检索结果-内蒙古大学图书馆

中华医学杂志 2004年第18期84卷 1528-1532页

作者：鲁玲玲苏月段春礼赵春礼苏玉金吴均赵焕英徐群渊杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生与修复研究重点实验室 100054

目的　探讨重组多巴胺合成酶基因在体内外的表达、生成蛋白的活性及对帕金森病模型大鼠的治疗作用。方法　在腺相关病毒介导下 ,将多巴胺合成酶相关基因酪氨酸羟化酶 (TH)基因、芳香族氨基酸脱羧酶 (AADC)基因与GTP环化水解酶Ⅰ (GCH ... 详细信息

目的　探讨重组多巴胺合成酶基因在体内外的表达、生成蛋白的活性及对帕金森病模型大鼠的治疗作用。方法　在腺相关病毒介导下 ,将多巴胺合成酶相关基因酪氨酸羟化酶 (TH)基因、芳香族氨基酸脱羧酶 (AADC)基因与GTP环化水解酶Ⅰ (GCH Ⅰ )基因导入COS7细胞 ,分别通过原位杂交与免疫组化的方法检测目的基因的转录与表达 ,通过高压液相分析检测酶活性。将携带目的基因的运载细胞移植到帕金森病模型大鼠纹状体 ,每周进行诱发旋转行为的检测。 10周后高压液相分析脑内多巴胺含量 ,以进一步评估复合基因的治疗效果。结果　重组多巴胺合成酶基因在体外可以表达并被正确修饰 ,具有联合酶促催化功能。当把表达TH、AADC与GCH Ⅰ基因的细胞共培养时 ,在底物左旋酪氨酸存在的情况下 ,可以生成大量多巴胺。而且 ,把携带治疗基因的细胞移植到大脑后 ,经检测三基因移植组脑内多巴胺的生成量较单基因移植组多 ,且前者与后者相比 ,其行为学改善更为明显。但是三基因移植组与双基因组相比 ,脑内多巴胺生成量差异无显著意义。结论　在帕金森病基因治疗策略中 ,应根据多巴胺能神经元的损伤程度来选择加入基因的组合量。

关键词：多巴胺帕金森病治疗脑内表达相关基因模型大鼠合成酶目的基因单基因

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Ⅱ型囊泡单胺转运体基因过表达对多巴胺含量影响的体外研究

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解剖学报 2004年第4期35卷 344-349页

作者：张京钟余爽赵春礼段春礼徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054

目的　获得人Ⅱ型囊泡单胺转运体 (VMAT2 )基因 ,转染至MN9D细胞 ,通过检测细胞内外单胺类递质含量的变化评价VMAT2 基因促进单胺类递质循环利用的效应。　方法　从人胎脑中提取总RNA ,RT PCR方法扩增目的cDNA片段并将其重组于pGEM Eas... 详细信息

目的　获得人Ⅱ型囊泡单胺转运体 (VMAT2 )基因 ,转染至MN9D细胞 ,通过检测细胞内外单胺类递质含量的变化评价VMAT2 基因促进单胺类递质循环利用的效应。　方法　从人胎脑中提取总RNA ,RT PCR方法扩增目的cDNA片段并将其重组于pGEM Easy T载体中 ,进行全序列测定。重组真核表达载体pBK RSV VMAT2 ,转染MN9D细胞 ,免疫细胞化学检测VMAT2 的表达 ,HPLC检测细胞内外单胺类递质含量的变化。　结果　RT PCR扩增到 16 37bp的带有Kozak序列的cDNA片段。原位杂交证实pAAV VMAT2 能在COS7细胞表达 ;免疫组织化学证实转基因的MN9D细胞 (实验组 )VMAT2 免疫着色明显高于对照组。高效液相色谱结果表明 ,实验组中细胞内外的多巴胺含量均升高 (P <0 0 1) ,细胞外HVA、DOPAC降低 (P <0 0 5 ) ,而胞内升高 (P <0 0 1)。　结论　克隆的VMAT2cDNA片段可在真核细胞中表达 ,该基因的过表达可促进多巴胺的循环利用 ,有望用于帕金森病的基因治疗。

