检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：鞠莉莉陈芸王蓓蓓曾辉段德义徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室传染病研究所北京地坛医院首都医科大学

目的比较四种分离纯化小鼠小胶质细胞的方法,并分别检测细胞表型及细胞因子释放。方法通过四种方法分离纯化小鼠小胶质细胞（磁珠分选原代组织匀浆,磁珠分选耗竭培养后漂浮细胞及摇床后悬浮细胞,磁珠分选间隔换液培养摇床后悬浮细胞）,... 详细信息

目的比较四种分离纯化小鼠小胶质细胞的方法,并分别检测细胞表型及细胞因子释放。方法通过四种方法分离纯化小鼠小胶质细胞（磁珠分选原代组织匀浆,磁珠分选耗竭培养后漂浮细胞及摇床后悬浮细胞,磁珠分选间隔换液培养摇床后悬浮细胞）,并用脂多糖（LPS）刺激。流式细胞仪（FCM）鉴定不同方法纯化小胶质细胞的表面标记物,流式细胞术微球阵列法（CBA）检测不同培养基中的炎性因子释放,包括:肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）,白介素家族（IL）。结果不同方法纯化的小胶质细胞表性鉴定相似,经LPS刺激后炎性因子释放增多,且变化趋势相同。结论四种分离纯化方法所获小鼠小胶质细胞的具有相似表型及炎性因子释放特性。

关键词：小胶质细胞细胞培养细胞纯化

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5羟色胺1A受体亚型的内在化研究

5羟色胺1A受体亚型的内在化研究

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中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第八届全国学术会议

作者：金艳燕李晓晓吕琼徐志卿北京首都医科大学神经生物学系北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病重点实验室

目的 5-羟色胺是脑内一类重要的单胺类神经递质。目前的研究认为,5-羟色胺通过与不同受体亚型结合,发挥各种生理及病理作用,参与了对情绪、焦虑、睡眠、体温、食欲、性行为、运动、心血管功能、痛觉等功能的调制。5羟色胺1A型受体亚型（... 详细信息

目的 5-羟色胺是脑内一类重要的单胺类神经递质。目前的研究认为,5-羟色胺通过与不同受体亚型结合,发挥各种生理及病理作用,参与了对情绪、焦虑、睡眠、体温、食欲、性行为、运动、心血管功能、痛觉等功能的调制。5羟色胺1A型受体亚型（5HT1A受体）属于G蛋白偶联受体,激活后可与Gi/o/z蛋白偶联,抑制腺苷酸环化酶的活性,促使神经元K电导增加并发生超极化。本文的目的是运用带有荧光蛋白标记的5HT1A受体,在活细胞内实时观察受体的表达及内在化过程,采用Texas-red转铁蛋白标记细胞内体,并对5HT1A受体的内在化机制做初步探讨。为进一步研究5HT1A受体在细胞内的转运和信号转导机制做准备。方法通过分子克隆方法构建出表达5HT1A-EGFP融合蛋白的真核表达质粒,瞬时转染PC12细胞系中,并通过药物G418筛选,培养出能够稳定表达羧基端带有绿色荧光蛋白标签的5HT1A受体的PC12细胞系。在此基础上,给予细胞浓度在10-4 M的5-HT刺激,分别在0min、5min 30min、60min、120min时间点观察5HT1A-EGFP内在化的过程。结果通过激光共聚焦显微镜的观察,在无药物刺激的情况下,大部分5HT1A-EGFP在PC12细胞膜表面分布。5-HT刺激5min时5HT1A-EGFP仍然在细胞膜表面,没有明显的下膜改变。30min开始,有极少量的细胞出现5HT1A-EGFP内在化,120mim达到最大,内在化率约为10-15%。Texas-red转铁蛋白标记细胞内体,内在化的5HT1A-EGFP在内体与转铁蛋白有共定位。结论我们的结果显示在稳定表达5HT1A-EGFP的PC12细胞系5-HT刺激可引起5HT1A内在化但不明显,且其过程可能是由内体-网格蛋白包被小凹的受体内在化途径介导的。

关键词： G蛋白偶联受体 5羟色胺1A受体内在化网格蛋白

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脂多糖注入黑质对恒河猴运动行为和多巴胺能神经元的影响

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解剖学报 2008年第4期39卷 481-487页

作者：陈庆友刘玉军鲁强户乃丽徐群渊张进禄首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京100069

