘扬赵咏梅张海燕李卫红徐群渊首都医科大学宣武医院北京100053 首都医科大学细胞生物学教研室北京100054 首都医科大学北京市神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054

目的通过比较自身不表达Nurrl基因的人神经母细胞瘤细胞SK—N—SH和过表达外源性Null基因的SK—N—SH／Nurrl细胞对神经毒素6-羟多巴胺（6-OHDA）损伤的敏感程度，探讨Null基因与6一OHDA引起的多巴胺（DA）能神经元特异性损伤的相关性... 详细信息

目的通过比较自身不表达Nurrl基因的人神经母细胞瘤细胞SK—N—SH和过表达外源性Null基因的SK—N—SH／Nurrl细胞对神经毒素6-羟多巴胺（6-OHDA）损伤的敏感程度，探讨Null基因与6一OHDA引起的多巴胺（DA）能神经元特异性损伤的相关性。方法①绘制SK—N—SH细胞及SK—N—SH／Nurrl细胞的生长曲线，比较外源性Null基因过表达对细胞增殖率的影响。②用不同浓度的6-OHDA（5—100μmol·L^-1）分别作用两株细胞1—24h，倒置相差显微镜下观察细胞形态变化，MTT测定法比较两株细胞的存活率。③用75μmol·L^-1的6-OHDA作用12h，经Hoechst33342染色，荧光显微镜观察细胞核形态，比较两株细胞的凋亡情况。结果①生长曲线结果显示，SK—N—SH／Null细胞增殖数目低于SK—N—SH细胞一②MTT结果显示，6-OHDA对两株细胞的存活均有抑制作用，但SK—N—SH／Null细胞存活率下降更为明显。③Hoechst33342染色结果显示，用75μmol·L^-1的6-OHDA作用12h后SK—N—SH细胞核没有出现明显的凋亡形态改变，而部分SK—N—SH／Null细胞的细胞核出现了染色质凝聚、碎裂等凋亡形态改变，比例约为22％-24％。结论外源性Null基因过表达抑制SK—N—SH细胞增殖，增强SK—N—SH细胞对6-OHDA的敏感性并有可能促进6-OHDA诱导的细胞凋亡。Null基因可能作为易感因子参与多巴胺能神经元的特异性损伤。

关键词： Null 过表达 6-OHDA 凋亡

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基因治疗帕金森病的分子生物学研究:神经营养因子Neurturin基因克隆及其真核表达

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中国临床康复 2005年第5期9卷 64-66页

作者：张京钟余爽段德义赵春礼徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京市100054

目的:克隆中国人Neurturin基因,重组携带Neurturin基因的真核表达载体,为研究Neurturin基因治疗帕金森病提供分子生物学基础。方法:实验于2003-03/2004-05在北京市神经再生修复研究重点实验室完成。采用RT-PCR方法从人胎儿脑中获取Neurt... 详细信息

目的:克隆中国人Neurturin基因,重组携带Neurturin基因的真核表达载体,为研究Neurturin基因治疗帕金森病提供分子生物学基础。方法:实验于2003-03/2004-05在北京市神经再生修复研究重点实验室完成。采用RT-PCR方法从人胎儿脑中获取NeurturincDNA,将其克隆至pGEM-Easy-T载体中。测序鉴定后,重组携带Neurturin基因的反转录病毒载体pLPCX-Neurturin;通过脂质体将重组载体转染PT67包装细胞系,用病毒上清感染NIH3T3细胞系以检测病毒滴度。结果:RT-PCR扩增到人NeurturincDNA片段,序列与Genebank登录的序列一致;将Neurturin基因亚克隆至反转录病毒载体得到插入方向正确的重组载体pLPCX-Neurturin,病毒上清滴度为5×104CFU/mL。结论:获得人Neurturin基因cDNA序列,检测到Neurturin基因在真核细胞中表达,并得到较高滴度的病毒上清。

