检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2005年第8期25卷 679-683页

作者：余爽徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054

在胚胎皮层的发育过程中,神经元及胶质细胞先后由同一先祖细胞分化而来.其中,bHLH(basic helix-loop-helix)转录因子NGN1表达水平的改变可能是前体细胞从神经元发生到胶质细胞发生转变过程中的一个关键因素.此外,转录因子EMX2 、PAX6 、... 详细信息

在胚胎皮层的发育过程中,神经元及胶质细胞先后由同一先祖细胞分化而来.其中,bHLH(basic helix-loop-helix)转录因子NGN1表达水平的改变可能是前体细胞从神经元发生到胶质细胞发生转变过程中的一个关键因素.此外,转录因子EMX2 、PAX6 、MASH1等也与神经元的表型特化及皮层的区域划分密切相关.

关键词：皮层神经元分化转录因子 NGN1

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反义HLA-A2 cDNA抑制人成纤维细胞于大鼠脑内移植后的免疫排斥反应

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神经解剖学杂志 2005年第2期21卷 113-118页

作者：李颖杨慧徐群渊姬曼张耀芬段德义首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054

为了探讨人类白细胞抗原(HLA)反义RNA在抑制异种移植免疫排斥反应中的作用,用HLA A2反义cDNA和GDNF共表达的逆转录病毒转导人胚肺成纤维细胞,再移植到Parkinson病大鼠模型纹状体(实验组);同时移植到未感染病毒的人成纤维细胞作对照。移... 详细信息

为了探讨人类白细胞抗原(HLA)反义RNA在抑制异种移植免疫排斥反应中的作用,用HLA A2反义cDNA和GDNF共表达的逆转录病毒转导人胚肺成纤维细胞,再移植到Parkinson病大鼠模型纹状体(实验组);同时移植到未感染病毒的人成纤维细胞作对照。移植后每周检测大鼠旋转行为的变化;并于4d、2周、6周灌杀大鼠,进行HLA A、CD4、CD8以及人核糖核蛋白颗粒(RNP)免疫组化染色等以观察宿主的免疫排斥反应和移植物在脑内的存活情况。结果发现:两组间动物的旋转行为变化不明显。实验组HLA A阳性细胞数在移植后的各时间点均明显少于对照组(P<0.05)。移植后4d两组的CD4和CD8阳性细胞数量变化均不明显(P>0.05),CD8细胞较多。2周和6周时实验组的CD4阳性细胞均明显少于对照组(P<0.01),且随时间逐渐下降。2周后实验组的CD8细胞基本消失,而对照组的CD8水平在2周时仍较高, 6周时也可见到。实验组RNP阳性细胞数量在各个时间点都明显多于对照组(P<0.01),到6周时明显下降, 12周时完全消失。反义HLA A2cDNA可以降低异种移植引起的免疫排斥反应程度,延长移植物存活时间,但抑制长期免疫排斥反应方面仍需寻找更好的方法。

关键词：反义cDNA HLA—A2 大鼠脑内移植免疫排斥反应基因治疗异种移植人成纤维细胞 Parkinson病

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骨髓源干细胞在脑组织的迁移和分化

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神经科学通报 2005年第6期21卷 425-431页

作者：邹西峰徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室

骨髓源干细胞(BONE MARROW-DERIVED STEM CELLS,BMDSCS)能否迁移至脑组织并分化为神经胶质细胞和神经细胞是近年来成体干细胞研究的热点领域。有一些学者采用Y染色体和GFP基因作为骨髓源细胞标记物,通过血行输入受体动物后,在脑组织内... 详细信息

骨髓源干细胞(BONE MARROW-DERIVED STEM CELLS,BMDSCS)能否迁移至脑组织并分化为神经胶质细胞和神经细胞是近年来成体干细胞研究的热点领域。有一些学者采用Y染色体和GFP基因作为骨髓源细胞标记物,通过血行输入受体动物后,在脑组织内发现了标记阳性细胞,并证实这些细胞有向神经胶质细胞和神经细胞分化的趋势;另有一些学者也采用GFP基因作为细胞标记物,但在受体动物脑组织并未发现标记阳性细胞。这些实验结果差异可能与观察时间长短、细胞标记方法和神经组织中标记基因沉默事件有关。就迁移到脑组织的BMDSCS 是否与宿主神经细胞整合的问题,有研究认为存在转分化(TRANSDIFFERENTIATION)机制,也有实验发现BMDSCS与小脑PURKINJE神经元之间有细胞融合现象。细胞转分化和细胞融合有可能是中胚层来源的BMDSCS向神经外胚层细胞变化的两种必要机制。讨论这些问题对阐明神经细胞的新老更替、损伤和修复机制是很有意义的。