目的观察恒河猴黑质内注射脂多糖后运动行为和黑质多巴胺能神经元的变化,探讨脑内炎症反应在黑质多巴胺能神经元慢性变性过程中的作用。方法成年恒河猴5只,分别定位注射生理盐水(对照,编号M5)和脂多糖(存活24周:编号M1和M2,存活48周:编... 详细信息

目的观察恒河猴黑质内注射脂多糖后运动行为和黑质多巴胺能神经元的变化,探讨脑内炎症反应在黑质多巴胺能神经元慢性变性过程中的作用。方法成年恒河猴5只,分别定位注射生理盐水(对照,编号M5)和脂多糖(存活24周:编号M1和M2,存活48周:编号M3和M4)。上述注射均在存活前0周、8周、16周,向右侧黑质部位注射3次,每次40μl(2.5g/L)。术后观察猴行为改变(包括随意运动和上肢活动),免疫组织化学染色观察黑质部位酪氨酸羟化酶阳性神经元的变化及小胶质细胞的激活情况。结果1.猴全身运动:注射脂多糖24周和48周后,各个动物运动距离和平均速度与术前自身相比随观察时间呈减少趋势,对照组动物两个指标与术前比较无变化。2.猴上肢活动:猴M1和M2,注射对侧前臂取食时间术后24周较术前分别延长了36.1%、27.1%,手爪抓取食物时间分别延长了41.2%、28.6%。猴M3和M4,注射对侧前臂取食时间术后48周较术前分别延长了76.5%(P<0.01)、50%(P<0.01),手爪抓取食物时间分别延长了81.8%(P<0.01)、55.6%(P<0.01),4只实验动物同侧上肢未见影响。3.注射脂多糖各个动物注射侧黑质阳性神经元数量与对侧相比较,有不同程度的减少,存活48周动物神经元减少更加明显;对照动物两侧黑质部位神经元数量无变化。4.注射脂多糖各个动物注射侧黑质部位小胶质细胞出现不同程度的激活,在24周组较明显。结论脂多糖诱导的炎症反应能引起猴黑质部位多巴胺能神经元的变性损伤和行为学的改变,这些改变呈慢性进展的特点,行为改变与多巴胺能神经元损伤程度相关。

关键词：脂多糖黑质行为酪氨酸羟化酶免疫组织化学恒河猴

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脑内炎症反应对大鼠黑质多巴胺能神经元长时程毒性作用的研究

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解剖学报 2008年第3期39卷 350-354页

作者：李军泉王元身孙晓红张进禄徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京100069

目的观察黑质部位炎症反应对多巴胺能神经元的长时程毒性作用,探讨脑内炎症反应在黑质多巴胺能神经元慢性变性过程中的作用。方法健康SD雄性大鼠28只,随机分为生理盐水组和10μg、25μg、50μg脂多糖组。定位注射生理盐水或脂多糖入右... 详细信息

目的观察黑质部位炎症反应对多巴胺能神经元的长时程毒性作用,探讨脑内炎症反应在黑质多巴胺能神经元慢性变性过程中的作用。方法健康SD雄性大鼠28只,随机分为生理盐水组和10μg、25μg、50μg脂多糖组。定位注射生理盐水或脂多糖入右侧脑室,术后24周观察大鼠行为学改变,免疫组织化学染色观察黑质部位小胶质细胞的激活情况及酪氨酸羟化酶阳性神经元的变化。结果1.大鼠行为学观察显示,10μg、25μg和50μg脂多糖组大鼠的平均运动速度与对照组相比,差异无统计学意义。***-42免疫组织化学染色显示,10μg和25μg脂多糖组大鼠黑质部位小胶质细胞激活明显。50μg脂多糖组大鼠黑质部位小胶质细胞激活不明显。3.酪氨酸羟化酶免疫组织化学染色显示,10μg和25μg脂多糖组大鼠黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元与对照组相比,胞体变小,突起减少甚至消失,染色变浅;50μg脂多糖组大鼠酪氨酸羟化酶阳性神经元形态与对照组相比没有明显改变。4.酪氨酸羟化酶阳性细胞计数显示,10μg和25μg脂多糖组大鼠与对照组比较,分别减少15.5%(P<0.01)和20.1%(P<0.01);50μg脂多糖组大鼠与对照组比较没有统计学差异。结论脑室注射脂多糖引发的脑内炎症可导致黑质多巴胺能神经元变性,这一过程呈慢性迟发性;同时,低剂量脂多糖激活小胶质细胞对黑质多巴胺能神经元的慢性毒性作用更为明显;该病理过程较好地模拟了帕金森病的发病特点。