关键词： Ⅱ型囊泡单胺转运体基因表达 MN9D细胞帕金森病人胎脑

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帕金森病基因治疗的理论:VMAT_2基因的表达及其对MN9D细胞多巴胺代谢的影响

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中国临床康复 2004年第4期8卷 667-669,T002页

作者：张京钟余爽赵春礼段春礼徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复重点实验室北京市100054

目的:获得人Ⅱ型囊泡单胺转运体(vesicularmonoaminetransporter-2,VMAT2)基因,转染至MN9D细胞,通过检测细胞内外单胺类递质含量的变化评价VMAT2基因促进单胺类递质循环利用的效应。方法:从人胎脑中提取总RNA,RT-PCR方法扩增目的cDNA片... 详细信息

目的:获得人Ⅱ型囊泡单胺转运体(vesicularmonoaminetransporter-2,VMAT2)基因,转染至MN9D细胞,通过检测细胞内外单胺类递质含量的变化评价VMAT2基因促进单胺类递质循环利用的效应。方法:从人胎脑中提取总RNA,RT-PCR方法扩增目的cDNA片段并将其重组于pGEM-Easy-T载体中,进行全序列测定。重组真核表达载体pBK-RSV-VMAT2,转染MN9D细胞,免疫细胞化学检测VMAT2的表达,HPLC检测细胞内外单胺类递质含量的变化。结果:RT-PCR扩增到1637bp的带有Kozak序列的cDNA片段。原位杂交证实pAAV-VMAT2能在COS7细胞表达;免疫组化证实转基因的MN9D细胞(实验组)VMAT2免疫着色明显高于对照组。HPLC结果表明实验组中细胞内外的多巴胺含量分别升高至(227.2±20.8)%和(302.6±15.7)%(P<0.01),而细胞外HVA、DOPAC分别降低至(48.1±5.3)%和(55.7±4.9)%(P<0.05),细胞内HVA,DOPAC分别升高至(332.1±28.2)%和(1176.8±82.5)%(P<0.01)。结论:克隆了VMAT2cDNA片断,可在真核细胞中表达。该基因的过表达可促进多巴胺的循环利用,有望用于帕金森病的基因治疗。

关键词：帕金森病基因治疗 VMAT2基因基因表达 MN9D细胞多巴胺代谢 Ⅱ型囊泡单胺转运体

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微囊化牛肾上腺嗜铬细胞多巴胺含量的检测

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解剖学报 2004年第5期35卷 489-492页

作者：张进禄张京钟蔡青鲁强赵春礼段春礼刘玉军薛毅珑徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经损伤修复研究重点实验室北京100054 解放军总医院临床基础研究所北京100853

目的　检测体外培养微囊化牛嗜铬细胞分泌多巴胺的动态变化 ,为用微囊化肾上腺髓质细胞移植治疗帕金森病提供实验依据。　方法　常规培养牛肾上腺髓质嗜铬细胞 ,用人工APA微囊对之微囊化后再培养 2 0d ,高效液相色谱 (HPLC)动态检测多... 详细信息

目的　检测体外培养微囊化牛嗜铬细胞分泌多巴胺的动态变化 ,为用微囊化肾上腺髓质细胞移植治疗帕金森病提供实验依据。　方法　常规培养牛肾上腺髓质嗜铬细胞 ,用人工APA微囊对之微囊化后再培养 2 0d ,高效液相色谱 (HPLC)动态检测多巴胺含量 ,并分别在光镜及电镜下观察微囊内牛嗜铬细胞的形态变化。　结果牛嗜铬细胞在微囊内生长良好 ,在培养液内可持续检测到多巴胺。第 8d左右多巴胺的分泌达到高峰 ,随后逐渐下降 ,14d后分泌量处于一种恒定的状态。　结论　微囊化牛嗜铬细胞分泌的多巴胺可以通透微囊 ,可以考虑用来进行异种细胞移植治疗帕金森病。