关键词：骨髓源干细胞神经胶质神经元转分化细胞融合

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制备人Ⅱ型多巴胺受体cRNA探针检测帕金森病大鼠模型纹状体内Ⅱ型多巴胺受体基因表达的变化

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中国临床康复 2005年第25期9卷 25-27,i0001页

作者：赵焕英李良刘延英刘静孙晓红杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复重点实验室北京市100054

目的:获得单链、杂交结果稳定的人Ⅱ型多巴胺受体基因正义和反义RNA探针,检测人Ⅱ型多巴胺受体在帕金森病大鼠模型中表达的变化。方法:实验于2002-10/2003-06在首都医科大学神经科学研究所内完成。选出2,6,12周帕金森病大鼠模型60只,每... 详细信息

目的:获得单链、杂交结果稳定的人Ⅱ型多巴胺受体基因正义和反义RNA探针,检测人Ⅱ型多巴胺受体在帕金森病大鼠模型中表达的变化。方法:实验于2002-10/2003-06在首都医科大学神经科学研究所内完成。选出2,6,12周帕金森病大鼠模型60只,每组各20只,用来做原位杂交的组织处理;将已制备的pGEM-T-Easy-D2R质粒载体分别经ClaI、XbaⅠ限制性酶切反应得到线形质粒,再分别以T7和SP6聚合酶制备了人Ⅱ型多巴胺受体基因的反义和正义探针,通过斑点杂交检测探针的浓度;将反义和正义探针分别作等梯度稀释,分别与组织切片杂交,强度洗脱后,观察使对照正义链探针没有杂交信号,而反义探针杂交后也无本底的最适宜浓度,从而降低内缘性其他多巴胺受体亚型的干扰作用;用制备的最适宜浓度探针分别杂交帕金森病大鼠模型2,6,12周的组织切片,杂交后冲洗,免疫检测及呈色,观察帕金森病大鼠模型纹状体中Ⅱ型多巴胺受体表达。结果:①实验标记的人Ⅱ型多巴胺受体探针属cRNA探针,其特点为单链探针,杂交过程不需变性,可合成最可靠的反义链探针,杂交结果稳定,体外转录合成的cRNA探针长度也比较一致,其浓度分别为150,120mg/L。②将反义和正义探针分别等梯度稀释,分别与组织切片杂交,强度洗脱后,结果证明25mg/L浓度最适宜,对照正义链探针没有杂交信号,而反义探针杂交后也无本底。③原位杂交证实,反义探针能够与帕金森病大鼠模型纹状体中Ⅱ型多巴胺受体mRNA杂交。用反义探针标记的细胞中可见蓝色颗粒沉积,左右半球纹状体中标记细胞数在2周时没有变化,帕金森病大鼠损伤侧和健侧Ⅱ型多巴胺受体mRNA表达没有明显变化;6周时,损伤侧较健侧表达明显上调,12周时,损伤侧与健侧表达都下降且没有明显差别。结论:实验获得了人Ⅱ型多巴胺受体基因反义和正义cRNA探针,并得出无本底的最适宜浓度;制备的人Ⅱ型多巴胺受体cRNA探针可以检测帕金森病大鼠模型纹状体内Ⅱ型多巴胺受体基因变化情况,并说明了帕金森病大鼠纹状体Ⅱ型多巴胺受体mRNA表达水平随模型日期增长而发生相应变化。

关键词：帕金森病受体多巴胺/遗传学原位杂交基因 RNA 信使/生物合成

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反义HLA-A2和GDNF共表达逆转录病毒载体的构建和鉴定

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神经解剖学杂志 2005年第2期21卷 103-107页

作者：段德义张海燕徐群渊李颖杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054

为构建GDNF和反义HLA -A2共表达的逆转录病毒载体,将人GDNF酶切片段(XhoI/SalI)克隆于逆转录病毒载体pLNCX2 的XhoI位点,再将HLA A2cDNA片段反向克隆于上述重组载体的HindIII/SalI位点,对其作酶切鉴定和测序后转染PA317包装细胞系进行... 详细信息