关键词：帕金森病脂多糖小胶质细胞酪氨酸羟化酶免疫组织化学大鼠

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人类白细胞抗原A表达沉默对大鼠脑内人细胞移植排斥反应的调节

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第40期12卷 7801-7807页

作者：徐云智梁彩霞赵春礼郑德宇段德义首都医科大学神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室神经变性病教育部重点实验室北京市100069

背景:移植物主要组织相容性抗原复合物在移植排斥反应中起关键作用。用慢病毒介导的人类白细胞抗原RNA干扰技术可以降低T淋巴细胞的细胞毒作用和抗体介导的溶细胞作用,但尚未见相关体内研究报道。目的:拟用携带人类白细胞抗原A小分子干... 详细信息

背景:移植物主要组织相容性抗原复合物在移植排斥反应中起关键作用。用慢病毒介导的人类白细胞抗原RNA干扰技术可以降低T淋巴细胞的细胞毒作用和抗体介导的溶细胞作用,但尚未见相关体内研究报道。目的:拟用携带人类白细胞抗原A小分子干扰RNA序列的慢病毒感染人胚肺成纤维细胞,再将其移植到帕金森大鼠纹状体,观察人类白细胞抗原A表达沉默对移植排斥反应的调节。设计、时间及地点:细胞基因工程体内实验,于2005-09/2008-01在首都医科大学神经科学研究所完成。材料:清洁级12周龄雌性SD大鼠33只,用于建立帕金森动物模型。原代培养的人胚肺成纤维细胞取材于12周流产人胚胎,由北京京北医院提供。293T为贴壁依赖型成上皮样细胞。慢病毒载体系统由pSicoR,pCMV-VSV-G和psPAX2三质粒组成,为美国Addgene公司产品。携带HLA-A2 cDNA的pcDNA I/Amp-HLA质粒由比利时Ludwig肿瘤研究所Pierre van Bruggen教授惠赠。方法:以携带HLA-A2 cDNA的pcDNA I/Amp-HLA质粒为模板PCR扩增HLA-A2 cDNA编码区序列,构建人类白细胞抗原A融合蛋白表达载体pEGFP-Flag-HLA,转染293T细胞。用HLA-A2编码区序列设计小分子干扰RNA4个待选靶点序列,分别起始于编码区的第257,350,833,251位碱基,构建表达小分子干扰RNA慢病毒载体。用带有Flag标签的人类白细胞抗原AcDNA表达载体转染293T细胞后,再进行不同靶点病毒直接感染。33只帕金森模型大鼠随机分为2组,实验组大鼠纹状体植入人类白细胞抗原A小分子干扰RNA病毒感染的人胚肺成纤维细胞,对照组植入带有小分子干扰RNA对照序列和绿色荧光蛋白病毒感染的人胚肺成纤维细胞。主要观察指标:免疫组织化学染色检测脑内移植物人类白细胞抗原A、CD4和CD8的表达,用抗人细胞核的阳性表达评价移植细胞的存活情况。结果:与对照组比较,实验组移植后4d、2周时人类白细胞抗原A阳性细胞均较少(t=3.301,2.631,P<0.01,0.05),6周时无明显变化;CD4阳性细胞仅移植后6周明显减少(t=2.269,P<0.05);移植后4dCD8阳性细胞无明显变化,2周及6周时明显减少(t=2.333,P<0.05);抗人细胞核阳性细胞仅移植后2周明显减少(t=2.952,P<0.05)。结论:人类白细胞抗原A表达敲减可以抑制移植排斥反应,但并不能显著延长移植物的存活时间。