关键词：牛嗜铬细胞微囊多巴胺

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骨髓基质干细胞多向分化的可能机制

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中国生物工程杂志 2004年第7期24卷 17-22页

作者：李娜杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054

近年来 ,围绕骨髓基质细胞分化机制的问题 ,大致有两种假说。有人认为骨髓基质细胞在其细胞的基因组内有几套“程序” ,在不同的外界环境下 ,会有相应的一套基因开启 ,从而分化成某种终末细胞。而另外一些人则认为骨髓基质细胞是通过与... 详细信息

近年来 ,围绕骨髓基质细胞分化机制的问题 ,大致有两种假说。有人认为骨髓基质细胞在其细胞的基因组内有几套“程序” ,在不同的外界环境下 ,会有相应的一套基因开启 ,从而分化成某种终末细胞。而另外一些人则认为骨髓基质细胞是通过与不同组织的细胞发生融合而实现向该组织分化的。在前人分化实验机理研究的基础上 ,认为骨髓基质细胞在分化成一些中胚层来源的细胞 ,如脂肪细胞 ,血细胞等时 ,可以直接通过靶基因的开启或关闭分化。而在跨胚层向外胚层或内胚层分化时 ,则需要通过细胞融合这一过程来最终分化成这些组织器官的特定细胞。

关键词：骨髓基质细胞干细胞分化机制融合

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神经干细胞脑内移植后的存活、迁移和分化

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中国生物工程杂志 2004年第11期24卷 13-17页

作者：王颖段德义徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经修复再生重点实验室北京100054

从胚胎或成体大鼠脑组织、人胚脑组织均能分离到神经干细胞 ,将它们进行体外原代培养扩增或永生化后植入脑内 ,均能观察到其在脑内的迁移和分化现象。其分化能力主要取决于移植部位的脑内微环境 ,但这种影响作用是相对的。同时 ,体外培... 详细信息

从胚胎或成体大鼠脑组织、人胚脑组织均能分离到神经干细胞 ,将它们进行体外原代培养扩增或永生化后植入脑内 ,均能观察到其在脑内的迁移和分化现象。其分化能力主要取决于移植部位的脑内微环境 ,但这种影响作用是相对的。同时 ,体外培养环境如培养时间和细胞融合程度、维甲酸类诱导分化剂处理、NGF转导处理再移植或与嗜铬细胞 (分泌NGF)共移植等 ,也能决定神经干细胞脑内移植后向神经元方向分化的能力。神经干细胞移植为中枢神经系统功能重建和神经再生带来新的希望。

关键词：脑内移植神经干细胞脑组织分化维甲酸类中枢神经系统功能转导成体存活培养时间

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骨髓源干细胞向损伤脑组织迁移的可能性

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解剖学报 2004年第6期35卷 561-564页

作者：邹西峰蔡青鲁强李铁林徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054 第一军医大学珠江医院神经外科广州510282

目的　探讨骨髓源干细胞迁移至损伤脑组织的可能性。　方法　致死剂量照射的C5 7BL 6雌性小鼠 ,接受月龄相配的雄性小鼠骨髓移植。骨髓移植 2个月后制作脑外伤模型 ,1、2、4和 6周分批处死存活的动物。分别在外周血涂片和新鲜脑切片上... 详细信息

目的　探讨骨髓源干细胞迁移至损伤脑组织的可能性。　方法　致死剂量照射的C5 7BL 6雌性小鼠 ,接受月龄相配的雄性小鼠骨髓移植。骨髓移植 2个月后制作脑外伤模型 ,1、2、4和 6周分批处死存活的动物。分别在外周血涂片和新鲜脑切片上用荧光原位杂交法检测Y染色体阳性细胞。　结果　在移植后 6周的脑外伤病灶周围发现Y染色体阳性细胞。　结论　骨髓源干细胞可以迁移至脑外伤病灶周围 ,但这些细胞的性质需要进一步研究证实。