关键词：帕金森病克隆,分子基因表达

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Ⅱ型人多巴胺受体逆转录病毒载体的构建及表达

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解剖学报 2005年第4期36卷 356-360页

作者：赵焕英赵春礼鲁玲玲鲁强刘延英杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复重点实验室 100054

目的构建人全长D2R基因真核表达载体,研究D2R在帕金森病(PD)中的作用和机制。方法将D2RcDNA片段克隆于pLNCX2逆转录病毒载体,转染成纤维包装细胞系PT67,G418筛选单克隆后进行传代培养,通过原位杂交、免疫组织化学和Westernblot检测其表... 详细信息

目的构建人全长D2R基因真核表达载体,研究D2R在帕金森病(PD)中的作用和机制。方法将D2RcDNA片段克隆于pLNCX2逆转录病毒载体,转染成纤维包装细胞系PT67,G418筛选单克隆后进行传代培养,通过原位杂交、免疫组织化学和Westernblot检测其表达效果。病毒上清再感染骨髓基质细胞(MSCs),免疫荧光检测D2R基因表达率。结果成功构建了逆转录病毒表达载体pLNCX2_D2R,原位杂交证实D2R基因在PT_67表达的阳性率为80%以上,免疫组织化学检测可见其蛋白分布在胞浆和胞膜,细胞裂解后Westernblot蛋白电泳可检测到约48·84kD的蛋白。经转染D2R基因的PT67细胞能分泌病毒并感染MSCs。结论逆转录病毒介导的D2R基因经PT67细胞包装后,能够产生病毒颗粒,收集含病毒颗粒的上清可进一步感染MSCs,这种经逆转录病毒介导的DR基因可用来作针对帕金森病进行基因治疗的研究。

关键词：多巴胺D2受体帕金森病基因治疗原位杂交人

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人胎儿脑室区神经前体细胞的分离纯化、培养及鉴定

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解剖学报 2005年第3期36卷 259-263页

作者：余爽张京钟赵春礼张海燕徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054

目的建立有效的人胎儿神经前体细胞分离及纯化系统。方法取人自然流产胎儿脑室区(VZ)并制备单细胞悬液,采用免疫磁珠法分离CD133阳性及CD133阴性细胞群,体外培养并比较两者增殖能力。用免疫荧光化学方法检测CD133阳性细胞群中神经上皮... 详细信息

目的建立有效的人胎儿神经前体细胞分离及纯化系统。方法取人自然流产胎儿脑室区(VZ)并制备单细胞悬液,采用免疫磁珠法分离CD133阳性及CD133阴性细胞群,体外培养并比较两者增殖能力。用免疫荧光化学方法检测CD133阳性细胞群中神经上皮干细胞蛋白(nestin)的表达及诱导分化后的多向分化潜能。结果纯化后CD133阳性细胞群体外扩增能力强,在无血清培养体系中能形成神经球并可连续传代,免疫荧光化学法检测表明其nestin抗原阳性,诱导分化后可分化为神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞。而CD133阴性细胞在培养体系中多呈单个分散状态,神经球形成数目与CD133阳性细胞有显著性差异(P<0.05)。结论免疫磁珠法可有效分离人胎儿脑内CD133阳性细胞,且该细胞在体外培养体系中具有神经前体细胞的特征。

关键词：神经前体细胞分离纯化免疫磁珠免疫荧光 CD133 胎儿

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胚胎皮层神经元的发育及其相关分子机制

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基础医学与临床 2005年第8期25卷 679-683页

作者：余爽徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054

在胚胎皮层的发育过程中,神经元及胶质细胞先后由同一先祖细胞分化而来.其中,bHLH(basic helix-loop-helix)转录因子NGN1表达水平的改变可能是前体细胞从神经元发生到胶质细胞发生转变过程中的一个关键因素.此外,转录因子EMX2 、PAX6 、... 详细信息

在胚胎皮层的发育过程中,神经元及胶质细胞先后由同一先祖细胞分化而来.其中,bHLH(basic helix-loop-helix)转录因子NGN1表达水平的改变可能是前体细胞从神经元发生到胶质细胞发生转变过程中的一个关键因素.此外,转录因子EMX2 、PAX6 、MASH1等也与神经元的表型特化及皮层的区域划分密切相关.