为构建GDNF和反义HLA -A2共表达的逆转录病毒载体,将人GDNF酶切片段(XhoI/SalI)克隆于逆转录病毒载体pLNCX2 的XhoI位点,再将HLA A2cDNA片段反向克隆于上述重组载体的HindIII/SalI位点,对其作酶切鉴定和测序后转染PA317包装细胞系进行病毒的包装。收获重组病毒感染的NIH3T3并进行病毒滴度的测定,GDNF及HLA- A2表达的RT -PCR检测,进一步感染人胚肺成纤维细胞,观察GDNF分泌情况。结果表明:GDNF和反义HLA -A2两片段的序列和插入方向完全正确,包装后获得的重组病毒的平均滴度为5×105 CFU/ml。RT PCR显示:在小鼠源性的PA317细胞中有人GDNF和HLA A2的表达,ELISA法测得病毒感染人胚肺成纤维细胞上清液中GDNF含量为450pg/ml。通过本实验,我们获得能共表达GDNF和反义HLA -A2的重组逆转录病毒,其转染的人成纤维细胞具有合成GDNF的能力。

关键词：反义HLA-A2 GDNF 基因表达逆转录病毒载体 Parkinson病神经退行性疾病人成纤维细胞基因治疗

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人Nurr1基因克隆及其在真核细胞中的表达

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神经解剖学杂志 2005年第3期21卷 247-251页

作者：张京钟余爽段德义赵春礼徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054

为探讨Nurr1基因治疗Parkinson病的可行性,本研究克隆了中国人核相关受体1(nuclearrelatedreceptor1,Nurr1)基因,并重组携带Nurr1基因的真核表达载体,为该研究提供分子生物学基础。实验采用反转录聚合酶链式反应(RTPCR)方法从人胎儿脑... 详细信息

为探讨Nurr1基因治疗Parkinson病的可行性,本研究克隆了中国人核相关受体1(nuclearrelatedreceptor1,Nurr1)基因,并重组携带Nurr1基因的真核表达载体,为该研究提供分子生物学基础。实验采用反转录聚合酶链式反应(RTPCR)方法从人胎儿脑中获取Nurr1cDNA,将其克隆至pGEMTEasy载体中;测序鉴定后,重组携带Nurr1基因的逆转录病毒载体pLNCX2Nurr1;通过脂质体将重组载体转染PT67包装细胞系,用病毒上清感染NIH3T3细胞系以检测病毒滴度。结果发现,RTPCR扩增得到人Nurr1cDNA片段,序列与GenBank登录的序列一致;将Nurr1基因亚克隆至逆转录病毒载体得到插入方向正确的重组载体pLNCX2Nurr1,病毒上清滴度为2×105CFU/ml。结果表明本实验获得人Nurr1基因cDNA序列,检测到Nurr1基因在真核细胞中表达,并得到较高滴度的病毒上清。

关键词：人Nurr1基因基因克隆基因表达帕金森病基因治疗

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内源性Nurr1对胚胎中脑及前脑前体细胞体外分化的诱导作用

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中国临床康复 2005年第9期9卷 52-54页

作者：李良赵焕英徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京市100054

目的:多巴胺神经元的发育是人们较为关注的问题,目前发现的蛋白可能在其发育机制中起着重要作用,研究内源性Nurr1基因表达变化对体外培养大鼠胚胎神经前体细胞分化的诱导作用。方法:实验于2003-05/2004-08在首都医科大学北京神经科学研... 详细信息

目的:多巴胺神经元的发育是人们较为关注的问题,目前发现的蛋白可能在其发育机制中起着重要作用,研究内源性Nurr1基因表达变化对体外培养大鼠胚胎神经前体细胞分化的诱导作用。方法:实验于2003-05/2004-08在首都医科大学北京神经科学研究所完成。分离13.5d大鼠胚胎中脑及前脑神经前体细胞并进行体外培养,培养基中加入视黄酸及毛喉素诱导3d,采用RT-PCR,WesternBlot及免疫荧光染色的方法观察Nurr1表达的变化及细胞分化;同时,用反义寡核苷酸转染技术阻断细胞Nurr1表达后再进行诱导,并进行同样观察。结果:视黄酸及毛喉素可诱导前体细胞的Nurr1表达,增加约60%,中脑来源神经前体细胞中(tyrosinehydroxylase,TH)阳性细胞占β-tublin-III阳性细胞的比例由原来的(5.32±1.20)%增至(9.01±3.20)%。前脑来源神经前体细胞中TH阳性细胞占β-tublin-III阳性细胞的比例由原来的(1.27±1.20)%增至(5.01±1.50)%。Nurr1反义寡核苷酸作用12h后前体细胞的Nurr1表达被阻断,至72h后重新表达。Nurr1被阻断后,只有少量的前体细胞被诱导为TH阳性细胞。结论:内源性Nurr1的过表达可促进胚胎神经前体细胞向多巴胺能神经元分化。

关键词：细胞分化 Nurrl 多巴胺神经元酪氨酸羟化酶

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Forskolin上调MN9D细胞Nurr1的表达及Nurr1过表达对酪氨酸羟化酶的影响