关键词： RNA干扰人类白细胞抗原A2 移植排斥

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帕金森病模型大鼠中脑黑质磷酸化α-突触核蛋白表达增加

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基础医学与临床 2008年第6期28卷 570-574页

作者：隋雷鸣赵焕英赵春礼孙晓红杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京100069

目的观察鱼藤酮对大鼠中脑黑质磷酸化α-突触核蛋白(α-SYN)、酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响。方法利用脑立体定位技术注射微量鱼藤酮,建立急性损伤帕金森病(PD)模型。采用动物行为轨迹分析软件计算各时间点30min内运动距离和平均运动速... 详细信息

目的观察鱼藤酮对大鼠中脑黑质磷酸化α-突触核蛋白(α-SYN)、酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响。方法利用脑立体定位技术注射微量鱼藤酮,建立急性损伤帕金森病(PD)模型。采用动物行为轨迹分析软件计算各时间点30min内运动距离和平均运动速度。免疫组织化学检测黑质(SN)部位TH、磷酸化α-SYN的表达,并统计TH和磷酸化α-SYN阳性神经元数目。结果PD组动物各时间点30min内运动距离、平均运动速度低于对照组(P<0.05,0.01)。同对照组相比,损伤侧SN部位TH阳性神经元数目明显减少(P<0.01),磷酸化α-SYN阳性神经元数目明显增加(P<0.01)。结论PD大鼠中脑黑质磷酸化α-SYN表达增加及TH的表达明显下降,并出现运动障碍。

关键词：磷酸化α-synuclein 鱼藤酮酪氨酸羟化酶帕金森病

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α-突触核蛋白各结构域与MN9D细胞线粒体的关系

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解剖学报 2008年第5期39卷 626-630页

作者：张韬赵焕英赵春礼杨慧首都医科大学神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室神经变性病教育部重点实验室北京100069

目的探讨α-突触核蛋白（α-synuclein）各结构域与MN9D细胞线粒体的关系。方法用PCR方法获得α-synuclein/1~65（N），α-synuclein/61~95（A）及α-synuclein/96~140（C）基因片段，克隆入真核表达质粒pLNCX2，经测序正确后以脂质体转... 详细信息

目的探讨α-突触核蛋白（α-synuclein）各结构域与MN9D细胞线粒体的关系。方法用PCR方法获得α-synuclein/1~65（N），α-synuclein/61~95（A）及α-synuclein/96~140（C）基因片段，克隆入真核表达质粒pLNCX2，经测序正确后以脂质体转染PT-67细胞，挑取单克隆并扩增，收集上清感染MN9D细胞，分别用Real Time PCR检测细胞基因表达水平，免疫组织化学染色检测蛋白表达，激光扫描共焦显微镜检测蛋白与线粒体共定位，流式细胞术检测细胞状态及线粒体膜电位状态。结果成功构建了pLNCX2/N、pLNCX2/NAC及pLNCX2/C基因片段的重组真核表达质粒，获得了可稳定表达α-synuclein各基因片段的MN9D细胞株。通过激光扫描共焦显微镜观察，可见α-synuclein/N端与线粒体存在共定位关系；α-synuclein/NAC主要在核内聚集表达；α-synuclein/C端在胞质和胞核内均有表达。JC1染色流式细胞术检测显示，过表达α-synuclein/N实验组细胞线粒体膜电位降低。结论α-synuclein的N端可能定位于线粒体，并参与调节线粒体功能；α-synuclein/NAC虽具有疏水性但却能穿过核膜，聚集在核仁周围；α-synuclein的C端定位于胞质和核内可能参与多种细胞功能。

关键词： α-突触核蛋白片段线粒体帕金森病流式细胞术免疫组织化学 MN9D细胞

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大鼠骨髓基质细胞在脑内的迁移和分化

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基础医学与临床 2008年第5期28卷 432-435页

作者：段春礼姬曼孙晓红赵春礼杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病重点实验室北京100069

目的研究骨髓基质细胞（bMSCs）在大鼠脑内的迁移和分化情况。方法体外分离培养大鼠四肢骨的bMSCs，原代培养8～10d后，同时用含增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的反转录病毒上清转导bMSCs并进行抗性筛选，7～10d可得到稳定表达EGFP的bMSCs... 详细信息