关键词：皮层神经元分化转录因子 NGN1

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反义HLA-A2 cDNA抑制人成纤维细胞于大鼠脑内移植后的免疫排斥反应

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神经解剖学杂志 2005年第2期21卷 113-118页

作者：李颖杨慧徐群渊姬曼张耀芬段德义首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054

为了探讨人类白细胞抗原(HLA)反义RNA在抑制异种移植免疫排斥反应中的作用,用HLA A2反义cDNA和GDNF共表达的逆转录病毒转导人胚肺成纤维细胞,再移植到Parkinson病大鼠模型纹状体(实验组);同时移植到未感染病毒的人成纤维细胞作对照。移... 详细信息

为了探讨人类白细胞抗原(HLA)反义RNA在抑制异种移植免疫排斥反应中的作用,用HLA A2反义cDNA和GDNF共表达的逆转录病毒转导人胚肺成纤维细胞,再移植到Parkinson病大鼠模型纹状体(实验组);同时移植到未感染病毒的人成纤维细胞作对照。移植后每周检测大鼠旋转行为的变化;并于4d、2周、6周灌杀大鼠,进行HLA A、CD4、CD8以及人核糖核蛋白颗粒(RNP)免疫组化染色等以观察宿主的免疫排斥反应和移植物在脑内的存活情况。结果发现:两组间动物的旋转行为变化不明显。实验组HLA A阳性细胞数在移植后的各时间点均明显少于对照组(P<0.05)。移植后4d两组的CD4和CD8阳性细胞数量变化均不明显(P>0.05),CD8细胞较多。2周和6周时实验组的CD4阳性细胞均明显少于对照组(P<0.01),且随时间逐渐下降。2周后实验组的CD8细胞基本消失,而对照组的CD8水平在2周时仍较高, 6周时也可见到。实验组RNP阳性细胞数量在各个时间点都明显多于对照组(P<0.01),到6周时明显下降, 12周时完全消失。反义HLA A2cDNA可以降低异种移植引起的免疫排斥反应程度,延长移植物存活时间,但抑制长期免疫排斥反应方面仍需寻找更好的方法。

关键词：反义cDNA HLA—A2 大鼠脑内移植免疫排斥反应基因治疗异种移植人成纤维细胞 Parkinson病

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骨髓源干细胞在脑组织的迁移和分化

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神经科学通报 2005年第6期21卷 425-431页

作者：邹西峰徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室

骨髓源干细胞(BONE MARROW-DERIVED STEM CELLS,BMDSCS)能否迁移至脑组织并分化为神经胶质细胞和神经细胞是近年来成体干细胞研究的热点领域。有一些学者采用Y染色体和GFP基因作为骨髓源细胞标记物,通过血行输入受体动物后,在脑组织内... 详细信息

骨髓源干细胞(BONE MARROW-DERIVED STEM CELLS,BMDSCS)能否迁移至脑组织并分化为神经胶质细胞和神经细胞是近年来成体干细胞研究的热点领域。有一些学者采用Y染色体和GFP基因作为骨髓源细胞标记物,通过血行输入受体动物后,在脑组织内发现了标记阳性细胞,并证实这些细胞有向神经胶质细胞和神经细胞分化的趋势;另有一些学者也采用GFP基因作为细胞标记物,但在受体动物脑组织并未发现标记阳性细胞。这些实验结果差异可能与观察时间长短、细胞标记方法和神经组织中标记基因沉默事件有关。就迁移到脑组织的BMDSCS 是否与宿主神经细胞整合的问题,有研究认为存在转分化(TRANSDIFFERENTIATION)机制,也有实验发现BMDSCS与小脑PURKINJE神经元之间有细胞融合现象。细胞转分化和细胞融合有可能是中胚层来源的BMDSCS向神经外胚层细胞变化的两种必要机制。讨论这些问题对阐明神经细胞的新老更替、损伤和修复机制是很有意义的。