关键词：骨髓源干细胞骨髓移植神经元神经胶质小鼠

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小鼠Y染色体RNA探针的标记和应用

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解剖学报 2004年第6期35卷 664-667页

作者：邹西峰苏玉金鲁玲玲杨慧李铁林徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054 第一军医大学珠江医院神经外科广州510282

目的　标记小鼠Y染色体RNA探针 ,检验该探针在检测外周血涂片和脑组织切片Y染色体阳性细胞的效率。　方法　以小鼠Y染色体重复序列pY35 3/BcDNA为模板标记RNA探针。以雌性小鼠为对照 ,用原位杂交法检测小鼠外周血涂片Y染色体阳性细胞 ;... 详细信息

目的　标记小鼠Y染色体RNA探针 ,检验该探针在检测外周血涂片和脑组织切片Y染色体阳性细胞的效率。　方法　以小鼠Y染色体重复序列pY35 3/BcDNA为模板标记RNA探针。以雌性小鼠为对照 ,用原位杂交法检测小鼠外周血涂片Y染色体阳性细胞 ;用荧光原位杂交法检测雄性小鼠脑组织切片Y染色体阳性细胞。　结果　Y染色体原位杂交法在外周血涂片Y染色体阳性的检测灵敏度和特异度均为 1 0 0 %,在脑切片检测Y染色体阳性细胞的灵敏度和特异度分别为 85 6 7%和 1 0 0 %。

关键词： Y染色体原位杂交荧光原位杂交小鼠

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壳聚糖生物活性载体植入大鼠脑皮质后的生物相容性研究

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中国康复理论与实践 2004年第1期10卷 28-30页

作者：高尔静刘丙方鲁强刘玉军蔡青李晓光首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经修复重点实验室北京市100054

目的研究一种具有诱导神经再生功能的壳聚糖生物活性微载体 (INRM )的生物相容性。方法将INRM植入到大鼠脑皮层 ,分别在植入材料后 1周、1个月、2个月行尼氏染色、GFAP及OX42 免疫组化染色 ,观察移入INRM周围脑的组织形态学变化。结果... 详细信息

目的研究一种具有诱导神经再生功能的壳聚糖生物活性微载体 (INRM )的生物相容性。方法将INRM植入到大鼠脑皮层 ,分别在植入材料后 1周、1个月、2个月行尼氏染色、GFAP及OX42 免疫组化染色 ,观察移入INRM周围脑的组织形态学变化。结果植入材料组的GFAP阳性细胞数量和分布在各个时间段与对照组没有显著性差异 ,而OX42 阳性细胞数量在植入材料后与对照组相比减少。结论INRM在动物脑内具有良好的生物相容性 ,是一种有前景的可应用于组织工程修复的材料。

关键词：生物相容性组织工程脑损伤壳聚糖大鼠

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人胚胎海马神经干细胞体外培养方法的建立

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首都医科大学学报 2004年第2期25卷 144-146页

作者：赵春礼孙晓红鲁强刘玉军李敏姜传涛杨慧徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室首都医科大学宣武医院

为建立人胚胎海马神经干细胞的体外培养方法 ,防止神经干细胞在培养过程中的分化 ,确立最佳的传代时机和方法 ,分离 1 6周人胚海马组织 ,采用无血清培养基对所分离的神经干细胞进行体外培养 ,比较不同培养条件与方法所获得的神经球数量... 详细信息

为建立人胚胎海马神经干细胞的体外培养方法 ,防止神经干细胞在培养过程中的分化 ,确立最佳的传代时机和方法 ,分离 1 6周人胚海马组织 ,采用无血清培养基对所分离的神经干细胞进行体外培养 ,比较不同培养条件与方法所获得的神经球数量的差异。结果 :建立了人胚胎海马神经干细胞体外培养的优化条件 ,确立了最佳传代方法与时机。提示 :人胚胎海马神经干细胞在体外抑制分化的条件下可以长期处于未分化状态增生 ,并且可多次传代。

关键词：人胚胎海马神经干细胞体外培养传代方法

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