目的研究骨髓基质细胞（bMSCs）在大鼠脑内的迁移和分化情况。方法体外分离培养大鼠四肢骨的bMSCs，原代培养8～10d后，同时用含增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的反转录病毒上清转导bMSCs并进行抗性筛选，7～10d可得到稳定表达EGFP的bMSCs，然后将EGFP标记的bMSCs通过侧脑室和尾静脉2种注射方式分别注入纹状体损伤的大鼠体内，进而观察bMSCs向脑内迁移和分化的情况。结果在移植后的大鼠脑内均观察到2种方式植入大鼠体内的bMSCs，这些EGFP阳性的细胞呈现出一些神经元和神经胶质细胞的形态并能表达一些神经元和神经胶质细胞的特异性标志物。结论骨髓基质细胞中确实含有能够向神经元方向分化的干细胞。

关键词：绿色荧光蛋白骨髓间充质干细胞迁移分化

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帕金森病相关蛋白PINK1和α-突触核蛋白相互作用研究

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中国生物工程杂志 2008年第12期28卷 7-11页

作者：范春香崔韬谷利张韬刘琦赵焕英赵春礼杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室神经变性病教育部重点实验室北京100069 首都医科大学附属北京天坛医院北京100050

目的:利用蛋白质组学方法和激光扫描共聚焦显微镜来鉴定帕金森病相关蛋白PINK1和α-突触核蛋白(α-synuclein)之间的相互作用关系及两种蛋白在MN9D细胞中的分布。方法:将α-synuclein基因插入pGEX-4T-1载体,经DNA测序证明形成GST融合蛋... 详细信息

目的:利用蛋白质组学方法和激光扫描共聚焦显微镜来鉴定帕金森病相关蛋白PINK1和α-突触核蛋白(α-synuclein)之间的相互作用关系及两种蛋白在MN9D细胞中的分布。方法:将α-synuclein基因插入pGEX-4T-1载体,经DNA测序证明形成GST融合蛋白,经大肠杆菌BL-2l表达纯化后,与MN9D细胞裂解液共孵育,检测PINK1与α-synuclein蛋白间的相互作用。并应用MN9D细胞的内源性PINK1与α-synuclein进行免疫共沉淀实验,进一步验证两蛋白之间的相互作用。MN9D细胞经免疫细胞化学染色,利用激光扫描共聚焦显微镜观察两种蛋白的细胞内分布及共定位状态。结果:利用GST-α-synuclein融合蛋白捕获及免疫共沉淀技术,检测到特异的PINK1条带。激光扫描共聚焦显微镜检测到两者存在部分共定位。结论PINK1和α-synuclein在体外和细胞内均可发生相互作用并在MN9D细胞中存在共定位关系。

关键词： PINK1 α-synuclein 蛋白质相互作用共定位

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AAV-GDNF/TH双基因载体的构建及表达

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基础医学与临床 2008年第6期28卷 543-548页

作者：张敏杨慧首都医科大学附属北京口腔医院口腔医学院北京口腔医学研究所北京100050 首都医科大学北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京100069

目的探讨构建于同一个重组腺相关病毒(rAAV)载体上的酪氨酸羟化酶(TH)基因和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因是否能够同时表达。方法应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测双基因在HEK293包装细胞中的转录;通过免疫细胞化学荧光染色... 详细信息

目的探讨构建于同一个重组腺相关病毒(rAAV)载体上的酪氨酸羟化酶(TH)基因和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因是否能够同时表达。方法应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测双基因在HEK293包装细胞中的转录;通过免疫细胞化学荧光染色和免疫组织化学染色技术分别检测双基因在体外培养大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)和大鼠脑中的表达。结果在HEK293包装细胞和BMSCs中分别同时检测到了GDNF和TH基因RNA和蛋白的表达。对照LacZ在HEK293包装细胞和骨髓基质细胞中的表达率分别为50%和15%。大鼠脑组织切片中注射AAV-GDNF/TH病毒的部位与注射PBS的对侧相比无论是GDNF还是TH的表达均显著增加(P<0.01)。结论构建于同一个rAAV载体上的TH基因和GDNF基因体内体外都能够同时表达,此结果为PD的基因治疗提供了新的依据。

关键词：腺相关病毒帕金森病酪氨酸羟化酶(TH) 胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)

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