关键词：骨髓源干细胞神经胶质神经元转分化细胞融合

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制备人Ⅱ型多巴胺受体cRNA探针检测帕金森病大鼠模型纹状体内Ⅱ型多巴胺受体基因表达的变化

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中国临床康复 2005年第25期9卷 25-27,i0001页

作者：赵焕英李良刘延英刘静孙晓红杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复重点实验室北京市100054

目的:获得单链、杂交结果稳定的人Ⅱ型多巴胺受体基因正义和反义RNA探针,检测人Ⅱ型多巴胺受体在帕金森病大鼠模型中表达的变化。方法:实验于2002-10/2003-06在首都医科大学神经科学研究所内完成。选出2,6,12周帕金森病大鼠模型60只,每... 详细信息

目的:获得单链、杂交结果稳定的人Ⅱ型多巴胺受体基因正义和反义RNA探针,检测人Ⅱ型多巴胺受体在帕金森病大鼠模型中表达的变化。方法:实验于2002-10/2003-06在首都医科大学神经科学研究所内完成。选出2,6,12周帕金森病大鼠模型60只,每组各20只,用来做原位杂交的组织处理;将已制备的pGEM-T-Easy-D2R质粒载体分别经ClaI、XbaⅠ限制性酶切反应得到线形质粒,再分别以T7和SP6聚合酶制备了人Ⅱ型多巴胺受体基因的反义和正义探针,通过斑点杂交检测探针的浓度;将反义和正义探针分别作等梯度稀释,分别与组织切片杂交,强度洗脱后,观察使对照正义链探针没有杂交信号,而反义探针杂交后也无本底的最适宜浓度,从而降低内缘性其他多巴胺受体亚型的干扰作用;用制备的最适宜浓度探针分别杂交帕金森病大鼠模型2,6,12周的组织切片,杂交后冲洗,免疫检测及呈色,观察帕金森病大鼠模型纹状体中Ⅱ型多巴胺受体表达。结果:①实验标记的人Ⅱ型多巴胺受体探针属cRNA探针,其特点为单链探针,杂交过程不需变性,可合成最可靠的反义链探针,杂交结果稳定,体外转录合成的cRNA探针长度也比较一致,其浓度分别为150,120mg/L。②将反义和正义探针分别等梯度稀释,分别与组织切片杂交,强度洗脱后,结果证明25mg/L浓度最适宜,对照正义链探针没有杂交信号,而反义探针杂交后也无本底。③原位杂交证实,反义探针能够与帕金森病大鼠模型纹状体中Ⅱ型多巴胺受体mRNA杂交。用反义探针标记的细胞中可见蓝色颗粒沉积,左右半球纹状体中标记细胞数在2周时没有变化,帕金森病大鼠损伤侧和健侧Ⅱ型多巴胺受体mRNA表达没有明显变化;6周时,损伤侧较健侧表达明显上调,12周时,损伤侧与健侧表达都下降且没有明显差别。结论:实验获得了人Ⅱ型多巴胺受体基因反义和正义cRNA探针,并得出无本底的最适宜浓度;制备的人Ⅱ型多巴胺受体cRNA探针可以检测帕金森病大鼠模型纹状体内Ⅱ型多巴胺受体基因变化情况,并说明了帕金森病大鼠纹状体Ⅱ型多巴胺受体mRNA表达水平随模型日期增长而发生相应变化。

关键词：帕金森病受体多巴胺/遗传学原位杂交基因 RNA 信使/生物合成

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