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解剖学报 2005年第4期36卷 342-345页

作者：赵咏梅张海燕刘扬赵春礼苏玉金李俊发徐群渊首都医科大学宣武医院北京100053 首都医科大学细胞生物学系北京100054 首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054

目的寻找能激活MN9D细胞内源性孤儿核受体(Nurrl)表达的信号分子,研究Nurrl表达增高对酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响,探讨激活Nurrl表达的信号机制。方法用蛋白激酶A激动剂Forskolin或蛋白激酶C激动剂PMA作用于MN9D细胞,用免疫荧光细胞化... 详细信息

目的寻找能激活MN9D细胞内源性孤儿核受体(Nurrl)表达的信号分子,研究Nurrl表达增高对酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响,探讨激活Nurrl表达的信号机制。方法用蛋白激酶A激动剂Forskolin或蛋白激酶C激动剂PMA作用于MN9D细胞,用免疫荧光细胞化学及Westernblot方法检测MN9D细胞内源性Nurrl表达的变化,以及Nurrl表达增加对TH表达的影响。利用PKA信号转导通路的特异性抑制剂H89探讨激活Nurrl表达的信号机制。结果1·从加入Forskolin1h起,直至6h,MN9D细胞Nurrl表达比未加Forskolin组明显增加(P<0·05);Forskolin主要增加MN9D细胞核内Nurrl含量,而细胞浆内Nurrl含量变化不明显;Forskolin作用后MN9D细胞TH表达无明显变化。2·用蛋白激酶A的特异性抑制剂H89预处理后,Forskolin仍具有增加Nurrl表达的作用。结论Forskolin可增加MN9D细胞内源性Nurrl表达及核转位,单纯Nurrl表达及核转位增加不影响MN9D细胞TH的表达,TH表达的激活可能还需要其他特殊的细胞(或神经元)环境或共激活因子的共同作用。Forskolin增加MN9D细胞内源性Nurrl表达及核转位的作用不是主要通过激活PKA信号转导通路完成的。

关键词：内源性孤儿核受体酪氨酸羟化酶蛋白激酶A 信号机制 MN9D细胞

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一种显示神经肌肉接头的改良乙酰胆碱酯酶-硝酸银双染法

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首都医科大学学报 2005年第6期26卷 758-759页

作者：刘扬姬曼陈亮王元身首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经修复重点实验室

哺乳动物的神经肌肉接头（NMJ）是被研究最多的突触结构。组织学染色为NMJ形态研究提供了良好途径。本方法总结以往各种染色方案，针对原有方法的染色背景偏重、神经末梢着染率低、显示不清晰、效果不稳定等缺点，综合Mesulam法和Bielsc... 详细信息

哺乳动物的神经肌肉接头（NMJ）是被研究最多的突触结构。组织学染色为NMJ形态研究提供了良好途径。本方法总结以往各种染色方案，针对原有方法的染色背景偏重、神经末梢着染率低、显示不清晰、效果不稳定等缺点，综合Mesulam法和Bielschowsky法，摸索出一种改良乙酰胆碱酯酶-硝酸银双染法，染色效果满意，现介绍如下。

关键词：乙酰胆碱酯酶神经肌肉接头双染法硝酸银组织学染色突触结构哺乳动物

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温控型永生化神经干细胞移植于大鼠纹状体后存活、迁移与分化的研究

温控型永生化神经干细胞移植于大鼠纹状体后存活、迁移与分化的研...

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中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会

作者：王颖段德义姬曼赵春礼张海燕徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室

＜正＞目的: 探讨SV40温度敏感型大T抗原永生化的神经干细胞移植于大鼠纹状体后的存活、迁移和分化情况,并观察GDNF转导对神经干细胞移植后特性的影响。方法:首先对细胞的分化情况进行鉴定,然后用携带绿色荧光蛋白（EGFP）或GDNF的重组... 详细信息

＜正＞目的: 探讨SV40温度敏感型大T抗原永生化的神经干细胞移植于大鼠纹状体后的存活、迁移和分化情况,并观察GDNF转导对神经干细胞移植后特性的影响。方法:首先对细胞的分化情况进行鉴定,然后用携带绿色荧光蛋白（EGFP）或GDNF的重组逆转录病毒分别感染永生化神经干细胞,获得稳定表达绿色荧光蛋白（即体外标记）或GDNF的细胞克隆后,再移植到成年SD大鼠纹状体内。移植术后第2周、4周和12周灌杀大鼠,测定神经干细胞的存活、迁移及分化情况。结果:移植前细胞表达SV40大T抗原、Nestin和Nurrl,但不表达分化标记物如β-tubulin-Ⅲ、

关键词：神经干细胞移植迁移分化大鼠

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